一種芒果核多酚提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種芒果核多酚提取物及其制備方法，屬于食品技術(shù)及生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的芒果核多酚提取物以芒果核為原料，經(jīng)過(guò)醇提取及大孔樹脂純化方法制備得到。本發(fā)明制備的芒果核多酚提取物具有顯著的抑菌、抗氧化活性作用，可作為抗氧化保健品或藥物而進(jìn)一步研究開發(fā)。
【專利說(shuō)明】
-種苦果核多齡提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種芒果核多酪提取物及其制備方法，屬于食品技術(shù)及生物技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 芒果（拉下學(xué)名：Mangifera indica Linn)，又稱樣果、悶果、蜜望子等，屬于漆樹 科植物，主要生長(zhǎng)于熱帶和亞熱帶沿海潮間帶。芒果的種植分布很廣，世界上有70多個(gè)國(guó)家 生產(chǎn)芒果，我國(guó)主要省份廣西、廣東、臺(tái)灣、海南均有芒果種植，且芒果資源豐富、品種繁多。 2014年我國(guó)芒果種植面積為117萬(wàn)公頃，總產(chǎn)量達(dá)88萬(wàn)噸，是我國(guó)的大宗傳統(tǒng)熱帶農(nóng)產(chǎn)品， 出口創(chuàng)匯潛力巨大，在我國(guó)對(duì)外貿(mào)易中有重要的地位。
[0003] 芒果為著名熱帶水果之一，因其果肉細(xì)膩（肉質(zhì)滑嫩、多汁）、風(fēng)味獨(dú)特（味道香 甜）、營(yíng)養(yǎng)豐富（富含糖、蛋白質(zhì)、粗纖維、維生素、礦物質(zhì)及脂肪等），集熱帶水果精華于一 身，被譽(yù)為"熱帶水果之王"。芒果具有極高的藥用價(jià)值，其果皮可入藥，為利尿、竣下劑;核 仁和芒果葉也可入藥，能解毒消滯、降壓。據(jù)中醫(yī)分析，芒果屬于性平味甘、解渴生津的果 品，有益胃、止嘔、防暈的功效。芒果中含有的芒果巧具有明顯的抗過(guò)氧化、保護(hù)腦神經(jīng)元和 桂疲止咳的功效。
[0004] 廣西作為我國(guó)生產(chǎn)芒果為數(shù)不多的主要省份之一，更是具有芒果資源豐富，品種 繁多等優(yōu)勢(shì)，但是目前市場(chǎng)上主要還是W產(chǎn)地鮮銷為主，少量加工成果汁、果脯W及果肉為 輔外，芒果深加工產(chǎn)業(yè)亟待需要進(jìn)一步發(fā)展。在芒果生產(chǎn)加工中的廢棄物，在過(guò)去常被丟棄 或者飼養(yǎng)牲畜。近年來(lái)，人們逐漸對(duì)芒果廢棄物進(jìn)行研究，包括芒果葉、芒果皮、芒果核、芒 果樹皮等，尤其是占芒果總重20-60%的芒果核獲得大部分研究者和企業(yè)家的關(guān)注。據(jù)報(bào) 道，芒果中化學(xué)成分種類繁多，主要W多酪為主，包括芒果巧、搬皮素、山奈酪、對(duì)徑基苯甲 酸、間香豆酸、對(duì)香豆酸W及阿魏酸等，而大部分活性成分位于占芒果總重20-60%的芒果 核中。
[0005] 芒果核富含有氨基酸、多膚、蛋白質(zhì)、酪類、黃酬、多糖、有機(jī)酸、皂巧、較質(zhì)、黃酬、 蔥釀、生物堿、香豆素與內(nèi)醋、Ξ祗及醬體、生物堿、揮發(fā)油及油脂等多種活性成分。
[0006] 近年來(lái)，我國(guó)圍繞芒果核多酪類物質(zhì)、黃酬類、化酬類、祗類等活性成分及其抑菌、 抗氧化功能進(jìn)行的相關(guān)研究逐漸較多，但是也存在不少問(wèn)題，主要有提取分離效果不明顯， 鑒定獲得的活性成分較少，活性成分抑菌、抗氧化作用等藥理作用還不明確。
[0007] 現(xiàn)有的芒果核多酪提取方法，也存在提取的總多酪含量低，有機(jī)溶劑殘留較多等 問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的是充分利用自然資源，尤其是廣西特色果蔬資源，提供一種芒果核 多酪提取物及其制備方法，該多酪提取物具有抑菌抗氧化性能，可用于保健品或者藥物制 備。同時(shí)為了解決目前已有芒果核多酪提取方法存在的總多酪含量低、有機(jī)溶劑殘留較多 的問(wèn)題，本發(fā)明方法是經(jīng)過(guò)醇提取及大孔樹脂純化方法制備芒果核多酪提取物。
[0009] 本發(fā)明的芒果核多酪提取物的制備方法，包括W下步驟：
[0010] (1)將芒果核干燥粉碎；
[0011] (2)用醇濃度20-90% (v/v)的乙醇溶液或甲醇溶液作為溶劑對(duì)步驟（1)中得到的 芒果核干燥粉末進(jìn)行提取，然后將得到的提取液減壓濃縮或真空冷凍干燥至浸膏；
