一種用于豬瘟活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑、制備方法及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種用于豬瘟活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑、制備方法及其應(yīng)用，屬于獸用生物制品制造技術(shù)領(lǐng)域。該保護(hù)劑，由以下質(zhì)量百分含量的組分組成：菊糖0.2%～2.5%、葡聚糖0.5%～12%、聚乙烯吡咯烷酮1%～6%、乳糖0.5%～12%、蔗糖0.2%～6%、聚乙二醇0.05%～2.5%、組氨酸0.005%～0.6%、半胱氨酸0.05%～4%、DMEM培養(yǎng)基0.2%～4%，其余為注射用水。本發(fā)明還提供該耐熱凍干保護(hù)劑制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑不含外源蛋白及明膠，避免了對(duì)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)以及副作用，大大提高了疫苗的安全性，在冷凍干燥及儲(chǔ)存過(guò)程中能夠高效保護(hù)抗原活性，增加了疫苗的穩(wěn)定性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種用于豬痘活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑、制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于獸用生物制品制造技術(shù)領(lǐng)域，尤其是設(shè)及用于豬攝活疫苗的耐熱凍干 保護(hù)劑、制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬攝(classical swine fever,CSF)俗稱(chēng)"爛腸攝"，在歐美一些地區(qū)又稱(chēng)豬霍亂 化og cholera)、豬熱病或古典豬攝，是由黃病毒科攝病毒屬的豬攝病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病，臨床上W發(fā)病急、高熱稽 留、全身泛發(fā)性點(diǎn)狀出血和脾梗死為主要特征。豬攝的死亡率高，會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的安 全隱患和經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] 1908年，匈牙利化tyra制備了CSFV高免血清，它能產(chǎn)生較強(qiáng)的保護(hù)力，但由于高免 血清的價(jià)格昂貴，獲取較困難，而且有散播的危險(xiǎn)，故各國(guó)學(xué)者轉(zhuǎn)向了滅活疫苗研究。滅活 疫苗也存在免疫劑量大、免疫期短、產(chǎn)生免疫力較慢、不能引發(fā)局部免疫、僅能皮下或肌肉 注射W及成本較高等缺點(diǎn)，故逐漸被豬攝弱毒疫苗所取代。1955年，我國(guó)成功研制的豬攝兔 化弱毒疫苗（即C株），在世界范圍內(nèi)的豬攝免疫防控及最終根除的過(guò)程中起到了至關(guān)重要 的作用，是防控豬攝使用最多的疫苗。
[0004] 市場(chǎng)上目前常見(jiàn)的豬攝活疫苗有4種，均是WC株為基礎(chǔ)，即豬攝細(xì)胞活疫苗、豬攝 乳兔脾淋組織活疫苗、豬攝成兔脾淋組織活疫苗和豬攝-豬丹毒-豬肺疫Ξ聯(lián)苗。其中免疫 效果較好的是豬攝細(xì)胞活疫苗和豬攝成兔組織脾淋苗，也是政府采購(gòu)的專(zhuān)用豬攝疫苗。
[0005] 目前常用的豬攝活疫苗凍干保護(hù)劑組方簡(jiǎn)單，大多含有薦糖、明膠、牛血清白蛋 白、水解乳蛋白等成分，但臨床上已發(fā)現(xiàn)注射凍干疫苗時(shí)由明膠和外源蛋白引起的過(guò)敏等 副作用;此外，傳統(tǒng)的的保護(hù)劑耐熱性能差，需要在冷凍條件下-15Γ才能長(zhǎng)期保存。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有用于豬攝活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑因含外源蛋白、明膠帶來(lái)副反 應(yīng)的問(wèn)題，提供一種不含有外源蛋白和明膠、用于豬攝活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑，該耐熱凍 干保護(hù)劑在冷凍干燥及高溫儲(chǔ)存過(guò)程中能夠高效保護(hù)抗原活性，而且對(duì)動(dòng)物無(wú)刺激性和危 害性，對(duì)豬安全。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，該方法操作方便。
