治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的組合物，具體地，所述組合物包括：治療有效量的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、人血清白蛋白溶液，和透明質(zhì)酸鈉。所述的制劑采用了優(yōu)化的制劑體積和組分濃度，具有意外的優(yōu)異治療效果。
【專利說(shuō)明】
治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及軟骨治療領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的組合 物。
【背景技術(shù)】
[0002] 膝關(guān)節(jié)透明軟骨位于脛骨和股骨之間，和滑膜液一起對(duì)于膝關(guān)節(jié)的活動(dòng)起緩沖和 潤(rùn)滑作用。膝關(guān)節(jié)透明軟骨修復(fù)能力較差，當(dāng)受到外力沖擊等發(fā)生損傷時(shí)無(wú)法自發(fā)愈合或 再生。透明軟骨不含血液，神經(jīng)以及淋巴系統(tǒng)，因此無(wú)法激發(fā)機(jī)體的修復(fù)反應(yīng)。
[0003] 早期的膝關(guān)節(jié)軟骨損傷癥狀不夠明顯，一般需要通過(guò)關(guān)節(jié)鏡手術(shù)才能發(fā)現(xiàn)，因此 容易進(jìn)展為慢性的較為嚴(yán)重的關(guān)節(jié)軟骨損傷，并引發(fā)疼痛，腫脹等癥狀。嚴(yán)重的關(guān)節(jié)軟骨損 傷不經(jīng)妥善治療極易引發(fā)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎，最終導(dǎo)致殘疾。
[0004] 目前針對(duì)膝關(guān)節(jié)軟骨損傷的主要治療方法為手術(shù)治療，以微骨折手術(shù)為代表，對(duì) 受損的膝關(guān)節(jié)區(qū)域鉆孔，以刺激自身的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞參與關(guān)節(jié)軟骨的修復(fù)。然而微骨 折手術(shù)后生成的軟骨組織為纖維軟骨，而非透明軟骨，因此微骨折手術(shù)雖在短期內(nèi)有一定 的效果，但長(zhǎng)期的隨訪證實(shí)接受微骨折手術(shù)的膝關(guān)節(jié)功能仍然會(huì)出現(xiàn)衰退現(xiàn)象。
[0005] 同時(shí)，采用自身軟骨顆粒填充的修復(fù)技術(shù)可以替代患者關(guān)節(jié)軟骨缺損部位，操作 相對(duì)簡(jiǎn)便，但軟骨顆粒的來(lái)源受限，同時(shí)研究顯示這種治療方法對(duì)于>5cm 2的關(guān)節(jié)軟骨損傷 治療效果不佳。
[0006]自體軟骨細(xì)胞移植手術(shù)是另一種較為常用修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨的治療方式，該方法取 患者自身的軟骨組織，提取軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，然后再重新移植入患者的膝關(guān)節(jié)軟骨 損傷位點(diǎn)。該方法對(duì)于治療膝關(guān)節(jié)軟骨損傷成功率較高，然而需要較高的技術(shù)條件，同時(shí)采 集患者自身的軟骨組織具有一定的風(fēng)險(xiǎn)，軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)容易衰老分化，失去修復(fù)關(guān) 節(jié)軟骨損傷的能力。
[0007] 祖細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞，脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞是成體 間充質(zhì)祖細(xì)胞的一種，取材容易，對(duì)供者傷害較小，同時(shí)具有成軟骨，成骨和成脂的分化能 力，在體外培養(yǎng)環(huán)境可以大量擴(kuò)增且保持其分化能力。因此是治療膝關(guān)節(jié)軟骨損傷的理想 細(xì)胞類型。然而，現(xiàn)有的祖細(xì)胞組合物在臨床用于經(jīng)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療軟骨缺損中，常出現(xiàn) 例如關(guān)節(jié)腫脹與酸痛之類的并發(fā)癥。因此，本領(lǐng)域需要開(kāi)發(fā)新型的軟骨損傷修復(fù)制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種施用方便、組分優(yōu)化，且能夠快速促進(jìn)軟骨損傷部位修 復(fù)的關(guān)節(jié)軟骨缺損組合物。
[0009] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的組合物，其特征在于，所述組 合物包括：治療有效量的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、人血清白蛋白溶液，和透明質(zhì)酸鈉。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的人血清白蛋白溶液為0. 5-2(v/v) %人血清白蛋白；較佳 地為 0.8-1. 5 (v/v) %。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的人血清白蛋白溶液是0. 5-2(v/v) %人血清白蛋白的復(fù)方 電解質(zhì)注射液溶液。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的透明質(zhì)酸鈉為溶液，較佳地為15_25wt %的透明質(zhì)酸鈉水 溶液。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的治療關(guān)節(jié)軟骨缺損指修復(fù)軟骨缺損，較佳地，所述的軟骨 缺損的修復(fù)包括選自下組的一個(gè)或多個(gè)特征：軟骨厚度增加、軟骨基質(zhì)再生、軟骨II型膠 原增生、軟骨降解酶MMP-13分泌被抑制。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的治療關(guān)節(jié)軟骨缺損包括使治療對(duì)象的選自下組的一個(gè)或 多個(gè)指標(biāo)改善：疼痛評(píng)分NRS-11、關(guān)節(jié)活動(dòng)功能障礙W0MAC評(píng)分、關(guān)節(jié)軟骨體積、關(guān)節(jié)軟骨 厚度、骨髓水腫。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0016] (i) 95 %以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90 ;
