含有蝦紅素的提取物的組成物及其用圖
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種含有蝦紅素的提取物的組成物及其用途。首次揭示了一種可以大幅度改善女性不孕的天然組成物，所述組成物以含有蝦紅素的提取物作為主要的活性成分。所述的提取物為天然成份，因此可以較安全地改善不孕癥狀，具有極好的藥用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
含有蝦紅素的提取物的組成物及其用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥物學(xué)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及含有蝦紅素的提取物的組成物及 其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 女性不孕主要由性激素分泌異常，染色體異常，排卵障礙，慢性炎癥，精神壓力等 生理或心理原因引起。為了治療女性的不孕，本領(lǐng)域進(jìn)行了大量的研究。雖然輔助生殖醫(yī) 療技術(shù)已發(fā)展到一定的高度，但即使是這些技術(shù)也存在較多難以治療的病例。
[0003] 為了提高女性身體懷孕的可能性，本發(fā)明人找到了天然的組成物。作為代表例，其 中有維生素 C，維生素 E等，雖然都在研究這類(lèi)物質(zhì)對(duì)女性不孕的改善的有效性，但至今為 止還沒(méi)有從這類(lèi)物質(zhì)中找到可以大幅度（顯著性）改善女性不孕的有效物質(zhì)。
[0004] 因此，本領(lǐng)域有必要進(jìn)一步地研究針對(duì)女性不孕不育真正有效的物質(zhì)，特別是毒 副作用低的天然物質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種含有蝦紅素的提取物的組成物及其用途。
[0006] 在本發(fā)明的第一方面，提供含有蝦紅素的提取物在制備治療或改善女性不孕的組 成物中的用途。
[0007] 在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的組成物還用于：
[0008] 提高卵泡對(duì)促性腺激素的反應(yīng)性；
[0009] 促進(jìn)女性排卵（臨床表現(xiàn)為：統(tǒng)計(jì)學(xué)上提高從女性體內(nèi)的平均獲卵數(shù)）；
[0010] 提高卵子質(zhì)量（臨床表現(xiàn)為：統(tǒng)計(jì)學(xué)上提高正常受精卵子數(shù)、統(tǒng)計(jì)學(xué)上增加平均 可移值胚胎數(shù)以及平均優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)）；或
[0011] 提尚胚胎的著床率和/或提尚臨床妊娠率。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的含有蝦紅素的提取物是雨生紅球藻提取物。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的組成物中還包括維生素 E、維生素 C和糊精。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的組成物中包括：
[0015] 蝦紅素： 3-20重量份；較佳地為4-15重量份；
[0016] 維生素 E : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0017] 維生素 C : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0018] 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述的含有蝦紅素的提取物是雨生紅球藻提取物時(shí)，所述的 蝦紅素存在于雨生紅球藻提取物中，所述的組成物中包括：
[0020] 雨生紅球藻提取物：167-1112重量份；較佳地為222-834重量份；
[0021] 維生素 E : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0022] 維生素 C : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0023] 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，所述的組成物中還包括調(diào)味劑；較佳地所述調(diào)味劑包括（但不 限于）：可可粉，香蕉粉，玉米粉；更佳地，組成物中包含可可粉500-2500重量份（更佳地為 800-1800 重量份）。
[0025] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于治療或改善女性不孕的組成物，所述的組成 物中包括：
[0026] 蝦紅素： 3-20重量份；較佳地為4-15重量份；
[0027] 維生素 E : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0028] 維生素 C : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0029] 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。
[0030] 在一個(gè)優(yōu)選例中，當(dāng)所述的含有蝦紅素的提取物是雨生紅球藻提取物時(shí)，所述的 蝦紅素存在于雨生紅球藻提取物中，所述的組成物中包括：
[0031] 雨生紅球藻提取物：167-1112重量份；較佳地為222-834重量份；
[0032] 維生素 E : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0033] 維生素 C : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0034] 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述的組成物中還包括調(diào)味劑，較佳地所述調(diào)味劑包括（但不 限于）：可可粉，香蕉粉，玉米粉；較佳地，組成物中包含可可粉500-2500重量份（更佳地為 800-1800 重量份）。
[0036] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種制備用于治療或改善女性不孕的組成物的方法， 所述的方法包括，將蝦紅素或含有蝦紅素的提取物、維生素 E、維生素 C以及糊精混合，各成 分的用量為：
[0037] 蝦紅素： 3-20重量份；較佳地為4-15重量份；
[0038] 維生素 E : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0039] 維生素 C : 5-20重量份；較佳地為6-15重量份；
[0040] 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。
[0041] 在一個(gè)優(yōu)選例中，提取物、維生素 E、維生素 C以及糊精還與可可粉混合，可可粉為 500-2500重量份（更佳地為800-1800重量份）。
[0042] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于治療或改善女性不孕的藥盒，所述的藥盒中 包括：
[0043] 容器，以及裝于該容器中的所述的組成物。
