一種用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由以下原料藥制成：當歸1～7份、藏紅花1～3份、川穹1～4份、杜仲1～3份和血滕1～3份。還公開了其制備方法。本發(fā)明提供的一種用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑，能夠有效治療骨關(guān)節(jié)疾病。本發(fā)明的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑具有明顯的降低IL－1β表達作用和降低TNF－α表達作用，從而抑制炎癥反應(yīng)，保護軟骨組織。本發(fā)明的苗藥制劑可以有效治療頸椎病，療效較好，具有補益肝腎，強筋壯骨，勝濕祛風(fēng)，活血通絡(luò)之功效。還可以有效抑制神經(jīng)病理性疼痛。本發(fā)明的制備方法簡單易操作，條件溫和易控制，制備時間短，成本低，易于大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】
-種用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及一種王敷靈苗藥制劑及其制備方法和應(yīng)用，具體屬于苗藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 在交通不便的年代，苗族人生活在山區(qū)要負重翻山越嶺，常年在田里勞作，女人長 期埋頭刺繡，造成很多頸、腰椎和膝關(guān)節(jié)不同程度損傷的病人。頸椎病是由于頸椎間盤退行 性變、頸椎骨質(zhì)增生所引起的一系列臨床癥狀的綜合征?？砂l(fā)生于任何年齡，近年來不少年 輕人甚至中小學(xué)生也患上了此類疾病，而且發(fā)病年齡明顯趨向年輕化。頸椎病是一種職業(yè) 病，發(fā)病率高，治療時間長，治療后極易復(fù)發(fā)。頸椎病由于慢性發(fā)展的特點，最初的頸肩僵 硬、脹痛、麻木等癥狀嚴重影響工作、生活，如不及時治療，重則會發(fā)展為失眠、失聰甚至擁 痕，喪失生活的自理能力。
[0003] 骨性關(guān)節(jié)炎是一種中老年人常見的W軟骨退行性變和繼發(fā)骨質(zhì)增生為主的慢性 退行性骨關(guān)節(jié)病，國內(nèi)外骨性關(guān)節(jié)炎總患病率約15%，60歲W上達50%，而75歲W上人群中 80% W上患有骨性關(guān)節(jié)炎。骨關(guān)節(jié)疾病對人類的威脅正在迅速增加，然而長期W來，對于骨 關(guān)節(jié)疾病的研究及治療，一直未能找到真正有效的方法。因此，研究一種用于治療骨關(guān)節(jié)疾 病的苗藥制劑，顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種王敷靈苗藥制劑及其制備方 法和應(yīng)用，該制劑能夠有效治療骨關(guān)節(jié)疾病，制備方法簡單。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目標，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0006] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸1~7份、藏紅花1 ~3份、川寫1~4份、杜仲1~3份和血滕1~3份。
[0007] 進一步地，前述王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸4份、 藏紅花2份、川寫3份、杜仲2份和血滕2份;所述制劑為外用制劑。
[000引前述王敷靈苗藥制劑，是將藥液滴于敷貼藥墊上制得的貼劑。
[0009] -種王敷靈苗藥制劑的制備方法，包括W下步驟:按重量比例稱取當歸，藏紅花， 川寫，杜仲和血滕，分別用水洗凈，陰干，切片;將切片的原料藥混合后加入乙醇溶液，加熱 回流提取1~3次，過濾，合并提取液得到藥液，維持藥液中乙醇的體積濃度，再將藥液制做 成外用制劑即得。優(yōu)選的，切片的原料藥的厚度為0.1~1cm。
[0010] 前述王敷靈苗藥制劑的制備方法，具體包括W下步驟:按重量比例稱取當歸，藏紅 花，川寫，杜仲和血滕，分別用水洗凈，陰干，切片;將切片的原料藥混合后加入體積分數(shù)為 20 %~90 %的乙醇溶液，在20°C~95 °C加熱回流提取1~3次，過濾，合并提取液得到藥液， 維持藥液中乙醇的體積濃度為40%~60%，再將藥液制做成貼劑即得。維持藥液中乙醇的 體積濃度為40%~60%，可W使得藥效成分保持穩(wěn)定，不易變質(zhì)，從而保證療效。
[0011] 前述王敷靈苗藥制劑的制備方法中，取藥液0.5~2mL滴于1~5cm2的敷帖藥墊上， 即得貼劑。