[0012] (3)將步驟(2)中得到的浸膏用水、醇濃度小于50% (v/v)的乙醇溶液或者醇濃度 小于50% (v/v)的甲醇溶液溶解，除去不溶物，得到上樣溶液；
[0013] (4)取非極性或弱極性大孔吸附樹脂，將步驟(3)得到的上樣溶液上樣，先用水洗 去雜質(zhì)，然后用洗脫劑(乙醇溶液或甲醇溶液)進(jìn)行洗脫，收集洗脫液;所述大孔吸附樹脂和 芒果核干燥粉末重量比為1:0.5-1:20;
[0014] (5)將步驟(4)收集的洗脫液減壓濃縮或真空冷凍干燥，得到芒果核多酪提取物。
[0015] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，步驟(2)中提取方法為每千克芒果核粉末加入2-50L 醇濃度為30%-80%的乙醇溶液或甲醇溶液，熱回流或浸潰或浸漉提取2-5次，熱回流提取 時(shí)每次提取1-化，浸潰或浸漉提取時(shí)每次提取10-15天，合并提取液。
[0016] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，是將芒果核粉末Wl〇-95%(v/ V，下同）的乙醇提取，優(yōu)選乙醇濃度為20%-80%，最優(yōu)選為40%-60%。
[0017] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，是將芒果核粉末W乙醇提取次 數(shù)1-4次，最優(yōu)選為2-3次。
[0018] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，料液比（芒果核粉末質(zhì)量與乙 醇溶液之比，m/v)為1:1-1:40，優(yōu)選1:5-1:30，更優(yōu)選地為1:15-1:25。
[0019] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，每次提取時(shí)間為0.5-4h，優(yōu)選 提取時(shí)間為1-化。
[0020] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)的提取，是在40-60°C下進(jìn)行。
[0021] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(2)具體工藝條件是：乙醇濃度70%，料液 比1:25，提取溫度60°C，提取時(shí)間120min。
[0022] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(3)中浸膏的溶解所用的水、乙醇溶液或者 甲醇溶液的重量為浸膏重量的3-50倍。
[0023] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，步驟(3)的提取方法如下：將步驟(2)中得到的浸膏 用10倍浸膏重量的水或者10%乙醇溶液溶解，除去不溶物后得到上樣溶液。
[0024] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，步驟(3)的除去不溶物，是采用過(guò)濾或離屯、的方法。
[0025] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，步驟(4)的大孔吸附樹脂的類型選用冊(cè)0-722、冊(cè)0- 826、1^(-17、^(-26、1^(-28、5?70、5?700^8-8、0121或者0101，優(yōu)選大孔樹脂48-8、0121、 D101，更優(yōu)選地為AB-8。
[0026] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，步驟(4)中的先用水洗去雜質(zhì)，是指用2-5BV的水進(jìn) 行洗脫W除去雜質(zhì)。
[0027] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(4)的洗脫流速為洗脫液流速1BVA-10BV/ h，優(yōu)選為 2BV/h-5Bv/h。
[0028] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(4)中洗脫劑乙醇溶液或者甲醇溶液的濃 度為5 %-95 %，優(yōu)選為20 %-80% ;洗脫劑的洗脫體積為1-10倍柱體積，優(yōu)選為3-8個(gè)柱體 積。
[0029] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(4)，是使用醇濃度為40-70%的乙醇溶液 進(jìn)行洗脫。