[0044] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥盒中還有使用說(shuō)明書(shū)，其中記載了所述的組成物的服 用量，有效成分含量等。
[0045] 本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn) 的。
【附圖說(shuō)明】
[0046] 圖1、患者1-8在攝取含有蝦紅素的提取物組成物之前（Pre)和之后（Post)的獲 卵數(shù)（縱坐標(biāo)：個(gè)）比較。數(shù)值以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEM)計(jì)算。
[0047] 圖2、患者在攝取含有蝦紅素的提取物組成物之前（Pre)和之后（Post)的受精卵 數(shù)（縱坐標(biāo)：個(gè)）。數(shù)值以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEM)計(jì)算。
[0048] 圖3、在服用本發(fā)明的組成物的之前（Pre)和之后（Post)，患者的可移植胚胎數(shù) (縱坐標(biāo)：個(gè)）。數(shù)值以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEM)計(jì)算。
[0049] 圖4、服用本發(fā)明的組成物之前（Pre)和之后（Post)患者的高質(zhì)量胚胎的數(shù)量。 數(shù)值以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEM)計(jì)算。
【具體實(shí)施方式】
[0050] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)深入的研究，首次揭示了蝦紅素是一種可大幅度改善女性不孕的物 質(zhì)，將含有蝦紅素的提取物作為主要的活性成分，可在臨床上顯著地促進(jìn)妊娠成功率。
[0051] 含有蝦紅素的提取物及其應(yīng)用
[0052] 蝦紅素（Astaxanthin，又稱(chēng)蝦青素）是類(lèi)胡蘿卜素的一種，是生物界中分布廣泛 的一種葉黃素顏色素，存在于水產(chǎn)動(dòng)物的蝦、蟹、魚(yú)和綠藻及一種酵母中，暗紅色。
[0053] 蝦紅素的化學(xué)名稱(chēng)為3, 3' -二羥基-4, 4' -二酮基-β，β ' -胡蘿卜素。
[0054] 蝦紅素是一種非維生素 Α原的類(lèi)胡蘿卜素。它具有獨(dú)特的著色功能和很多重要生 理功能（抗氧化、防癌變、抵御紫外線傷害等），在飼料、食品、化妝品，等領(lǐng)域中有應(yīng)用。蝦 紅素與維生素一樣，動(dòng)物不能自行合成，必需從食物中攝取，綠藻中的單細(xì)胞藻-雨生紅球 藻所含的蝦紅素很高，高出甲殼類(lèi)動(dòng)物數(shù)10倍。
[0055] 本發(fā)明中，所述的含有蝦紅素的提取物的來(lái)源可以多種途徑的，例如可以是通過(guò) 商購(gòu)購(gòu)買(mǎi)獲得的，也可以是分離提取自雨生紅藻、甲殼類(lèi)動(dòng)物等。
[0056] 目前，含有蝦紅素的提取物已經(jīng)可以商業(yè)購(gòu)買(mǎi)，其提取方法也是本領(lǐng)域已知的，例 如日本專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)亻_(kāi)2010-43032中提供了從雨生紅球藻中獲得含有蝦紅素的提取物的方 法。此外，所述的雨生紅球藻提取物也可通過(guò)化學(xué)合成的方式獲得。
[0057] 可將含有蝦紅素的提取物直接給藥；或者可將含有蝦紅素的提取物進(jìn)行提純和加 工，制成純凈形式的蝦紅素或各種形式的以蝦紅素為活性成分的制劑后，用于給藥。
[0058] 本發(fā)明中，首次提出將含有蝦紅素的提取物應(yīng)用于改善女性的不孕，其可以作為 藥品、食品或保健品來(lái)大幅度改善女性不孕。較佳地，在含有蝦紅素的提取物的組成物中還 含有維生素 C維生素 E等的抗氧化物質(zhì)。
[0059] 含有蝦紅素的提取物的組成物
[0060] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"本發(fā)明的組成物"包括藥物組成物、飲食補(bǔ)充劑、保健品組成 物，只要它們含有有效量的含有蝦紅素的提取物作為治療或改善女性不孕的主要活性成 分。
[0061] 如本文所用，屬于"組成物"可與"組合物"互換使用。
[0062] 本發(fā)明中，"藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的"成分是適用于人和/或動(dòng)物而無(wú)過(guò)度不 良副反應(yīng)（如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng)）即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。
[0063] 本發(fā)明中，"藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體"是用于將本發(fā)明的含有蝦紅素的提 取物傳送給動(dòng)物或人的藥學(xué)上或食品上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體 或固體。
[0064] 本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"含有"表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的混合物或組成物中。 因此，術(shù)語(yǔ)"主要由...組成"和"由...組成"包含在術(shù)語(yǔ)"含有"中。
[0065] 蝦紅素是通過(guò)十二指腸來(lái)吸收消化的，本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，糊精能夠幫助蝦 紅素在十二指腸的吸收。因此，作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，本發(fā)明所述的組成物中，不僅含有 對(duì)女性不孕有有效作用的含有蝦紅素的提取物，還含有可以調(diào)節(jié)蝦紅素吸收率的纖維成分 糊精，其有助于提高蝦紅素的體內(nèi)吸收量，從而促進(jìn)本發(fā)明的組成物的治療或改善不孕的 效果。
[0066] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，蝦紅素雖然自身有著抗氧化作用，但其本身也容易氧化。因此，作 為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的組成物中還包括：維生素 E和維生素 C，該兩種維生素的加入， 有助于阻止蝦紅素的自身氧化，從而有效保持蝦紅素的功效。
[0067] 另外，因?yàn)槲r紅素自身有著獨(dú)特的味道，食用味道不是很理想，因此，在組成物中 加入調(diào)味劑是改善組成物口味的有效手段，所述的調(diào)味劑可以是本領(lǐng)域熟知的各種調(diào)味 劑，例如香蕉粉、草莓粉、可可粉、玉米粉、巧克力粉等等。本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，可可粉混 合于含有蝦紅素的提取物的組成物中，可以極其有效地掩蓋蝦紅素的不良味道，從而避免 影響使用者的食欲。因此，作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的組成物中還包括可可粉或可可顆 粒。另外，也可以采取添加其它帶有水果味或可可味的方式進(jìn)行掩味。