[0012] 前述王敷靈苗藥制劑的制備方法中，敷貼藥墊通過W下方法制備:將膠水均勻涂 布在無紡布上，加熱揮發(fā)膠水中溶劑，再將消毒后的棉花貼到涂膠無紡布的中屯、區(qū)域，備 用;取質(zhì)量分數(shù)為2%~10%的天竺葵色素水溶液0.5mL~1.5mL，均勻涂布到中屯、區(qū)域的棉 花上，隨后再在棉花上面放置離型紙或離型膜即得。本發(fā)明敷貼藥墊中加入了天竺葵色素， 使用時與藥液結(jié)合，能更好地促進藥液被機體吸收，從而產(chǎn)生更好的療效。本發(fā)明貼劑貼穴 位具有更好的療效。
[0013] 前述王敷靈苗藥制劑的制備方法中，原料藥混合后加入乙醇溶液時，按照質(zhì)量比， 混合后原料藥:乙醇溶液= 1:6~20。
[0014] 前述王敷靈苗藥制劑的制備方法中，加熱回流提取時間為每次0.化~化。
[0015] -種王敷靈苗藥制劑在制備治療骨關(guān)節(jié)疾病藥物中的應(yīng)用，特別是在制備治療頸 椎病藥物、制備治療神經(jīng)病理性疼痛藥物或者制備治療膝骨性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明王敷靈苗藥制劑是一種可W用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑，是由當歸， 藏紅花，川寫，杜仲和血滕藥材組成的復(fù)方制劑，能夠有效治療骨關(guān)節(jié)疾病，尤其是治療膝 骨性關(guān)節(jié)炎、動力失衡頸椎病、腰5脊神經(jīng)結(jié)扎引起的神經(jīng)病理性疼痛等多種疾病。
[0017] 方中當歸:補血，活血，調(diào)經(jīng)止痛，藏紅花:活血，桂疲，止痛。當歸、藏紅花二味藥物 共為君藥。川寫：活血行氣，桂風(fēng)止痛，為處方中臣藥。杜仲:補益肝腎、強筋壯骨、調(diào)理沖任， 為處方中佐藥。血滕:補血，活血，通絡(luò)，為處方中使藥。
[0018] 為了確保本發(fā)明制劑的科學(xué)、合理、有效，發(fā)明人進行了一系列實驗。
[0019] 一、篩選實驗
[0020] 1、提取時乙醇濃度的篩選
[0021] W處方中主藥當歸的藥效成分阿魏酸和蔓本內(nèi)醋，W及藏紅花的藥效成分徑基黃 色素 A含量為評價指標，對不同乙醇濃度進行篩選，結(jié)果見表1。由表1可知，提取時，隨著乙 醇濃度從10%上升到100%，阿魏酸、蔓本內(nèi)醋和徑基黃色素 A的含量有顯著性差異;而乙醇 濃度從20%-90%，阿魏酸、蔓本內(nèi)醋和徑基黃色素 A的含量變化不大，無統(tǒng)計學(xué)差異，且明 顯高于10%和100%，因此，本發(fā)明中原料藥混合后加入體積分數(shù)為20%-90%的乙醇。
[0022] 表1不同乙醇濃度篩選結(jié)果表
[0023]
[0024] 2、提取溫度的篩選
[0025] W處方中主藥當歸的藥效成分阿魏酸和蔓本內(nèi)醋，W及藏紅花的藥效成分徑基黃 色素 A含量為評價指標，對不同提取溫度進行篩選，結(jié)果見表2。由表2可知，隨著提取溫度從 2(TC上升到95Γ，阿魏酸、蔓本內(nèi)醋和徑基黃色素 A的含量變化不大，無統(tǒng)計學(xué)差異，因此， 選擇提取溫度20-95 °C。
[0026] 表2不同提取溫度篩選結(jié)果表
[0027]
[0028] ~3、提取次數(shù)的篩選 '
' '
[0029] W處方中主藥當歸的藥效成分阿魏酸和蔓本內(nèi)醋，W及藏紅花的藥效成分徑基黃 色素 A含量為評價指標，對不同提取次數(shù)進行篩選，結(jié)果見表3。由表3可知，隨著提取次數(shù)從 1次上升到3次，阿魏酸、蔓本內(nèi)醋和徑基黃色素 A的含量沒有顯著性差異，因此，提取次數(shù)1- 3次均能滿足要求。
[0030] 表3不同提取次數(shù)篩選結(jié)果表
[0031] '[0032]~二、防治大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎實驗
' '
[0033] 1材料與方法
[0034] 1.1實驗動物
[0035] SD大鼠180只，雌雄各半，體重（200±20)g，SPF級，購自長沙天勤生物技術(shù)有限公 司，動物許可證號為：SCXK(湘）2014-0011。按照國際實驗動物保健和使用指導(dǎo)原則對大鼠 進行飼養(yǎng)，即溫度為25 ± 2 °C，濕度為55 ± 5 %。
[0036] 1.2主要試劑與儀器
[0037] 木瓜蛋白酶（Sigama公司，P3250-5g);化ISA試劑盒（化-10、了^-日），加3日61〇公 司；Quant Reverse Transc;rip1:ase試劑盒，德國Qia-gen公司產(chǎn)品。DU 800分光光度計，美 國Beckman公司產(chǎn)品。