[0030] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，步驟(4)的純化方法如下:取與芒果核粉重量之比為 1:5的弱極性大孔樹脂，將步驟(3)中得到的上樣溶液上樣，采用2-5BV的水洗去雜質(zhì)，后采 用3-10BV的50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集50%的乙醇溶液洗脫得到的洗脫液。
[0031] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述步驟(4)中，芒果核多酪提取液的上樣量(芒果 核粉末質(zhì)量:樹脂質(zhì)量)為0.5:1-20:1，優(yōu)選1:1-10:1。
[0032] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法是乙醇溶液加熱回流提取芒果核多酪， 回收乙醇，濃縮，將芒果核多酪提取液吸附到大孔樹脂上、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲 得純化的芒果核多酪。
[0033] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法具體是：（1)將芒果核干燥粉碎；（2)砰取芒 果核粉末1kg加入20L濃度為50%的乙醇溶液，熱回流提取Ξ次，熱回流提取每次化，合并提 取液，提取液減壓濃縮汁浸膏；（3)浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，過(guò)濾出去不溶物，得到上 樣溶液；（4)將上樣溶液上柱，控制流出液流速為0.5BVA，上樣量與樹脂AB-8體積比為2:1， 至提取液全部進(jìn)入樹脂床;采用2-5BV的水進(jìn)行洗脫，W除去雜質(zhì)，然后用3-10BV的40~ 60 %乙醇溶液沖洗樹脂床，控制流出液流速2BVA，收集乙醇溶液的洗脫液；（5)將收集的洗 脫液減壓濃縮至一定體積，進(jìn)行噴霧干燥，即得純化產(chǎn)物。
[0034] 本發(fā)明還要求保護(hù)按照所述制備方法或者純化方法得到的芒果核多酪提取物在 制備食品、保健品或藥物上的應(yīng)用。
[0035] 所述保健品或藥物，是具有抑菌抗氧化活性的保健品或藥物。
[0036] 本發(fā)明的有益效果：
[0037] 1、本發(fā)明通過(guò)對(duì)芒果核多酪提取步驟進(jìn)行改進(jìn)，有效提高了多酪物質(zhì)的提取效 率，得到的提取液中多酪含量可達(dá)18-20.9mg/g(即1kg芒果核干燥粉末中可提取得到18- 20.9g多酪）。而且，本發(fā)明方法W水或者乙醇為溶劑，既廉價(jià)又無(wú)毒。
[0038] 2、本發(fā)明采用大孔樹脂純化的方法進(jìn)一步對(duì)提取液進(jìn)行純化，該純化方法操作簡(jiǎn) 便、快捷，選用的大孔樹脂具有吸附量大、解吸率大的特點(diǎn)，有效去除了提取液的雜質(zhì)，防止 了有機(jī)溶劑殘留的問(wèn)題。
[0039] 3、按照本發(fā)明方法得到的芒果核多酪提取物，產(chǎn)量可達(dá)3.6-20.9mg/g，得到的多 酪提取物對(duì)徑基和超氧自由基陰離子具有明顯的清除作用。
【附圖說(shuō)明】
[0040] 圖1為沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0041 ]圖2為芒果核多酪提取物對(duì)徑基的清除作用；
[0042] 圖3為芒果核多酪提取物對(duì)超氧自由基陰離子的清除作用；
[0043] 圖4為芒果核多酪提取物對(duì)DPK1的清除作用。
【具體實(shí)施方式】
[0044] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容做進(jìn)一步說(shuō)明，下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不 是限定性的，不能w下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0045] 各實(shí)施例中使用的一起設(shè)備、化學(xué)試劑W及檢測(cè)方法如下：
[0046] 儀器與設(shè)備:FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；UPC-n-20T優(yōu) 普系列超純水器，四川優(yōu)普超純科技有限公司；SQP電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有 限公司；ZWYR-D2403振蕩培養(yǎng)箱，上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司；SHZ-D虹予華牌循環(huán)水 真空累，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司;皿S-6S電子恒溫不誘鋼水浴鍋，上海宜昌儀器紗篩 廠;UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)，上海奧析科學(xué)儀器有限公司；