[0068] 本發(fā)明還提供了一種組成物，含有有效量的蝦紅素，或含有蝦紅素的提取物。
[0069] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，用于配制本發(fā)明的組成物的各組分的用量如表6所示。
[0070] 表 6
[0071]
[0072] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，當(dāng)所述的含有蝦紅素的提取物是雨生紅球藻提取物時(shí)， 所述的蝦紅素存在于雨生紅球藻提取物中，所述的組成物中的各組分的用量如表7所示。
[0073] 表 7
[0074]
[0075] 在得知本發(fā)明的含有蝦紅素的提取物的組成物的組分及其配方以后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可方便地進(jìn)行配制。
[0076] 從易于制備和給藥的立場(chǎng)看，優(yōu)選的藥物組成物是固態(tài)組成物，尤其是片劑和固 體填充或液體填充的膠囊。為了能讓對(duì)象容易攝取，上述的組成物可以做成顆?；蛘叻蹌?。
[0077] 本發(fā)明所述的藥物組成物的劑型可以是多種多樣的，只要是能夠使活性成分有效 地到達(dá)哺乳動(dòng)物體內(nèi)的劑型都是可以的。比如可選自：片劑、膠囊、粉末、顆粒、糖漿、溶液、 懸浮液、或氣霧劑。其中含有蝦紅素的提取物可以存在于適宜的固體或液體的載體或稀釋 液中。
[0078] 根據(jù)體重和對(duì)于蝦紅素的吸收率，受試對(duì)象的1天的攝取量也不同（每天6mg~ 12mg)，通常1天攝取6mg就能達(dá)到足夠的效果。
[0079] 含有蝦紅素的提取物還可與其它活性成分或藥物聯(lián)合給藥。當(dāng)兩種或兩種以上的 藥物聯(lián)合給藥時(shí)，一般具有優(yōu)于兩種藥物分別單獨(dú)給藥的效果。
[0080] 本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于：
[0081] (1)首次揭示含有蝦紅素的提取物作為主要活性成分的組成物可以大幅度改善女 性不孕的各種問(wèn)題。
[0082] (2)含有蝦紅素的提取物為天然成份，所以可以較為安全地改善不孕癥狀，具有極 好的藥用前景。并且，本發(fā)明的含有蝦紅素的提取物對(duì)于肥胖，免疫力相關(guān)，也進(jìn)行過(guò)很多 的臨床試驗(yàn)，至今為止沒(méi)有因蝦紅素引起并發(fā)癥的報(bào)告。
[0083] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0084] 材料和試驗(yàn)方法
[0085] 主要活性物質(zhì)：以下實(shí)施例中，所用的含有蝦紅素的提取物為雨生紅球藻提取物。 該雨生紅球藻提取物提取自雨生紅球藻，提取方法參見(jiàn)日本專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)亻_(kāi)2010-43032,制 備成含有恒定蝦紅素含量的提取物，即每克（g)該雨生紅球藻提取物中蝦紅素含量為18毫 克（mg)。
[0086] 實(shí)施例1、配方1藥物的制備和服用
[0087] 藥物：含有蝦紅素的提取物（雨生紅球藻提取物）的組成物1，配方如表1。表1 配方制成藥包，每包2500mg。
[0088] 表 1
[0089]
[0090] 表中，含有雨生紅球藻提取物333. 5mg，相當(dāng)于含有6mg蝦紅素。
[0091] 實(shí)施對(duì)象：選擇13例反復(fù)體外受精-胚胎移植（IVF-ET)失敗的患者，共進(jìn)行了 41 周期IVF-ET助孕，均未獲妊娠。其中長(zhǎng)方案促排卵11個(gè)周期，微刺激促排卵30周期。13 例患者中原發(fā)不孕5例，繼發(fā)不孕8例；年齡27~40歲，平均（31. 5±3. 9)歲。平均不孕 年限4. 5年。不孕原因：輸卵管因素3例，卵巢功能減退7例，多囊卵巢綜合癥2例，子宮內(nèi) 膜異位癥1例，不明原因2例。各患者情況如下：
[0092] 患者 1
[0093] 患者年齡：29歲。
[0094] 患者病情：原因不明的不孕，不孕時(shí)間5年。
[0095] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)1次長(zhǎng) 方案促排卵、4次微刺激促排卵IVF-ET，進(jìn)行1次凍融胚胎移植治療，未獲妊娠。
[0096] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行2次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0097] 患者 2
[0098] 患者年齡：30歲。
[0099] 患者病情：因?yàn)檩斅压埽ㄓ覀?cè)輸卵管梗阻，左側(cè)輸卵畸形）問(wèn)題引起的不孕。
[0100] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)1次長(zhǎng) 方案促排卵、1次微刺激促排卵IVF-ET，進(jìn)行2次凍融胚胎移植治療，未獲妊娠。
[0101] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行1次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0102] 患者 3
[0103] 患者年齡：40歲。
[0104] 患者病情：因尚齡問(wèn)題引起不孕。
[0105] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)4次微 刺激促排卵IVF-ET，進(jìn)行1次凍融胚胎移植治療，未獲妊娠。
[0106] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行2次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0107] 患者 4
[0108] 患者年齡：31歲。
[0109] 患者病情：右側(cè)輸卵管宮外孕術(shù)后傘端梗阻伴積水，左側(cè)輸卵管間質(zhì)部梗阻，卵巢 功能減退?；A(chǔ)內(nèi)分泌檢查FSH11. 64, B超檢查提示左側(cè)卵巢竇卵泡儲(chǔ)備3枚，右側(cè)竇卵泡 儲(chǔ)備2枚。
[0110] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)3次微 刺激促排卵IVF-ET，進(jìn)行1次凍融胚胎移植治療，未獲妊娠。
[0111] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行1次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0112] 患者 5
[0113] 患者年齡：32歲。
[0114] 患者病情：因?yàn)槟蟹缴偃蹙影Y，女方卵巢低反應(yīng)引起的不孕。
[0115] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)2次長(zhǎng) 方案促排卵IVF-ET ;1次獲卵3枚，卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù)（ICSI)助孕，新鮮胚胎移 植2枚未孕；1次獲卵6枚，再次ICSI助孕，獲2枚可移植胚胎，凍融胚胎移植未孕。后又 進(jìn)行1次微刺激促排卵體外受精助孕，取卵1枚，未獲可移植胚胎。