[0038] 1.3動物分組、模型制備及給藥
[0039] 180只SD大鼠分為本發(fā)明苗藥高劑量組、本發(fā)明苗藥中劑量組、本發(fā)明苗藥低劑量 組、陽性對照組、空白對照組及模型組，各30只。制備大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎模型：無菌條件下， 腔水合氯醒麻醉下于雙膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射濃度為4 %的木瓜蛋白酶溶液0.2mL，每2d注射1次， 共注射2周。
[0040] 1.4實驗動物給藥及處理
[0041] 模型制備成功后，每只大鼠按體重貼患處/穴位給藥，根據(jù)人鼠換算出服藥量，每 日2次?？瞻捉M用正常大鼠給予蒸饋水貼患處/穴位;模型組用大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎模型大鼠 給予蒸饋水貼患處/穴位;本發(fā)明苗藥高劑量組、本發(fā)明苗藥中劑量組、本發(fā)明苗藥低劑量 組分別于大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎模型大鼠患處貼劑量為0.5血、0.25mL、0.125mL的本發(fā)明苗藥。 陽性對照組劑量為〇.25mL。治療W2周為1個療程，6組大鼠分別于模型制作成功給藥后14d、 28d、42d分批處理。腹腔麻醉后抽取關(guān)節(jié)腔灌洗液，置于-80°C保存，后取出雙膝關(guān)節(jié)置于 10%甲醒溶液中保存，待觀察與檢測。
[0042] 1.5觀察指標與方法
[0043] (1)-般情況觀察:包括動物毛發(fā)光澤度、食量、體重、活動度、步態(tài)、精神狀況。
[0044] (2)血液流變學(xué)測定:動物麻醉后，采用腹腔靜脈取血，急送血液流變學(xué)測定。
[0045] (3)組織病理學(xué)檢測：取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)，沿中屯、矢狀面剖成兩半，置于10%甲醒溶液 中1周，經(jīng)邸TA-2化(pH7.4)脫巧2個月，脫巧后進行常規(guī)皿染色。二甲苯透明后石蠟包埋， 肥染色切片觀察滑膜，軟骨面和細胞結(jié)構(gòu)。
[0046] (4)化-10和TNF-a測定：采用酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-1 inked immunosorbent- assay，ELISA)方法。
[0047] 1.6統(tǒng)計學(xué)處理
[004引采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，實驗數(shù)據(jù)均W均數(shù)±標準差（占：8 )表示，組間 差異采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗，WP<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0049] 蛹果
[(X)加]2.1動物造模后一般情況觀察
[0051]注射木瓜蛋白酶第1天后均出現(xiàn)精神異常，如煩躁或萎靡，反應(yīng)遲純，雙下肢脹活 動不利。1周后動物體重出現(xiàn)顯著差異，本發(fā)明苗藥組大鼠體重大于其他各組。8周后本發(fā)明 苗藥組大鼠膝關(guān)節(jié)腫脹程度及活動度優(yōu)于其他組。大體解剖發(fā)現(xiàn)模型組大鼠膝關(guān)節(jié)疲血明 顯，本發(fā)明苗藥組大鼠疲血表現(xiàn)較輕。
[0化2] 2.2血液流變學(xué)結(jié)果
[0化3]用藥后30d、60d、90d每組分別處死10只，腹腔靜脈取血隨機取6個樣本測血流變。 ①全血高切比較結(jié)果見表4:早期、中期和晚期本發(fā)明苗藥高劑量組、本發(fā)明苗藥中劑量組、 本發(fā)明苗藥低劑量組均可降低全血高切，且效果優(yōu)于陽性對照組。說明本發(fā)明苗藥在SD大 鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎各期均有降低全血高切的治療效果。②血漿黏度比較結(jié)果見表5。早期、中 期和晚期本發(fā)明苗藥高劑量組、本發(fā)明苗藥中劑量組、本發(fā)明苗藥低劑量組均可降低血漿 黏度，且效果優(yōu)于陽性對照組好。表明本發(fā)明苗藥可降低血漿黏度。③紅細胞變形指數(shù)比較 結(jié)果見表6。早期、中期和晚期本發(fā)明苗藥高劑量組、本發(fā)明苗藥中劑量組、本發(fā)明苗藥低劑 量組均可升高紅細胞變形指數(shù)，且優(yōu)于陽性對照組。綜上結(jié)果表明本發(fā)明苗藥可改善局部 血液循環(huán)。
