魚精dna-na、魚精蛋白提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種魚精DNA-NA的提取物、魚精蛋白提取物及其制備方法。方法如下：(1)取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到魚精巢原料；(2)加入1～10倍體積的水，在溫度37～58℃下，加入水解用生物酶0.1～1.2％，酶解30～300分鐘；(3)將濾液濃縮至30～80％；(4)調(diào)節(jié)pH至6.0～8.0上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，將合并后的流出液和洗脫液濃縮，乙醇沉淀，收集沉淀；(5)采用1～5％氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫陽離子交換樹脂至流出液無蛋白時，收集洗脫液。所述魚精蛋白提取物和魚精DNA-NA的提取物收率和純度高，可同時獲得，不使用具有污染和毒性的物質(zhì)。
【專利說明】
魚精DNA-NA、魚精蛋白提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及魚精DNA-NA、魚精蛋白提取物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]成熟雄魚的精巢組織稱魚精，因具有異味，多被廢棄或作廢料。但是，魚精巢中含有大量的魚精蛋白和魚精核酸類物質(zhì)，這兩種物質(zhì)均具有良好的功效。魚精蛋白(protamine)，是一類堿性蛋白質(zhì)，其中的精氨酸含量相對較多，精氨酸具有強(qiáng)化肝功能，刺激垂體釋放促性腺激素的作用，可治療男性不育癥。同時，魚精蛋白具有廣譜抗菌活性，是一種天然防腐劑，且由于魚精蛋白完全是天然成分，具有很高的安全性，具有安全、無毒、無副作用的優(yōu)點(diǎn)，作為一種新型防腐劑，在食品工業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]魚精中的核酸類物質(zhì)(DNA)具有一定的美容功能，作為天然的皮膚保護(hù)劑和營養(yǎng)劑，這些有效成分經(jīng)皮吸收的時候能促進(jìn)皮膚細(xì)胞再生或細(xì)胞活化，具有改善皮膚紋理、防止肌膚粗糙、褐斑、雀斑、皺紋等，達(dá)到防止皺紋和美白皮膚的效果。
[0004]目前關(guān)于魚精蛋白和魚精DNA制備方法的研究均為兩類物質(zhì)的單獨(dú)提取工藝，僅僅是針對一種功效成分的提取工藝研究，比如提取魚精蛋白時必定會舍棄魚精核酸類物質(zhì)，提取魚精核酸類物質(zhì)時必定會舍棄魚精蛋白類物質(zhì)，這對于工業(yè)化大生產(chǎn)無疑是很大的浪費(fèi)。劉紅玉等(大馬哈魚魚精蛋白的提取及抑菌作用的研究，食品科學(xué)，2007年第2期37?39頁)采用正交試驗(yàn)法篩選提取魚精蛋白的最佳工藝條件，其條件為=H2SO4濃度為7.5%,用量為魚精的3.5倍(W/W)，提取時間2h，95%乙醇用量為魚精的3倍(W/W)。對魚精蛋白進(jìn)行分析，其蛋白質(zhì)含量達(dá)到89.7%，且精氨酸含量較高。吳燕燕等(淡水魚精巢核蛋白和魚精蛋白的提取及營養(yǎng)分析，營養(yǎng)學(xué)報，1999年第I期)研究提取淡水魚精巢中的核蛋白和魚精蛋白的工藝條件，采用正交試驗(yàn)法篩選，確定了提取蛋白的最佳工藝條件為:NaCl濃度1.0mol/L，NaCl用量為原料量的10倍(W/W)，提取時間lh，95%乙醇用量為料液量的2倍(W/W)。提取魚精蛋白的最佳工藝條件為=H2SO4濃度為5.0%，用量為原料量的3倍(W/W)，提取時間2h，95%乙醇用量為料液量的3倍(W/W)。辛修明等(從河飩魚精巢中提取DNA-NA的研究，河北漁業(yè)，1994年第5期)采用SDS、苯酚飽和溶液脫蛋白方法，得到大分子量的河飩魚DNA-NA產(chǎn)品，其中磷含量8.5%，DNA含量95.05 %，蛋白質(zhì)含量I %，所述的百分比為質(zhì)量百分比。吳漢民(從魚精巢中提取高聚NA-DNA的研究，浙江海洋學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版)，1983年第2期)采用先用酚進(jìn)行第一次變性，然后再用5% SDS-CHCl3進(jìn)行第二次變性的制備工藝，制得的成品，經(jīng)鑒定達(dá)到國際同類產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)。
[0005]由上可見，現(xiàn)有技術(shù)中僅有只針對魚精蛋白提取物或魚精DNA的提取方法，造成資源浪費(fèi)，因此亟需開發(fā)新的提取方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服了現(xiàn)有魚精蛋白和魚精DNA的制備方法往往只能針對其中一種成分進(jìn)行提取，并且提取工藝中使用有毒物質(zhì)的缺陷，提供了魚精DNA-NA提取物、魚精蛋白提取物及其制備方法和同步提取兩者的制備方法。該制備方法充分利用原料資源，能夠同時有效提取多種有效成分，操作步驟簡單方便，工藝合理，獲得的產(chǎn)品的收率和純度顯著提高，有利于應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0007]本發(fā)明提供一種同時獲得魚精DNA-NA提取物和魚精蛋白提取物的方法，其包括以下的步驟:
[0008]①取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料；