[000引本發(fā)明的再一目的是提供上述耐熱凍干保護(hù)劑在制備豬攝活疫苗方面的應(yīng)用，審U 備的豬攝活疫苗，能夠耐受較高溫度儲(chǔ)存。
[0009] 本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
[0010] -種用于豬攝活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑，由W下質(zhì)量百分含量的組分組成：菊糖 0.2%~2.5%、葡聚糖0.5%~12%、聚乙締化咯燒酬1 %~6%、乳糖0.5%~12%、薦糖 0.2 %~6 %、聚乙二醇0.05 %~2.5 %、組氨酸0.005 %~0.6 %、半脫氨酸0.05 %~4%、 DMEM培養(yǎng)基0.2%~4%，其余為注射用水。
[0011] 在本發(fā)明中，菊糖的聚合度為2~10,葡聚糖為Dextran-40或Dextran-70,聚乙締 化咯燒酬為PVP K30或PVP K90,聚乙二醇為陽(yáng)G 200~400。
[0012] 本發(fā)明還提供所述耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，包括如下步驟：
[0013] (1)將菊糖、葡聚糖、聚乙締化咯燒酬、乳糖、薦糖、聚乙二醇溶于水，采用高壓蒸汽 滅菌法進(jìn)行滅菌；
[0014] (2)將組氨酸、半脫氨酸和DMEM培養(yǎng)基溶于水，采用過(guò)濾法進(jìn)行除菌；
[0015] (3)將步驟(1)和(2)所得溶液混合，補(bǔ)足水，得到所述耐熱凍干保護(hù)劑。
[0016] 本發(fā)明還提供所述耐熱凍干保護(hù)劑在制備豬攝活疫苗方面的應(yīng)用W及采用所述 耐熱凍干保護(hù)劑制備的豬攝活疫苗。
[0017] 本發(fā)明還提供豬攝活疫苗的制備方法，包括如下步驟:將耐熱凍干保護(hù)劑和豬攝 病毒液按體積比1:0.8~1.2混合，冷凍干燥后得到所述豬攝活疫苗。
[0018] 在本發(fā)明中，所述冷凍干燥方法如下：將耐熱凍干保護(hù)劑和豬攝病毒液的混合物 放在凍干機(jī)箱體內(nèi)的隔板上，在常壓、2~5°C條件下預(yù)冷20~40min，然后按照0.5~rC/ min的速度降溫至-38~-42°C并維持3~化;將凍干機(jī)的冷阱降至-48~-52°C，箱體內(nèi)抽真 空至300~400mTorr;然后將所述隔板W0.2~0.8°C/min的速度升溫至-22~-28°C并維持 14~1她，之后W0.1~0.4°C/min的速度升溫至-12~-17°C并維持8~12h，最后W0.2~0.8 °C/min升溫至20~24°C并維持5~化。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明用于豬攝活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑的有益效果如下：本 發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑不含外源蛋白及明膠，避免了對(duì)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)W及副作用，大大提 高了疫苗的安全性。本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑在冷凍干燥及儲(chǔ)存過(guò)程中能夠高效保護(hù)抗原活 性，有效解決了疫苗在保存、運(yùn)輸中的低溫冷鏈問(wèn)題，增加了疫苗的穩(wěn)定性。采用本發(fā)明耐 熱凍干保護(hù)劑制備的豬攝活疫苗，在2-8°C條件下至少能夠儲(chǔ)存36個(gè)月，在37°C條件下至少 能夠儲(chǔ)存15天。因此，采用本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑制備的豬攝活疫苗將大大降低失活風(fēng)險(xiǎn)， 提高疫苗安全性。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下述實(shí)施例僅對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0021 ]實(shí)施例1耐熱凍干保護(hù)劑1