[0054]表4SD大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎造模本發(fā)明苗藥治療后全血高切的比較
[ο化5]
[0化6] 注:*與模型組比較，Ρ<0.05
[0057]表5SD大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎造模本發(fā)明苗藥治療后血漿黏度的比較 [0化引
[0060] 注:*與模型組比較，Ρ<0.05
[0061] 表6SD大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎造模本發(fā)明苗藥治療后紅細胞變形指數(shù)的比較
[0062]
[0063] 注與模型組比較，Ρ<0.05
[0064] 2.3組織病理學(xué)觀察
[0065] 圖1是組織病理學(xué)切片圖。肉眼觀察:模型組大鼠膝關(guān)節(jié)有明顯的關(guān)節(jié)軟骨潰瘍、 脫失，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有淡黃色炎性液體;本發(fā)明苗藥低、中、高劑量組大鼠關(guān)節(jié)面光滑，接近空白 組，關(guān)節(jié)液量少清亮。皿染色:造模后30d，本發(fā)明苗藥（圖1 (a))關(guān)節(jié)軟骨欠光滑，但軟骨細 胞分布均勻，排列整齊，各層次清晰，無明顯細胞簇集現(xiàn)象，潮線完整;模型組病理切片（圖1 (b))上呈典型的軟骨受損，軟骨面不光滑，部分軟骨脫失，軟骨細胞排列素亂。造模后60d， 本發(fā)明苗藥組（圖1(c))軟骨面平整光滑，滑膜無明顯增厚;模型組（圖1(d))部分軟骨面出 現(xiàn)大片缺失，伴有滑膜炎，滑膜增厚，軟骨壞死，軟骨下骨硬化。造模后90d，本發(fā)明苗藥組 (圖1(e))軟骨面尚光滑，無明顯潰瘍、缺失;模型組(圖1(f))關(guān)節(jié)軟骨表面壞死，潰瘍形成， 部分缺失，軟骨下骨質(zhì)硬化，偶見股骨囊腫及骨寶生成。
[0066] 2.4關(guān)節(jié)液中比_10、了肥_曰含量的表達
[0067] 本發(fā)明苗藥組IL-Ιβ表達明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（見表7)。證 明本發(fā)明苗藥組具有明顯的降低IL-Ιβ表達作用，從而抑制炎癥反應(yīng)。本發(fā)明苗藥組TNF-a 表達明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(見表7)。證明本發(fā)明苗藥組具有明顯的降 低TNF-a表達作用，從而抑制炎癥反應(yīng)，保護軟骨組織。
[0068] 表7SD大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎造模本發(fā)明苗藥治療后各組關(guān)節(jié)液中IL-Ιβ和TNF-a表達
[0069]
[0070] 注:*與模型組比較，P<0.05
[0071] Ξ、動力失衡頸椎病模型大鼠實驗
[0072] 1實驗材料
[0073] 1.1 動物
[0074] SD雄大鼠，SPF級，購自長沙天勤生物技術(shù)有限公司，動物許可證號為：SCXK(湘） 2014-0011〇
[0075] 1.2 儀器
[0076] X線機，由北京萬東集團生產(chǎn)，型號:新東方1000型。
[0077] 2方法與結(jié)果 [007引 2.1造模
[00巧]選取80~lOOg SD雄大鼠80只飼養(yǎng)Ξ月后(體重為350-400g)準備進行手術(shù)造模。 用10 %水合氯醒3.5mL/kg腹腔注射麻醉后于頸后部備皮，嚴格無菌操作，后正中切口長約2 ~3cm，切開皮膚、下皮層，嚴格止血，然后切斷頸闊肌，頭、頸、梟最長肌，頸骼肋肌和頭半棘 肌，并切除l.OcmW免斷端愈合，逐層縫合。假手術(shù)組除不切斷肌肉群外，其余操作同上。
[0080] 2.2分組與給藥
[0081] 造模10周后將成活的60只大鼠（80只中，手術(shù)后死亡20只）按體重隨機分成6組:假 手術(shù)組、模型對照組、頸復(fù)康顆粒組（2.33g/kg，臨床用量的7倍）、本發(fā)明苗藥高劑量組 (1.12g/kg，臨床用量的14倍）、中劑量組(0.56g/kg，臨床用量的7倍）、低劑量組(0.28g/kg， 臨床用量的3.5倍），每組10只。各組均為貼患處/穴位，給藥體積為lOmL/kg，模型組和假手 術(shù)組給予同體積蒸饋水。給藥4周后進行指標檢測。
[00劇 2.3檢測指標
[0083] 2.3.1斜板運動功能
[0084] 將大鼠身體縱軸和斜板縱軸一致，斜板每升高5°，大鼠能停留10s，記錄斜板與水 平面的最大夾角。斜板實驗評價的運動功能W斜板的角度來衡量，角度越低，動力失衡頸椎 病越嚴重。