[0017] (ii) 95 %以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73 ;
[0018] (iii) 95 %以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29 ;
[0019] (iv)95%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶49d。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，98%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90,更佳地，99%以上的細(xì)胞具 有表面抗原⑶90。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，98%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73,更佳地，99%以上的細(xì)胞具 有表面抗原⑶73。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，98%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29,更佳地，99%以上的細(xì)胞具 有表面抗原⑶29。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，98 %以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶49d，更佳地，99 %以上的細(xì)胞 具有表面抗原⑶49d。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，99. 6%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，99. 7%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，99. 5%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，99. 8%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶49d。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任一或多種特征：
[0029] (v) 2%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34 ;
[0030] (vi) 1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45 ;
[0031] (vii)〇. 3%以下的細(xì)胞具有表面抗原Actin ;
[0032] (viii)O. 5%以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶14 ;
[0033] (ix) 0. 1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原HLA-DR。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶34,更佳地，0. 5 %以下的細(xì)胞具 有表面抗原⑶34。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，0. 5 %以下的細(xì)胞具有表面抗原⑶45,更佳地，0. 1 %以下的細(xì)胞 具有表面抗原⑶45。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞不具有表面抗原⑶34。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞不具有表面抗原⑶45。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞不具有表面抗原⑶14。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞不具有表面抗原HLA-DR。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在所述組合物中的濃度為105_10 9/mL。
[0041 ] 在另一優(yōu)選例中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在所述組合物中的濃度為106_10 s/mL。
[0042] 在另一優(yōu)選例中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在所述組合物中的濃度為 5X 105-5X 106/mL〇
[0043] 在另一優(yōu)選例中，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在所述組合物中的濃度為 5X 106-5X 107/mL〇
[0044] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞還表達(dá)細(xì)胞因子，且所述的細(xì)胞因子 選自下組：TGF-β 1，HGF，VEGF，或其組合。
[0045] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子TGF-βΙ的量為 1000-1300pg/ml/10 6 細(xì)胞。
[0046] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子HGF的量為 9000-10000pg/ml/10 6 細(xì)胞。
[0047] 在另一優(yōu)選例中，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子VEGF的量為 300-800pg/ml/10 6 細(xì)胞。
[0048] 在另一優(yōu)選例中，所述的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有成軟骨、成骨及成脂分化能力。
[0049] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中，透明質(zhì)酸鈉與人血清白蛋白的體積比為 1-5:0. 8-1. 2,較佳地為 2-4:1，更佳地為 2. 5-3. 5:1。
[0050] 在另一優(yōu)選例中，所述組合物為單元?jiǎng)┬停宜鰡卧獎(jiǎng)┬偷捏w積為< 4mL，較佳 地為彡3mL。
