治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方法，本發(fā)明藥物組合物是以彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯為原料藥，配比而成，可按常規(guī)制劑工藝制成各種劑型，治療宮頸癌療效顯著。
【專利說明】
治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來在植物中尋找有效且副作用小的抗腫瘤藥物已成為國內(nèi)外重要的課題，關(guān) 于中藥抗腫瘤機制的研究方興未艾，但尚無突破性成果。許多化療藥物是通過自由基途徑 來實現(xiàn)其抗腫瘤作用的，因為腫瘤細(xì)胞內(nèi)的自由基產(chǎn)生與清除處于失衡狀態(tài)，產(chǎn)生自由基 能力強，而清除能力弱，對自由基十分敏感。R0S包括以自由基存在的和不以自由基存在的 具有高度活性的中間產(chǎn)物，前者有0：Γ、0Η，后者有H 202、N0等。惡性腫瘤細(xì)胞除了受刺激分泌 R0S外，還能自分泌一定量的R0S。細(xì)胞的生存取決于細(xì)胞內(nèi)部產(chǎn)生的R0S與抗氧化代謝的平 衡，這種平衡反映了細(xì)胞內(nèi)氧化還原態(tài)水平。細(xì)胞增殖過盛和凋亡抑制被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生 發(fā)展的關(guān)鍵，多種化療藥物均可引起腫瘤細(xì)胞的凋亡。細(xì)胞凋亡是多基因控制的程序化過 程。通過研究其分子調(diào)控機制，將對有計劃誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡產(chǎn)生重要的指導(dǎo)作用。與細(xì)胞 凋亡相關(guān)的基因有P53基因等多種基因。p53基因分為野生型和突變型，因野生型p53表達產(chǎn) 物半衰期短，代謝不穩(wěn)定及含量低，故常規(guī)方法很難檢測，往往只能檢測突變型P53基因的 表達水平。
[0003] 棱果海桐子：本品為海桐花科海桐花屬植物棱果海桐P i 11 〇 s ρ 〇 r u m trigonocarpum L6vl[P.glabratum sensu Rehd·]的種子。8-9月采摘成熟果實，除去果核， 取出種子曬干?！拘晕丁靠唷⑽?，微寒?！竟δ苤髦巍渴諗恐篂a，清熱除煩。主治腹瀉，痢疾，咽 痛，心煩不眠?！驹参镄螒B(tài)】常綠灌木、嫩枝無毛，嫩芽有短柔毛，老枝灰色，有皮孔。葉簇生 于枝頂，二年生，革質(zhì)，倒卵形或矩圓倒披針形，長7-14厘米，寬2.5-4厘米，先端急短尖，基 部窄楔形，上面綠色、發(fā)亮，干后褐綠色，下面淺褐色，無毛；側(cè)脈約6對，與網(wǎng)脈在上下兩面 均不明顯，邊緣平展，葉柄長約1厘米。傘形花序3-5枝頂生，花多數(shù);花梗長1-2.5厘米，纖 細(xì)，無毛;萼片卵形，長2毫米，有睫毛;花瓣長1.2厘米，分離，或部分聯(lián)合;雄蕊長8毫米，雌 蕊與雄蕊等長，子房有柔毛，側(cè)膜胎座3個，胚珠9-15個。蒴果常單生，橢圓形，干后三角形或 圓形，長2.7厘米，有毛，子房柄短，長不過2毫米，宿存花柱長3毫米，果梗長約1厘米，有柔 毛，3片裂開，果片薄，革質(zhì)，表面粗糙，每片有種子3-5個;種子紅色，長約5-6厘米，種柄長2 毫米，壓扁，散生于縱長的胎座上。收載于中藥大辭典。
[0004] 彈刀子菜：本品為玄參科通泉草屬植物彈刀子菜Mazus stachydi f ο 1 ius (Turcz . ) Maxim.的全草。開花結(jié)果時采收，曬干?！拘晕丁课段⑿?性涼?！竟δ苤髦巍壳鍩峤?毒;涼血散瘀。主便秘下血;瘡癤腫毒；毒蛇咬傷；跌打損傷?！驹螒B(tài)】多年生草本，高10-50cm。粗壯，全株被白色長柔毛。根狀莖短;莖直立，稀上升，圓柱形，不分枝或基部分枝，老 時基部木質(zhì)化?；~匙形，有短柄，常早枯;莖生葉對生，上部的?；ド瑹o柄;葉片長橢圓 形至倒卵狀披針形；紙質(zhì)，長2-7cm，以莖中部的量大，邊緣具鋸齒?？偁罨ㄐ蝽斏L2-20cm，花稀疏;苞片三角形;花萼漏斗狀，長0.5-lcm，比花梗長，萼齒略長于筒部，先端長銳 尖;花冠紫以，長1.5-2cm;花冠筒與唇部近等長，上唇短，2裂，裂片狹長三角形，端部尖，下 唇寬大，開展，3裂，中裂片較側(cè)裂片小，近圓形，稍突出，有兩條著生腺毛的皺褶直達喉部； 雄蕊4枚，二強;子房上部被長硬毛。蒴果扁卵球形，長2-4mm?；ㄆ?-6月，果期7-9月。收載于 中藥大辭典。