[0009]②向步驟①所得的魚精巢原料中加入I?10倍體積的水，在溫度37?58°C下，加入0.1?1.2%水解用生物酶，酶解30?300分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的水解用生物酶為蛋白酶，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比；
[0010]③將步驟②所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的10?80%，即為料液A ;
[0011]④將步驟③所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6.0?8.0得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，濃縮，用乙醇進(jìn)行沉淀，收集沉淀，獲得魚精巢提取物I，即為魚精DNA-NA的提取物，所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?6倍；
[0012]⑤采用I?5%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液獲得魚精巢提取物II，即為魚精蛋白的提取物，所述百分比為質(zhì)量百分比。
[0013]步驟①為:取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料。其中，所述的魚為本領(lǐng)域常規(guī)的魚，較佳地為選自鮭魚、鱈魚和鰹魚的一種或多種。
[0014]步驟②為:向步驟①所得的魚精巢原料中加入I?10倍體積的水，在溫度37?58°C下，加入0.1?1.2%水解用生物酶，酶解30?300分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的水解用生物酶為蛋白酶，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比。其中，較佳地，所述的水解用蛋白酶為堿性蛋白酶、復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和胰蛋白酶中的一種或多種。較佳地，向步驟①所得的魚精巢原料中加入2?6倍體積的水。較佳地，所述的溫度為45?58°C。較佳地，所述酶解的時間為180?240分鐘。
[0015]步驟③為:將步驟②所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的10?80%，即為料液A。其中，較佳地，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的40?60%。
[0016]步驟④為:將步驟③所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6.0?8.0得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，濃縮，用乙醇進(jìn)行沉淀，收集沉淀，獲得魚精巢提取物I，即為魚精DNA-NA的提取物，所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?6倍。其中，較佳地，所述料液A調(diào)節(jié)pH至6.5?7.5。較佳地，所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?4倍。較佳地，所述的濃縮為將所述流出液和所述洗脫液濃縮至所述流出液和所述洗脫液的原總體積的15%?50%;更佳地為25%?50%。較佳地，所述的百分比為乙醇占濃縮至原總體積15%?50%的所述流出液和所述洗脫液與所述乙醇體積之和的百分比。
[0017]步驟⑤為:采用I?5%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液獲得魚精巢提取物II，即為魚精蛋白的提取物，所述百分比為質(zhì)量百分比。其中，較佳地，采用I?2%氯化鈉溶液，所述百分比為質(zhì)量百分比。
[0018]較佳地，所述的方法還包括如下的步驟:
[0019]⑥取所述的魚精巢提取物I干燥；和/或，
[0020]⑦將步驟⑤所得的魚精巢提取物II進(jìn)行脫味脫色處理，干燥。
[0021]步驟⑥為:取所述的魚精巢提取物I干燥。其中，所述的干燥為本領(lǐng)域常規(guī)的干燥，較佳地為噴霧干燥或真空干燥；所述干燥的時間為本領(lǐng)域常規(guī)的時間，較佳地為30?120分鐘。所述干燥的溫度為本領(lǐng)域常規(guī)的溫度，較佳地為40?60°C。
[0022]步驟⑦為:將步驟⑤所得的魚精巢提取物II進(jìn)行脫味脫色處理，干燥。其中，所述的脫色脫味處理為本領(lǐng)域常規(guī)的脫色脫味處理，較佳地為活性炭處理。所述的干燥為本領(lǐng)域常規(guī)的干燥，較佳地為噴霧干燥或真空干燥；更佳地，所述真空干燥在所述魚精巢提取物II脫色脫味后濃縮至膏狀時進(jìn)行。所述干燥的時間為本領(lǐng)域常規(guī)的時間，較佳地為30?120分鐘。所述干燥的溫度為本領(lǐng)域常規(guī)的溫度，較佳地為40?60°C。
[0023]利用所述的同時獲得魚精DNA-NA的提取物和魚精蛋白提取物的方法，所得的魚精DAN-NA的提取物的純度為85%以上，所述的百分比為魚精DNA-NA占魚精DNA-NA的提取物的質(zhì)量百分比。魚精DNA-NA的收率為3 %?7 %，所述的百分比為魚精DNA-NA占魚精巢的質(zhì)量百分比。所得的魚精蛋白提取物的純度為90%以上，所述的百分比為魚精蛋白占魚精蛋白的提取物的質(zhì)量百分比。收率為10?15%，所述的百分比為魚精蛋白占魚精巢的質(zhì)量百分比。