[0051] 在另一優(yōu)選例中，所述單元?jiǎng)┬偷捏w積為0. 15-3mL。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，對(duì)于每cm2關(guān)節(jié)軟骨損傷面積施用1單元的組合物。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還用于使軟骨厚度增加。
[0054] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還用于使軟骨基質(zhì)再生。
[0055] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還用于使軟骨II型膠原增生。
[0056] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還用于抑制軟骨降解酶MMP-13分泌。
[0057] 在另一優(yōu)選例中，所述組合物注射后，脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在體內(nèi)存活時(shí)間為10 周。
[0058] 本發(fā)明的第二方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的組合物的制備方法，所 述方法包括步驟：將脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、人血清白蛋白溶液和透明質(zhì)酸鈉混合，制成組合 物。
[0059] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括對(duì)脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，且所述的培養(yǎng) 包括步驟：
[0060] a)提供30_50ml的脂肪組織；
[0061] b)用膠原酶I對(duì)所述的脂肪組織進(jìn)行消化；
[0062] c)棄去消化后的脂肪，收集底層沉淀；
[0063] d)加入細(xì)胞培養(yǎng)基，混勾，去除未消化的組織塊，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；
[0064] e)調(diào)整接種密度，將細(xì)胞接種至T75培養(yǎng)瓶；接種密度為5 X 105_2 X 106/T75培養(yǎng) 瓶（每個(gè)T75培養(yǎng)瓶中接種12ml抽脂脂肪量），置35-40°C、1-10% 0)2下培養(yǎng)至貼壁細(xì)胞 呈集落；
[0065] f)用Trypsin EDTA溶液消化1. 5-2. 5min，離心去除消化液后進(jìn)行傳代，得到所述 的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，在所述方法中，用于對(duì)脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)所用的培養(yǎng) 基為無(wú)血清培養(yǎng)基或含血清培養(yǎng)基。
[0067] 本發(fā)明的第三方面，提供了一種用于治療骨關(guān)節(jié)軟骨缺損的制劑，所述制劑包含 如本發(fā)明第一方面所述的組合物作為有效成分。
[0068] 在另一優(yōu)選例中，所述的制劑是注射劑，較佳地為關(guān)節(jié)腔注射劑。
[0069] 在另一優(yōu)選例中，所述的為單元?jiǎng)┬?，且所述單元?jiǎng)┬偷捏w積為< 4mL，較佳地為 3mL〇
[0070] 在另一優(yōu)選例中，所述單元?jiǎng)┬偷捏w積為0. 15_3mL。
[0071] 在另一優(yōu)選例中，對(duì)于每cm2關(guān)節(jié)軟骨損傷面積施用1單元的組合物。
[0072] 在另一優(yōu)選例中，所述的制劑還用于使軟骨厚度增加。
[0073] 在另一優(yōu)選例中，所述的制劑還用于使軟骨基質(zhì)再生。
[0074] 在另一優(yōu)選例中，所述的制劑還用于使軟骨II型膠原增生。
[0075] 在另一優(yōu)選例中，所述的制劑還用于抑制軟骨降解酶MMP-13分泌。
[0076] 在另一優(yōu)選例中，所述制劑注射后，脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在體內(nèi)存活時(shí)間為10周。
[0077] 本發(fā)明的第四方面，提供了一種試劑組合或試劑盒，包括：
[0078] a.脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞；
[0079] b. 15-25 %透明質(zhì)酸鈉溶液；
[0080] c. 0. 5-2 %人血清白蛋白溶液；
[0081] 和d.說(shuō)明書(shū)，所述的說(shuō)明書(shū)中記載了使用方案；
[0082] 且所述的使用方法包括：將組分a、b、c混合，用于對(duì)骨關(guān)節(jié)軟骨缺損患者進(jìn)行治 療。
[0083] 本發(fā)明的第五方面，提供了一種預(yù)防和/或治療骨性關(guān)節(jié)炎的方法，所述方法包 括步驟：給需要的對(duì)象施用如本發(fā)明第一方面所述的組合物，或給需要的對(duì)象施用如本發(fā) 明第三方面所述的制劑。
[0084] 在另一優(yōu)選例中，所述方法包括步驟：用如本發(fā)明第一方面所述的組合物或如本 發(fā)明第三方面所述的制劑，對(duì)所述對(duì)象的關(guān)節(jié)腔進(jìn)行注射。
[0085] 在另一優(yōu)選例中，所述組合物或制劑的施用量為：每cm2關(guān)節(jié)軟骨損傷面積 0. 5-2X106個(gè)細(xì)胞。
[0086] 在另一優(yōu)選例中，所述組合物或制劑的施用量為：每cm2關(guān)節(jié)軟骨損傷面積注射 l-5mL組合物或制劑。
[0087] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說(shuō)明】
[0088] 圖1為實(shí)施例2中的流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)圖譜；
[0089] 圖2阿辛藍(lán)染色檢測(cè)脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞成軟骨、成骨和成脂肪能力；
[0090] 圖3為實(shí)施例3中本發(fā)明組和對(duì)照組細(xì)胞存活情況；
[0091 ] 圖4為組合物治療效果圖，圖中，圖4A番紅固綠染色圖、圖4B為II型膠原實(shí)驗(yàn)圖， 圖4C為MMP-13免疫組化實(shí)驗(yàn)圖；
