一種雙花千里光總黃酮的制備方法及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙花千里光總黃酮的制備方法及其應(yīng)用，其主要制備方法包括：a.將雙花千里光于60℃烘干粉碎，得粗粉；b.超聲?微波提取；c.大孔吸附樹脂純化，乙醇洗脫，收集洗脫液；d.濃縮，干燥，即得雙花千里光總黃酮。經(jīng)藥效學(xué)評(píng)價(jià)，該提取物具有良好的抗氧化作用，效果明顯，可將其用于制備抗氧化的藥品中，具有療效顯著、使用方便等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種雙花千里光總黃酮的制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種雙花千里光總黃酮的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 自由基是人體生命活動(dòng)中多種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物。細(xì)胞在正常的代謝過程 中，或者受到高能輻射，以及高壓氧、藥物、香煙煙霧和光化學(xué)空氣污染等作用，都會(huì)產(chǎn)生自 由基。
[0003] 研究表明，自由基從產(chǎn)生到衰亡的過程就是電子轉(zhuǎn)移的過程。在生命體系中，電子 的轉(zhuǎn)移是一種最基本的運(yùn)動(dòng)，而氧的得電子能力很強(qiáng)，因此，生物體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)都與氧 有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)損害人體健康的自由基幾乎都與那些活性較強(qiáng)的含氧物質(zhì)有關(guān)，與這些物 質(zhì)相結(jié)合的自由基叫做活性氧自由基?；钚匝踝杂苫鶎?duì)人體的損害實(shí)際上是一種氧化過 程。因此，要降低自由基的損害，就要從抗氧化做起。
[0004] 西藏藥用植物雙花千里光為一種菊科千里光屬的多年生草本植物，具有清熱解毒 的特效。近年來一些藏族同胞將雙花千里光用作美容，效果良好。黃酮類化合物具有降脂、 抗衰老、抗氧化、抗血栓、清除自由基、抗心律失常、抗癌等功效。
[0005] 傳統(tǒng)的提取方法包括溶劑提取、沉淀分離法、水蒸氣蒸餾法、分子蒸餾技術(shù)等。雖 然這些方法在天然產(chǎn)物提取被大多數(shù)人采用，但也存在不少缺點(diǎn)，如提取過程中普遍使用 大量有機(jī)溶劑;處理時(shí)間長(zhǎng);操作步驟多等。因而實(shí)驗(yàn)過程中樣品損失嚴(yán)重，產(chǎn)生的誤差較 大。
[0006] 本發(fā)明采用現(xiàn)代的微波-超聲提取技術(shù)，快速高效的提取雙花千里光總黃酮。且通 過文獻(xiàn)檢索，國(guó)內(nèi)尚未見雙花千里光總黃酮用于制備抗氧化藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于尋求新型高效的天然抗氧化劑的開發(fā)利用，提供了一種雙花千 里光總黃酮的制備方法及其應(yīng)用。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下： a. 將雙花千里光總黃酮于60°C烘干，得粗粉； b. 將雙花千里光粉末置于微波-超聲裝置中，加入原料重量3~5倍的70~80%的乙醇溶 液，設(shè)置超聲500W常開、微波功率為600~800W，提取2~3h，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮液； c. 將濃縮液加入到大孔吸附樹脂柱，先用2~3BV的蒸餾水洗脫，再用4~6BV的65~75%的 乙醇洗脫，收集洗脫液； d. 洗脫液濃縮，干燥，即得雙花千里光總黃酮。
[0009] 步驟C中所述的大孔吸附樹脂類型為AB-8、HPD300、XDA-1中的一種。
[0010] 本發(fā)明制備的雙花千里光總黃酮在制備具有抗氧化作用的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明獲得的雙花千里光總黃酮，通過對(duì)其抗脂質(zhì)過氧化能力、清除超氧陰離子 自由基Γ〇2)2能力和清除DPPH自由基能力等指標(biāo)的研究表明：雙花千里光總黃酮具有很強(qiáng) 的抗脂質(zhì)過氧化能力，同時(shí)還可以有效清除超氧陰離子自由基和DPPH自由基。因此，雙花千 里光總黃酮是開發(fā)新型高效的天然抗氧化劑的一個(gè)好選擇。
[0012]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】 [0013] 實(shí)施例1: 將雙花千里光總黃酮于60°C烘干，得粗粉;將1000g雙花千里光粉末置于微波-超聲裝 置中，加入4L的80%的乙醇溶液，設(shè)置超聲500W常開、微波功率為800W，提取3h，過濾，濾液減 壓濃縮得濃縮液;將濃縮液加入到HPD300大孔吸附樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水洗脫， 再用6倍柱體積的75%的乙醇洗脫，收集洗脫液;洗脫液濃縮，干燥，即得雙花千里光總黃酮 110. lg。經(jīng)UV檢測(cè)，雙花千里光總黃酮的含量為78.9%。
[0014] 實(shí)施例2: 將雙花千里光總黃酮于60°C烘干，得粗粉;將1000g雙花千里光粉末置于微波-超聲裝 置中，加入3L的70%的乙醇溶液，設(shè)置超聲500W常開、微波功率為600W，提取2h，過濾，濾液減 壓濃縮得濃縮液;將濃縮液加入到AB-8大孔吸附樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水洗脫，再 用4倍柱體積的65%的乙醇洗脫，收集洗脫液；洗脫液濃縮，干燥，即得雙花千里光總黃酮 114.8g。經(jīng)UV檢測(cè)，雙花千里光總黃酮的含量為81.2%。