[0085] 2.3.2X線片評分
[0086] 用10%水合氯醒3.5mL/kg腹腔注射麻醉后分別攝頸椎的正、側(cè)位X光片。評分標準 如下①頸椎生理彎曲（0-3分）：生理彎曲存在(0分），生理彎曲輕度僵硬（1分)生理彎曲喪失 (2分），生理彎曲完全喪失并有反屈(3分）。②椎體前后緣骨寶(0-3分）：無(0分），輕度增生 (1分），中度增生（2分），重度增生(3分）。③椎間隙狹窄（0-3分）：正常(0分），輕度狹窄（1 分），中度狹窄（2分），重度狹窄（3分）。④鉤椎關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)(0 - 3分）：正常(0分），模糊 不清（1分），輕度增生硬化(2分），明顯增生硬化(3分）。動力失衡型線影像評分越高，動力失 衡頸椎病越嚴重。
[0087] 2.4實驗結(jié)果
[008引 2.4.1斜板運動功能
[0089] 斜板運動功能測試結(jié)果如表8所示。
[0090] 表8各組斜板運動結(jié)果（X + S )
[0091]
[0092] 注:與假手術(shù)組比較ΔΔΡ<0.01，與模型對照組比較沖<0.05, * *P<0.01。
[0093] 2.4.2影像學(xué)評分
[0094] 影像學(xué)評分結(jié)果如表9所示。
[0095] 表9各組X線片評分（x±s )
[0096]
[0097] 注:與假手術(shù)組比較ΔΡ<0.05，ΔΔΡ<0.01;與模型對照組比較巧<0.05, *大P <0.01。
[009引四、抑制腰5脊神經(jīng)結(jié)扎引起的神經(jīng)病理性疼痛
[0099] 1材料和方法
[0100] 1.1實驗動物及分組
[0101] 實驗共使用60只雄性SD大鼠，體質(zhì)量150~170g，清潔級標準，購自長沙天勤生物 技術(shù)有限公司，動物許可證號為:SCXK(湘)2014-0011。動物分籠飼養(yǎng)，自由飲食，隔日更換 墊料。室溫保持在20~25°C，濕度50%~80 %，12:12h白天一黑夜循環(huán)照明。所有實驗步驟 都盡量減輕動物的痛苦并按照有關(guān)實驗動物的使用原則操作。所有大鼠分為6組，前3組分 別給予10,30,90mg/kg本發(fā)明苗藥，第4組為對照組，給予溶劑，第5組為lOOmg/kg陽性對照 藥連續(xù)給藥組，第6組為溶劑對照組。
[0102] 1.2實驗方法
[0103] 采用經(jīng)典的腰5脊神經(jīng)結(jié)扎加切斷模型，具體方法如下。給予lOOmL/L水合氯醒 (3.5Ml/kg，i.p.)麻醉后，實驗大鼠經(jīng)備皮、消毒，分離左側(cè)L5脊神經(jīng)，用3-0醫(yī)縫合線結(jié)扎 并切斷，逐層縫合切口。
[0104] 采用50%機械刺激撤足闊值檢測病理性疼痛是否出現(xiàn)。為了消除屯、理因素對測試 結(jié)果的影響，在撤足闊值的基礎(chǔ)值測定前1周，每日將大鼠放置于測試裝置內(nèi)不少于20min， 直至大鼠搔抓、直立、行走等活動完全停止，處于安靜狀態(tài)時為止。監(jiān)測裝置為透明有機玻 璃箱（18X25 X 18cm)，箱底由金屬網(wǎng)制成（網(wǎng)格為0.8X0.8cm)，通過網(wǎng)孔用von化巧hair 可W對大鼠足底部皮膚施加機械性刺激。至大鼠體質(zhì)量在(230±20)g時開始采用化-Down 方法，每天檢測1次50%機械性撤足闊值(g)，W獲得基礎(chǔ)值。2~3天后行腰5脊神經(jīng)切斷術(shù)， 術(shù)后第4天開始新的測試，50%機械刺激撤足闊值顯著下降者為模型成功。
[0105] 將成功模型鼠分為本發(fā)明苗藥組與溶劑對照組，本發(fā)明苗藥組連續(xù)7d于每天早上 9:00貼患處/穴位給予本發(fā)明苗藥，溶劑對照組貼患處/穴位給予生理鹽水。給藥后化測試 50%機械刺激撤足闊值，測試于停藥后繼續(xù)進行，直至大鼠50%機械刺激撤足闊值恢復(fù)至 術(shù)后水平。
[0106] 撤足陽性反應(yīng)的判定:①測試時化ir垂直，微彎，在大鼠足屯、部停留的6~8s內(nèi)，出 現(xiàn)快速撤足為陽性反應(yīng);②撤離化ir刺激作用的瞬間大鼠出現(xiàn)撤足，亦為陽性反應(yīng);③在刺 激期間大鼠行走，為可疑反應(yīng)，待大鼠安靜后重新檢測。
[0107] 1.3統(tǒng)計方法