[0022] 耐熱凍干保護(hù)劑1，由W下質(zhì)量百分含量的組分組成：菊糖（聚合度（DP)為9) 0.5%、葡聚糖(Dextran-70)5%、聚乙締化咯燒酬(PVP Κ30)3%、乳糖5%、薦糖2%、聚乙二 醇(PEG 200) 1 %、組氨酸0.3 %、半脫氨酸1.5 %、DMEM培養(yǎng)基(G化CO公司）3 %，其余為注射 用水。
[0023] 耐熱凍干保護(hù)劑1的具體制備步驟如下：
[0024] (1)稱(chēng)取菊糖(DP為9)、葡聚糖(Dex化an-70)、聚乙締化咯燒酬(PVP K30)、乳糖、薦 糖、聚乙二醇(PEG200)溶于少量注射用水中，高壓蒸汽滅菌法滅菌30min，滅菌過(guò)程中控制 溫度為ll〇°C，備用；
[0025] (2)稱(chēng)取組氨酸、半脫氨酸和DMEM培養(yǎng)基溶于少量注射用水中，用孔徑為0.22皿的 濾膜過(guò)濾除菌后備用；
[0026] (3)將步驟(1)和(2)制得的溶液混合，補(bǔ)足注射用水，得耐熱凍干保護(hù)劑1。
[0027] 制備豬攝活疫苗1:將耐熱凍干保護(hù)劑1與豬攝病毒液(C株，病毒含量40X 104RID/ mUW體積比1:1混合，分裝至7ml西林瓶中，2ml/瓶，用下基四叉塞半加塞后，置入凍干機(jī)箱 體內(nèi)進(jìn)行冷凍干燥，得到豬攝活疫苗1。
[0028] 冷凍干燥的具體步驟為:將耐熱凍干保護(hù)劑1與豬攝病毒液的混合物放在凍干機(jī) 箱體內(nèi)的隔板上，在常壓、4°C條件下預(yù)冷30min，然后按照rC/min的速度降溫至-40°C，在- 40°C維持4h;將凍干機(jī)的冷阱降至-50°C，凍干機(jī)箱體內(nèi)抽真空至350mTorr;然后將隔板W 0.5°C/min的速度升溫至-25°C，在-25 °C維持16h，之后W0.25 °C/min的速度升溫至-15 °C， 在-15°C維持lOh，最后W〇.5°C/min升溫至20°C，在20°C維持化。
[0029] 實(shí)施例2耐熱凍干保護(hù)劑2
[0030] 耐熱凍干保護(hù)劑2,由W下質(zhì)量百分含量的組分組成：菊糖（DP為5)2%、葡聚糖 (Dextran-70)10%、聚乙締化咯燒酬（PVP Κ90)2%、乳糖1%、薦糖0.5%、聚乙二醇 。66400)2%、組氨酸0.01%、半脫氨酸3%、0161培養(yǎng)基0.5%，其余為注射用水。
[0031 ]耐熱凍干保護(hù)劑2的具體制備步驟如下：
[0032] (1)稱(chēng)取菊糖(DP為5)、葡聚糖(Dextoin-70)、聚乙締化咯燒酬(PVP Κ90)、乳糖、薦 糖、聚乙二醇(PEG400)溶于少量注射用水中，高壓蒸汽滅菌法滅菌30min，滅菌過(guò)程中控制 溫度為ll〇°C，備用；
[0033] (2)稱(chēng)取組氨酸、半脫氨酸和溶于少量注射用水中，用孔徑為0.22皿的濾膜過(guò) 濾除菌后備用；
[0034] (3)將步驟(1)和(2)制得的溶液混合，補(bǔ)足注射用水，得耐熱凍干保護(hù)劑2。
[0035] 制備豬攝活疫苗2:將耐熱凍干保護(hù)劑2與豬攝病毒抗原液（C株，病毒含量40 X 104RID/mL) W體積比1:1混合，分裝至7ml西林瓶中，2ml/瓶，用下基四叉塞半加塞后，置入 凍干機(jī)箱體內(nèi)進(jìn)行冷凍干燥，得到豬攝活疫苗2。
[0036] 冷凍干燥的具體步驟為:將耐熱凍干保護(hù)劑2與豬攝病毒液的混合物放在凍干機(jī) 箱體內(nèi)的隔板上，在常壓、3°C條件下預(yù)冷25min，然后按照0.5°C/min的速度降溫至-38°C， 在-38°C維持化;將凍干機(jī)的冷阱降至-48°C，凍干機(jī)箱體內(nèi)抽真空至400mTorr;然后將隔板 W〇.2°C/min的速度升溫至-28°C，在-28°C維持1地，之后W0. rC/min的速度升溫至-17°C， 在-17°C維持她，最后W〇.4°C/min升溫至24°C，在24°C維持化。
