一種改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健制劑的制備方法及用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健制劑，其由梔子、三七、人參和靈芝四種可用于保健食品的提取物組成，使用藥劑學(xué)常規(guī)輔料，并通過藥劑學(xué)常規(guī)工藝制備成內(nèi)服制劑。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明保健制劑可明顯改善阿爾茨海默氏癥模型果蠅的學(xué)習(xí)記憶能力，并降低其腦部炎癥反應(yīng)的水平，因此可以將其制成改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健食品。
【專利說明】
一種改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健制劑的制備方法及用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及制備治療學(xué)習(xí)記憶力障礙的保健食品的制備方法和用途，屬于醫(yī)藥制造和運(yùn)用領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]學(xué)習(xí)記憶障礙是一種病理狀態(tài)，可分為衰老性和疲勞性兩種。
[0003]衰老性障礙主要誘因是器官因生理或病理導(dǎo)致的學(xué)習(xí)和記憶能力下降，其嚴(yán)重程度隨年齡的增大而加劇。由于我國社會(huì)逐漸向老齡化發(fā)展，2010年全國65歲及以上的人口已經(jīng)超過了一億人。隨著年齡增加，老年癡呆癥等學(xué)習(xí)記憶障礙型疾病的發(fā)病率也迅速上升，已是世界上老年癡呆癥患者最多的國家，業(yè)已超過800萬。據(jù)預(yù)測，到2040年患者將達(dá)到2200萬，是所有發(fā)達(dá)國家老年癡呆癥患者數(shù)的總和。這給中國的經(jīng)濟(jì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，也是中國經(jīng)濟(jì)社會(huì)可持續(xù)發(fā)展的一個(gè)重要阻礙。
[0004]疲勞性學(xué)習(xí)障礙是由長期的應(yīng)激損害導(dǎo)致的。長期的睡眠不足，用腦過度和亞健康都都會(huì)導(dǎo)致和加劇此種現(xiàn)象。雖然并無權(quán)威數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，但由于社會(huì)生活節(jié)奏加快，白領(lǐng)人群的日益擴(kuò)大，以及社會(huì)和個(gè)人的不重視，此類障礙的人群也日益擴(kuò)大。
[0005]衰老性和疲勞性學(xué)習(xí)障礙的引發(fā)原因有很多，其中一個(gè)共通的特點(diǎn)是腦部的炎癥。臨床上業(yè)已發(fā)現(xiàn)，老年阿茲海默癥患者的腦部有明顯的炎癥反應(yīng)。與此同時(shí)，用藥物誘發(fā)小鼠腦部的炎癥反應(yīng)，也能引起小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙。因此，改善腦部的炎癥反應(yīng)有助于改善腦功能。不過，直接治療炎癥的藥物，如C0X-2抑制劑或NSAID，并不能改善記憶。一些科學(xué)家認(rèn)為，腦部炎癥損傷了大腦的功能，使得學(xué)習(xí)記憶能力出現(xiàn)障礙，但在障礙后單獨(dú)地降低炎癥并不能修復(fù)已經(jīng)發(fā)生的損傷。因此，兩者結(jié)合，在挽救學(xué)習(xí)記憶能力障礙的同時(shí)挽救炎癥可以取得更好的療效。