[0047] 化學(xué)試劑：無(wú)水碳酸鋼、甲醇、乙醇、丙酬、乙酸乙醋、福林酪試劑、沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn) 品、各種類型大孔樹脂等均由柳州蘇利有限責(zé)任公司提供。
[0048] 測(cè)定：
[0049] 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:準(zhǔn)確稱取50mg沒(méi)食子酸，用70%乙醇溶液定容至50ml， 即得濃度為1. Omg/ml沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。取9支50ml容量瓶，分別移取0、1、2、3、4、5、7.5、 10、12.51111上述沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將其稀釋后配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.15、 0.20、0.25mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。用福林法測(cè)定吸光度值。W沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo)，765nm處的 吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行回歸分析。福林酪法測(cè)定總酪的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1)。 結(jié)果表明，沒(méi)食子酸在濃度0-0.25mg/ml內(nèi)與其吸光值呈良好的線性關(guān)系，在此范圍內(nèi)的線 性回歸方程為:y = 4.2974X+0.056，r2 = 0.9994。
[0050] 總酪含量的測(cè)定:準(zhǔn)確移取待測(cè)液2.0ml于50ml容量瓶中，加入福林試劑1.0ml，充 分混合后靜置2min，加入10ml 7%的碳酸鋼溶液，充分混合后用蒸饋水定容，置30°C恒溫水 浴中反應(yīng)化，不斷振蕩。取出，在波長(zhǎng)765nm處測(cè)定吸光度值蒸饋水為空白對(duì)照）。根據(jù)標(biāo) 準(zhǔn)曲線及其回歸方程求出待測(cè)液中的多酪含量，然后計(jì)算出Ig芒果核干燥破碎后的粉末樣 品中多酪類物質(zhì)的含量(W沒(méi)食子酸計(jì)，mg/g，即多酪含量mg/芒果核粉末g)。
[0051] 抗氧化活性的測(cè)定：
[0052] 清除徑基自由基能力測(cè)定:分別取不同質(zhì)量濃度的待測(cè)樣液于5只試管中，各加入 硫酸亞鐵、雙氧水，靜置aOmin后加入水楊酸，靜置后在510nm處測(cè)定吸光度Ai，用蒸饋水替 代水楊酸按照上述方法測(cè)定吸光度值A(chǔ)2,用蒸饋水代替待測(cè)液按上述方法測(cè)定吸光度值A(chǔ)o， Vc做對(duì)照，按照下列公式求多酪物質(zhì)對(duì)徑自由基的清除率:徑自由基（％) = [A0-(A廣A2)]/ (Ao)*100(%)。
[0053] 清除超氧陰離子自由基能力測(cè)定：取4.5ml化is-HCl緩沖溶液，于20°C水浴中預(yù) 熱20min，分別加入1ml不同濃度的樣品液和0.4ml 25mmol/L的鄰苯Ξ酪溶液，混勻后，于25 °C水浴中反應(yīng)5min，然后加入8mol/L的HC1溶液1ml終止反應(yīng)，然后在325nm處測(cè)定吸光度 Ai，空白W蒸饋水代替樣品液，測(cè)定吸光度Ao。樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除率:清除率 (%) = (l-Ai/Ao)*100(%)。
[0054] DPPH清除能力測(cè)定:分別取2.0血不同質(zhì)量濃度（1.0、5.0、！0.0、15.0、芒果核活性 成分樣液于5只試管中，各加入2mL DPPH(0.04mg/ml)，靜置20min在517皿檢測(cè)吸光度Ai; W 無(wú)水乙醇代替DPPH，按照上述方法測(cè)定吸光度A2 ;做空白組按上述方法測(cè)定吸光度Ao，WVc 做對(duì)照，樣品對(duì)DPPH自由基的清除率:DPPH清除率（％ ) = [1-(Ai-A2)/A0]*100( % )。