[0037] 實(shí)施例3豬攝新型耐熱凍干保護(hù)劑3
[0038] 豬攝新型耐熱凍干保護(hù)劑3,由W下質(zhì)量百分含量的組分組成：菊糖（DP為2) 0.2%、葡聚糖(Dex化an-40)l%、聚乙締化咯燒酬(PVP Κ30)5%、乳糖10%、薦糖5%、聚乙 二醇(PEG 250)0.1 %、組氨酸0.5%、半脫氨酸0.1 %、DMEM培養(yǎng)基1.5%，其余為注射用水。
[0039] 耐熱凍干保護(hù)劑3的具體制備步驟如下：
[0040] (1)稱(chēng)取菊糖、葡聚糖(Dextran-40)、聚乙締化咯燒酬(PVP K30)、乳糖、薦糖、聚乙 二醇溶于少量注射用水中，高壓蒸汽滅菌法滅菌30min，滅菌過(guò)程中控制溫度為11(TC，備 用；
[0041 ] (2)稱(chēng)取組氨酸、半脫氨酸和溶于少量注射用水中，用孔徑為0.22皿的濾膜過(guò) 濾除菌后備用；
[0042] (3)將步驟(1)和(2)制得的溶液混合，補(bǔ)足加注射用水，得耐熱凍干保護(hù)劑3。
[0043] 制備豬攝活疫苗3:將本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑3與豬攝病毒液(C株，病毒含量40 X 104RID/mL) W體積1:1比混合，分裝至7ml西林瓶中，2ml/瓶，用下基四叉塞半加塞后，置入 凍干機(jī)箱體內(nèi)進(jìn)行冷凍干燥，得到豬攝活疫苗3。
[0044] 冷凍干燥的具體步驟為:將耐熱凍干保護(hù)劑3與豬攝病毒液的混合物放在凍干機(jī) 箱體內(nèi)的隔板上，在常壓、2°C條件下預(yù)冷20min，然后按照rC/min的速度降溫至-42°C，在- 42°C維持化;將凍干機(jī)的冷阱降至-52°C，凍干機(jī)箱體內(nèi)抽真空至300mTorr，然后將隔板W 0.8°C/min的速度升溫至-22°C，在-22°C維持1她，之后W〇.4°C/min的速度升溫至-12°C， 在-12°C維持12h，最后W〇.7°C/min升溫至22°C，在22°C維持化。
[0045] 實(shí)施例4對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑1
[0046] 對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑1(公開(kāi)于CN102793927A)，由W下重量百分含量的組分組成： 海藻糖5%、聚乙締化咯燒酬。￥?1(30)2.5%、明膠2%、谷氨酸鋼2%，0-山梨醇3.5%、多聚 蛋白腺4.5%、k精氨酸0.75%、維生素 C 0.75%、余量為滅菌后的注射用水。
[0047] 對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑1的制備方法如下：（1)按所述重量配比稱(chēng)取聚乙締化咯燒酬 (PVP K30)、明膠、D-山梨醇、多聚蛋白腺溶于少量注射用水中，110°C滅菌30min備用；（2)按 所述重量配比稱(chēng)取海藻糖、谷氨酸鋼α-精氨酸、維生素 C溶于少量注射用水中，用孔徑為 0.22皿的濾膜過(guò)濾除菌后備用；（3)將步驟（1)、（2)制得的溶液混合，加注射用水至全量即 得。
[004引對(duì)照豬攝活疫苗1:取對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑1與豬攝病毒抗原液(C株，病毒含量40 X 104RID/mL)按照體積比為1:1.2混合，分裝至7ml西林瓶中，2ml/瓶，用下基膠塞半加塞 后，凍干機(jī)箱體內(nèi)。
[0049] 凍干的具體步驟為:將混合液置入2°C的凍干箱中，WrC/min的降溫速率降至-35 °C，在此溫度下維持3.化，開(kāi)啟真空累，至箱內(nèi)真空度達(dá)O.Olmbar時(shí)開(kāi)始升溫，2化升至-6 °C，再W6°C A的升溫速率升至25°C，在此溫度下維持化。
[0050] 實(shí)施例5對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑2