[0092] 圖5為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在大鼠體內(nèi)示蹤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；其中，圖5A為文獻(xiàn)Hirie et al，Stem Cells，2009中的人滑膜來(lái)源間充質(zhì)祖細(xì)胞大鼠膝關(guān)節(jié)注射實(shí)驗(yàn)結(jié)果，圖5B為 本發(fā)明實(shí)施例7實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0093] 圖6為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞治療效果實(shí)驗(yàn)結(jié)果，圖6A為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物治 療后NRS-11評(píng)分圖；圖6B為關(guān)節(jié)活動(dòng)功能障礙W0MAC評(píng)分圖；圖6C為關(guān)節(jié)軟骨體積MRI 測(cè)定結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0094] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，用一類特定的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞 結(jié)合透明質(zhì)酸制成注射針劑，在低注射量（約3ml左右）的情況下，即可治療軟骨損傷?；?于上述發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
[0095] 術(shù)語(yǔ)
[0096] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"以上"和"以下"包括本數(shù)，例如"95%以上"指彡95%，"0. 2% 以下"指彡0.2%。
[0097] 脂肪
[0098] 自體脂肪是整形和抗衰老治療的優(yōu)良來(lái)源，脂肪組織材料可以來(lái)源于腰部、臀部、 腹部、大腿、上臂等部位。本領(lǐng)域技術(shù)人員可采用通用的技術(shù)方法獲得自體脂肪組織，包括 (但不限于）抽吸、手術(shù)分離等方法。
[0099] 在本發(fā)明中，脂肪組織或脂肪原料沒(méi)有特別限制，可以是來(lái)源于動(dòng)物或人的任何 部位的脂肪組織，優(yōu)選人的脂肪組織。較佳地，脂肪組織可以是腰部、臀部、腹部、大腿、上臂 等部位的組織。
[0100] 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞
[0101] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞"、"haMPCs"或"adipose tissue-derived mesenchymal progenitor cells"含義相同，可以互換使用。
[0102] 本發(fā)明使用的脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞優(yōu)選人來(lái)源的脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞； 更優(yōu)選人自體脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞。
[0103] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法進(jìn)行haMPCs的分離和培養(yǎng)，在一個(gè)優(yōu) 選例的實(shí)施例中，包括步驟：
[0104] a)洗滌脂肪組織（除去血細(xì)胞）：向脂肪組織中加入生理鹽水，以充分洗滌脂肪組 織，使不同相分離，吸去下層水相；重復(fù)以上操作直到下層液較為清澈。
[0105] b)膠原酶消化：加入膠原酶I對(duì)脂肪組織進(jìn)行消化。
[0106] c)收集沉淀：棄去上層消化后的脂肪，收集底層沉淀至一個(gè)新離心管，加 DMEM以 離心洗滌。
[0107] d)過(guò)濾并計(jì)數(shù)：加 DMEM，混勾，過(guò)濾去除未消化的組織塊，加 DMEM，吸取1ml計(jì)數(shù) 細(xì)胞量及活力。
[0108] e)接種培養(yǎng)：離心洗滌一次，根據(jù)計(jì)數(shù)細(xì)胞的量調(diào)整接種密度接種至T75培養(yǎng)瓶， 進(jìn)行培養(yǎng)。
[0109] f)傳代：接種后約1-2天貼壁，3天左右出現(xiàn)少量貼壁間充質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)至貼 壁細(xì)胞呈集落時(shí)，用Trypsin EDTA溶液消化傳代，每T75培養(yǎng)瓶加入2ml，消化時(shí)間為 1. 5-2. 5min，收集并計(jì)數(shù)細(xì)胞，根據(jù)原代貼壁情況按1:1-2的比例傳代，傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)變 快，一般三天即可再次傳代，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，按照1 :2-3的比例傳代，收集P3-P7代細(xì)胞 用于治療或制備藥物組合物。
[0110] 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞的抗原檢測(cè)
[0111] 本發(fā)明使用的脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有極高的純度和活性。
[0112] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法對(duì)間充質(zhì)祖細(xì)胞表面抗原進(jìn)行檢測(cè)，如 過(guò)流式細(xì)胞儀法等。
[0113] 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有多種特異性抗原和受體，主要有：⑶29、⑶73、⑶90、 CD49d 等。
[0114] 帶有⑶90抗原的間充質(zhì)祖細(xì)胞在總間充質(zhì)祖細(xì)胞中的比例多92 %，更佳地 彡95%，更佳地多98%，最佳地，99%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶90。
[0115] 帶有⑶73抗原的間充質(zhì)祖細(xì)胞在總間充質(zhì)祖細(xì)胞中的比例多92 %，更佳地 彡95%，更佳地多98%，最佳地，99%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73。