[0108] 所有行為學(xué)測試結(jié)果均采用非參數(shù)檢驗進行分析。同一組大鼠不同測試時間點的 數(shù)據(jù)先用化iedman AN0NA檢驗差異，然后再用兩組相關(guān)數(shù)據(jù)的秩和檢驗分析。用SPSS 10.0 (SPSS Inc,USA)進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)+標準誤(Mean+ SE)表示，P<0.05認為 有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0109] 2 結(jié)果
[0110] 2.1-次性貼患處/穴位本發(fā)明苗藥對機械性痛超敏的抑制作用
[0111] 量效實驗結(jié)果顯示：在3.75mg/kg、7.5mg/kg、15mg/kg、30mg/kg和60mg/kg實驗組 中，30mg/kg劑量組開始有顯著效果。本實驗W30mg/kg為中間劑量，將模型成功大鼠隨機分 為本發(fā)明苗藥不同劑量組（lOmg/kg、30mg/kg和90mg/kg)、溶劑對照組和陽性對照組(加己 噴下lOOmg/kg)，每組10只。采用貼患處/穴位給藥，給藥后分別于化、3h、化和化測試大鼠 50%機械刺激撤足闊值。
[0112] -次性貼患處/穴位lOmg/kg本發(fā)明苗藥不能抑制機械性痛超敏，它與對照組沒有 差異，大鼠的機械刺激撤足闊值一直維持術(shù)后狀態(tài)（圖2)。貼患處/穴位30mg/kg本發(fā)明苗藥 于給藥后化已經(jīng)有顯著效果(Mann-Whitney U test，P<0.05)，作用維持化W上，到化基本 恢復(fù)至術(shù)后水平（圖3)D90mg/kg的本發(fā)明苗藥作用與lOOmg/kg的加己噴下作用相似（圖4)。 陽性藥加己噴下lOOmg/kg作用在化時已經(jīng)起效，藥效能維持化W上（圖5)。一次性貼患處/ 穴位本發(fā)明苗藥大于30mg/kg時，可部分緩解機械性痛超敏，30mg/kg與90mg/kg作用沒有明 顯差異，且運種作用與加己噴下對機械性痛超敏的作用不同。
[0113] 2.2連續(xù)7天采用本發(fā)明苗藥灌胃對痛超敏的作用
[0114] 連續(xù)7天灌胃給予本發(fā)明苗藥與對照組相比有明顯的抑制機械性痛超敏的作用 (Mann-Whitney U test，P<0.05)，運種作用可維持到給藥后4d。說明藥物作用有一定的累 積效應(yīng)，但每次給藥后本發(fā)明苗藥對大鼠機械性痛超敏的抑制作用相互之間沒有明顯統(tǒng)計 學(xué)差異(Wilcoxon test，P>0.05)，停藥后運種趨勢消失，體現(xiàn)出藥物在體內(nèi)自然消退的過 程(圖6)。
[0115] 本發(fā)明的有益之處在于:本發(fā)明提供的一種王敷靈苗藥制劑，能夠有效治療骨關(guān) 節(jié)疾病，尤其是治療膝骨性關(guān)節(jié)炎、動力失衡頸椎病、腰5脊神經(jīng)結(jié)扎引起的神經(jīng)病理性疼 痛等多種疾病。本發(fā)明的苗藥制劑具有明顯的降低IL-Ιβ表達作用和降低TNF-a表達作 用，從而抑制炎癥反應(yīng)，保護軟骨組織。本發(fā)明的苗藥制劑可W有效治療頸椎病，療效較好， 具有補益肝腎，強筋壯骨，勝濕桂風(fēng)，活血通絡(luò)之功效。還可W有效抑制神經(jīng)病理性疼痛。本 發(fā)明的制備方法簡單易操作，條件溫和易控制，制備時間短，成本低，易于大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā) 明王敷靈苗藥制劑能夠用于制備治療骨關(guān)節(jié)疾病的藥物，特別是用于制備治療頸椎病的藥 物、制備治療神經(jīng)病理性疼痛的藥物或者制備治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的藥物。
【附圖說明】
[0116] 圖1是本發(fā)明的組織病理學(xué)切片圖；
[0117] 圖2是本發(fā)明苗藥lOmg/kg劑量組與溶劑對照組對模型鼠50 %機械刺激撤足闊值 的影響圖；
[011引圖3是本發(fā)明苗藥30mg/kg劑量組與溶劑對照組對模型鼠50 %機械刺激撤足闊值 的影響圖；
[0119] 圖4是本發(fā)明苗藥90mg/kg劑量組與溶劑對照組對模型鼠50 %機械刺激撤足闊值 的影響圖；
[0120] 圖5是加己噴下lOOmg/kg陽性對照組與溶劑對照組對模型鼠50 %機械刺激撤足闊 值的影響圖；
[0121] 圖6是連續(xù)7天給予本發(fā)明苗藥30mg/kg對機械性痛超敏的作用圖；
[0122] 圖中附圖標記的含義：圖1: (a)本發(fā)明苗藥組第30天病理切片（10X10)，（b)模型 組第30天病理切片（10 X 10)，（C)本發(fā)明苗藥組第60天病理切片（10 X 10)，（d)模型組第60 天病理切片（10X10)，（e)本發(fā)明苗藥組第90天病理切片（10X10)，（f)模型組第90天病理 切片（10X10);圖2~圖5中：a-本發(fā)明苗藥1 Omg/kg劑量組，b-本發(fā)明苗藥30mg/kg劑量組， C-本發(fā)明苗藥90mg/kg劑量組，d-加己噴下100mg/kg，e-溶劑對照組，1)P<0.05,2)P< 0.01，3化<0.001;圖6:1沖<0.05,2化<0.01，6-本發(fā)明苗藥30111邑/1^劑量組，6-溶劑對照 組。