[0006]為了治療學(xué)習(xí)記憶能力障礙，科學(xué)家們從機(jī)理著手，運(yùn)用動(dòng)物模型并發(fā)現(xiàn)多個(gè)與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的靶點(diǎn)，并據(jù)此開發(fā)了多種藥物和保健品。從機(jī)理上說，可以分為神經(jīng)營養(yǎng)劑，神經(jīng)受體調(diào)控劑，特異性靶點(diǎn)調(diào)控劑三個(gè)大類。深海魚油(富含歐米伽-3)，卵磷脂，?；撬岬仁墙?jīng)典的神經(jīng)營養(yǎng)劑；乙酰膽堿酯酶抑制劑，天門冬氨酸拮抗劑等屬于神經(jīng)受體調(diào)控劑;而Abeta/磷酸化Tau蛋白抗體則屬于特異性靶點(diǎn)調(diào)控劑。這三類物質(zhì)都能夠在一定程度上改善學(xué)習(xí)記憶障礙。其中，第一種物質(zhì)主要能改善疲勞性學(xué)習(xí)障礙，后兩種主要能改善衰老型學(xué)習(xí)障礙。但令人遺憾的是，這些物質(zhì)的改善幅度都不大，不能根治或預(yù)防學(xué)習(xí)記憶障礙，對(duì)腦部炎癥也沒有很好的效果，因此市場需要新的治療或改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的藥物及保健食品。
[0007]中藥在健腦益智上有著長久的歷史，本草綱目中就記載靈芝能益心氣、寧心神、增智慧。本發(fā)明的發(fā)明人將傳統(tǒng)上具有健腦益智的四種可用于保健食品的中藥提取物制成制劑。在實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，該制劑能夠改善由老年癡呆癥引起的學(xué)習(xí)記憶能力障礙，并降低其腦部炎癥反應(yīng)。因此，可以將其制備成治療學(xué)習(xí)記憶障礙的藥物或保健食品等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種具有改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健制劑和制備方法和用途。
[0009]本發(fā)明公開的制備改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健食品的活性成分的方法。所述保健食品包含梔子、三七、人參和靈芝四種可用于保健食品的提取物。
[0010]各原料的用量以重量份表示為:人參提取物:30?100 ；靈芝提取物:40?80 ；三七提取物:30?100;梔子提取物:30?100。
[0011 ] 優(yōu)選配比:人參提取物:50?75 ；靈芝提取物:40?60 ；三七提取物:50?75 ；梔子提取物:50?75。
[0012]最佳配比:人參提取物:75;靈芝提取物:50;三七提取物:62.5;梔子提取物:62.5。
[0013]所述各活性成分是由以下步驟制成:
(1)梔子提取物制備:將梔子原料粉碎后，用水加熱回流提取三次，每次二小時(shí)。合并提取液后，真空減壓濃縮。將濃縮浸膏噴霧干燥后，過篩，備用；
(2)二七提取物制備:將二七原料粉碎后過40目篩去除細(xì)粉，使用70%乙醇提取二遍。合并提取液后，經(jīng)15μπι細(xì)度過濾器過濾，80°C減壓濃縮。將濃縮浸膏120°C滅菌6秒后，噴霧干燥，所得提取物過80目篩，備用；
(3)人參提取物制備:將人參根原料使用乙醇提取三遍，合并提取液后，80°C減壓濃縮，真空干燥，所得提取物過100目篩，備用；
(4)靈芝提取物制備:將靈芝原料粉碎后，100°C水提取三次，每次一點(diǎn)五小時(shí)。合并提取液80°C真空濃縮，將濃縮液放入反應(yīng)釜中，冷卻后加入4倍乙醇醇沉12小時(shí)后，將沉淀取出，加水復(fù)溶成浸膏。將浸膏噴霧干燥后，過篩，備用；
將步驟(I)?(4)所得的提取物，在合并后，加入與合并后提取物總重量比為I?1.2的微晶纖維素，混合20分鐘；然后加入80%乙醇溶液制軟材，18目篩制粒，濕顆粒干燥后，18目篩整粒;之后加入常規(guī)輔料，制備成臨床可接受的口服固體劑型，如膠囊劑、片劑、顆粒劑或滴丸等。
[0014]下面以通過對(duì)老年癡呆癥模型果蠅為例，依照實(shí)施例1中提取物的配比，對(duì)本發(fā)明保健制劑改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙和降低腦部炎癥反應(yīng)測試的效果進(jìn)行說明。
[0015]試驗(yàn)1:本發(fā)明對(duì)老年癡呆癥模型果蠅改善記憶力減退的挽救測試。
[0016]試驗(yàn)?zāi)康?評(píng)估本發(fā)明保健制劑對(duì)老年癡呆癥模型果蠅改善記憶力減退的挽救測試。