[0051] 對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑2(公開(kāi)于CN103341176A)，具體制備方法如下：（1)A液配制： 取NZ-胺3g、谷氨酸單鐘鹽0.375g，薦糖25g、水解乳蛋白1.875g，將W上成分按順序溶于 lOOmL注射用水中，充分溶解后搖勻，用0.22皿的濾膜過(guò)濾除菌后2~8°C備用；（2)B液配制： 取水解明膠20g，用70~80°C的注射用水lOOmL充分溶解后，121°C、15磅高壓滅菌30分鐘，滅 菌后保存在37°C ; (3)將A液與B液按4:1的比例進(jìn)行配比，混合均勻即為耐熱凍干保護(hù)劑，其 中各組分的質(zhì)量體積百分比濃度如下：2.4%NZ-胺、0.3%谷氨酸單鐘鹽、20%薦糖、1.5% 水解乳蛋白、4 %水解明膠。
[0052] 對(duì)照豬攝活疫苗2:取對(duì)照耐熱凍干保護(hù)劑2與豬攝病毒抗原液(C株，病毒含量40 X104RID/mL)按照體積比為1:4混合，分裝至7ml西林瓶中，2ml/瓶，用下基膠塞半加塞后， 凍干機(jī)箱體內(nèi)。
[0053] 具體凍干步驟為:將混合液置入凍干箱中，選取預(yù)凍溫度為-50°C，預(yù)凍時(shí)低溫保 持時(shí)間為化、預(yù)凍前期控制在-15Γ，待產(chǎn)品釋放解析熱后快速冷凍:升華階段產(chǎn)品溫度為- 33°C、板層溫度設(shè)定為-8°C、升華時(shí)間為1化;解析溫度為26°C、解析時(shí)間為地，凍干全程為 24h，加塞出箱，得到對(duì)照豬攝活疫苗2。
[0054] 實(shí)施例6豬攝活疫苗的檢測(cè)
[0055] 測(cè)定實(shí)施例1~5中各豬攝活疫苗的物理性狀、殘余水分，在37°C條件下儲(chǔ)存Od、 lOd對(duì)活疫苗病毒含量的影響，在2~8°C條件下儲(chǔ)存不同時(shí)間對(duì)活疫苗病毒含量的影響。
[0056] 凍干制品的物理性狀、剩余水分測(cè)定按照現(xiàn)行《中華人民共和國(guó)獸藥典》附錄的方 法和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。具體結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可W看出，均符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》附錄的規(guī) 定，且豬攝活疫苗1、2和3在物理性狀、真空度等方面均符合規(guī)定，殘余水分比對(duì)照豬攝活疫 苗1和2均略低。豬攝活疫苗凍干制品病毒含量檢測(cè)方法按照現(xiàn)象《中華人民共和國(guó)獸用生 物制品規(guī)程》進(jìn)行。
[0057] 表1豬攝活疫苗的物理性狀、殘余水分測(cè)定結(jié)果 [0化引
[0059] 表2豬攝活疫苗37°C10d和15d后病毒含量的測(cè)定結(jié)果
[0060]
[0061] 表2中：凍干損失是指濕毒和凍干后Od疫苗病毒含量的差值。耐熱損失是指疫苗凍 干0天后與37°C保存10天或15天后疫苗病毒含量的差值。
[0062] 從表2可W看出，豬攝活疫苗1、2和3在凍干過(guò)程中病毒含量損失在0.3~0.43Lg RID/1血W下;在37°C條件下儲(chǔ)存10天后，病毒含量損失均《1.化g RID/lmL，37°C條件下儲(chǔ) 存15天后，病毒含量損失為1.化g RID/lmL。豬攝新型耐熱活疫苗1、2和3在凍干和耐熱過(guò)程 中的病毒含量損失均小于或等于對(duì)照豬攝耐熱活疫苗。
[0063] 表3豬攝活疫苗于2~8°C保存不同時(shí)間后的病毒含量測(cè)定結(jié)果
[0064]
[0065] 從表3可W看出，豬攝新型活疫苗1、2和3在凍干后在2~8°C保存36個(gè)月內(nèi)，病毒含 量損失為0.87~1.化曲ID/1血，凍干損失與耐熱損失之和為1.化g RID/1血，在不添加外源 蛋白、明膠情況下，本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑的耐熱損失小于對(duì)照組；同時(shí)降低了對(duì)動(dòng)物的副 作用，增加了制品的安全性。
[0066] 實(shí)施例7豬攝活疫苗的安全性
[0067] 用生理鹽水將豬攝活疫苗1、豬攝活疫苗2、豬攝活疫苗3分別復(fù)溶成溶液，每頭份 含量為7500RID，按照1頭份、5頭份W及10頭份劑量免疫。
[0068] 動(dòng)物試驗(yàn)共分為4組(表4)，分別是1頭份、5頭份W及10頭份，免疫途徑為肌肉注 射，W及空白對(duì)照組(不免疫）。試驗(yàn)選取20日齡的仔豬，每組10只。