[0024]本發(fā)明提供一種魚精DNA-NA的提取物，其包括85?98%核酸和0.1?8%游離蛋白質(zhì)，較佳的，游離蛋白的含量為1.0%以下，所述百分比為質(zhì)量百分比。所述魚精DNA-NA的提取物的分子量為5000?60萬道爾頓。
[0025]本發(fā)明提供一種魚精蛋白的提取物，其包括85 %?98 %蛋白質(zhì)和I?5 %核酸，所述百分比為質(zhì)量百分比。所述魚精蛋白的提取物中精氨酸含量為50%?70%。
[0026]本發(fā)明提供一種魚精DNA-NA的提取物的制備方法，所述的魚精DNA-NA為魚精DNA的鈉鹽，其包括以下的步驟:
[0027]步驟①?步驟④與所述的同時獲得魚精DNA-NA提取物和魚精蛋白提取物的方法中的步驟①?步驟④相同。
[0028]較佳地，所述的制備方法還包括如下的步驟:
[0029]取步驟④所述的魚精巢提取物I，干燥。
[0030]本發(fā)明提供一種魚精蛋白提取物的制備方法，其包括如下步驟:
[0031]步驟①?步驟⑤與所述的同時獲得魚精DNA-NA提取物和魚精蛋白提取物的方法中的步驟①?步驟⑤相同。
[0032]較佳地，所述的制備方法還包括如下的步驟:
[0033]將步驟⑤所得的魚精巢提取物II進(jìn)行脫味脫色處理，干燥。
[0034]本發(fā)明提供一種所述的魚精DNA-NA在制備保濕和抗衰老皮膚外用劑中的應(yīng)用。
[0035]本發(fā)明提供一種所述的魚精蛋白提取物在制備防腐劑中的應(yīng)用。
[0036]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0037]本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于:所述的同時獲得魚精DNA-NA和魚精蛋白提取物的制備方法優(yōu)化了提取工藝，能夠同步提取得到魚精蛋白提取物和魚精DNA-NA，充分利用魚精巢資源，并且獲得的魚精蛋白提取物和魚精DNA-NA收率和純度高。并且在制備方法中不使用具有污染和毒性的物質(zhì)，避免使用常規(guī)方法中硫酸、SDS、苯酚等物質(zhì)，不產(chǎn)生污染物，具有良好的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。所述的魚精蛋白具有良好的抗菌性，可以應(yīng)用于防腐劑的制備。所述的魚精DNA-NA則具有保濕和抗衰老的功效，可應(yīng)用于皮膚外用劑的制備。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。
[0039]實(shí)施例1制備魚精DNA-NA的提取物
[0040](I)取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料；
[0041](2)向步驟(I)得到的魚精巢原料中加入3倍體積的水，在56°C下，加入0.5%堿性蛋白酶酶解240分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比；
[0042](3)將步驟(2)所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾得到的濾液濃縮至所述濾液原體積的50%，即為料液A ;
[0043](4)將步驟(3)所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6.5得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，將其濃縮至流出液和洗脫液原總體積的15%，用乙醇沉淀，收集沉淀，即為魚精巢提取物I，其中乙醇的終濃度為45%，所述百分比為乙醇占濃縮至15%的所述流出液、洗脫液和所述乙醇總體積的體積百分比；所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2倍。
[0044](5)將步驟(4)所得的魚精巢提取物I 40°C干燥30分鐘，即可。
[0045]將獲得的魚精DNA-NA的提取物測定，發(fā)現(xiàn)核酸含量為85%，游離蛋白質(zhì)的含量為
2.5%，所述的百分比為質(zhì)量百分比。獲得的魚精DNA-NA的收率為3%，所述的百分比為魚精DNA-NA占魚精巢的質(zhì)量百分比。
[0046]實(shí)施例2制備魚精蛋白提取物
[0047](I)取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料；
[0048](2)向步驟⑴得到的魚精巢原料中加入5倍體積的水，在45°C下，加入0.6%復(fù)合風(fēng)味蛋白酶酶解60分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比；
[0049](3)將步驟(2)所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾得到的濾液濃縮至所述濾液原體積的25%，即為料液A ;
[0050](4)將步驟(3)所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至7.5得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，將其濃縮至流出液和洗脫液原總體積的50%，用乙醇沉淀，收集沉淀，即為魚精巢提取物I，其中乙醇的終濃度為70%，所述百分比為乙醇占濃縮至50%的所述流出液、洗脫液和所述乙醇總體積的體積百分比；所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的4倍。