[0015] 實(shí)施例3: 將雙花千里光總黃酮于60°C烘干，得粗粉;將1000g雙花千里光粉末置于微波-超聲裝 置中，加入5L的75%的乙醇溶液，設(shè)置超聲500W常開、微波功率為600W，提取2.5h，過濾，濾液 減壓濃縮得濃縮液;將濃縮液加入到XDA-1大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫， 再用5倍柱體積的70%的乙醇洗脫，收集洗脫液;洗脫液濃縮，干燥，即得雙花千里光總黃酮 113.2g。經(jīng)UV檢測(cè)，雙花千里光總黃酮的含量為83.6%。
[0016] 具體藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)： 將lg上述3個(gè)實(shí)施例中所得的雙花千里光總黃酮，分別用30%的乙醇將其溶解定容在 5〇mL容量瓶中，記為A、B、C，備用。
[0017] a.抗脂質(zhì)過氧化能力的測(cè)定 分別于樣品管中依次加入lmL 10mg/mL卵磷脂溶液(LLS)、1 mL 0.4mmo 1 /L硫酸亞鐵、 lmL上述A、B、C三個(gè)樣品，混勻，避光于37°C水浴60min，加入2mL三氯乙酸(TCA)-硫代巴比妥 酸(TBA)-HCl混合液，90°0100°C水浴15min，迅速冷卻，以3000r/min離心10min，取上清液 在535nm測(cè)吸光度(As)，參比管中以lmL蒸餾水代替lmL卵磷脂?？箟难?VC)為陽性對(duì)照。 結(jié)果見表1。
[0018] 抑制率=[Ac_As/ Ac] X100% 式中:Ac為對(duì)照品（以蒸餾水代替樣品）的吸光度； As為加入A、B、C三個(gè)樣品時(shí)的吸光度。
[0019] 表1雙花千里光總黃酮抗脂質(zhì)過氧化能力測(cè)定(士.土S)

雙花千里光總黃酮對(duì)Fe2+引發(fā)的卵磷脂脂質(zhì)體過氧化有明顯的抑制作用，抑制率隨樣 品中總黃酮含量的增加而增大。由表1可以看出，雙花千里光總黃酮抗脂質(zhì)過氧化能力與抗 壞血酸相當(dāng)。
[0020] b.清除超氧陰離子自由基Γ〇2)2能力的測(cè)定 采用鄰苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl緩沖溶液(ρΗ=8.2)4.5mL，置于25°C水 浴中預(yù)熱20min，分別加入lmL樣品和0.4mL 25mmol/L鄰苯三酸溶液，混勾后于25°C水浴中 反應(yīng)5min后，加入8mol/L HC1 0.8mL終止反應(yīng)。自氧化管以lmL蒸餾水代替樣品管中樣品， 操作方法同樣品管，在325nm處測(cè)定吸光值，以等體積pH值8.2的Tris-HCl緩沖液為空白。結(jié) 果見表2: 超氧陰離子的清除率zUtHU/Ao] X100% 式中:A〇為自氧化管的吸光度； Μ為樣品管的吸光度。
[0021]表2雙花千里光總黃酮清除超氧陰離子自由基能力測(cè)定(i.土S)
雙花千里光總黃酮對(duì)清除超氧陰離子自由基有較好的清除效果，清除率隨樣品中總黃 酮含量的增加而增大。由表2可以看出，雙花千里光總黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率尤 為顯著，明顯強(qiáng)于Vc(在濃度為lmg/mL時(shí)，清除率為69.34%)。
[0022] c.對(duì)DPPH自由基的清除作用 在試管中分別加入2 . OOmL各濃度的稠李葉總黃酮溶液，編號(hào)為A、B、C，加入 2. OOmLO. 2mml/LDPPH乙醇溶液，搖勻，放置30min，以2.OOmL無水乙醇代替樣品和2.00mL70% 乙醇混合后作為參比，測(cè)定517nm波長(zhǎng)處的吸光度(AO?？瞻讓?duì)照組以2.OOmL無水乙醇代替 樣品，測(cè)定517nm波長(zhǎng)處的吸光度(A〇)，同時(shí)測(cè)定2 · OOmL待測(cè)液與2 · OOmL無水乙醇在517nm 波長(zhǎng)處的吸光度(Aj)。以Vc為對(duì)照品。結(jié)果見表3: DPPH自由基清除率按一下公式計(jì)算： 清除率=[A0 - (Ai-Aj)]/ ΑοΧΙΟΟ% 式中:A〇-不加黃酮的吸光值，Ai-測(cè)定液的吸光值，Aj-黃酮的本底吸光值。
[0023] 表3雙花千里光總黃酮對(duì)DPHH自由基能力測(cè)定(?土S)

從表3中可以看出，隨著含量的增加，雙花千里光總黃酮清除DPPH自由基的能力隨著濃 度的增大而增大，有明顯的劑量依賴性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明雙花千里光總黃酮是良好的質(zhì)子供 體，具有顯著的抗氧化作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雙花千里光總黃酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： a. 將雙花千里光總黃酮于60°C烘干，得粗粉； b. 將雙花千里光粉末置于微波-超聲裝置中，加入原料重量3~5倍的70~80%的乙醇溶 液，設(shè)置超聲500W常開、微波功率為600~800W，提取2~3h，過濾，濾液減壓濃縮得濃縮液； c. 將濃縮液加入到大孔吸附樹脂柱，先用2~3BV的蒸餾水洗脫，再用4~6BV的65~75%的 乙醇洗脫，收集洗脫液； d. 洗脫液濃縮，干燥，即得雙花千里光總黃酮。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙花千里光總黃酮的制備方法，其特征在于，步驟c中所 述的大孔吸附樹脂類型為AB-8、HPD300、XDA-1中的一種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法制備的雙花千里光總黃酮在制備具有抗氧化作用的藥 物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK106038644SQ201610306676
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司