[0116] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行1次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0117] 患者 6
[0118] 患者年齡：42歲。
[0119] 患者病情：因?yàn)樯旋g原因引起的不孕。
[0120] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)2次微 刺激促排卵體外受精助孕，凍融胚胎移植1次未孕。
[0121] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行1次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0122] 患者 7
[0123] 患者年齡：31歲。
[0124] 患者病情：雙側(cè)輸卵管切除術(shù)后，卵巢功能減退引起的不孕。基礎(chǔ)內(nèi)分泌檢查 FSH7. 78, B超檢查提示左側(cè)卵巢竇卵泡儲(chǔ)備5枚，右側(cè)竇卵泡儲(chǔ)備2枚。反復(fù)體外受精失 敗史。
[0125] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)1次長(zhǎng) 方案促排卵IVF-ET ;3次微刺激促排卵體外受精助孕，凍融胚胎移植1次未孕。
[0126] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行2次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0127] 患者 8
[0128] 患者年齡：35歲。
[0129] 患者病情：因?yàn)楦啐g、反復(fù)夫精人工受精失敗、不明原因引起的不孕。
[0130] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)2次長(zhǎng) 方案促排卵IVF-ET ;3次微刺激促排卵體外受精助孕，凍融胚胎移植1次未孕。
[0131] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1包），服用3個(gè)月后，再行2次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0132] 患者 9
[0133] 患者年齡：27歲。
[0134] 患者病情：結(jié)婚4年未避孕未孕，女方多囊卵巢綜合癥，多次促排卵因排卵障礙助 孕失敗。
[0135] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)2次長(zhǎng) 方案促排卵IVF-ET，進(jìn)行1次新鮮胚胎移植，2次凍融胚胎移植治療，未獲臨床妊娠。
[0136] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天2包），服用3個(gè)月后，再行1次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0137] 患者 10
[0138] 患者年齡：32歲。
[0139] 患者病情：結(jié)婚10年未避孕未孕，女方多囊卵巢綜合癥，多次促排卵因排卵障礙 助孕失敗。
[0140] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)2次長(zhǎng) 方案促排卵IVF-ET，微刺激方案促排卵2次，進(jìn)行1次新鮮胚胎移植，4次凍融胚胎移植治 療，未獲臨床妊娠。
[0141] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天2包），服用時(shí)間3個(gè)月后，再行1次微刺激 促排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0142] 患者 11
[0143] 患者年齡：29歲。
[0144] 患者病情：結(jié)婚6年，未避孕未孕5年，女方卵巢功能減退，三次促排卵人工授精均 未孕。
[0145] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)3次人 工授精，2次微刺激方案促排卵IVF - ET，2次凍融胚胎移植治療，未獲臨床妊娠。
[0146] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1/2包），服用時(shí)間3個(gè)月后，再行2次微刺 激促排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0147] 患者 12
[0148] 患者年齡：34歲。
[0149] 患者病情：結(jié)婚10年未避孕未孕，男方嚴(yán)重少弱精子癥，女方卵巢功能減退，基礎(chǔ) FSH12. 5, 7年前行1次人工授精未孕。
[0150] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)1次人 工授精，3次微刺激方案促排卵IVF，1次凍融胚胎移植治療，未獲臨床妊娠。
[0151] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1/2包），服用時(shí)間3個(gè)月后，再行2次微刺 激促排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0152] 患者 13
[0153] 患者年齡：29歲
[0154] 患者病情：因女方子宮內(nèi)膜異位癥IV期，左卵巢巧克力囊腫剝除術(shù)盆腔粘連松解 術(shù)后2年不孕。
[0155] 是否接受過(guò)輔助生育技術(shù)治療：接受過(guò)。接受過(guò)的輔助生育技術(shù)是：接受過(guò)2次微 刺激方案促排卵IVF，1次凍融胚胎移植治療，未獲臨床妊娠。
[0156] 治療方案：服用表1中組成物1 (每天1/2包），服用時(shí)間3個(gè)月后，再行1次微刺 激促排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0157] 長(zhǎng)方案促排卵IVF-ET的具體做法是：黃體中期（前一月經(jīng)周期第21天）進(jìn)行垂 體降調(diào)節(jié)（促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑GnRHa)，用藥10~14天后，測(cè)FSH、LH、E2,顯示抑 制滿意，則開(kāi)始給予皮下注射重組人促卵泡激素（Gonal-F，75IU/支）2-3支每天，定期B 超檢查以及行血黃體生成素（LH)、孕酮（P)、雌二醇（E2)測(cè)定。當(dāng)卵泡直徑達(dá)到18_時(shí)，于 當(dāng)晚注射HCG 10000IU。注射HCG后34~36小時(shí)在陰道B超引導(dǎo)下取卵。取卵后4~6 小時(shí)行IVF或卵細(xì)胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI)，18小時(shí)左右觀察受精情況。將正常受精的卵 繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時(shí)后，顯微鏡下評(píng)估胚胎質(zhì)量，移植到宮腔。移植后14天檢測(cè)血HCG， 移植后21~24天B超檢查，以確定臨床妊娠。