[0055] 實(shí)施例1:本發(fā)明的芒果核多酪提取物的制備方法
[0056] (1)芒果核多酪提取:芒果核干燥粉碎，砰取芒果核粉末1kg加入20L濃度為50 %的 乙醇，熱回流提取Ξ次，熱回流提取每次Ih，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸 膏重量10倍的水溶解，過(guò)濾出去不溶物，得到上樣溶液，總多酪含量為18-20.9g/kg芒果核 粉末。
[0057] (2)上柱:將芒果核多酪提取液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂 AB-8體積比為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床。
[0化引（3)洗脫:采用2-5BV的水進(jìn)行洗脫，W除去雜質(zhì)，后分別采用3-10BV的5%-80%乙 醇沖洗樹脂床，控制流出液流速2BVA，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進(jìn)行噴霧干 燥，即得不同組分的純化產(chǎn)物，其中全部組分總多酪含量約為20.9g/kg，純化產(chǎn)物中，水洗 脫液中多酪含量約為2.2g/kg，5 %乙醇洗脫液中多酪含量約為3.8g/kg，10 %乙醇洗脫液中 多酪含量約為4.8g/kg，20 %乙醇洗脫液中多酪含量約為8.04g/kg，30 %乙醇洗脫液中多酪 含量約為8.5g/kg，40 %乙醇洗脫液中多酪含量約為13.3g/kg，50 %乙醇洗脫液中多酪含量 約為15.2g/kg，60 %乙醇洗脫液多酪中含量約為13.7g/kg，70 %乙醇洗脫液中多酪含量約 為11. Ig/kg，80%乙醇洗脫液中多酪含量約為9.9g/kg。
[0059] 實(shí)施例2:選用不同條件進(jìn)行提取
[0060] 采用本發(fā)明提供的方法，選用不用條件進(jìn)行芒果核多酪(樣品為芒果核干燥粉碎 Ig)提取實(shí)驗(yàn)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間和提取溫度四個(gè)主要 因素做L9(34)正交試驗(yàn)(表1)，正交結(jié)果分析如表2。
[0061 ]表1芒果核多酪提取工藝正交試驗(yàn)表頭設(shè)計(jì)
[0(?日]表3芒果核多酪提取驗(yàn)證試驗(yàn) [0066]
[0067]由表2可知，各因素對(duì)芒果核多酪提取影響大小順序?yàn)?B〉A(chǔ)〉D〉C，即料液比〉乙醇 濃度〉提取時(shí)間〉提取溫度，其中料液比對(duì)芒果核多酪提取影響最顯著，其次是乙醇濃度和 提取時(shí)間，影響顯著性一樣，提取溫度對(duì)芒果核多酪提取影響最不顯著。由正交試驗(yàn)結(jié)果可 W得出最佳試驗(yàn)組合為A3B3C3D3，即乙醇濃度70%，料液比1: 25，提取溫度60°C，提取時(shí)間 120min。并不是正交表的組合中，所W需要做驗(yàn)證試驗(yàn)(表3)，由驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果可知多酪的 提取含量是5.36mg/g，所W芒果核多酪提取的最佳工藝條件為乙醇濃度70%，料液比1:25， 提取溫度60 °C，提取時(shí)間120min。
[006引實(shí)施例3:大孔樹脂純化工藝
[0069] 選取不同樹脂種類、樣液濃度、吸附速率、上樣量、乙醇洗脫濃度、洗脫速率等因素 分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)，確定各因素的最佳值。
[0070] 上樣液制備:砰取芒果核粉末20g，按照乙醇濃度70 %，料液比1: 25，提取溫度60 °C，每次提取化，提取3次，提取后濾液合并，減壓濃縮至干，真空干燥至恒重，精密砰取干膏 適量，W甲醇或乙醇溶液溶于10ml容量瓶中，加甲醇或乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻備用。移 取1ml濾液至10ml容量瓶，加甲醇或乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按照上述方法測(cè)定多酪的 含量。
[0071] 靜態(tài)吸附：取10種經(jīng)過(guò)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂各lOg，各加入芒果核多酪溶液 10ml，每lOmin振搖一次，2h后分別各取樹脂吸附后的溶液測(cè)定多酪含量，計(jì)算各樹脂對(duì)芒 果核多酪的吸附率。