[0051](5)采用1%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液，即得魚精巢提取物II，所述百分比為質(zhì)量百分比；
[0052](6)將步驟(5)所得的魚精巢提取物II用活性炭進(jìn)行脫味脫色處理，進(jìn)行600C 30min噴霧干燥，即可。
[0053]將獲得的魚精蛋白提取物進(jìn)行測定，蛋白質(zhì)92%、核酸2%，所述百分比為質(zhì)量百分比。所述魚精蛋白的提取物中精氨酸含量為60%。獲得的魚精蛋白的收率為10%，所述的百分比為魚精蛋白占魚精巢的質(zhì)量百分比。
[0054]實(shí)施例3制備魚精DNA-NA的提取物和魚精蛋白提取物
[0055](I)取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料；
[0056](2)向步驟⑴得到的魚精巢原料中加入10倍體積的水，在58°C下，加入0.5%胰蛋白酶酶解300分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比；
[0057](3)將步驟(2)所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾得到的濾液濃縮至所述濾液原體積的10%，即為料液A ;
[0058](4)將步驟(3)所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至7得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，將其濃縮至流出液和洗脫液原總體積的25%，用乙醇沉淀，收集沉淀，即為魚精巢提取物I，其中乙醇的終濃度為60%，所述百分比為乙醇占濃縮至25%的所述流出液、洗脫液和所述乙醇總體積的體積百分比；所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的6倍；
[0059](5)將步驟(4)所得的魚精巢提取物I 50°C噴霧干燥120分鐘，即可；
[0060](6)采用3%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液，即得魚精巢提取物II，所述百分比為質(zhì)量百分比；
[0061](7)將步驟(6)所得的魚精巢提取物II用活性炭進(jìn)行脫味脫色處理，進(jìn)行40°C噴霧干燥120min。
[0062]將獲得的魚精DNA-NA的提取物測定，發(fā)現(xiàn)核酸含量為90 %，游離蛋白質(zhì)的含量為5%，所述的百分比為質(zhì)量百分比。獲得的魚精DNA-NA的收率為7%，所述的百分比為魚精DNA-NA占魚精巢的質(zhì)量百分比。
[0063]將獲得的魚精蛋白提取物進(jìn)行測定，蛋白質(zhì)90%、核酸5%，所述百分比為質(zhì)量百分比。所述魚精蛋白的提取物中精氨酸含量為58.5%。獲得的魚精蛋白的收率為15%，所述的百分比為魚精蛋白占魚精巢的質(zhì)量百分比。
[0064]實(shí)施例4制備魚精DNA-NA的提取物和魚精蛋白提取物
[0065](I)取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料；
[0066](2)向步驟(I)得到的魚精巢原料中加入I倍體積的水，在37°C下，加入0.1%堿性蛋白酶酶解180分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比；
[0067](3)將步驟(2)所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾得到的濾液濃縮至所述濾液原體積的40%，即為料液A ;
[0068](4)將步驟(3)所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至8得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，將其濃縮至流出液和洗脫液原總體積的50%，用體積比90%的乙醇沉淀，收集沉淀，即為魚精巢提取物I，其中乙醇的終濃度為50%，所述百分比為乙醇占濃縮至50%的所述流出液、洗脫液和所述乙醇總體積的體積比；所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的3倍；
[0069](5)將步驟⑷所得的魚精巢提取物I 60°C真空干燥60分鐘，即可。
[0070](6)采用5%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液，即得魚精巢提取物II，所述百分比為質(zhì)量百分比；
[0071](7)將步驟(6)所得的魚精巢提取物II用活性炭進(jìn)行脫味脫色處理，在所述魚精巢提取物II脫色脫味后濃縮至膏狀時，50°C真空干燥lOOmin。
[0072]實(shí)施例5制備魚精DNA-NA的提取物和魚精蛋白提取物
[0073](I)取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料；
[0074](2)向步驟⑴得到的魚精巢原料中加入6倍體積的水，在50°C下，加入0.1 %胰蛋白酶、0.1%復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和1%胰蛋白酶酶解30分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比；
[0075](3)將步驟(2)所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾得到的濾液濃縮至所述濾液原體積的80%，即為料液A ;