[0116] 帶有⑶29抗原的間充質(zhì)祖細(xì)胞在總間充質(zhì)祖細(xì)胞中的比例多92 %，更佳地 彡95%，更佳地多98%，最佳地，99%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶29。
[0117] 帶有⑶49d抗原的間充質(zhì)祖細(xì)胞在總間充質(zhì)祖細(xì)胞中的比例多92 %，更佳地 彡95%，更佳地多98%，最佳地，99%以上的細(xì)胞具有表面抗原⑶73。
[0118] 在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述的細(xì)胞具有選自下組的一個(gè)或多個(gè)特征：99. 6% 以上的細(xì)胞具有表面抗原CD90 ;99. 7%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD73 ;99. 5%以上的細(xì)胞 具有表面抗原CD29 ;和/或99. 8%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD49d。
[0119] 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞的陰性指標(biāo)包括：⑶34、⑶45等。本發(fā)明中，帶有⑶34 的間充質(zhì)祖細(xì)胞在總間充質(zhì)祖細(xì)胞中的比例< 2%，更佳地< 1%，更佳地< 0. 5%，最佳地 沒(méi)有⑶34。
[0120] 帶有⑶45的間充質(zhì)祖細(xì)胞在總間充質(zhì)祖細(xì)胞中的比例< 1%，更佳地< 0. 5%，更 佳地< 0. 1 %，最佳地沒(méi)有⑶45。
[0121] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以使用常規(guī)方法對(duì)haMPCs進(jìn)行使用、處理、施用等操 作。如：每批haMPCs發(fā)放或使用之前，必須通過(guò)無(wú)菌、內(nèi)毒素和支原體檢查，以及DNA同一 認(rèn)定。每批發(fā)放的細(xì)胞都要符合細(xì)胞活力多95%、細(xì)胞純度（陽(yáng)性指標(biāo)多95%，陰性指標(biāo) 〈2% )。haMPCs急毒、過(guò)敏檢測(cè)結(jié)果均呈陰性，均有一份相應(yīng)的檢測(cè)報(bào)告。
[0122] 軟骨缺損及其修復(fù)
[0123] 關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，主要由軟骨細(xì)胞、軟骨基質(zhì)及II型膠原組成，它具有良 好的彈性及摩擦系數(shù)小等力學(xué)特性，對(duì)于關(guān)節(jié)的功能活動(dòng)極其重要。關(guān)節(jié)的創(chuàng)傷和炎癥等 疾病常引起關(guān)節(jié)軟骨損害，由于關(guān)節(jié)軟骨再生能力有限，一旦損傷，難以自行修復(fù)，從而導(dǎo) 致關(guān)節(jié)功能障礙。長(zhǎng)期以來(lái)，如何修復(fù)病損的關(guān)節(jié)軟骨，一直是骨科研究的重要課題之一。
[0124] 本發(fā)明中，軟骨缺損的修復(fù)包括選自下組的一個(gè)或多個(gè)指標(biāo)被改善：軟骨厚度增 加、軟骨基質(zhì)再生、軟骨II型膠原增生、軟骨降解酶MMP-13分泌被抑制、關(guān)節(jié)積液、骨刺增 生、骨髓水腫等癥狀的減少、軟骨生成基因表達(dá)的升高（優(yōu)選為選自下組的軟骨生成基因： Colleger! II、TGF-beta、BMP-2,或其組合）、軟骨溶解酶抑制基因表達(dá)的降低（優(yōu)選的所述 的軟骨溶解酶選自下組：??ΜΡ1、??ΜΡ2,或其組合）、生成軟骨細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路基因表達(dá) 的升高（優(yōu)選為選自下組的；生成軟骨細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路基因：P_ERKl/2、Ihh，或其組合）。
[0125] 特別地，在臨床治療中，所述的修復(fù)還包括使治療對(duì)象的選自下組的一個(gè)或多個(gè) 指標(biāo)改善：疼痛評(píng)分NRS-11、關(guān)節(jié)活動(dòng)功能障礙W0MAC評(píng)分、關(guān)節(jié)軟骨體積、關(guān)節(jié)軟骨厚度、 骨髓水腫。
[0126] 透明質(zhì)酸鈉
[0127] 透明質(zhì)酸鈉廣泛存在于動(dòng)物和人體的生理活性物質(zhì)，在人皮膚、關(guān)節(jié)滑膜液、臍 帶、房水及眼玻璃體中均有分布。分子量為500000~730000道爾頓，其溶液具有高黏彈性 及仿形性，常為眼科手術(shù)輔助用藥，尚可用于腹部手術(shù)后，注入腹腔內(nèi)，減少術(shù)后腸管粘鏈。 也可以注入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，減少關(guān)節(jié)面的摩擦，減輕關(guān)節(jié)疼痛。也可膀胱灌注，用于膀胱上皮氨 基葡萄糖保護(hù)層缺乏的臨時(shí)替代。
[0128] 藥物組合物及其應(yīng)用
[0129] 本發(fā)明還提供了一種注射劑組合物，它含有有效量的間充質(zhì)祖細(xì)胞，以及藥學(xué)上 可接受的載體。
[0130] 通常，可將間質(zhì)血管層細(xì)胞和間充質(zhì)祖細(xì)胞配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接 受的水性載體介質(zhì)中，如生理鹽水中，其中pH通常約為5-8,較佳地，pH約為7-8。
[0131] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"有效量"或"有效劑量"是指可對(duì)人和/或動(dòng)物產(chǎn)生功能或活 性的且可被人和/或動(dòng)物所接受的量。
[0132] 如本文所用，"藥學(xué)上可接受的"的成分是適用于人和/或哺乳動(dòng)物而無(wú)過(guò)度不良 副反應(yīng)（如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng)）的，即具有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上 可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體，包括各種賦形劑和稀釋劑。
[0133] 本發(fā)明的藥物組合物含有的載體包括（但并不限于）：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、 甘油、乙醇、及其組合。通常藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配，本發(fā)明的藥物組合物可以被制 成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。 所述的藥物組合物宜在無(wú)菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量。本發(fā)明的藥物 制劑還可制成緩釋制劑。
