一種具有保肝作用的藥物及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種具有保肝作用的藥物及其應(yīng)用，該藥物的有效成分為滇結(jié)香花30%乙醇提取部位或60%乙醇提取部位，將滇結(jié)香花用體積濃度為50%?80%乙醇超聲提取2次，將制得的提取液濃縮得醇提物，加水，經(jīng)石油醚2?3次萃取分離，分為石油醚部位與水部位。取水部位上大孔樹(shù)脂柱，分別用體積濃度為30%乙醇、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干即得。中藥滇結(jié)香花30%乙醇提取部位、60%乙醇提取部位顯著降低血清中ALT、AST、TBIL、TAB水平（P<0.05、0.01）；肝組織勻漿中測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，MDA水平明顯降低，提高肝組織中GSH、SOD的水平（P<0.01～0.05）；其具有保肝護(hù)肝作用，具有保護(hù)肝細(xì)胞膜穩(wěn)定性作用，可以用來(lái)制備保肝藥物，無(wú)毒副作用。
【專利說(shuō)明】
-種具有保肝作用的藥物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種具有保肝作用的藥物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝損傷是由多種病因引起且有多種因素參與的復(fù)雜過(guò)程。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病 已成為常見(jiàn)病、多發(fā)病，更為嚴(yán)重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率 高，極大地威脅著人類的健康。腹腔注射四氯化碳植物油溶液是目前常用的肝炎模型，該模 型在肝細(xì)胞受損時(shí)，胞質(zhì)膜破裂，細(xì)胞溶解，ALT、AST進(jìn)入血液，使血液中水平明顯升高；肝 細(xì)胞受損，TBA、TBIL代謝受阻，從而血清中TBA、TBIL含量升高;血清中ALT、AST、TBA、TBIL的 含量高低在一定程度上反映出肝細(xì)胞損傷程度，是反映肝細(xì)胞損傷常用指標(biāo);SOD是機(jī)體內(nèi) 天然存在的超氧自由基清除因子，而G細(xì)是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化劑和自由清除劑，MDA可作 為四氯化碳在肝內(nèi)代謝引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)得最終產(chǎn)物，其可作為機(jī)體內(nèi)氧化反應(yīng)程度的 指標(biāo)。通過(guò)檢測(cè)肝勻漿中S0D、G甜活力及MDA含量可反應(yīng)藥物對(duì)肝臟的保護(hù)作用。因此本申 請(qǐng)W血清中ALT、AST、TBA、TBIL的含量及肝組織勻漿中SOD、G甜活力及MDA含量為指標(biāo)探討 濱結(jié)香花不同提取部位對(duì)肝臟的保護(hù)作用。
[0003] 濱結(jié)香花是藏藥瑞香科結(jié)香屬植物濱結(jié)香(Edgeworthia gardneri Meissn)的干 燥花蕾部分。濱結(jié)香又名溝皮樹(shù)，長(zhǎng)梗結(jié)香，為桃金娘目瑞香科結(jié)香屬小喬木，花蕾、根和莖 皮均可入藥，一種藏族地區(qū)常用于預(yù)防和治療糖尿病、高血壓、高血脂、冠屯、病、血管炎、脈 管炎等的特色保健藥?，F(xiàn)代有研究表明，濱結(jié)香提取物具有抗炎和抗氧化作用，然未有關(guān)于 濱結(jié)香花不同提取部位具有保護(hù)肝損傷作用的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種無(wú)毒副作用、制備工藝簡(jiǎn)便、提取率高的具有保肝作 用的藥物及其應(yīng)用，W解決上述【背景技術(shù)】中提出的問(wèn)題。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案： 一種具有保肝作用的藥物，其有效成分為濱結(jié)香花30%乙醇提取部位或?yàn)I結(jié)香花60%乙 醇提取部位。
[0006] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:濱結(jié)香花30%乙醇提取部位、濱結(jié)香花60%乙醇提取部 位的制備過(guò)程為:將濱結(jié)香花用體積濃度為50%-80%乙醇超聲提取2次，每次用水量與濱結(jié) 香花的體積質(zhì)量比為25-30:3ml/g，超聲提取時(shí)間為化，將制得的提取液濃縮得醇提物，加 1-1.5倍水，經(jīng)石油酸2-3次萃取分離，分為石油酸部位與水部位。取水部位上大孔樹(shù)脂柱， 分別用體積濃度為30%乙醇、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到濱結(jié)香花30%乙醇 提取部位、濱結(jié)香花60%乙醇提取部位。
[0007] 濱結(jié)香花30%乙醇提取部位或?yàn)I結(jié)香花60%乙醇提取部位在制備保護(hù)肝藥物中的 應(yīng)用。
[0008] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:保肝藥物為保護(hù)肝損傷藥物。
[0009] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:保肝藥物為保護(hù)急性肝損傷藥物。