[0069] 表4為耐熱凍干保護(hù)劑的安全性動(dòng)物試驗(yàn)分組
[0070]
[0071] ~耐熱凍干保護(hù)劑的安全性動(dòng)物試驗(yàn)方法和研究的指標(biāo):
[0072] 臨床觀察:在接種后的2地內(nèi)，每隔化觀察一次仔豬有無(wú)不良反應(yīng);4化~72h，每隔 化觀察一次仔豬有無(wú)不良反應(yīng);接種后3~14d內(nèi)，每2地觀察有無(wú)不正常反應(yīng)。如有非特異 性死亡，免疫組與對(duì)照組均應(yīng)不超過(guò)1只。
[0073] 結(jié)果:采用豬攝活疫苗1、豬攝活疫苗2、豬攝活疫苗3分別按照1頭份、5頭份W及10 頭份劑量免疫20日齡仔豬后，豬只精神狀況、采食、飲水、生長(zhǎng)發(fā)育情況均正常，均未發(fā)現(xiàn)不 良反應(yīng)。因此本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑對(duì)豬只是安全的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于豬瘟活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于由以下質(zhì)量百分含量的組分組 成:菊糖0.2%~2.5%、葡聚糖0.5%~12%、聚乙烯吡咯烷酮1%~6%、乳糖0.5%~12%、蔗糖 0·2%~6%、聚乙二醇0·05%~2·5%、組氨酸0·005%~0·6%、半胱氨酸0·05%~4%、DMEM培養(yǎng)基 0.2%~4%，其余為注射用水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述用于豬瘟活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于菊糖的聚合度 為2~10,葡聚糖為Dextran-40或Dextran-70,聚乙烯吡咯烷酮為PVP K30或PVP K90,聚乙 二醇為PEG 200~400。3. 權(quán)利要求1或2所述耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 將菊糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、蔗糖、聚乙二醇溶于水，采用高壓蒸汽滅菌 法進(jìn)行滅菌； (2) 將組氨酸、半胱氨酸和DMEM培養(yǎng)基溶于水，采用過(guò)濾法進(jìn)行除菌； (3) 將步驟(1)和(2)所得溶液混合，補(bǔ)足水，得到所述耐熱凍干保護(hù)劑。4. 權(quán)利要求1或2所述耐熱凍干保護(hù)劑在制備豬瘟活疫苗方面的應(yīng)用。5. 采用權(quán)利要求1-2之一所述耐熱凍干保護(hù)劑制備的豬瘟活疫苗。6. 權(quán)利要求5所述豬瘟活疫苗的制備方法，其特征在于包括如下步驟:將耐熱凍干保護(hù) 劑和豬瘟病毒液按體積比1:0.8~1.2混合，冷凍干燥后得到所述豬瘟活疫苗。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述豬瘟活疫苗的制備方法，其特征在于所述冷凍干燥方法如下:將 耐熱凍干保護(hù)劑和豬瘟病毒液的混合物放在凍干機(jī)箱體內(nèi)的隔板上，在常壓、2~5°C條件 下預(yù)冷20~40min，然后按照0.5~l°C/min的速度降溫至-38~-42°C并維持3~5h;將凍干 機(jī)的冷阱降至-48~-52°C，箱體內(nèi)抽真空至300~400mTorr;然后將所述隔板以0.2~0.8 °C/min的速度升溫至-22~-28°C并維持14~18h，之后以0.1~0.4°C/min的速度升溫至-12 ~-17°C并維持8~12h，最后以0.2~0.8°C/min升溫至20~24°C并維持5~7h。
【文檔編號(hào)】A61P31/14GK105999284SQ201610297754
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月6日
【發(fā)明人】呂芳, 趙艷紅, 盧宇, 彭苗苗, 鄧碧華, 張金秋, 候繼波
【申請(qǐng)人】江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院