[0134] 本發(fā)明所述間質(zhì)血管層細(xì)胞和間充質(zhì)祖細(xì)胞的有效量可隨給藥的模式和待治療 的疾病的嚴(yán)重程度等而變化。優(yōu)選的有效量的選擇可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)各種 因素來(lái)確定（例如通過(guò)臨床試驗(yàn)）。所述的因素包括但不限于：所述藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)例如 生物利用率、代謝、半衰期等；患者所要治療的疾病的嚴(yán)重程度、患者的體重、患者的免疫狀 況、給藥的途徑等。
[0135] 本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選為關(guān)節(jié)腔注射試劑。在另一優(yōu)選例中，所述關(guān)節(jié)腔 注射制劑的間充質(zhì)祖細(xì)胞濃度為10 5-109個(gè)/mL，較佳地為10 6-108個(gè)/mL，更佳地為 5X 106-5X 107/mL〇
[0136] 本發(fā)明還提供了一種使用本發(fā)明所述藥物組合物的方法，在一個(gè)具體地實(shí)施例 中，包括步驟：
[0137] (1)給需要的對(duì)象施用間質(zhì)血管層細(xì)胞，和
[0138] (2)給需要的對(duì)象施用間充質(zhì)祖細(xì)胞，優(yōu)選的使用時(shí)間為步驟⑴之后的1個(gè)月， 和/或3個(gè)月。
[0139] 在本發(fā)明中，給所需要的對(duì)象施用間充質(zhì)祖細(xì)胞，優(yōu)選的施用部位為所述對(duì)象的 關(guān)節(jié)腔，從而刺激祖細(xì)胞成軟骨分化從而修復(fù)病變。
[0140] 本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)如下：
[0141] 1.本發(fā)明使用脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、透明質(zhì)酸鈉和人血清白蛋白制成注射液，作為 脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞溶劑，僅需關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射即可填充至關(guān)節(jié)軟骨損傷部位，可以治療大面 積軟骨缺損。
[0142] 2.本發(fā)明采用了優(yōu)化的制劑體積和組分濃度，具有意外的治療效果，而且本制劑 中的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞能存活意外長(zhǎng)的時(shí)間。
[0143] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件如 Sambrook 等人，分子克隆：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0144] 實(shí)施例1細(xì)胞的分離，純化和培養(yǎng)
[0145] a)洗滌脂肪組織（除去血細(xì)胞）：向含有脂肪的離心管中加入等量的生理鹽水，擰 緊蓋子，晃動(dòng)3min以充分洗滌脂肪組織，接著靜止3-5min，使不同相分離，吸去下層水相； 重復(fù)以上操作三次，直到下層液較為清澈。
[0146] b)膠原酶消化：吸棄生理鹽水后，加預(yù)熱的與脂肪等體積的含0. 1 %膠原酶I的 DMEM，置恒溫振蕩器中，37°C，200rpm，消化lh，每隔15min，晃動(dòng)離心管5~10秒（使脂肪 與膠原酶I充分接觸）。
[0147] c)收集沉淀：消化完畢，2000rpm離心10min，棄去上層消化后的脂肪，收集兩管的 底層沉淀至一個(gè)新離心管，加 DMEM至50ml，lOOOrpm離心8min洗滌一次。
[0148] d)過(guò)濾并計(jì)數(shù)：加 DMEM至50ml，混勻，lOOum濾器過(guò)濾去除為消化的組織塊，加 DMEM至50ml，吸取lml計(jì)數(shù)細(xì)胞量及活力。
[0149] e)接種培養(yǎng)：lOOOrpm離心8min洗滌一次，根據(jù)計(jì)數(shù)細(xì)胞的量調(diào)整接種密度接種 至T75培養(yǎng)瓶（接種密度：一般每個(gè)T75培養(yǎng)瓶中接種12ml抽脂脂肪量，即50ml抽脂脂肪 分離得到的細(xì)胞接種到4個(gè)T75培養(yǎng)瓶），置37°C、5% C02培養(yǎng)。
[0150] f)傳代：接種后約1-2天貼壁，3天左右出現(xiàn)少量貼壁間充質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)5-7天 貼壁細(xì)胞呈集落時(shí)，用Trypsin EDTA溶液消化傳代，每T75培養(yǎng)瓶加入2ml，消化時(shí)間為 1. 5-2. 5min，收集并計(jì)數(shù)細(xì)胞，按5 X 103/cm2 (即根據(jù)原代貼壁情況1:1-2的比例）傳代，傳 代后細(xì)胞生長(zhǎng)變快，一般三天即可再次傳代，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，按照1 :2_3的比例傳代， 收集P3-P7代細(xì)胞用于治療或制備藥物組合物。
[0151] 實(shí)施例2脂肪祖細(xì)胞的鑒別
[0152] 將用實(shí)施例1所培養(yǎng)的脂肪祖細(xì)胞離心后重懸；細(xì)胞計(jì)數(shù)后將細(xì)胞濃度調(diào)整為 1 X 10S/L，分別與人抗 CD34、CD45、CD29、CD73、CD90、CD105、Actin、CD14、HLA-DR 單克隆抗 體室溫反應(yīng)30min，用PBS重懸細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)（圖1)。
[0154] 結(jié)論：通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)脂肪祖細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面抗原標(biāo)記表達(dá)分析顯示該細(xì)胞 純度很高。
[0155] 實(shí)施例3脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞成軟骨、成骨、成脂分化能力測(cè)試