[0005] 密花草:本品為溝繁縷科田繁縷屬植物田繁縷Bergia ammannioides Roxb. Ex Roth的全草。全年可采;洗凈;曬干?！拘晕丁课陡?性涼?！竟δ苤髦巍壳鍩峤舛?。主尿路感染； 癰癤；口腔炎?！驹螒B(tài)】一年生草本，高7-30cm。近直立或漸升，分枝多，淡紅色，具平展的 腺毛。葉對生，幾無柄;插葉長約2mm，2深裂，裂片披針形，有撕裂狀小齒;葉片狹橢圓形或倒 披針形，長0.4-2cm，寬2-8_，邊緣有尖銳的小鋸齒，下面有短毛?；ㄐ?，多數(shù)簇生于葉腋;花 梗長卜2mm;萼片5,狹卵形，長約1.2mm，先端漸尖;花瓣5,淡紅色，狹卵形，約與萼片等長;雄 蕊5;花柱5,短。蒴果近球形，長1.2-2_，裂為5瓣。種子我數(shù)，極小。花期幾近全年。收載于中 藥大辭典。
[0006] 金雞菊查耳酮(Okanin ): CAS號484-76-4，分子式C15H12〇6，分子量288 · 26?！舅幚碜?用】黃色素?！境煞謥碓础烤湛平痣u菊屬和鬼針草屬植物黃花中。
[0007]仙鶴草內(nèi)酯（481'；[11101101丨(16):043號21499-24-1，分子式(]181118〇5，分子量314.34。 【藥理作用】能降低離體兔腸的收縮幅度及張力，并使腸運動停止于松弛狀態(tài);也能抑制在 體小鼠腸的蠕動?！居猛尽拷獬交’d攣?！境煞謥碓础克N薇科植物（日本)龍芽草(仙鶴草） Agrimonia pilosa Ledeb. var. japonica (MIq.) Nakai 根。
[0008] 2個原料藥的結(jié)構(gòu)：


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是克服【背景技術(shù)】的不足，提供一種有效治療宮頸癌的藥物組合物及 其制備方法。
[0010] 本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)的： 制成該治療宮頸癌的藥物組合物的原料藥的組成和重量份為： 彈刀子菜562-568重量份密花草500-506重量份金雞菊查耳酮204-208重量份棱果 海桐子50-60重量份仙鶴草內(nèi)酯12-14重量份。
[0011]優(yōu)選的用于治療宮頸癌的藥物組合物，是由如下重量份的原料藥組成： 彈刀子菜565重量份密花草503重量份金雞菊查耳酮206重量份棱果海桐子55重量 份仙鶴草內(nèi)酯13重量份。
[0012] -種治療宮頸癌的藥物組合物，其特征在于藥物組合物可以采用制劑學(xué)的常規(guī)方 法制備成片劑或膠囊劑或滴丸。
[0013] -種治療宮頸癌的藥物組合物，其特征在于藥物組合物與化學(xué)藥或中藥組成的治 療宮頸癌藥物。
[0014] -種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于按如下步驟制備： 原料藥的組成和重量份為:彈刀子菜562-568重量份密花草500-506重量份金雞菊查 耳酮204-208重量份棱果海桐子50-60重量份仙鶴草內(nèi)酯12-14重量份； 制備方法： (1) 按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2) 取步驟(1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3) 將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。
[0015] 優(yōu)選的一種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于按如下步驟制備： 原料藥的組成和重量份為:彈刀子菜565重量份密花草503重量份金雞菊查耳酮206 重量份棱果海桐子55重量份仙鶴草內(nèi)酯13重量份； 制備方法： (1) 按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2) 取步驟(1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3) 將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。
[0016] -種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于藥物組合物可以采用制劑 學(xué)的常規(guī)方法制備成片劑或膠囊劑或滴丸。
[0017] -種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于藥物組合物與化學(xué)藥或中 藥組成治療宮頸癌藥物。
[0018] 藥物組合物治療宮頸癌療效顯著。
【具體實施方式】
[0019] 實施例1:治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方法 治療宮頸癌的藥物組合物的原料藥的組成和重量份為:彈刀子菜565g密花草503g金 雞菊查耳酮206g棱果海桐子55g仙鶴草內(nèi)酯13g; 制備方法： (1) 按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2) 取步驟(1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3) 將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。