[0010] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:濱結(jié)香花30%乙醇提取部位、濱結(jié)香花60%乙醇提取部 位的制備過(guò)程為:將濱結(jié)香花用體積濃度為50%-80%乙醇超聲提取2次，每次用水量與濱結(jié) 香花的體積質(zhì)量比為25-30:3ml/g，超聲提取時(shí)間為化，將制得的提取液濃縮得醇提物，加 1-1.5倍水，經(jīng)石油酸2-3次萃取分離，分為石油酸部位與水部位。取水部位上大孔樹(shù)脂柱， 分別用體積濃度為30%乙醇、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到濱結(jié)香花30%乙醇 提取部位、濱結(jié)香花60%乙醇提取部位。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是： 1、該發(fā)明中藥濱結(jié)香花為藏藥瑞香科結(jié)香屬植物濱結(jié)香(Edgeworthia gardneri Meissn)的干燥花蕾部分，是藏族地區(qū)常用于預(yù)防和治療糖尿病、高血壓、高血脂、冠屯、病、 血管炎、脈管炎等的特色保健藥，具有很好的用藥基礎(chǔ)，其特點(diǎn)在于應(yīng)用了植物的花蕾部 位。經(jīng)試驗(yàn)，其具有抗四氯化碳致肝損傷作用，具有保肝護(hù)肝療效。
[0012] 2、該發(fā)明藥物濱結(jié)香花有效提取部位無(wú)毒副作用。
[0013] 3、該發(fā)明藥物濱結(jié)香花有效提取部位，制備工藝簡(jiǎn)便，提取率高，為該藥物的工業(yè) 化生產(chǎn)，提供了很好的基礎(chǔ)。
[0014] 4、該發(fā)明藥物濱結(jié)香花，為民族藥資源，民族藥事業(yè)的發(fā)展，有利于少數(shù)民族的經(jīng) 濟(jì)發(fā)展。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1是本發(fā)明小鼠肝組織結(jié)構(gòu)變化示意圖(A-G); 其中，（A):空白對(duì)照組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)化E，X200下同）;肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞排列 整齊； (B) :模型組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu);較多肝細(xì)胞壞死，呈片狀或灶狀，肝血竇擴(kuò)張，有大量 炎性細(xì)胞浸潤(rùn)； (C) :陽(yáng)性對(duì)照組肝臟組織結(jié)構(gòu);肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝細(xì)胞排列較整齊； (D) :濱結(jié)香花30%乙醇提取部位低劑量組肝臟組織結(jié)構(gòu);肝索排列素亂，肝血竇擴(kuò)張， 有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)； (E) :濱結(jié)香花30%乙醇提取部位高劑量組肝臟組織結(jié)構(gòu);肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝血竇稍 擴(kuò)張，肝細(xì)胞排列較整齊； (F) :濱結(jié)香花60%乙醇提取部位低劑量組肝臟組織結(jié)構(gòu);肝小葉結(jié)構(gòu)較清楚，肝細(xì)胞排 列較整齊，少量肝細(xì)胞可見(jiàn)水樣變性，或者灶狀壞死； 化）:濱結(jié)香花60%乙醇提取部位高劑量組肝臟組織結(jié)構(gòu);肝細(xì)胞排列較整齊，肝血竇稍 擴(kuò)張，少量肝細(xì)胞可見(jiàn)水樣變性，或者灶狀壞死。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的 實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都 屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0017]為證實(shí)本發(fā)明提取部位的保肝護(hù)肝作用，本發(fā)明W聯(lián)苯雙醋為陽(yáng)性對(duì)照，分別考 察了濱結(jié)香花不同提取部位對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，濱結(jié)香花30%乙醇提取部位、60%乙醇提取部位對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小 鼠有較好的治療作用。具體過(guò)程描述如下。
[001引 1.制備方法 1.1實(shí)施例1 稱取300g濱結(jié)香花，50%乙醇超聲提取2次，每次用水量2500ml，時(shí)間化，提取液濃縮得 醇提物，加1倍水，經(jīng)石油酸3次萃取分離，分為石油酸部位與水部位。取水部位上大孔樹(shù)脂 柱，分別用30%、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到濱結(jié)香花30%、60%乙醇提取部 位。
