一種具有抗氧化活性與α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞葉多酚制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用大孔樹脂柱層析法制備具有抗氧化活性與α?葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞葉多酚的方法。該方法包括沸水浸提，過濾，離心取上清液，減壓濃縮，AB?8大孔樹脂柱層析純化；采用體外清除DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基的方法分析了枸杞葉多酚粗提物及經(jīng)AB?8大孔樹脂處理的多酚樣品的體外抗氧化活性，以阿卡波糖作為陽性對照測定了二者對α?葡萄糖苷酶活性的抑制作用。本方法制備的枸杞葉多酚對自由基有良好的清除能力，對α?葡萄糖苷酶也有顯著的抑制作用。本發(fā)明的枸杞葉多酚的制備方法具有提取效率高、重復性好、工藝溫和、成本低、不污染環(huán)境等優(yōu)點，制備的多酚具有顯著的抗氧化活性與α?葡萄糖苷酶抑制活性，因此在食品工業(yè)及醫(yī)藥行業(yè)具有廣闊的應用前景。
【專利說明】
一種具有抗氧化活性與α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞葉多酚制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及從枸杞葉茶中提取相關(guān)成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用大孔樹脂柱層析制備枸杞葉多酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]枸t己(Lyciumbarbarum L.)為前科枸t己屬多年生落葉小灌木，是中國傳統(tǒng)的藥食同源性滋補食品。據(jù)《本草綱目》記載，枸杞具有滋養(yǎng)肝腎、補充能量、改善視力，增強免疫力等功效。目前枸杞干燥果實已列入《中華人名共和國藥典》。在中國，枸杞的種植主要分布于陜、新疆、西藏、甘肅等地區(qū)，其中尤其以寧夏地區(qū)已經(jīng)將枸杞作為一種重要的經(jīng)濟作物對其開展了大面積的種植和利用。大量研究報道枸杞中含有豐富的包括多酚、多糖、類胡蘿卜素，氨基酸，不飽和脂肪酸等在內(nèi)的生物活性成分。多酚是廣泛存在于高等植物體中的次級代謝產(chǎn)物，具有十分廣泛的生物活性。研究發(fā)現(xiàn)綠茶中多酚類物質(zhì)對于抗氧化、抗腫瘤、降血糖、降血壓、降膽固醇、預防肥胖等具有良好的預防效果，目前對于傳統(tǒng)綠茶中多酚類物質(zhì)的研究已經(jīng)十分透徹。枸杞的藥用部位主要包括果實、根皮、芽葉、果柄等部位，長期以來研究者們將研究重要主要集中在枸杞果實方面，對枸杞果實中所含有的多糖、多酚、類胡蘿卜素等活性成分的研究已經(jīng)十分成熟，而對于枸杞的芽葉方面的活性成分研究還十分不完善。枸杞葉作為一種傳統(tǒng)的中藥材，具有清熱止咳，養(yǎng)肝明目等功效，對于虛勞發(fā)熱、熱毒瘡腫等疾病也有很好的治療效果。枸杞葉茶是以新鮮枸杞嫩葉為原料加工而成的新型茶品，在寧夏地區(qū)枸杞葉茶又被稱為“長壽茶”，近年來隨著枸杞的種植面積與應用方向的不斷擴大，枸杞葉茶這一新型茶品也逐漸受到消費者關(guān)注與青睞。茶多酚作為綠茶中最主要的生物活性成分已經(jīng)得到了十分廣泛的研究與利用，因而對枸杞葉茶這一新型茶品中所含有的多酚類物質(zhì)進行研究分析具有重要的意義與價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明旨在提供一種高效、便捷、低成本制備枸杞葉多酚的方法，實現(xiàn)本發(fā)明的具體方案如下:
[0004](I)取枸杞葉茶或枸杞葉以I: 40料液比用預熱去離子水浸泡并以96°C浸提30min，期間每隔5m i η攪拌一次。
[0005](2)將步驟(I)得到的枸杞葉茶浸提液經(jīng)8層紗布過濾去除殘渣得枸杞葉茶茶湯。