[0020] 實施例2:治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方法 治療宮頸癌的藥物組合物的原料藥的組成和重量份為:彈刀子菜562g密花草506g金 雞菊查耳酮204g棱果海桐子60g仙鶴草內(nèi)酯12g; 制備方法： (1) 按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2) 取步驟(1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3) 將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。
[0021 ]實施例3:治療宮頸癌的藥物組合物及其制備方法 治療宮頸癌的藥物組合物的原料藥的組成和重量份為:彈刀子菜568g密花草500g金 雞菊查耳酮208g棱果海桐子50g仙鶴草內(nèi)酯14g; 制備方法： (1)按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2) 取步驟(1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3) 將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。
[0022]實施例4:片劑的制備 取實施例1藥物組合物327g，加入淀粉275g，混勻，制粒，干燥，加微晶纖維素15lg，硬脂 酸鎂11.5g，混勻，壓制成1500片，即得藥物組合物片劑。
[0023]實施例5:膠囊的制備 取實施例2藥物組合物400.5g，加入淀粉350.5g，混勻，制粒，干燥，整粒，加入適量硬脂 酸鎂，混勻，裝膠囊1500粒，即得藥物組合物膠囊。
[0024]實施例6:滴丸的制備 稱取聚乙二醇6000 243.5g水浴(80°C)加熱煮熔，加入實施例3藥物組合物12.4g，充 分?jǐn)嚢杈鶆颍砸后w石蠟為冷卻劑，置玻璃管(4*80cm)中，冷卻溫度為-4°C，滴口內(nèi)外徑為 7.0/2.0(mm/mm)，滴口距液面為2.3cm，滴速以每分54滴為最佳條件，用棉布吸干滴丸表面 的冷凝劑，即得藥物組合物滴丸。
[0025]實驗例1:治療宮頸癌的試驗研究 1材料和方法 1.1材料和試劑 Hela細(xì)胞由中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫提供，藥物組合物(實施例1藥物組 合物批號20120915)，RPMI-1640培養(yǎng)液(GIB⑶，USA)，胎牛血清(天津血液研究所），R0S測 定試劑盒(南京建成生物有限公司），胰蛋白酶、核糖核酸酶(RNase)、碘化丙啶(PI)、免疫組 化試劑盒均為上海華美生物工程公司提供。
[0026] 1.2藥物制備 藥物組合物20g加水200 ml，加熱沸騰30 min,網(wǎng)篩過濾去渣，濾液離心20 min,取上 清液濃縮為100 m，過濾除菌，備用。
[0027] 1.3實驗方法 1.3.1 He la細(xì)胞培養(yǎng) 培養(yǎng)液為含10%胎牛血清、l〇5U/L青霉素、0. lg/L鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液。將100 ml 培養(yǎng)瓶置于5% C02、37 °C、飽和濕度的恒溫箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞達80%-90%融合狀態(tài)時用0.25% 胰蛋白酶消化后傳代。實驗期間不斷凍存細(xì)胞，全部實驗均用指數(shù)生長期細(xì)胞。
[0028] 1.3.2藥物處理和分組情況 0.25%胰酶消化細(xì)胞后，用RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為108/L，每培養(yǎng)瓶各加細(xì)胞懸 液lml再各加入培養(yǎng)液6ml置5% C02、37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長達70%融合時更換 培養(yǎng)液，同時加入藥物組合物提取液，按藥物組合物終濃度分組，即藥物組合物20g/L、40g/ L和80g/L組，不同濃度培養(yǎng)相同時間，加入等量培養(yǎng)液組為對照組。
[0029] 1.3.3 MTT法細(xì)胞增殖實驗 將Hela細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔細(xì)胞數(shù)104個(分組同上，對照組加等量完全培養(yǎng) 基）；細(xì)胞同步化后，更換新鮮培養(yǎng)基，加入藥物組合物提取液，使藥物終濃度為20、40、80g/ L，培養(yǎng)48 h。移液槍小心吸去所有上清液，每孔加160μ1無血清培養(yǎng)基及40μ1ΜΤΤ(ΜΤΤ終濃 度為lg/L);鋁箱包好培養(yǎng)板，繼續(xù)培養(yǎng)4 h;終止培養(yǎng)時吸去孔內(nèi)所有上清液，每孔加200μ 1DMS0,室溫下微孔板振蕩器上振蕩lOmin;酶標(biāo)儀550 nm波長測光密度(D值）；腫瘤細(xì)胞生 長抑制率=(1-藥物組D值/對照組D值）X 100%。