【具體實施方式】
[0123] W下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的介紹。
[0124] 本發(fā)明中試劑采用市售產(chǎn)品。
[0125] 實施例1
[01%] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸1份、藏紅花1份、 川寫1份、杜仲1份和血滕1份。按重量比例稱取當歸，藏紅花，川寫，杜仲和血滕，分別用水洗 凈，陰干，切片;將切片的原料藥混合后加入體積分數(shù)為20%的乙醇溶液，按照質(zhì)量比，混合 后原料藥：乙醇溶液=1:6;在20°C加熱回流提取3次，每次提取化，過濾，合并提取液得到藥 液，維持藥液中乙醇的體積濃度為40%，取藥液0.5mL滴于1cm2的敷帖藥墊上，即得貼劑。敷 帖藥墊采用市售產(chǎn)品。
[0127] 實施例2
[0128] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸7份、藏紅花3份、 川寫4份、杜仲3份和血滕3份。按重量比例稱取當歸，藏紅花，川寫，杜仲和血滕，分別用水洗 凈，陰干，切片;將切片的原料藥混合后加入體積分數(shù)為90%的乙醇溶液，按照質(zhì)量比，混合 后原料藥：乙醇溶液=1:20;在95°C加熱回流提取1次，每次提取0.化，過濾，合并提取液得 到藥液，維持藥液中乙醇的體積濃度為60%，取藥液2mL滴于5cm2的敷帖藥墊上，即得貼劑。 敷帖藥墊采用市售產(chǎn)品。
[0129] 實施例3
[0130] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸4份、藏紅花2份、 川寫3份、杜仲2份和血滕2份。按重量比例稱取當歸，藏紅花，川寫，杜仲和血滕，分別用水洗 凈，陰干，切片，其中，切片的原料藥厚度為0.5cm;將切片的原料藥混合后加入體積分數(shù)為 60%的乙醇溶液，按照質(zhì)量比，混合后原料藥：乙醇溶液= 1:12;在60°C加熱回流提取2次， 每次提取化，過濾，合并提取液得到藥液，維持藥液中乙醇的體積濃度為50%，取藥液ImL滴 于3cm2的敷帖藥墊上，即得貼劑。
[0131] 其中，敷貼藥墊通過W下方法制備:將膠水均勻涂布在無紡布上，加熱揮發(fā)膠水中 溶劑，再將消毒后的棉花貼到涂膠無紡布的中屯、區(qū)域，備用;取質(zhì)量分數(shù)為10%的天竺葵色 素水溶液〇.5mL，均勻涂布到中屯、區(qū)域的棉花上，隨后再在棉花上面放置離型紙即得。
[0132] 實施例4
[0133] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸2份、藏紅花2.5 份、川寫2份、杜仲1.5份和血滕2份。按重量比例稱取當歸，藏紅花，川寫，杜仲和血滕，分別 用水洗凈，陰干，切片，其中，切片的原料藥厚度為0.1cm;將切片的原料藥混合后加入體積 分數(shù)為75 %的乙醇溶液，分別按照質(zhì)量比，混合后原料藥：乙醇溶液=1:16和混合后原料 藥:乙醇溶液=1:10,在80°C加熱回流提取2次，每次提取化，過濾，合并提取液得到藥液，維 持藥液中乙醇的體積濃度為45~50%，取藥液0.5~2mL滴于1~5cm2的敷帖藥墊上，即得貼 劑。
[0134] 其中，敷貼藥墊通過W下方法制備:將膠水均勻涂布在無紡布上，加熱揮發(fā)膠水中 溶劑，再將消毒后的棉花貼到涂膠無紡布的中屯、區(qū)域，備用；取質(zhì)量分數(shù)為2%的天竺葵色 素水溶液1.5mL，均勻涂布到中屯、區(qū)域的棉花上，隨后再在棉花上面放置離型膜即得。
[0135] 實施例5
[0136] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸6份、藏紅花1.5 份、川寫3.5份、杜仲2.5份和血滕1.5份。按重量比例稱取當歸，藏紅花，川寫，杜仲和血滕， 分別用水洗凈，陰干，切片，其中，切片的原料藥厚度為1cm;將切片的原料藥混合后分別加 入體積分數(shù)為40 %、50 %、80 %的乙醇溶液，按照質(zhì)量比，混合后原料藥:40 %乙醇溶液=1: 9、混合后原料藥:50 %乙醇溶液=1:18和混合后原料藥:80 %乙醇溶液=1:14，在40°C加熱 回流提取3次，每次提取2.化，過濾，合并提取液得到藥液，維持藥液中乙醇的體積濃度為55 ~60%，取藥液0.5~2mL滴于1~5cm%敷帖藥墊上，即得貼劑。