[0006](3)將步驟(2)得到的枸杞葉茶茶湯離心(4000rpm，I Omin)得淡黃色澄清上清液。
[0007](4)將步驟(3)得到的上清液倒入旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸溫度40 0C，待上清液旋至濃稠的墨綠色液體停止旋蒸，收集旋蒸液。
[0008](5)將步驟(4)得到的墨綠色旋蒸液體冷凍干燥得枸杞葉多酚粗提物并保存于-20C冰箱中備用。
[0009](6)將步驟(5)所得粗提物以料液比1:15配置成水溶液后上樣于AB-8大孔樹脂層析柱，以去離子水洗脫一個柱體積后繼續(xù)以80 %乙醇洗脫兩個柱體積，收集80 %乙醇洗脫液；
[0010](7)將步驟(6)所得帶有顏色的80%乙醇洗脫液收集并以40°C旋蒸，旋至洗脫液呈較濃稠的黃色液體為止。
[0011 ] (8)將步驟(6)所得的黃色旋蒸液凍干燥得高濃度的枸杞葉多酚純化樣品，并保存于-20 C冰箱中備用。
[0012](9)將步驟(5)得到的枸杞葉多酚粗提物及步驟(8)得到的枸杞葉多酚分別以去離子水配制成系列濃度溶液，測定其對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基的清除能力及二者對α_葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
[0013]制備得到的枸杞葉多酚純化樣品呈黃色粉末狀，該多酚樣品對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基有較好的清除能力，并呈現(xiàn)較明顯的劑量依賴關(guān)系，枸杞葉多酚對α-葡萄糖苷酶活性也有較好的抑制作用。枸杞葉多酚對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基及α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度(IC5q)分別為86.29、47.38、61.90、63.91yg/mL。
【附圖說明】
[0014]圖1枸杞葉多酚粗提物、枸杞葉多酚及維生素C對DPPH自由基的清除作用分析圖
[0015]圖2枸杞葉多酚粗提物、枸杞葉多酚及維生素C對ABTS自由基的清除作用分析圖
[0016]圖3枸杞葉多酚粗提物、枸杞葉多酚及維生素C對DPPH自由基的清除作用分析圖
[0017]圖4枸杞葉多酚粗提物、枸杞葉多酚及市售阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的體外抑制作用分析圖
【具體實施方式】
[0018]下面通過實施例，對本發(fā)明作進一步描述。
[0019]實施例1:
[0020](I)取枸杞葉茶或枸杞葉以I: 40料液比96 V水浴浸提30min。
[0021](2)將步驟(I)得到的枸杞葉茶浸提液經(jīng)8層紗布過濾得枸杞葉茶茶湯。
[0022](3)將步驟(2)得到的枸紀葉茶茶湯離心(4000rpm，1min)得上清液。
[0023](4)將步驟(3)得到的上清液倒入旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸溫度40°C，旋至較濃稠的墨綠色液體。
[0024](5)將步驟(4)得到的墨綠色液體冷凍干燥得枸杞葉多酚粗提物。
[0025](6)將步驟(5)所得粗提物以料液比1:15配置成水溶液后上樣于AB-8大孔樹脂層析柱，先后分別以去離子水及80 %乙醇洗脫，收集80 %乙醇洗脫液；
[0026](7)將步驟(6)所得帶有顏色的洗脫液收集到旋蒸瓶中旋蒸，旋蒸溫度為40°C，旋至較濃稠的黃色液體。
[0027](8)將步驟(6)所得的樣品旋蒸，冷凍干燥即為高濃度的枸杞葉多酚純化樣品。
[0028](9)將步驟(5)得到的枸杞葉多酚粗提物及步驟(8)得到的枸杞葉多酚以去離子水分別配制成一系列濃度溶液，測定其對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基清除能力及二者對α-葡萄糖苷酶的體外抑制作用。