[0030] 1.3.4流式細(xì)胞儀測定Hela細(xì)胞凋亡 收集上述處理后的包括貼壁和懸浮的Hela細(xì)胞，用roS調(diào)細(xì)胞濃度為109/L，取1 ml單 細(xì)胞懸液，離心、漂洗，70%乙醇1 ml固定細(xì)胞，再用PBS漂洗。在單細(xì)胞樣本中加入RNase，再 加入終濃度為50 mg/L的PI染色，過濾后用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡。以正常人的外周血淋 巴細(xì)胞為正常二倍體標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)測定的DNA組方圖，用CELLQUEST分析軟件分析Hela細(xì)胞的 凋亡率。
[0031] 1.3.5化學(xué)比色法測定Hela細(xì)胞Hela細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS) 收集處理后的Hela細(xì)胞，用生理鹽水調(diào)細(xì)胞濃度為101()/L，取細(xì)胞懸液1 ml，4°C下離 心去上清液，再加入1 ml勾楽;介質(zhì)，離心10 min,取適量上清液進行ROS測定。按ROS測定盒 說明書試劑操作步驟進行，同時設(shè)標(biāo)準(zhǔn)空白管、標(biāo)準(zhǔn)管，用752紫外分光光度計測定550 nm 處D值。
[0032] 1.3.6免疫組織化學(xué)法測定Hela細(xì)胞p53基因產(chǎn)物表達 取出載有不同條件下培養(yǎng)的Hela細(xì)胞的玻片，用95%乙醇固定細(xì)胞30 min，按免疫組化 試劑盒說明書步驟操作。P53表達定位于細(xì)胞核，棕黃、黃褐色為陽性表達。結(jié)果應(yīng)用LEICA QWIN計算機圖像分析儀，隨機選取100個細(xì)胞，測其細(xì)胞核灰階度，以反映染色強度，比較各 組染色強度差異。
[0033] 1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 6.0進行數(shù)據(jù)處理，計量數(shù)據(jù)用，X±S表示，組間差異采用t檢驗，P〈0.05為差 異有顯著性。
[0034] 2 結(jié)果 2.1藥物組合物對Hela細(xì)胞增殖的抑制作用 結(jié)果見表1。
[0035] 表1不同濃度藥物組合物對Hela細(xì)胞增殖的影響(n=4)
3種濃度的藥物組合物作用一定時間后均可抑制Hela細(xì)胞的增殖，其抑制率最高可達 80.54%〇
[0036] 2.2藥物組合物對Hela細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)R0S的影響 隨不同濃度藥物組合物作用時間的延長，He 1 a細(xì)胞凋亡率明顯增加，而細(xì)胞內(nèi)R0S水平 降低。見表2。
[0037] 表2不同濃度HD對Hela細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)R0S的影響(n=4, .X土s)
與對照組比較:*P〈〇 · 05，#P〈0 · 01。
[0038] 2.3藥物組合物作用后Hela細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化 2.3.1倒置顯微鏡下動態(tài)觀察培養(yǎng)細(xì)胞結(jié)果 Hela細(xì)胞接種后24 h完全貼壁，并伸出偽足，可見分裂期細(xì)胞。對照組Hela細(xì)胞生長活 躍，懸浮細(xì)胞很少；而加入藥物組合物提取液后隨作用時間延長，懸浮細(xì)胞增加，貼壁細(xì)胞 體積增大，細(xì)胞密度降低，分裂期細(xì)胞減少。
[0039] 2.3.2蘇木精-伊紅染色結(jié)果 對照組Hela細(xì)胞增殖活躍，分裂期細(xì)胞多見，細(xì)胞核呈類圓形，邊界清，染色質(zhì)均勻分 布呈淺藍色著色，核仁明顯(2-3個），細(xì)胞有偽足使細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞密度高。藥物組合 物(40 g/L)作用48h后Hela細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，細(xì)胞密度降低，并出現(xiàn)凋亡細(xì)胞。凋亡 細(xì)胞胞體小，細(xì)胞膜完整，細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)濃縮，呈大小不等、數(shù)量不等的小球形、半月 形，核仁消失，核染色呈紫褐色。