[0017]動(dòng)物:轉(zhuǎn)入人類老年癡呆癥相關(guān)的Abeta42蛋白的UAS_Abeta42/Cyo(H29.3)果蠅；誘導(dǎo)Abeta42在腦中特異性表達(dá)的ElaV-Gal4G133果蠅(P35);以及作為對(duì)照的野生型W1118果蠅(2U)，均由清華大學(xué)提供。測試選用P35和H29.3雜交后代中表達(dá)Abeta的雄性果蠅作為老年癡呆癥模型果蠅，P35和2U雜交后不表達(dá)Abeta的雄性果蠅作為野生型對(duì)照果蠅。所有果蠅均飼養(yǎng)于裝有果蠅培養(yǎng)基(自制)的玻璃瓶中，并放入23-25°C，相對(duì)濕度40-50% ,12:12光暗循環(huán)的房間中。
[0018]試劑:鹿糖，3-Octanol，4_MethyIcyclohexanol均為Sigma公司產(chǎn)品。
[0019]藥物:按本發(fā)明實(shí)施例1中配比制得，并以0.05mg/ml的濃度溶解在藥物溶劑中。藥物溶劑:4%的蔗糖水。
[0020]試驗(yàn)設(shè)備:果蠅巴甫洛夫嗅覺逃避條件反射自動(dòng)訓(xùn)練儀;T型迷宮測試儀。以上設(shè)備均為自制。
[0021]喂藥方法:挑取羽化后雄性的老年癡呆癥模型果蠅或野生型對(duì)照果蠅的雄蠅，以100只/瓶的密度將其飼養(yǎng)在裝有標(biāo)準(zhǔn)果蠅培養(yǎng)基的玻璃指管中，從羽化后第三天到第十天，每天給予模型果蠅溶劑或藥物，同時(shí)給予野生型對(duì)照果蠅溶劑。
[0022]巴甫洛夫嗅覺測試:在果蠅開始喂食藥物I周后(羽化后第10天)，將果蠅放入250C，70%濕度的暗室中，每管果蠅各放入一內(nèi)鋪有銅網(wǎng)的訓(xùn)練管中，在I分鐘的環(huán)境適應(yīng)后，先后通入兩種氣味OCT及MCH各I分鐘，中間間隔45秒新鮮空氣。在通入第一種氣味的同時(shí)，對(duì)銅網(wǎng)施加60V的脈沖電壓(寬度1.5秒，間隔3.5秒)，此時(shí)第一種氣味標(biāo)記為CS+。在該過程內(nèi)，果蠅會(huì)被施加以I分鐘的電擊懲罰。之后在45秒新鮮空氣后，通入第二種氣味，但并不給銅網(wǎng)施加電壓，此時(shí)第二種氣味標(biāo)記為CS-。之后再通入45秒的新鮮空氣保證管內(nèi)無氣味殘留。以上過程為一個(gè)訓(xùn)練周期。測試時(shí)，將訓(xùn)練好的果蠅轉(zhuǎn)移至T迷宮內(nèi)，迷宮左右兩臂分別通入CS+及CS-兩種氣味。讓果蠅在其中選擇2分鐘。之后，將兩臂果蠅收集起來分別統(tǒng)計(jì)數(shù)量。
[0023]在完成測試后，將以上所述測試后的果蠅數(shù)量，按以下公式進(jìn)行計(jì)算得到行為指數(shù)(Performance Index，PI):Pi/2=((CS+)- (CS-))/((CS+)+ (CS-))* 100。將OCT及MCH分別作為CS+各進(jìn)行一次所得的PI1/2值進(jìn)行平均后，記為I個(gè)PI。不同組別的果蠅所測得的PI值，作為對(duì)化合物效果的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。
[0024]數(shù)據(jù)處理:采用One way Anova比較各組間差異情況。
[0025]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:如圖1所示，老年癡呆癥的模型果蠅相對(duì)于野生型對(duì)照果蠅，在PI值上有明顯的下降，意味著存在明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙。而本發(fā)明所述保健制劑，可以有效地挽救該下降(P〈0.01)，表明其對(duì)老年癡呆癥造成的學(xué)習(xí)記憶缺陷有挽救效果。
[0026]試驗(yàn)2:本發(fā)明對(duì)老年癡呆癥模型果蠅降低腦部炎癥反應(yīng)的挽救測試。
[0027]試驗(yàn)?zāi)康?評(píng)估本發(fā)明保健制劑對(duì)老年癡呆癥模型果蠅降低腦部炎癥反應(yīng)的作用。