[0158] 微刺激促排卵周期輔助生育技術(shù)手術(shù)：以月經(jīng)來(lái)潮為第1天，第2天空腹女性生殖 激素檢查，第3天給予克羅米芬，50mg/d，5天后經(jīng)陰道B超檢查，繼續(xù)克羅米芬治療，每日予 以尿促性腺素（HMG，75IU/支）或注射用重組人促卵泡激素 （Gonal -F，75IU/支）2-3支，定 期B超檢查以及行血黃體生成素（LH)、孕酮（P)、雌二醇（E2)測(cè)定。當(dāng)卵泡直徑達(dá)到18_ 時(shí)，當(dāng)日夜間予以絨毛膜促性腺素（HCG) 10000U注射，36h取卵。如卵泡液中未見(jiàn)卵母細(xì)胞， 用培養(yǎng)液沖洗卵泡腔，再抽取。取卵后4~6h行IVF或卵細(xì)胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI)，18h 左右觀察受精情況。將正常受精的卵繼續(xù)培養(yǎng)24~48h后，顯微鏡下評(píng)估胚胎質(zhì)量，將可 移植胚胎進(jìn)行全胚胎冷凍保存。下個(gè)月經(jīng)周期進(jìn)行凍融胚胎移植。
[0159] 實(shí)施對(duì)象的給藥方式選自如下：
[0160] (a) -天服用1次，每次服用2500mg量（即1包），其中雨生紅球藻提取物 333. 5mg，相當(dāng)于含奸紅素6mg。服用方法為：溫水吞服。
[0161] (b) -天服用1次，每次服用5000mg量（即2包），其中雨生紅球藻提取物667mg， 相當(dāng)于含蝦紅素12mg。服用方法為：溫水吞服。
[0162] (c) 一天服用1次，每次服用1250mg量（即1/2包），其中雨生紅球藻提取物 166. 8mg，相當(dāng)于含奸紅素3mg。服用方法為：溫水吞服。
[0163] 按照以上給藥方式之一給予患者服用所述的組成物3個(gè)月之后，全部實(shí)施微刺激 促排卵周期輔助生育技術(shù)手術(shù)，具體方法同上描述。比較13例患者服用組成物1前后輔助 生育技術(shù)實(shí)施的結(jié)果，包括取卵數(shù)、可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)及臨床妊娠率等指標(biāo)。
[0164] 實(shí)施例2、患者1-8用藥（服用量1包）前后實(shí)施微刺激體外受精助孕獲得卵子數(shù) 量變化
[0165] 患者1-8通過(guò)服用3個(gè)月組成物1后，同樣進(jìn)行微刺激體外受精技術(shù)助孕，考察患 者1-8用藥前后平均每取卵周期的卵子獲得數(shù)的變化。獲得的8個(gè)患者的卵子數(shù)量統(tǒng)計(jì)總 數(shù)后計(jì)算平均數(shù)值。
[0166] 結(jié)果如圖1所示，攝取所述的組成物之前和之后患者的平均獲卵數(shù)有顯著的增 加，從2. 2個(gè)增加到了 3. 8個(gè)。
[0167] 獲卵數(shù)是顯示患者卵巢生產(chǎn)正常的成熟的卵子的能力的一個(gè)指標(biāo)。因此可見(jiàn)，通 過(guò)攝取本發(fā)明的組成物，患者卵巢的功能有顯著的提高。
[0168] 實(shí)施例2、患者1-8用藥（服用量1包）前后實(shí)施微刺激體外受精助孕獲得正常受 精卵數(shù)量變化
[0169] IVF/ICSI卵母細(xì)胞獲取的操作常規(guī)如下：
[0170] 1、操作液的準(zhǔn)備
[0171] (1)子宮頸/ 口擦洗液：10ml培養(yǎng)液（M-HTF/HTF/P1液）/每病人。
[0172] (2)卵母細(xì)胞體外操作液（M-頂）：M_HTF液+10 % SSS (v/V)。
[0173] 根據(jù)病人治療的情況準(zhǔn)備M-頂液：IVF病人：5ml ;ICSI病人：7ml。
[0174] (3)卵母細(xì)胞體外受精液（頂）：HTF液+10% SSS(v/V)，10ml/每病人。
[0175] (4)胚胎體外培養(yǎng)液（GM) :P1/ECM液 +10% SSS(v/V)，5 ~6ml/ 每病人。
[0176] (5)礦物油：15~20ml/每病人。
[0177] 所有操作液和礦物油用15ml Falcon無(wú)菌試管分裝，標(biāo)上標(biāo)簽（名稱(chēng)、配制日期、 配置者姓名），于取卵的前一天置培養(yǎng)箱中（5% C02、37°C、100%濕度）平衡，其中M-頂?shù)?帶Hepes的培養(yǎng)液只需加溫，無(wú)需平衡，蓋緊蓋子。
[0178] 2、卵母細(xì)胞的采集與處理
[0179] (1)取卵前應(yīng)有專(zhuān)職的護(hù)士和實(shí)驗(yàn)室技師嚴(yán)格的審查接受治療的夫妻雙方的結(jié)婚 證、身份證、知情同意書(shū)以及其它必要的證件和文書(shū)，仔細(xì)閱讀病歷。
[0180] (2)取卵前30分鐘，將經(jīng)已檢測(cè)的falcon3003培養(yǎng)皿于加熱平臺(tái)上預(yù)熱。
[0181] (3)在溫度調(diào)試好的工作區(qū)內(nèi)，裝M-頂液的falcon3001培養(yǎng)皿2~3個(gè)，培養(yǎng)皿 蓋標(biāo)上患者的姓名（如有重名，加標(biāo)丈夫的姓名或操作者能區(qū)分的其它符號(hào)）、以及液體的 名稱(chēng)。
[0182] (4)將每管卵泡液倒入3003皿中，在體視顯微鏡下仔細(xì)檢查，用巴氏德管將卵 丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（COCs)檢至裝M-頂液的3001培養(yǎng)皿中，詳細(xì)記錄卵泡的數(shù)目和卵母 細(xì)胞的數(shù)目，并及時(shí)與穿卵手術(shù)者通報(bào)撿卵情況。
[0183] (5)將取出的COCs在裝M-頂液的3001培養(yǎng)皿中充分漂洗3~4遍，去除血細(xì)胞 和其它雜質(zhì)，最后將漂洗過(guò)的COCs移入裝頂液的干凈falcon3037培養(yǎng)皿中。
[0184] (6)卵母細(xì)胞成熟度的觀察與評(píng)價(jià)：
[0185] 適當(dāng)調(diào)整體視顯微鏡倍數(shù)，對(duì)卵母細(xì)胞的成熟度進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)的依據(jù)為卵母細(xì) 胞、放射冠和卵丘細(xì)胞的形態(tài)特征。
[0186] I :未成熟卵母細(xì)胞：卵細(xì)胞呈深色；放射冠沒(méi)有分散開(kāi)；卵丘細(xì)胞緊密排列，顏色 偏深。
[0187] II :欠成熟卵母細(xì)胞：卵細(xì)胞顏色變淺；放射冠已呈不同程度的分散；卵丘細(xì)胞排 列變稀疏，顏色變淺。
[0188] III :成熟卵母細(xì)胞：卵細(xì)胞顏色很淡，形狀為規(guī)則的圓形；放射冠呈完全分散狀； 卵丘細(xì)胞團(tuán)較大，排列稀松，顏色很淡，光鏡下發(fā)亮。
[0189] IV :過(guò)熟卵母細(xì)胞：卵細(xì)胞顏色變深；放射冠分散；卵丘細(xì)胞團(tuán)擴(kuò)散，細(xì)胞團(tuán)中有 黑色顆粒團(tuán)，折光性較差，或卵丘細(xì)胞團(tuán)已部分脫落，能見(jiàn)不均勻卵母細(xì)胞質(zhì)。
[0190] 必要時(shí)切除顆粒細(xì)胞，觀察第一極體，詳細(xì)記錄卵子成熟情況及撿卵過(guò)程。
[0191] (7)檢卵者、手術(shù)者和助手在檢卵記錄上小結(jié)并簽字。