[0040] 2.4藥物組合物對Hela細(xì)胞p53基因表達的影響 藥物組合物(40 g/L)作用48 h后Hela細(xì)胞p53表達下降，其蛋白染色灰階度明顯低于 對照組(P〈〇.〇l)。
【主權(quán)項】
1. 一種治療宮頸癌的藥物組合物，其特征在于制成該藥物組合物的原料藥的組成和重 量份為： 彈刀子菜562-568重量份密花草500-506重量份金雞菊查耳酮204-208重量份棱果 海桐子50-60重量份仙鶴草內(nèi)酯12-14重量份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種治療宮頸癌的藥物組合物，其特征在于制成該藥物組合物 的原料藥的組成和重量份為： 彈刀子菜565重量份密花草503重量份金雞菊查耳酮206重量份棱果海桐子55重量 份仙鶴草內(nèi)酯13重量份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種治療宮頸癌的藥物組合物，其特征在于藥物組合物可以采 用制劑學(xué)的常規(guī)方法制備成片劑或膠囊劑或滴丸。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種治療宮頸癌的藥物組合物，其特征在于藥物組合物與化學(xué) 藥或中藥組成的治療宮頸癌藥物。5. -種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于按如下步驟制備： 原料藥的組成和重量份為:彈刀子菜562-568重量份密花草500-506重量份金雞菊查 耳酮204-208重量份棱果海桐子50-60重量份仙鶴草內(nèi)酯12-14重量份； 制備方法： (1)按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2 )取步驟（1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3)將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述一種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于按如下 步驟制備： 原料藥的組成和重量份為：彈刀子菜565重量份密花草503重量份金雞菊查耳酮206 重量份棱果海桐子55重量份仙鶴草內(nèi)酯13重量份； 制備方法： (1)按原料藥配比取彈刀子菜、密花草、金雞菊查耳酮、棱果海桐子、仙鶴草內(nèi)酯，混勻， 用重量百分比濃度21.5%乙醇作為溶劑，在38.5°C溫浸提取，提取次數(shù)為25次，每次提取時 間26.5小時，每次溶劑用量為原料藥總重量的36.5倍，濾過，得藥渣A和提取液A，提取液A回 收乙醇，濃縮至相對密度1.14,濾過，藥液通過LSD280大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用重 量百分比濃度43.5%乙醇溶液洗脫LSD280大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度43.5%乙醇 洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物A; (2 )取步驟（1)藥渣A，用重量百分比濃度59.5%乙醇作為溶劑，加熱回流提取19次，每次 提取時間為〇. 1小時，每次溶劑用量為藥渣A重量的56倍，濾過，得藥渣B和提取液B，提取液B 回收乙醇，濃縮至相對密度1.04,濾過，藥液通過FU-18大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用 重量百分比濃度77%乙醇溶液洗脫FU-18大孔吸附樹脂柱，收集重量百分比濃度77%乙醇洗 脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得提取物B; (3)將提取物A和提取物B混勻，即得藥物組合物。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述一種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于藥物組 合物可以采用制劑學(xué)的常規(guī)方法制備成片劑或膠囊劑或滴丸。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述一種治療宮頸癌的藥物組合物的制備方法，其特征在于藥物組 合物與化學(xué)藥或中藥組成治療宮頸癌藥物。
【文檔編號】A61K31/12GK106038799SQ201610502060
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請人】濟南星懿醫(yī)藥技術(shù)有限公司