[0028]動(dòng)物:轉(zhuǎn)入人類老年癡呆癥相關(guān)的Abeta42蛋白的UAS_Abeta42/Cyo(H29.3)果蠅；誘導(dǎo)Abeta42在腦中特異性表達(dá)的ElaV-Gal4G133果蠅(P35);以及作為對(duì)照的野生型W1118果蠅(2U)，均由清華大學(xué)提供。測試選用P35和H29.3雜交后代中表達(dá)Abeta的雄性果蠅作為老年癡呆癥模型果蠅，P35和2U雜交后不表達(dá)Abeta的雄性果蠅作為野生型對(duì)照果蠅。所有果蠅均飼養(yǎng)于裝有果蠅培養(yǎng)基(自制)的玻璃瓶中，并放入23-25°C，相對(duì)濕度40-50% ,12:12光暗循環(huán)的房間中。
[0029]試劑:實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，ABI公司產(chǎn)品；RNA提取試劑盒(TrizoUi)Jnvitrogen公司產(chǎn)品;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，Invitrogen公司產(chǎn)品;標(biāo)準(zhǔn)果繩培養(yǎng)基:自制；
藥物溶劑:4%的蔗糖水(蔗糖采購自Sigma)。
[0030]藥物:按本發(fā)明實(shí)施例1中配比制得，并以0.05mg/ml的濃度溶解在藥物溶劑中。
[0031]引物，蘇州金維智公司合成，其序列為 G3_Rp49Forward: GACGCTTCAAGGGACAGTATCTG G3_Rp49Reverse: AAACGCGGTTCTGCATGAGG3_Drosomyciη(Drs)Fw: CGTGAGAACCTTTTCCAATATGATGG3_Drosomycin(Drs)Rv: TCCCAGGACCACCAGCATG3_Diptericin(Dipt)Fw: GCTGCGCAATCGCTTCTACTG3_Diptericin(Dipt)Rv: TGGTGGAGTGGGCTTCATGG3_Attacin(AttC)Fw: TGGGCTACAACAATCATGGAG3_Attacin(AttC)Rv: GCGTATGGGTTTTGGTCAGTG3_Cecropin(Cec)Fw: ACGCGTTGGTCAGCACACTG3_Cecropin(Cec)Rv: ACATTGGCGGCTTGTTGAGG3_Metchnikowin(Mtk)Fw: CGTCACCAGGGACCCATTTG3_Metchnikowin(Mtk)Rv: CCGGTCTTGGTTGGTTAGGA。
[0032]儀器:實(shí)時(shí)定量PCR機(jī)，ABI公司產(chǎn)品；Nanodrop，賽默飛公司產(chǎn)品。
[0033]實(shí)驗(yàn)方法:挑取羽化后雄性的老年癡呆癥模型果蠅或野生型對(duì)照果蠅的雄蠅，以100只/瓶的密度將其飼養(yǎng)在裝有標(biāo)準(zhǔn)果蠅培養(yǎng)基的玻璃指管中，從羽化后第三天到第十天，每天給予模型果蠅溶劑或藥物，同時(shí)給予野生型對(duì)照果蠅溶劑。在羽化第十天，取果蠅腦部并用trizol法提取RNA。將提取到的RNA用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)錄為cDNA。取Iug的cDNA，加A1 uM的指定引物對(duì)和實(shí)時(shí)定量PCR試劑，放入實(shí)時(shí)定量PCR機(jī)中運(yùn)行程序。
[0034]PCR程序?yàn)?95度2分鐘后開展一個(gè)40次的循環(huán)，循環(huán)內(nèi)容為95度30秒，60度45秒，72度30秒。循環(huán)結(jié)束后進(jìn)行以0.5度為步長的融解曲線。
[0035]數(shù)據(jù)處理。數(shù)據(jù)以雙重Ct差值法處理，以平均值+_標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用One wayAnova比較各組間差異情況。
[0036]實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如圖2所示，相對(duì)于定義為I的野生型對(duì)照果蠅腦部炎癥基因的表達(dá)水平，老年癡呆癥的模型果蠅腦部5個(gè)炎癥基因的表達(dá)在mRNA水平上都明顯上調(diào)，而根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1制備的藥物能夠挽救這種上調(diào)(P〈0.01)，表明其對(duì)炎癥反應(yīng)有明顯的降低作用。