[0029]制備得到的枸杞葉多酚純化樣品為黃色粉末，該茶多酚純化樣品對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基的清除率呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，枸杞葉多酚對α-葡萄糖苷酶有較好的體外抑制作用。枸杞葉多酚對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基及α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度(IC5Q)分別為86.29、47.38、61.90、63.91yg/mL。
[0030]DPPH 自由基清除率(% ) = [Ar(A1-A2) ]/Ao X 100%
[0031]AO組是以水代替樣品溶液，A2組是以乙醇代替DPPH溶液，Al組是樣品實驗。
[0032]ABTS自由基清除率(% ) = [A0-(A1-A2)]/A0 X 100%
[0033]AO組是水代替樣品溶液，A2組是以磷酸鹽緩沖溶液代替ABTS溶液，Al組是樣品實驗。
[0034]超氧陰離子自由基清除率(％) = [A0-(A1-A2)]/A0X100%
[0035]AO組是以水代替樣品，A2組是以磷酸鹽緩沖液代替NBT溶液，Al組是樣品實驗。
[0036]α-葡萄糖苷酶抑制率(%) = [ (Α1-Α2)/Α1 ] X 100%
[0037]Al、Α2分別為空白對照和不同濃度樣品溶液在405nm處吸光值。
[0038]綜上所述僅為本發(fā)明的較佳施例而已，并非用來限定本發(fā)明的實施范圍。即凡依本發(fā)明申請專利范圍的內(nèi)容所做的等效變化與修飾都應為本發(fā)明的技術(shù)。
【主權(quán)項】
1.一種具有抗氧化活性與α-葡萄糖苷酶抑制活性的枸杞葉多酚制備方法，其特征在于包括以下操作步驟: (1)取適量枸杞葉茶或枸杞葉以預熱去離子水按料液比1:40于96°C水浴中浸提30min，期間每隔數(shù)分鐘攪拌一次。 (2)將步驟(I)得到的枸杞葉茶浸提液經(jīng)8層紗布過濾去除茶渣得枸杞葉茶茶湯。 (3)將步驟(2)得到的枸紀葉茶茶湯離心(4000rpm，1min)得澄清上清液。 (4)將步驟(3)得到的上清液旋蒸，旋蒸溫度40°C，上清液旋蒸至顏色呈墨綠色為止。 (5)將步驟(4)得到的旋蒸液冷凍干燥得枸杞葉多酚粗提物，粗提物保存于-20°C冰箱中備用。 (6)將步驟(5)所得粗提物以料液比1:15配置成水溶液后過0.22μπι濾膜并通過AB-8大孔樹脂層析柱進行純化，先后分別以去離子水及80 %乙醇洗脫，收集80 %乙醇洗脫液； (7)將步驟(6)所得帶有顏色的80%乙醇洗脫液收集并旋蒸，旋蒸溫度為40°C，乙醇洗脫液旋蒸至呈現(xiàn)黃色為止。 (8)將步驟(7)所得旋蒸液冷凍干燥即得含量較高的枸杞葉AB-8多酚純化樣品。 (9)將步驟(5)所得的枸杞葉茶粗提物及步驟(8)得到的枸杞葉多酚純化樣品用去離子水配置系列濃度梯度水溶液，測定二者對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基的清除能力及對α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。2.制備的枸杞葉多酚為黃色粉末，對比枸杞葉多酚粗提物，枸杞葉多酚對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基清除效果顯著，并呈現(xiàn)明顯劑量依賴關(guān)系、對α-葡萄糖苷酶也有良好的抑制作用。枸杞葉多酚對DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基及α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度(IC5Q)分別為86.29、47.38、61.90、63.9lyg/mL。
【文檔編號】A61P39/06GK105998358SQ201610329600
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月16日
【發(fā)明人】曾曉雄, 周志陽
【申請人】南京農(nóng)業(yè)大學