[0156] 以實(shí)施例1所培養(yǎng)的細(xì)胞作為本發(fā)明組，進(jìn)行成軟骨、成骨、成脂分化能力測(cè)試。 體外向軟骨方向分化培養(yǎng)3-4周后阿辛藍(lán)染色表明以實(shí)施例1所培養(yǎng)的細(xì)胞在體外具有向 軟骨分化的能力（圖2A);體外向骨方向分化培養(yǎng)3-4周后茜素紅染色表明以實(shí)施例1所 培養(yǎng)的細(xì)胞在體外具有向骨分化的能力（圖2B);體外向脂肪方向分化培養(yǎng)3-4周后油紅0 染色表明以實(shí)施例1所培養(yǎng)的細(xì)胞在體外具有向脂肪分化的能力（圖2C)。
[0157] 實(shí)施例4脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的檢測(cè)
[0158] 實(shí)施例1中所培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞離心后重懸，調(diào)整細(xì)胞密度接種，48h后收 集上清，檢測(cè)細(xì)胞因子TGF-β 1，HGF和VEGF，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)下表。
[0159]
[0160] 結(jié)論：該脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞能夠表達(dá)TGF- β 1，HGF和VEGF。
[0161] 實(shí)施例5膝關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)注射劑的制備
[0162] 用Trypsin EDTA消化細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液，使用生理鹽水洗滌三次，去除殘留液 體。根據(jù)關(guān)節(jié)軟骨損傷面積，準(zhǔn)備合適的細(xì)胞量1 X 1〇6細(xì)胞/cm2關(guān)節(jié)軟骨損傷面積，使用 透明質(zhì)酸鈉注射液重懸細(xì)胞，并與人血清白蛋白溶液混合后制備成終產(chǎn)品組合物。
[0163] 經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，使用20%透明質(zhì)酸鈉注射液重懸細(xì)胞后以3 :1的比例與1%人血清 白蛋白混合，既可以保證脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞的有效保存時(shí)間在8小時(shí)，同時(shí)能夠形成有效 的生物支架結(jié)構(gòu)，從而使終產(chǎn)品更容易填充至軟骨缺損部位，而且保持一定的黏度，和軟骨 缺損部位更好的結(jié)合。
[0164] 脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞終產(chǎn)品劑型對(duì)于細(xì)胞活率的影響對(duì)比如圖3所示。圖中，左側(cè) 為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞終產(chǎn)品以臺(tái)酚藍(lán)法測(cè)細(xì)胞活率，右側(cè)為脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞直接與透明 質(zhì)酸鈉注射液混合8小時(shí)后細(xì)胞活率?？梢?jiàn)，本發(fā)明的劑型可以很好地保持脂肪間充質(zhì)祖 細(xì)胞的存活率。
[0165] 實(shí)施例6人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物治療新西蘭大白兔關(guān)節(jié)軟骨損傷
[0166] 新西蘭大白兔30只，分3組，每組10只，組一不做任何處理，組二與組三行右下肢 膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶切斷和內(nèi)側(cè)半月板切除后六周形成軟骨損傷模型。組二組三于術(shù)后第六 周、九周、十二周分別透明質(zhì)酸鈉、人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物進(jìn)行注射，術(shù)后第十六周處 死動(dòng)物，進(jìn)行番紅固綠染色、Π 型膠原和MMP-13免疫組化實(shí)驗(yàn)。
[0167] 結(jié)論：本發(fā)明的人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物能再生損傷的軟骨，番紅固綠染色顯 示軟骨基質(zhì)再生明顯（圖4A);軟骨II型膠原增生明顯（圖4B)和軟骨降解酶MMP-13分 泌受抑制（圖4C)。
[0168] 實(shí)施例7人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物SD大鼠膝關(guān)節(jié)注射示蹤實(shí)驗(yàn)
[0169] 在無(wú)血清培養(yǎng)基中將細(xì)胞濃度調(diào)整為1 X 106/mL ;按1 :100比例將DiD細(xì)胞標(biāo)記 液混入細(xì)胞懸液中，即每1毫升細(xì)胞懸液中加入10 μ 1細(xì)胞標(biāo)記液，輕輕吹打混合；37°C條 件下孵育50分鐘。標(biāo)記后的細(xì)胞懸液，在37°C，1500rpm條件下離心5分鐘；移除上清液， 在37°C的無(wú)血清培養(yǎng)液中重新懸浮細(xì)胞；重復(fù)步驟4及步驟5,清洗細(xì)胞2次以上；完成清 洗后10分鐘，進(jìn)行熒光檢測(cè)。
[0170] 2月齡SPF級(jí)SD大鼠行右后肢內(nèi)側(cè)半月板去除手術(shù)造模，所有的實(shí)驗(yàn)大鼠均于造 模術(shù)后立即進(jìn)行1次右后肢膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射。將20只造模后的實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為2組，組 一為對(duì)照組，注射l〇〇ul透明質(zhì)酸鈉溶液；組二為實(shí)驗(yàn)組，注射100ul (2. 5X 106)經(jīng)膜染料 DiD染色的人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物；組三為未手術(shù)造模組，注射100ul (2. 5 X 106)經(jīng)膜 染料DiD染色的人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物。小動(dòng)物成像儀（PerkinElmer公司）每周檢 測(cè)大鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)殘留細(xì)胞。