[0076](4)將步驟(3)所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，將其濃縮至流出液和洗脫液原總體積的15%，用體積比95%的乙醇沉淀，收集沉淀，即為魚精巢提取物I，其中乙醇的終濃度為70%，所述百分比為乙醇占濃縮至15%的所述流出液、洗脫液和所述乙醇總體積的體積比；所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2倍；
[0077](5)將步驟(4)所得的魚精巢提取物I 60°C真空干燥40分鐘；
[0078](6)采用2%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液，即得魚精巢提取物II，所述百分比為質(zhì)量百分比；
[0079](7)將步驟(6)所得的魚精巢提取物II用活性炭進(jìn)行脫味脫色處理，進(jìn)行55°C噴霧干燥80min。
[0080]實(shí)施例6魚精DNA-NA的提取物進(jìn)行保濕、抗衰老相關(guān)美容效果測試
[0081]測試樣品:將實(shí)施例1制備的魚精DNA-NA配制成皮膚外用劑A和不含有魚精DNA-NA的普通皮膚外用劑
[0082]受試人群:年齡25-30歲年齡段的女性16名。
[0083]16名受試者在恒溫恒濕的穩(wěn)定環(huán)境的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，露出待測手前臂靜坐15分鐘。用水分測試探頭測量已被標(biāo)尺標(biāo)記部位皮膚的水分初始值，再將不同的待測樣品均勻涂抹在標(biāo)尺標(biāo)記部位。讓受試者在實(shí)驗(yàn)室靜坐3小時，再用水分測試探頭測量被標(biāo)記部位的水分值。
[0084]結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在同等條件下，含有魚精DNA-NA的提取物的皮膚外用劑A的保濕性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于不含有魚精DNA-NA的提取物的普通皮膚外用劑的保濕性，并且保濕性可以持續(xù)較長時間。
[0085]此外，還分別用皮膚外用劑A和普通皮膚外用劑培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)含有魚精DNA-NA的皮膚外用劑A對人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的促進(jìn)作用要遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于不含有魚精DNA-NA的提取物的普通皮膚外用劑，因此魚精DNA-NA的提取物具有抗衰老的美容效果。
[0086]實(shí)施例7魚精蛋白的提取物的抑菌實(shí)驗(yàn)
[0087]將實(shí)施例2制備的魚精蛋白的提取物配置成防腐劑，將所述防腐劑添加至培養(yǎng)有金色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus Rosenbach)、大腸桿菌(Escherichia coli)和綠膿桿菌(P.aeruginosa)的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)含有實(shí)施例2制備的魚精蛋白的提取物的抑菌劑可以明顯抑制金色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌的生長。因此，魚精蛋白的提取物具有抑囷效果。
[0088]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不構(gòu)成對權(quán)利要求范圍的限制，本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員可以想到的其他實(shí)質(zhì)上等同的替代，均在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種同時獲得魚精DNA-NA提取物和魚精蛋白提取物的方法，其特征在于，其包括以下的步驟: ①取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料； ②向步驟①所得的魚精巢原料中加入I?10倍體積的水，在溫度37?58°C下，加入0.1?1.2%水解用生物酶，酶解30?300分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的水解用生物酶為蛋白酶，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比； ③將步驟②所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的10?80%，即為料液A ; ④將步驟③所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6.0?8.0得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，濃縮，用乙醇進(jìn)行沉淀，收集沉淀，獲得魚精巢提取物I，即為魚精DNA-NA的提取物，所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?6倍； ⑤采用I?5%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液獲得魚精巢提取物II，即為魚精蛋白的提取物，所述百分比為質(zhì)量百分比。