[0072] 靜態(tài)解吸：
[0073] 將靜態(tài)吸附的樹脂過(guò)濾抽干，加30ml 50%乙醇解吸，每lOmin振搖一次，化后分別 各取樹脂吸附后的溶液測(cè)定多酪含量，計(jì)算各樹脂對(duì)芒果核多酪的解吸率。見表4。從表中 可W看出，10種樹脂的吸附率都較大(大于90%)，解吸率都大于40%，其中AB-8、DM21、D101 的解吸率都大于60%，選取AB-8、DM21、D101做動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。
[0074] 表4大孔樹脂對(duì)芒果核多酪的吸附與解吸率
[0075]
[0076] 動(dòng)態(tài)吸附：
[0077] 取處理好的靜態(tài)吸附優(yōu)選巧巾樹脂AB-8、DM21、D101各15mL于柱內(nèi)，加芒果核多酪 提取液于柱頂，W0.5BVA的流速進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，按照樹脂體積流出收集流出液，測(cè)定多酪 含量，計(jì)算各樹脂對(duì)芒果核多酪的吸附率。結(jié)果見表5,表明AB-8和D101達(dá)到飽和吸附時(shí)，所 吸附的總多酪量較DM21大，選取其做解吸實(shí)驗(yàn)。
[0078] 表5大孔樹脂對(duì)芒果核多酪的動(dòng)態(tài)吸附結(jié)果
[0079]
[0080] 動(dòng)態(tài)解吸:取處理好的AB-8和D101樹脂各20ml于柱內(nèi)，分別加芒果核多酪提取液 (10.5mg/g)于柱頂，W0.5BV/h的流速進(jìn)行吸附后，用60%乙醇W2BV/h的流速進(jìn)行洗脫，按 照樹脂體積流出收集洗脫液，測(cè)定多酪含量，計(jì)算各樹脂對(duì)芒果核多酪的吸附率。結(jié)果見表 6,可W看出AB-8比D101解吸效果好，選取其作為最佳樹脂。
[0081 ]表6大孔樹脂對(duì)芒果核多酪的動(dòng)態(tài)解吸結(jié)果
[0082]
[0083] 乙醇濃度:取10份處理好的AB-8樹脂20ml于柱內(nèi)，加芒果核多酪提取液于柱頂，W 0.5BV/h的流速進(jìn)行吸附后，再分別用5BV的水、5 %、10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%乙醇W2BVA流速進(jìn)行單獨(dú)洗脫，按照樹脂體積流出收集洗脫液，測(cè)定多酪含量， 結(jié)果見表7，可W看出，當(dāng)乙醇洗脫濃度為40 %-70 %時(shí)，洗脫總多酪得率最高。
[0084] 表7乙醇洗脫濃度考察
[0085]
[0086] 實(shí)施例4:芒果核多酪提取物的制備方法
[0087] 將芒果核干燥粉碎，砰取芒果核粉末1kg加入20L濃度為50 %的乙醇，熱回流提取 Ξ次，熱回流提取每次化，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水 溶解，過(guò)濾出去不溶物，得到上樣溶液，總多酪含量為18-20.9g/kg。
[0088] 將芒果核多酪提取液上柱，控制流出液流速為0.5BVA，上樣量與樹脂AB-8體積比 為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床。采用2-5BV的水除去雜質(zhì)，然后采用3-10BV的50%乙醇沖 洗樹脂床，控制流出液流速2BVA，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進(jìn)行噴霧干燥， 即得純化產(chǎn)物，多酪含量為14-15.2邑/1^。
[0089] 實(shí)施例5:芒果核多酪提取物的制備方法
[0090] 將芒果核干燥粉碎，砰取芒果核粉末1kg加入20L濃度為50 %的乙醇，熱回流提取 Ξ次，熱回流提取每次化，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水 溶解，過(guò)濾出去不溶物，得到上樣溶液，總多酪含量為18-20.9g/kg。
[0091] 將芒果核多酪提取液上柱，控制流出液流速為0.5BVA，上樣量與樹脂AB-8體積比 為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床。采用2-5BV的水除去雜質(zhì)，然后采用3-10BV的40%乙醇沖 洗樹脂床，控制流出液流速2BVA，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進(jìn)行噴霧干燥， 即得純化產(chǎn)物，多酪含量為12-13.3g/kg。