[0037]具體實(shí)例
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但不局限于此。
[0038]實(shí)施例1:本發(fā)明的片劑制備
以每1000片片劑為例，原輔料配比如下:人參提取物:75 g;靈芝提取物:50 g;三七提取物:62.5 g;梔子提取物:62.5 g;微晶纖維素:285 g。將以上各組分過80目篩，混合2分鐘，加入80%乙醇溶液制軟材，18目篩制粒，濕顆粒干燥后，18目篩整粒。加入硬脂酸鎂3 go總混5分鐘，按0.6 g每片壓片。取12 g薄膜包衣預(yù)混劑制包衣液包衣。以上步驟均在10萬級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)進(jìn)行操作。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種具有改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙的保健制劑，其特征是以梔子、三七、人參和靈芝的提取物為原料，使用藥劑學(xué)常規(guī)輔料，并通過藥劑學(xué)常規(guī)工藝制備成內(nèi)服制劑。2.如權(quán)利要求1所述具有改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙作用的保健制劑，其特征在于，所述各原料的用量以重量份表示為，人參提取物:30?100;靈芝提取物:40?80;三七提取物:30?100;梔子提取物:30?100。3.如權(quán)利要求1所述具有改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙作用的保健制劑，其特征在于，所述各原料的用量以重量份表示為:人參提取物:50?75;靈芝提取物:40?60;三七提取物:50?75;梔子提取物:50?75。4.如權(quán)利要求1所述具有改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙作用的保健制劑，其特征在于，所述各原料的用量以重量份表示為:人參提取物:75;靈芝提取物:50;三七提取物:62.5;梔子提取物:62.505.如權(quán)利要求1所述的保健制劑，其特征在于，所述各活性成分是由以下步驟制成:(1)梔子提取物制備:將梔子原料粉碎后，用水加熱回流提取三次，每次二小時(shí);合并提取液后，真空減壓干燥;將濃縮浸膏噴霧干燥后，過80目篩，備用；(2)三七提取物制備:將三七原料粉碎后過40目篩去除細(xì)粉，用70%乙醇提取三次;合并提取液后，經(jīng)15μπι細(xì)度過濾器過濾，80°C減壓濃縮;將濃縮浸膏120°C滅菌6秒后，噴霧干燥，所得提取物過80目篩，備用；(3)人參提取物制備:將人參根原料用70%乙醇提取三次，合并提取液后，80 °C減壓濃縮，真空干燥，所得提取物過100目篩，備用；(4)靈芝提取物制備:將靈芝原料粉碎后，用100°C水提取三次，每次一個(gè)半小時(shí);合并提取液后，80°C減壓濃縮，將濃縮液放入反應(yīng)釜中，在冷卻后加入4倍乙醇；醇沉12小時(shí)后，將沉淀取出，加水復(fù)溶成浸膏；將浸膏噴霧干燥后，過80目篩，備用。6.如權(quán)利要求1所述的保健制劑，其特征在于，所述各活性成分，在合并后，加入與合并后提取物總重量比為I?1.2的微晶纖維素，混合20分鐘;然后加入80%乙醇溶液制軟材，18目篩制粒，濕顆粒干燥后，18目篩整粒;之后加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的口服固體劑型，如膠囊劑、片劑、顆粒劑或滴丸等。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK106038761SQ201610537617
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年7月11日
【發(fā)明人】陶?qǐng)? 馬偉偉, 彭峰, 彭一峰
【申請(qǐng)人】蘇州卓凱生物技術(shù)有限公司