[0019] 1.2 實(shí)施例2 稱取300g濱結(jié)香花，70%乙醇超聲提取2次，每次用水量3000ml，時(shí)間化，提取液濃縮得 醇提物，加1.5倍水，經(jīng)石油酸2次萃取分離，分為石油酸部位與水部位。取水部位上大孔樹(shù) 脂柱，分別用30%、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到濱結(jié)香花30%、60%乙醇提取部 位。
[0020] 2.材料與方法 2.1材料和試劑 濱結(jié)香花不同提取部位提取物，提取方法，見(jiàn)實(shí)施例1、實(shí)施例2。
[0021] 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、總膽汁酸(TBA)測(cè)定試劑 盒，均購(gòu)自南昌百特生物高新技術(shù)股份有限公司；還原性谷脫甘膚(GSH)、丙二醒(MDA)、超 氧化物岐化酶(SOD)測(cè)定試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所;蘇木素-伊紅染液，購(gòu)自 南京建隸生物工程研究所;聯(lián)苯雙醋滴丸，購(gòu)自浙江萬(wàn)邦藥業(yè)股份有限公司；乙醇，購(gòu)自西 晚化工股份有限公司。
[0022] 2.1.1 儀器 高速冷凍離屯、機(jī)，購(gòu)自美國(guó)Beckman-Coulter公司；AU480生化分析儀，購(gòu)自美國(guó) Beckman-Coulter公司；超低溫冰箱，購(gòu)自美國(guó)化ermo公司；電熱恒溫水溫箱，購(gòu)自上海博迅 實(shí)業(yè)有限公司；電子分析天平，購(gòu)自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；紫外分光光度計(jì)UV- 1800,（蘇）制(05000111)號(hào);TKY-BMB型石蠟包埋機(jī)，購(gòu)自湖北省泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司；包 埋專用冷臺(tái)，購(gòu)自湖北省泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司；半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)LeicaRM2245，購(gòu)自 北京長(zhǎng)恒榮創(chuàng)科技有限公司;XI15正置顯微鏡，購(gòu)自日本奧林己斯有限公司。
[0023] 2.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 70只昆明種成年雄性小鼠，等級(jí)SPF級(jí)，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)： SCXK(湘)2013-0004,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0024] 2.2實(shí)驗(yàn)方法 將70只小鼠隨機(jī)分成7組，每組10只。分別為空白對(duì)照組、模型組、聯(lián)苯雙醋組（陽(yáng)性對(duì) 照組）、30%乙醇提取部位低劑量組(3L)、30%乙醇提取部位高劑量組(3H)、60%乙醇提取部位 低劑量組(6L)、60%乙醇提取部位高劑量組(6H)。將濱結(jié)香花各個(gè)部位提取物混懸在0.5%的 簇甲基纖維素鋼溶液中，濱結(jié)香花各個(gè)部位低、高劑量分別為0.1邑/4邑、0.3邑/1^，聯(lián)苯雙醋 混懸在0.5%的簇甲基纖維素鋼溶液中，聯(lián)苯雙醋組的劑量為0.15g/kg。空白對(duì)照組和模型 組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。連續(xù)給藥7天，第6天給藥化后，腹腔注射0.2%四氯化碳花生油 溶液，劑量為lOml/kg?？瞻讓?duì)照組給予相應(yīng)體積的花生油。造模后，禁食不禁水，1化后給藥 1次，化后眼眶取血，全血SOOOr/min，離屯、5min，取血清，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀按照說(shuō)明測(cè) 定八1；1\451\了8化、了84各項(xiàng)指標(biāo)。斷頸脫白致死，并于冰臺(tái)快速分離相同部位肝臟組織2份， 其中一份10%甲醒固定，制備病理切片；另一份肝臟組織稱取0.1 g左右，制備成10%的肝組織 勻漿，500化/min離屯、5min取上清液，按照各個(gè)測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定SOD、MDA、GSH、蛋白的 含量。
[0025] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表1
注：*與空白對(duì)照組比較，吁<〇.〇5，** Ρ<0.01;Δ與模型組比較，Ap<〇.〇5，^P< 0.01。
[0026] 從表1可W看出，模型組與空白組對(duì)照，血清中41；1\451\了8化、了84含量明顯增高， 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，說(shuō)明造模成功。濱結(jié)香花不同提取部位低、高劑量組與模型組 比較，ALT、AST、TBIL、TBA含量明顯降低(P<0.01 -0.05)，說(shuō)明濱結(jié)香花30%乙醇提取部位、 60%乙醇提取部位具有較強(qiáng)的保肝作用。
[0027] 表 2 注：*與空白對(duì)照組比較，*P<〇.〇5, **
Ρ<0.01;Δ與模型組比較，Ap<〇.〇5，^P< 0.01。