[0092] 實(shí)施例6:芒果核多酪提取物的制備方法
[0093] 將芒果核干燥粉碎，砰取芒果核粉末1kg加入20L濃度為50 %的乙醇，熱回流提取 Ξ次，熱回流提取每次化，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水 溶解，過(guò)濾出去不溶物，得到上樣溶液，總多酪含量為18-20.9g/kg。
[0094] 將芒果核多酪提取液上柱，控制流出液流速為0.5BVA，上樣量與樹脂AB-8體積比 為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床。采用2-5BV的水除去雜質(zhì)，然后采用3-10BV的70%乙醇沖 洗樹脂床，控制流出液流速2BVA，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進(jìn)行噴霧干燥， 即得純化產(chǎn)物，多酪含量為10-11.1 g/kg。
[00M]實(shí)施例7:本發(fā)明方法得到的芒果核多酪提取物的抗菌抗氧化性能
[0096] 抑菌效果的測(cè)定：
[0097] 將供試菌株于斜面培養(yǎng)基上活化，用接種環(huán)挑取環(huán)1-2環(huán)于50mL無(wú)菌生理鹽水Ξ 角瓶中振蕩lOmin(內(nèi)有數(shù)粒玻璃珠），要求菌懸液約10化即/mL左右備用。稱取一定量真空 冷凍干燥的實(shí)施例4-6得到的芒果核多酪提取物樣品，在超凈工作臺(tái)上用無(wú)菌的40%乙醇 水溶液溶解樣品至所需的濃度，備用。新鮮配制的培養(yǎng)基基于12rC條件下滅菌，當(dāng)培養(yǎng)基 冷至50-60°C時(shí)，于超凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒入滅菌的090mm的培養(yǎng)皿中，每皿15-20mL培 養(yǎng)基，待平板冷卻后，每皿中加入0.5mL菌懸液，用Ξ角玻璃涂棒均勻涂成薄板備用。將無(wú)菌 濾紙片浸入配好的藥液其中12h，漸干。每一含菌平板上，呈正Ξ角形排布3片帶藥無(wú)菌紙 片，細(xì)菌于37°C條件下培養(yǎng)2地，啤酒酵母和黑曲霉于30°C條件下培養(yǎng)5d，測(cè)其抑菌圈直徑。 根據(jù)抑菌圈大小來(lái)確定其抑菌效果。W不加芒果核多酪溶液只加菌懸液為對(duì)照。結(jié)果顯示， 本發(fā)明得到的芒果核多酪提取物具有強(qiáng)烈的抑菌效果。
[0098] 芒果核多酪物質(zhì)抗氧化活性研究：
[0099] 徑基是活性最強(qiáng)的活性氧化自由基，會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷，其清除率常常是 反應(yīng)藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)。同樣的，超氧陰離子也是生物體主要的活性氧自由基，由 其引起的體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化是機(jī)體衰老、屯、血管疾病及腫瘤發(fā)生的重要原因。芒果核多酪徑 基自由基清除能力如圖2所示，清除能力隨著多酪濃度增加而增加，當(dāng)芒果核多酪的濃度達(dá) 到0.6mg/ml時(shí)清除率能達(dá)到約90%，說(shuō)明芒果核多酪具有較強(qiáng)的清除徑基自由基作用。芒 果核多酪超氧陰離子自由基清除能力如圖3所示，芒果核多酪的濃度越高，清除超氧陰離子 自由基的能力越強(qiáng)，當(dāng)芒果核多酪的濃度達(dá)到0.5-0.6mg/mL，清除能力趨于平穩(wěn)，清除率達(dá) 到83%，但是清除能力較Vc弱些。芒果核多酪提取物DPPH自由基清除能力結(jié)果如圖4所示， 清除能力隨著多酪濃度增加而增加，當(dāng)濃度達(dá)到〇.6mg/mLW上時(shí)，其對(duì)DPPH自由基的清除 率能達(dá)到90%，說(shuō)明芒果核多酪具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基作用。W上數(shù)據(jù)說(shuō)明芒果果核 多酪對(duì)徑基自由基W及超氧陰離子自由基均具有較好的清除能力，研究結(jié)果將為芒果核資 源的綜合利用及其相應(yīng)的功能性食品開發(fā)提供參考借鑒。