[0137] 其中，敷貼藥墊通過W下方法制備:將膠水均勻涂布在無紡布上，加熱揮發(fā)膠水中 溶劑，再將消毒后的棉花貼到涂膠無紡布的中屯、區(qū)域，備用；取質(zhì)量分數(shù)為5%的天竺葵色 素水溶液ImL，均勻涂布到中屯、區(qū)域的棉花上，隨后再在棉花上面放置離型紙或離型膜即 得。
[013引實施例6
[0139] -種王敷靈苗藥制劑，按照重量份數(shù)計，由W下原料藥制成：當歸3份、藏紅花2份、 川寫4份、杜仲1份和血滕2份。按重量比例稱取當歸，藏紅花，川寫，杜仲和血滕，分別用水洗 凈，陰干，切片;將切片的原料藥混合后加入體積分數(shù)為50%的乙醇溶液，按照質(zhì)量比，混合 后原料藥:乙醇溶液=1:8;在35°C加熱回流提取3次，每次提取2.化，過濾，合并提取液得到 藥液，維持藥液中乙醇的體積濃度為45%，再將藥液制做成外用制劑(如擦劑、涂劑或洗劑） 即得。
[0140] 實施例1~6中的王敷靈苗藥制劑可W作為治療骨關(guān)節(jié)疾病的藥物，特別是可W作 為治療頸椎病的藥物、作為治療神經(jīng)病理性疼痛的藥物或者作為治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的藥 物。
【主權(quán)項】
1. 一種用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑，其特征在于:按照重量份數(shù)計，由以下原料藥 制成:當歸1~7份、藏紅花1~3份、川穹1~4份、杜仲1~3份和血滕1~3份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑，其特征在于:按照重量份數(shù) 計，由以下原料藥制成：當歸4份、藏紅花2份、川穹3份、杜仲2份和血滕2份;所述制劑為外用 制劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑，其特征在于:所述制劑 是將藥液滴于敷貼藥墊上制得的貼劑。4. 一種如權(quán)利要求2所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑的制備方法，其特征在于： 包括以下步驟：按重量比例稱取當歸，藏紅花，川穹，杜仲和血滕，分別用水洗凈，陰干，切 片;將切片的原料藥混合后加入乙醇溶液，加熱回流提取1~3次，過濾，合并提取液得到藥 液，維持藥液中乙醇的體積濃度，再將藥液制做成外用制劑即得。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑的制備方法，其特征在于:包 括以下步驟:按重量比例稱取當歸，藏紅花，川穹，杜仲和血滕，分別用水洗凈，陰干，切片； 將切片的原料藥混合后加入體積分數(shù)為20 %~90 %的乙醇溶液，在20 °C~95 °C加熱回流提 取1~3次，過濾，合并提取液得到藥液，維持藥液中乙醇的體積濃度為40 %~60 %，再將藥 液制做成貼劑即得。6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑的制備方法，其特征在 于:取藥液0.5~2mL滴于1~5 cm2的敷帖藥墊上，即得貼劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑的制備方法，其特征在于:所 述敷貼藥墊通過以下方法制備:將膠水均勻涂布在無紡布上，加熱揮發(fā)膠水中溶劑，再將消 毒后的棉花貼到涂膠無紡布的中心區(qū)域，備用;取質(zhì)量分數(shù)為2%~10%的天竺葵色素水溶 液0.5mL~1.5mL，均勻涂布到中心區(qū)域的棉花上，隨后再在棉花上面放置離型紙或離型膜 即得。8. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑的制備方法，其特征在 于:原料藥混合后加入乙醇溶液時，按照質(zhì)量比，混合后原料藥:乙醇溶液=1:6~20。9. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑的制備方法，其特征在 于:所述加熱回流提取時間為每次0.5h~3h。10. 如權(quán)利要求1-3任一項所述的用于治療骨關(guān)節(jié)疾病的苗藥制劑在制備治療骨關(guān)節(jié) 疾病藥物中的應(yīng)用，特別是在制備治療頸椎病藥物、制備治療神經(jīng)病理性疼痛藥物或者制 備治療膝骨性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/08GK105998435SQ201610515021
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月4日
【發(fā)明人】王福寧, 汪浩, 秦春耀
【申請人】王福寧, 汪浩, 秦春耀