[0192] (8)向病人通報(bào)取卵情況。
[0193] (9)卵母細(xì)胞的培養(yǎng)
[0194] 將裝有COCs的3037培養(yǎng)皿迅速移入培養(yǎng)箱中（37°C、5% C02)培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間據(jù) 卵母細(xì)胞的成熟度而定，一般在取卵后再培養(yǎng)3~5小時(shí)，準(zhǔn)備受精。
[0195] (10)取卵結(jié)束后立刻準(zhǔn)備受精滴和胚胎培養(yǎng)滴
[0196] 原則上根據(jù)卵細(xì)胞的數(shù)量準(zhǔn)備受精滴：
[0197] 當(dāng)卵細(xì)胞數(shù)目小于6時(shí)，采用微滴法或四孔皿法受精。在3001培養(yǎng)皿中分別做頂 液（IVF病人用）和GM液（IVF和ICSI病人用）微滴（20~30 μ 1/每滴），上覆礦物油，移 入培養(yǎng)箱中平衡、備用。
[0198] 當(dāng)卵細(xì)胞數(shù)目大于等于6時(shí)，采用3037培養(yǎng)皿法受精。在3037皿中間加1ml頂 液，旁邊2ml頂液。卵細(xì)胞加入到中間lml頂液中備用。準(zhǔn)備GM液微滴上覆礦物油，移 入培養(yǎng)箱中平衡、備用。
[0199] 所有培養(yǎng)皿蓋均須標(biāo)上患者的姓名（如有重名，加標(biāo)丈夫的姓名或操作者能區(qū)分 的其它符號(hào)）、培養(yǎng)液的名稱(chēng)。
[0200] 獲得受精卵的方法有體外受精（IVF)和卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI)兩種：
[0201] IVF的受精操作常規(guī)如下：
[0202] (1)將預(yù)處理好的精子滴片觀察。
[0203] (2)將經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的COCs移入頂微滴或3037皿。
[0204] (3)取卵數(shù)大于等于6枚，一般采用3037法受精；取卵數(shù)小于6枚，一般采用微滴 法或者四孔皿受精。加精終濃度為5X 105個(gè)/ml，加精后待精子團(tuán)散開(kāi)后，鏡下觀察，以兩 個(gè)精子間的距離約為一個(gè)精子的長(zhǎng)度為最佳濃度。
[0205] (4)將培養(yǎng)皿移入培養(yǎng)箱中（37°C、5% C02、100%濕度），精卵共培養(yǎng)16~18小 時(shí)。
[0206] (5)詳細(xì)記錄加精的時(shí)間，加精的濃度等操作過(guò)程，操作者和證人簽名。
[0207] (6)受精后16~18小時(shí)后拆蛋（剝除卵母細(xì)胞周?chē)穆亚痤w粒，暴露卵母細(xì)胞的 過(guò)程），先拉毛細(xì)管，毛細(xì)管的粗細(xì)以卵母細(xì)胞直徑的1. 5倍、不損害卵母細(xì)胞為準(zhǔn)；移卵的 毛細(xì)管的管徑應(yīng)大于卵母細(xì)胞，并過(guò)火鈍化管口。
[0208] (7)精卵共培養(yǎng)16~18小時(shí)后，準(zhǔn)備四孔板，其中一孔為M-頂液，另外三孔為GM 液，將卵子移入M-頂中，用毛細(xì)管同時(shí)反復(fù)吹打多枚卵子除去周?chē)穆亚鸺?xì)胞，注意動(dòng)作 要輕柔。
[0209] (8)將卵子在GM液中洗滌約5~10次（用移卵管將卵子在GM液中吹吸），移入 GM液微滴中（每卵/每滴）。迅速移入培養(yǎng)箱。
[0210] 卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI)操作規(guī)程如下：
[0211] 1、卵細(xì)胞準(zhǔn)備，顆粒細(xì)胞（放射冠）去除（拆蛋）：
[0212] (1)選用透明質(zhì)酸酶和PVP均為商品化試劑，提前預(yù)溫，透明質(zhì)酸酶需在使用前1 小時(shí)放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中平衡。
[0213] (2)拉制口徑200~300 μ m毛細(xì)管數(shù)根。準(zhǔn)備兩個(gè)3037皿，分別標(biāo)上ICSI前和 ICSI后以及患者姓名和日期。兩個(gè)3037皿中間均加入lml GM并覆蓋礦物油，移入培養(yǎng)箱 備用。
[0214] (3)在已預(yù)熱的4孔板1、2和3號(hào)孔、中間孔中加入M-頂液各lml。在1號(hào)孔中 加入透明質(zhì)酸酶工作液0. 5ml。4號(hào)孔中加入GM液lml。
[0215] (4)每次取COCs 4~5枚加入4孔板的1號(hào)孔，用較大口徑毛細(xì)管反復(fù)吹打至去 除大部分卵丘顆粒細(xì)胞，20秒內(nèi)移入中間孔洗滌，再到2號(hào)孔用200 μ m毛細(xì)管繼續(xù)吹打至 顆粒細(xì)胞基本去除，15秒內(nèi)再移入3號(hào)孔吹打洗滌至完全去除顆粒細(xì)胞。將卵母細(xì)胞在4 號(hào)孔中充分洗滌后移入ICSI前的3037皿中，隨后移入培養(yǎng)箱中備用。
[0216] 2、顯微注射準(zhǔn)備：
[0217] (l)PVP:提前預(yù)溫。
[0218] (2)顯微注射皿的準(zhǔn)備：采用1006皿制備顯微注射皿。
[0219] (3)架針：調(diào)節(jié)附有顯微注射器的倒置顯微鏡，先在普通4倍鏡下調(diào)焦，清晰后換 至高4倍鏡安裝顯微固定針及顯微注射針，調(diào)節(jié)平行，特別注意調(diào)節(jié)顯微注射針的水平位 置。安好后再依次換從普通4倍至20倍，檢查注射針尖端是否銳利，固定針頂端是否光滑， 兩針?lè)謩e吸入少量培養(yǎng)液平衡壓力。
[0220] 3、精子選擇、制動(dòng)與卵漿內(nèi)注射：
[0221] (1)盡可能選擇形態(tài)正常與活動(dòng)好的精子，將此類(lèi)精子移入PVP滴。
[0222] (2)注射針置于精子尾部中點(diǎn)，下壓、水平快速拉過(guò)尾部制動(dòng)，將精子從尾部吸入 注射刺針。
[0223] (3)取1枚或多枚（最多不能超過(guò)4枚）成熟卵移入ICSI皿的M-頂培養(yǎng)液滴中， 用固定針于9點(diǎn)處將1只卵固定，極體置于6或12點(diǎn)處。
[0224] (4)將已吸入一條經(jīng)制動(dòng)處理精子的注射針移入液滴（如發(fā)現(xiàn)精子仍活動(dòng)，則須 返回PVP滴重新制動(dòng)），檢查推拉注射器（或吹吸）時(shí)精子是否前后移動(dòng)（未粘于注射針內(nèi) 壁），于3點(diǎn)或9點(diǎn)處刺入透明帶、卵細(xì)胞膜，回吸部分卵胞漿（胞漿如能快速回吸入注射 針，則說(shuō)明胞膜已破），然后將回吸的胞漿連同精子及盡量少的PVP -起注入胞漿，慢慢撤 出注射針。注射后卵細(xì)胞漿在1~5分鐘內(nèi)緩慢恢復(fù)正常形態(tài)，這時(shí)檢查精子是否留在胞 漿內(nèi)，如果精子被注射到卵周間隙，則需要重復(fù)注射一次。如一次移入幾只卵，則重復(fù)上述 步驟至注射完所有卵細(xì)胞。每個(gè)M-頂?shù)蚊看沃环?枚卵。
[0225] (5)將已注射的卵移入標(biāo)有ICSI后的3037皿中反復(fù)洗滌，移入GM培養(yǎng)滴中，采用 單滴單卵法進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)皿迅速置于37°C，5% C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