[0100] W上通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳 實(shí)施例，不能被認(rèn)為用于限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的 精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該W權(quán)利要求書所界 定的為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種芒果核多酚提取物的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： (1) 將芒果核干燥粉碎； (2) 用醇濃度20-90%v/v的乙醇溶液或甲醇溶液作為溶劑對(duì)步驟（1)中得到的芒果核 干燥粉末進(jìn)行提取，然后將得到的提取液減壓濃縮或真空冷凍干燥至浸膏； (3) 將步驟（2)中得到的浸膏用水、醇濃度小于50%v/v的乙醇溶液或者醇濃度小于 50 % v/v的甲醇溶液溶解，除去不溶物，得到上樣溶液； (4) 取非極性或弱極性大孔吸附樹脂，將步驟(3)得到的上樣溶液上樣，先用水洗去雜 質(zhì)，然后用洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液;所述大孔吸附樹脂和芒果核干燥粉末重量比為1: 0.5-1:20； (5) 將步驟(4)收集的洗脫液減壓濃縮或真空冷凍干燥，得到芒果核多酚提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)的大孔吸附樹脂為AB-8、DM21 或者D101。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)的洗脫劑為濃度5%-95%v/v 的乙醇溶液或者甲醇溶液;洗脫劑的洗脫體積為1-10倍柱體積。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)的洗脫劑為醇濃度為40-70 % 的乙醇溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中提取方法為每千克芒果核 粉末加入2-50L醇濃度為30 %-80 %的乙醇溶液或甲醇溶液，熱回流或浸漬或浸漉提取2-5 次，熱回流提取時(shí)每次提取l_3h，浸漬或浸漉提取時(shí)每次提取10-15天，合并提取液。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)的提取是在40-60°C下進(jìn)行， 提取次數(shù)1-4次、每次提取時(shí)間為0.5-4h、料液比為1:1-1:40。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)具體是:取與芒果核粉 重量之比為1:5的弱極性大孔樹脂，將步驟(3)中得到的上樣溶液上樣，采用2-5BV的水洗去 雜質(zhì)，后采用3-10BV的50 %乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集50 %的乙醇溶液洗脫得到的洗脫液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具體是：（1)將芒果核干燥粉碎； (2)秤取芒果核粉末lkg加入20L濃度為50 %的乙醇溶液，熱回流提取三次，熱回流提取每次 lh，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏；（3)浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，過(guò)濾出去不溶 物，得到上樣溶液；（4)將上樣溶液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂AB-8體 積比為2:1，至提取液全部進(jìn)入樹脂床;采用2-5BV的水進(jìn)行洗脫，以除去雜質(zhì)，然后用3-10BV的40~60%乙醇溶液沖洗樹脂床，控制流出液流速2BV/h，收集乙醇溶液的洗脫液；（5) 將收集的洗脫液減壓濃縮至一定體積，進(jìn)行噴霧干燥，即得純化產(chǎn)物。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法得到的芒果核多酚提取物。10. 權(quán)利要求9所述的芒果核多酚提取物在制備食品、保健品或藥物上的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23L33/105GK105998109SQ201610471546
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月24日
【發(fā)明人】康超, 羅楊合, 李燕, 伍淑捷, 帥良, 覃盛, 李菁, 蘇時(shí)旭
【申請(qǐng)人】賀州學(xué)院