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟②中，向步驟①所得的魚精巢原料中加入2?6倍體積的水；所述的溫度為45?58°C ;所述的水解用生物酶為堿性蛋白酶、復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和胰蛋白酶中的一種或多種；所述酶解的時間為180?240分鐘；步驟③中，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的40 %?60 % ;步驟④中，所述料液A調(diào)節(jié)pH至6.5?7.5 ;所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?4倍；所述的濃縮為將所述流出液和所述洗脫液濃縮至所述流出液和所述洗脫液原總體積的15%?50%;較佳地濃縮至所述流出液和所述洗脫液原總體積的25%?50%;所述乙醇的終濃度為45%?70%，所述的百分比為乙醇占濃縮至原總體積15%?50%的所述流出液和所述洗脫液與所述乙醇體積之和的百分比；和/或，步驟⑤中，所述的氯化鈉溶液為I?2%的氯化鈉溶液，所述的百分比為質(zhì)量百分比。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的制備方法還包括如下的步驟: ⑥取所述的魚精巢提取物I，進(jìn)行干燥；和/或， ⑦將步驟⑤所得的魚精巢提取物II進(jìn)行脫味脫色處理，干燥。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟⑥中，所述的干燥為噴霧干燥或真空干燥；較佳地，所述干燥的時間為30?120分鐘；所述干燥的溫度為40?60°C;步驟⑦中，所述的脫色脫味處理為活性炭處理；所述的干燥為噴霧干燥或真空干燥；較佳地，所述真空干燥在所述魚精巢提取物II脫色脫味后濃縮至膏狀時進(jìn)行；所述干燥的時間為30?120分鐘；和/或，所述干燥的溫度為40?60°C。5.一種魚精DNA-NA的提取物的制備方法，所述的魚精DNA-NA為魚精DNA的鈉鹽，其特征在于，其包括以下的步驟: ①取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料； ②向步驟①所得的魚精巢原料中加入I?10倍體積的水，在溫度37?58°C下，加入0.1?1.2%水解用生物酶，酶解30?300分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的水解用生物酶為蛋白酶，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比； ③將步驟②所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的10?80%，即為料液A ; ④將步驟③所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6.0?8.0得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，濃縮，用乙醇進(jìn)行沉淀，收集沉淀，獲得魚精巢提取物I，即為魚精DNA-NA的提取物，所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?6倍。6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述的制備方法還包括以下的步驟: 取所述的魚精巢提取物I，干燥。7.—種魚精蛋白提取物的制備方法，其包括如下步驟: ①取魚精巢，加入水清洗，瀝干水分，得到清洗干凈的魚精巢原料； ②向步驟①所得的魚精巢原料中加入I?10倍體積的水，在溫度37?58°C下，加入0.1?1.2%水解用生物酶，酶解30?300分鐘，得酶解后的魚精巢原料，所述的水解用生物酶為蛋白酶，所述的百分比為占魚精巢原料的質(zhì)量百分比； ③將步驟②所得的酶解后的魚精巢原料過濾，將過濾所得的濾液濃縮至所述濾液原體積的10?80%，即為料液A ; ④將步驟③所得的料液A調(diào)節(jié)pH值至6.0?8.0得料液B，上陽離子交換樹脂柱，收集流出液，并用水清洗所述陽離子交換樹脂柱，合并流出液和洗脫液，濃縮，用乙醇進(jìn)行沉淀，收集沉淀，獲得魚精巢提取物I，即為魚精DNA-NA的提取物，所述的水的體積為所述陽離子交換樹脂柱體積的2?6倍； ⑤采用I?5%氯化鈉溶液繼續(xù)洗脫所述陽離子交換樹脂，洗脫至流出液無蛋白時，停止洗脫，收集洗脫液獲得魚精巢提取物II，即為魚精蛋白的提取物，所述百分比為質(zhì)量百分比。8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述的制備方法還包括如下的步驟: 將步驟⑤所得的魚精巢提取物II進(jìn)行脫味脫色處理，干燥。9.一種魚精DNA-NA的提取物，其特征在于，所述的提取物包括85?98%核酸和0.1?8%游離蛋白質(zhì)，所述百分比為質(zhì)量百分比；所述的提取物的分子量為5000?60萬道爾頓。10.一種魚精蛋白提取物，其特征在于，85 %?98 %蛋白質(zhì)和I?5 %核酸，所述百分比為質(zhì)量百分比；所述魚精蛋白的提取物中精氣酸含量為50%?70%。
【文檔編號】A61K8/44GK106031709SQ201510125690
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年3月20日
【發(fā)明人】駱峰, 周自華, 楊海延
【申請人】上海輝文生物技術(shù)股份有限公司