[0226] (6)無(wú)極體的未成熟卵可嘗試生長(zhǎng)液培養(yǎng)，待當(dāng)晚或第二天出現(xiàn)第一極體后再行 精子注射。
[0227] 受精觀察：
[0228] 在400倍下觀察原核，有雙原核的卵為正常受精的胚胎，單原核、多原核、無(wú)原核 (排除晚期卵裂）的卵則判為異常受精或不受精，詳細(xì)記錄觀察時(shí)間及受精卵的異常情況 如透明帶異常，大量空泡，胞漿顆粒粗、胚胎破裂或死亡、多核等。
[0229] 結(jié)果如圖2所示，患者1-8平均的正常受精卵數(shù)量，受精的卵子數(shù)量從1. 5個(gè)增加 到3個(gè)，并且卵子的質(zhì)量都是上乘的。
[0230] 實(shí)施例3、患者1-8用藥（服用量1包）前后實(shí)施微刺激體外受精助孕獲得可移植 胚胎數(shù)變化
[0231] 胚胎發(fā)育的觀察、胚胎質(zhì)量的評(píng)價(jià)：
[0232] -級(jí)：胚胎發(fā)育速度正常，卵裂球均勻、數(shù)目均等，細(xì)胞質(zhì)均一、無(wú)空泡，碎片少于 5% ；
[0233] 二級(jí)：胚胎發(fā)育速度正常，卵裂球均勻或大致均勻、數(shù)目均等或大致均等，細(xì)胞質(zhì) 均一、無(wú)空泡，碎片不超過(guò)10% ;
[0234] 三級(jí)：胚胎發(fā)育速度大致正常，卵裂球不均勻/均勻、數(shù)目不均等/均等，細(xì)胞質(zhì)中 有少量空泡，少于15 %碎片；
[0235] 四級(jí)：胚胎發(fā)育速度異常，卵裂球不均勻、數(shù)目不均等，細(xì)胞質(zhì)不均一、有大量空 泡，10~50 %碎片；
[0236] -級(jí)和二級(jí)統(tǒng)稱(chēng)為優(yōu)質(zhì)胚胎；一級(jí)，二級(jí)和三級(jí)統(tǒng)稱(chēng)為可移植胚胎。
[0237] 胚胎發(fā)育觀察
[0238] (1)受精觀察：在400倍下觀察原核，有雙原核的卵為正常受精的胚胎，單原核、多 原核、無(wú)原核（排除晚期卵裂）的卵則判為異常受精或不受精，詳細(xì)記錄觀察時(shí)間及受精卵 的異常情況如透明帶異常，大量空泡，胞漿顆粒粗、胚胎破裂或死亡、多核等。
[0239] (2)第二天觀察胚胎發(fā)育情況，并打分，詳細(xì)記錄細(xì)胞數(shù)，碎片，細(xì)胞核情況。根據(jù) 胚胎發(fā)育速度，第二天2細(xì)胞胚胎最多評(píng)為II級(jí)胚胎，不能評(píng)為I級(jí)胚胎。受精卵數(shù)目少于 3個(gè)的可于第二天移植。準(zhǔn)備ET液（Pl/ECM+50% SSS液，2ml/每病人）。
[0240] (3)第三天觀察胚胎發(fā)育情況，挑選最好的胚胎移植，盡可能選擇一級(jí)和二級(jí)優(yōu)質(zhì) 胚胎，其余多余的可移植胚胎可選擇冷凍。融合胚胎不寫(xiě)明細(xì)胞數(shù)，可注明碎片比例，優(yōu)先 選擇移植。第三天小于4個(gè)卵裂球的細(xì)胞都算IV級(jí)胚胎。
[0241] (4)解凍胚胎在上午解凍后立即觀察，解凍后存活卵裂球數(shù)大于冷凍前50%定義 為存活。第二天上午移植前觀察，卵裂球數(shù)增多定義為胚胎生長(zhǎng)，若未生長(zhǎng)，評(píng)分應(yīng)比冷凍 前降一級(jí)，盡量選擇卵裂球數(shù)增多的胚胎移植。
[0242] 結(jié)果如圖3所示，在服用本發(fā)明的組成物之前，患者只有0. 3個(gè)可移植胚胎數(shù)；在 服用后，上升到了 1個(gè)，并且胚胎的質(zhì)量顯著改善。
[0243] 實(shí)施例4、患者1-8用藥（服用量1包）前后實(shí)施微刺激體外受精助孕獲得高質(zhì)量 胚胎數(shù)變化
[0244] 胚胎觀察和評(píng)價(jià)同前。結(jié)果如圖4所示，服用前后患者的平均優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)從0. 13 個(gè)上升到了 0. 48個(gè)。
[0245] 綜上實(shí)施例1~4,8名患者服用組成物1三個(gè)月前后的微刺激體外受精實(shí)施結(jié)果 比較如表2。
[0246] 表 2
[0247]

[0248] 實(shí)施例5、患者2,4-8用藥（服用量1包）前后著床率以及臨床妊娠率比較
[0249] 參加試驗(yàn)的患者2,4_8,在服用本發(fā)明的組成物之前共計(jì)進(jìn)行過(guò)6個(gè)周期凍融胚 胎移植，其著床率與臨床妊娠都是0 %。
[0250] 服用本發(fā)明的組成物3個(gè)月后行微刺激體外受精技助孕，患者2,4-8再進(jìn)行7個(gè) 周期的凍融胚胎移植，統(tǒng)計(jì)患者著床率以及妊娠率。
[0251] 玻璃化胚胎冷凍解凍操作常規(guī)如下：
[0252] 1、胚胎冷凍
[0253] (1)采用玻璃化的方法進(jìn)行胚胎的冷凍和解凍。
[0254] (2)商品化的胚胎冷凍保護(hù)液按規(guī)定4°C低溫保存，并嚴(yán)格在有效期內(nèi)使用。
[0255] (3)觀察完胚胎，確認(rèn)需要冷凍后，冷凍前半~一小時(shí)將冷凍平衡液VI和玻璃化 冷凍液V2分別取lml移入標(biāo)記好的四孔板的1和2號(hào)孔中，四孔板上詳細(xì)記錄患者姓名及 編號(hào)，置于室溫下。冷凍時(shí)應(yīng)該確保兩種液體已經(jīng)完全恢復(fù)室溫。
[0256] (4)在載體和冷凍鋁桿上做好標(biāo)簽，標(biāo)簽必須能耐受超低溫而不褪色，標(biāo)簽上注明 患者姓名，編號(hào)。
[0257] (5)將胚胎移入VI中5分鐘，隨后迅速移入V2中，在一分鐘內(nèi)完成裝管過(guò)程。然 后投入液氮中，套上套子。最后放入液氮罐保存。
[0258] (6) -根載體冷凍不能超過(guò)三枚胚胎。
[0259] (7)在冷凍登記本上詳細(xì)的記錄患者姓名，編號(hào)，儲(chǔ)藏的位置，冷凍胚胎的數(shù)量和 質(zhì)量以及冷凍者和證人簽名。
[0260] 2、胚胎解凍
[0261] (1)冷凍胚胎解凍，提前一天配制培養(yǎng)液。配制BM(10% SSS的Blastocyst液） 兩毫升，并根據(jù)凍胚的數(shù)量用3001培養(yǎng)皿做20-30 μ L的BM微滴；培養(yǎng)滴和培養(yǎng)液放入培 養(yǎng)箱中平衡過(guò)夜，備用。
[0262] (2)商品化的胚胎解凍液按規(guī)定4°C低溫保存，并嚴(yán)格在有效期內(nèi)使用。
[0263] (3)解凍前至少半小時(shí)將解凍液T1、T2、T3和T4分別取0. 5-lml移入四孔板的1、 2、3和4號(hào)孔中，置于室溫下，四孔板上應(yīng)標(biāo)明患者姓名及編號(hào)、解凍液名稱(chēng)。解凍時(shí)應(yīng)該確 保四種液體已經(jīng)完全恢復(fù)室溫。
[0264] (4)準(zhǔn)備泡沫盒并裝滿液氮，將需解凍的載體從儲(chǔ)存胚胎的液氮罐中迅速移入泡 沫盒中，再次確認(rèn)載體上的標(biāo)簽是否正確。
[0265] (5)核對(duì)后將載體取出，在液氮中用鑷子取下套子，胚胎移入1號(hào)孔中1-3分鐘，然 后2號(hào)孔3分鐘，3號(hào)孔3分鐘，最后移入4號(hào)孔中。
[0266] (6)胚胎經(jīng)過(guò)4號(hào)孔液體充分洗滌后移入BM微滴中，隨后觀察記錄胚胎卵裂球的 數(shù)量以及形態(tài)等。