[0028] 從表2可W看出，模型組與空白組對(duì)照比較，肝組織勻漿中S0D、G甜含量明顯降低， MDA含量明顯升高，亦說(shuō)明造模成功。濱結(jié)香花不同提取部位低、高劑量組與模型組比較，除 30%乙醇提取部位低劑量組SOD含量雖有所升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05) ; 30%乙醇提取部 位高劑量組、60%乙醇提取部位低、高劑量組SOD、GSH含量明顯降低，MDA含量明顯升高，具有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇. 01-0.05)。
[0029] 綜上說(shuō)明，濱結(jié)香花30%乙醇提取部位、濱結(jié)香花60%乙醇提取部位具有保肝護(hù)肝 作用，具有保護(hù)肝細(xì)胞膜穩(wěn)定性作用，可W用來(lái)制備保肝藥物。
[0030] 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在 不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠W其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論 從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán) 利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有 變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
[0031] 此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書(shū)按照實(shí)施方式加 W描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包 含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書(shū)的運(yùn)種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng) 將說(shuō)明書(shū)作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可W經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員 可W理解的其他實(shí)施方式。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有保肝作用的藥物，其特征在于，其有效成分為滇結(jié)香花30%乙醇提取部位或 滇結(jié)香花60%乙醇提取部位。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有保肝作用的藥物，其特征在于，滇結(jié)香花30%乙醇提取部 位、滇結(jié)香花60%乙醇提取部位的制備過(guò)程為:將滇結(jié)香花用體積濃度為50%-80%乙醇超聲 提取2次，每次用水量與滇結(jié)香花的體積質(zhì)量比為25-30:3ml/g，超聲提取時(shí)間為2h，將制得 的提取液濃縮得醇提物，加1-1.5倍水，經(jīng)石油醚2-3次萃取分離，分為石油醚部位與水部 位。取水部位上大孔樹(shù)脂柱，分別用體積濃度為30%乙醇、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 旋干，得到滇結(jié)香花30%乙醇提取部位、滇結(jié)香花60%乙醇提取部位。3. 滇結(jié)香花30%乙醇提取部位或滇結(jié)香花60%乙醇提取部位在制備保護(hù)肝藥物中的應(yīng) 用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的滇結(jié)香花30%乙醇提取部位或滇結(jié)香花60%乙醇提取部位在制 備保肝藥物中的應(yīng)用，其特征在于，保肝藥物為保護(hù)肝損傷藥物。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的滇結(jié)香花30%乙醇提取部位或滇結(jié)香花60%乙醇提取部位在制 備保肝藥物中的應(yīng)用，其特征在于，保肝藥物為保護(hù)急性肝損傷藥物。6. 根據(jù)權(quán)利要求3-5任一所述的滇結(jié)香花30%乙醇提取部位或滇結(jié)香花60%乙醇提取部 位在制備保肝藥物中的應(yīng)用，其特征在于，滇結(jié)香花30%乙醇提取部位、滇結(jié)香花60%乙醇提 取部位的制備過(guò)程為:將滇結(jié)香花用體積濃度為50%_80%乙醇超聲提取2次，每次用水量與 漬結(jié)香花的體積質(zhì)量比為25_30 : 3ml/g，超聲提取時(shí)間為2h，將制得的提取液濃縮得醇提 物，加1-1.5倍水，經(jīng)石油醚2-3次萃取分離，分為石油醚部位與水部位。取水部位上大孔樹(shù) 脂柱，分別用體積濃度為30%乙醇、60%乙醇洗脫，分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，得到滇結(jié)香花30% 乙醇提取部位、滇結(jié)香花60%乙醇提取部位。
【文檔編號(hào)】A61K133/00GK105998385SQ201610575783
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月21日
【發(fā)明人】李敏, 南彩云, 朱繼孝, 鐘國(guó)躍
【申請(qǐng)人】江西中醫(yī)藥大學(xué)