[0171] 結(jié)論：本發(fā)明的2. 5X 106人脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物在SD大鼠手術(shù)組體內(nèi)能存 活10周左右，在非手術(shù)組體內(nèi)能存活4周左右（圖5B)，存活時(shí)間均優(yōu)于日本小組5x101 滑膜來(lái)源間充質(zhì)祖細(xì)胞大鼠膝關(guān)節(jié)注射實(shí)驗(yàn)（約4周，圖5A)。
[0172] 實(shí)施例8臨床膝關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)
[0173] 關(guān)節(jié)軟骨損傷患者18名，在獲得倫理委員會(huì)批件和簽署知情同意書(shū)的條件下取 自體脂肪30-50ml，制備成脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物，取3ml組合物注射到有軟骨損傷的關(guān) 節(jié)腔，取自身對(duì)照，觀察注射后3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月的療效。
[0174] 患者體位：仰臥位，全身肌肉放松
[0175] 關(guān)節(jié)：伸直位或微曲
[0176] 進(jìn)針點(diǎn)：內(nèi)、外側(cè)髕骨緣膝眼注射
[0177] 患者仰臥位，膝關(guān)節(jié)伸直，髕骨上緣與髕骨內(nèi)外側(cè)緣的交點(diǎn)為兩點(diǎn)，斜向髕股關(guān)節(jié) 中心，以45°角穿刺。膝關(guān)節(jié)微屈30°左右，從髕骨下方的髕韌帶內(nèi)側(cè)或外側(cè)關(guān)節(jié)間隙垂 直進(jìn)針，慢速將組合物終產(chǎn)品注射入膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，注射后保持30分鐘，之后可以正?；顒?dòng)。
[0178] 治療后在第12、24、48周隨訪。結(jié)果表明，脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞組合物能夠明顯降低 患者的關(guān)節(jié)疼痛，疼痛評(píng)分NRS-11明顯下降（圖6A);提升關(guān)節(jié)的活動(dòng)功能，關(guān)節(jié)活動(dòng)功能 障礙W0MAC評(píng)分明顯下降（圖6B) ;MRI所測(cè)關(guān)節(jié)軟骨體積明顯增加（圖6C)。
[0179] 結(jié)論：脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞和透明質(zhì)酸鈉注射液組合物對(duì)于治療關(guān)節(jié)透明軟骨缺損 效果明顯。
[0180] 在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范 圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的組合物，其特征在于，所述組合物包括：治療有效量的脂 肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、人血清白蛋白溶液，和透明質(zhì)酸鈉。2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任 一或多種特征： (i) 95%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD90 ; (ii) 95%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD73 ; (iii) 95%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD29 ; (iv) 95%以上的細(xì)胞具有表面抗原CD49d。3. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的間充質(zhì)祖細(xì)胞具有選自下組的任 一或多種特征： (v) 2 %以下的細(xì)胞具有表面抗原CD34 ; (vi) 1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原CD45 ; (vii) O. 3%以下的細(xì)胞具有表面抗原Actin ; (viii) O. 5%以下的細(xì)胞具有表面抗原CD14 ; (ix) 0. 1 %以下的細(xì)胞具有表面抗原HLA-DR。4. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞在所述組合物中 的濃度為105_10 9/mL。5. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞還表達(dá)細(xì)胞因 子，且所述的細(xì)胞因子選自下組：TGF-β 1，HGF，VEGF，或其組合。6. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的組合物中，透明質(zhì)酸鈉與人血清白 蛋白的體積比為1-5:0. 8-1. 2,較佳地為2-4:1，更佳地為2. 5-3. 5:1。7. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物為單元?jiǎng)┬?，且所述單元?jiǎng)┬?的體積為彡4mL，較佳地為彡3mL。8. 如權(quán)利要求1-7任一所述的組合物的制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟：將 脂肪間充質(zhì)祖細(xì)胞、人血清白蛋白溶液和透明質(zhì)酸鈉混合，制成組合物。9. 一種用于治療骨關(guān)節(jié)軟骨缺損的制劑，其特征在于，所述制劑包含如權(quán)利要求1-7 任一所述的組合物作為有效成分。10. -種試劑組合或試劑盒，其特征在于，包括： a. 脂肪來(lái)源的間充質(zhì)祖細(xì)胞； b. 15-25 %透明質(zhì)酸鈉溶液； c. 0.5-2 %人血清白蛋白溶液； 和d.說(shuō)明書(shū)，所述的說(shuō)明書(shū)中記載了使用方案； 且所述的使用方法包括：將組分a、b、c混合，用于對(duì)骨關(guān)節(jié)軟骨缺損患者進(jìn)行治療。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK106031792SQ201510104870
【公開(kāi)日】2016年10月19日
【申請(qǐng)日】2015年3月10日
【發(fā)明人】曹衛(wèi), 汪文, 李蒙, 何娜, 戴成祥, 張麗, 張露億, 王飛, 李蘇克, 劉佳
【申請(qǐng)人】西比曼生物科技（上海）有限公司, 西比曼生物科技（無(wú)錫）有限公司