[0267] (7)詳細(xì)記錄解凍過(guò)程和解凍時(shí)間，解凍者和證人簽名。
[0268] (8)第二天觀察胚胎發(fā)育的情況，移植的胚胎必須是有卵裂球增殖的胚胎。
[0269] 胚胎移植操作常規(guī)如下：
[0270] (1)用于移植的胚胎應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室技師挑選，和臨床醫(yī)生溝通病人胚胎情況后由臨 床醫(yī)生和病人談話，患者夫婦簽署知情同意書(shū)，多余的胚胎經(jīng)病人同意冷凍、捐獻(xiàn)科研或者 廢棄，須簽署相應(yīng)的文書(shū)和協(xié)議。
[0271] (2)將所要移植的胚胎提前1~2分鐘移至ET液中備用。移植過(guò)程嚴(yán)格無(wú)菌操 作，嚴(yán)格遵循證人制度。
[0272] (3)用1ml注射器吸取0. 3mlET液，套上ET管，頭部向上，吸入少量空氣，輕彈注射 器，使氣體排出，緩慢推動(dòng)注射器，排出多余ET液，抽吸lcm空氣。
[0273] (4)當(dāng)手術(shù)室一切準(zhǔn)備就緒后，吸胚胎和ET液（約5 μ L)，再吸lcm空氣，最后吸 ET液5yL左右。
[0274] (5)臨床醫(yī)生在B超引導(dǎo)下，完成ET。
[0275] (6)ET結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)室技師應(yīng)迅速將ET的內(nèi)、外套管帶至實(shí)驗(yàn)室仔細(xì)檢查，特別注 意血和粘液中是否有殘留的胚胎，若有則應(yīng)及時(shí)通知臨床醫(yī)生，準(zhǔn)備二次ET。
[0276] (7)實(shí)驗(yàn)室技師和臨床醫(yī)生共同填寫(xiě)ET表，詳細(xì)記錄出血和黏液情況，實(shí)驗(yàn)室技 師和臨床醫(yī)生以及證人共同簽字。
[0277] 表3是給攝取了本發(fā)明的組成物的患者進(jìn)行胚胎移植時(shí)的著床率以及妊娠率的 圖表。攝取后對(duì)6例患者進(jìn)行7個(gè)周期冷凍胚胎移植，著床率為44. 44% (相當(dāng)于移植9個(gè) 胚胎中4胚胎著床），臨床妊娠率達(dá)到了 66. 67% (相當(dāng)于6個(gè)移植周期中4個(gè)周期臨床妊 娠）。
[0278] 表3、服用了本發(fā)明的組成物之前和之后著床率以及妊娠率
[0279]
[0280] 因此，本發(fā)明的組成物對(duì)于不孕患者有非常好的效果。
[0281] 實(shí)施例6、患者9-10用藥（服用量2包）前后臨床妊娠情況
[0282] 患者9服用本發(fā)明的組成物2包/天，服用時(shí)間3個(gè)月后，再行1次微刺激促排卵 體外受精技術(shù)助孕。
[0283] 患者10服用本發(fā)明的組成物2包/天，服用時(shí)間3個(gè)月后，再行1次微刺激促排 卵體外受精技術(shù)助孕。
[0284] 結(jié)果如表4。
[0285] 表 4
[0288] 由表4結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明的組成物可以有效地提高胚胎質(zhì)量，有效地促進(jìn)臨床妊 娠成功率。
[0289] 實(shí)施例7、患者11-13用藥（服用量1/2包）前后臨床妊娠情況
[0290] 患者11服用本發(fā)明的組成物1/2包/天，服用時(shí)間3個(gè)月后，再行2次微刺激促 排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0291] 患者12服用本發(fā)明的組成物1/2包/天，服用時(shí)間3個(gè)月后，再行2次微刺激促 排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0292] 患者13服用本發(fā)明的組成物1/2包/天，服用時(shí)間3個(gè)月后，再行1次微刺激促 排卵體外受精技術(shù)助孕。
[0293] 結(jié)果如表5。
[0294] 表 5
[0295]
[0296] 由表5結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明的組成物可以有效地提高胚胎質(zhì)量，有效地促進(jìn)臨床妊 娠成功率。
[0297] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范 圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 含有郵紅素的提取物在制備治療或改善女性不孕的組成物中的用途。2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組成物還用于： 提高卵泡對(duì)促性腺激素的反應(yīng)性； 促進(jìn)女性排卵； 提高卵子質(zhì)量；或 提高胚胎的著床率和/或提高臨床妊娠率。3. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的含有郵紅素的提取物是雨生紅球藻 提取物。4. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的組成物中還包括維生素E、維生素C 和糊精。5. 如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的組成物中包括： 蟲(chóng)下紅素： 3-20重量份；較佳地為4-15重量份； 維生素 E; 5-20重量份；較佳地為6-^重量份； 維生素 C: 5-20重量份；較佳地為6-15重量扮； 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。6. 如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的組成物中還包括調(diào)味劑；較佳地所述 調(diào)味劑包括：可可粉，香蕉粉，玉米粉；更佳地，組成物中包含可可粉500-2500重量份。7. -種用于治療或改善女性不孕的組成物，其特征在于，所述的組成物中包括： 師紅素： 3-20重量份；較佳地為4-15重量份； 維生素 E: 5-誠(chéng)重量份；較佳地為6-15重量份； 維生素 C; 5-20重量份：較佳地為6-15重量份； 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量粉。8. 如權(quán)利要求7所述的組成物，其特征在于，所述的組成物中還包括調(diào)味劑，較佳地所 述調(diào)味劑包括：可可粉，香蕉粉，玉米粉；較佳地，組成物中包含可可粉500-2500重量份。9. 一種制備用于治療或改善女性不孕的組成物的方法，其特征在于，所述的方法包括， 將郵紅素或含有郵紅素的提取物、維生素E、維生素C W及糊精混合，各成分的用量為： 郵紅素； 3-20重量份；較佳地為4-15重量份； 維生素 E; 5-20重量份；較佳地為6-15重量份； 維生素 C: 5-20重量份；較隹地為6-15重量份； 糊精： 800-2500重量份；較佳地為1000-1800重量份。10. -種用于治療或改善女性不孕的藥盒，其特征在于，所述的藥盒中包括： 容器，W及裝于該容器中的權(quán)利要求7或8所述的組成物。
【文檔編號(hào)】A61K31/355GK106031721SQ201510107072
【公開(kāi)日】2016年10月19日
【申請(qǐng)日】2015年3月11日
【發(fā)明人】蔡立義, 高橋祐司, 石井好智, 張帆
【申請(qǐng)人】上海瑞亦康生物科技有限公司