竹葉提取物防治酒精性肝損傷的應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥學領域，特別是涉及一種竹葉提取物在制備防治酒精性肝損傷的藥物或食品中的應用，所述竹葉提取物包含2～10wt％的竹葉總黃酮。
【專利說明】
竹葉提取物防治酒精性肝損傷的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥保健品領域，特別是涉及一種植物提取物的醫(yī)藥用途。
【背景技術】
[0002] 竹子在我國具有悠久的食用和藥用歷史，竹的醫(yī)療與保健作用早已為世人所知。 據(jù)醫(yī)書記載，竹葉具有涼心緩脾、清爽止渴、清熱解毒之功能。
[0003] 竹葉中含有大量的黃酮類化合物和生物活性多糖及其他有效成分，如酚酸類化合 物、蒽醌類化合物、萜類內(nèi)酯、特種氨基酸和活性肽、錳、鋅、硒等物質(zhì)。
[0004] 目前常用的竹葉提取工藝有水煮提取、微波輔助提取、有機溶劑提取和大孔樹脂 純化分離等，最終提取物主要為黃酮類。
[0005] 酒精性肝損傷(alcoholic liver disease)表現(xiàn)多樣，初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進 而可發(fā)展成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化。在嚴重酗酒時可誘發(fā)廣泛肝細 胞壞死甚或肝功能衰竭。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明的目的旨在提供一種竹葉提取物的醫(yī)藥用途。
[0007] 具體地說，本發(fā)明提供了一種竹葉提取物在制備防治酒精性肝損傷的藥物或食品 中的應用，所述竹葉提取物含有2~10wt%竹葉總黃酮。
[0008] 在一優(yōu)選例中，所述竹葉總黃酮的含量為5.8wt%。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述竹葉提取物由如下方法制得：
[0010]步驟一，將竹葉粉碎至20~100目，投入反應釜，加入竹葉粉重量2~4倍量的用乙 醇與水按照2:1的體積比形成的混合溶液，浸泡4~12小時；
[0011]步驟二，在反應爸中加入竹葉粉重量2~4倍量的水，攪拌加熱至反應爸內(nèi)溫度達 到40~45°C，加入纖維素酶，所述纖維素酶的用量為每千克竹葉粉加入纖維素酶15~50萬 單位，以每分鐘50~100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12~36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45~55°C之 間；
[0012]步驟三，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4~8小時，濾出浸出液Μ備用，保留固體殘渣于 反應爸中；
[0013] 步驟四，在反應釜中加入與浸出液Μ等量的水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到40~ 45°C，將相當于竹葉粉重量0.08~0.15倍量的糊精與水按照1: 2的重量比混合，溶解，加入α 淀粉酶，所述α淀粉酶的用量為每千克糊精加入α淀粉酶2萬單位，攪拌均勻，將該混合物投 入反應釜，以每分鐘50~100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12~36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45~55 °C之間；
[0014] 步驟五，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4~8小時，濾出浸出液N;
[0015] 步驟六，將浸出液Μ和浸出液N混合，回收乙醇，濃縮，干燥。
[0016] 本發(fā)明各個方面的細節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求 的描述，本發(fā)明的特點、目的和優(yōu)勢將更為明顯。
【附圖說明】
[0017]圖1為實施例4的小鼠喂食方案
[0018] 圖2為實施例4的各組小鼠血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶對比
[0019] 圖3為實施例4的各組小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶對比
[0020] 圖4為實施例4的各組小鼠肝臟甘油三脂對比
【具體實施方式】
[0021] 本發(fā)明的問世部分是基于這樣一個意外發(fā)現(xiàn):用本發(fā)明的新工藝提取獲得的竹葉 提取物可以有效治療小鼠酒精性肝損傷。因此，該植物提取物可有望開發(fā)成為一種預防或 者治療酒精性肝損傷的藥物。
[0022] 具體而言，本發(fā)明的竹葉提取物可通過本發(fā)明的如下新工藝從竹葉中提取獲得： [0023]步驟一，將竹葉粉碎至20~100目，投入反應釜，加入竹葉粉重量2~4倍量的用乙 醇與水按照2:1的體積比形成的混合溶液，浸泡4~12小時；
[0024]步驟二，在反應爸中加入竹葉粉重量2~4倍量的水，攪拌加熱至反應爸內(nèi)溫度達 到40~45°C，加入纖維素酶，所述纖維素酶的用量為每千克竹葉粉加入纖維素酶15~50萬 單位，以每分鐘50~100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12~36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45~55°C之 間；
[0025]步驟三，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4~8小時，濾出浸出液Μ備用，保留固體殘渣于 反應爸中；
[0026]步驟四，在反應釜中加入與浸出液Μ等量的水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到40~ 45°C，將相當于竹葉粉重量0.08~0.15倍量的糊精與水按照1: 2的重量比混合，溶解，加入α 淀粉酶，所述α淀粉酶的用量為每千克糊精加入α淀粉酶2萬單位，攪拌均勻，將該混合物投 入反應釜，以每分鐘50~100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12~36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45~55 °C之間；
[0027]步驟五，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4~8小時，濾出浸出液N;
[0028] 步驟六，將浸出液Μ和浸出液N混合，回收乙醇，濃縮，干燥。
[0029]經(jīng)檢測證實，本發(fā)明的竹葉提取物中竹葉總黃酮的含量為2~10wt%，優(yōu)選的含量 為5 · 8wt%。
[0030] 本發(fā)明的竹葉提取物可以單獨使用或以藥物組合物的形式使用。藥物組合物包括 作為活性成分的本發(fā)明的竹葉提取物及可藥用載體。較佳地，本發(fā)明的藥物組合物含有 0.1-99.9%重量百分比的作為活性成分的本發(fā)明的竹葉提取物。"可藥用載體"不會破壞本 發(fā)明的竹葉提取物的藥學活性，同時其有效用量，即能發(fā)揮藥物載體作用時的用量對人體 無 。
[0031] 所述可藥用載體包括但不限于:軟磷脂、硬脂酸鋁、氧化鋁、離子交換材料、自乳化 藥物傳遞系統(tǒng)、吐溫或其他表面活化劑、血清蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、氨基乙酸、山梨酸、 水、鹽、電解質(zhì)如硫酸鹽精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、硅酸鎂、飽和脂肪酸 部分甘油酯混合物等。
[0032] 其他常用的藥物輔料如粘合劑（如微晶纖維素）、填充劑(如淀粉、葡萄糖、無水乳 糖和乳糖珠粒）、崩解劑(如交聯(lián)PVP、交聯(lián)羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙 基纖維素）、潤滑劑(如硬脂酸鎂）以及吸收促進劑、吸附載體、香味劑、甜味劑、賦形劑、稀釋 劑、潤濕劑等。
[0033] 本發(fā)明的竹葉提取物以及其藥物組合物可按本領域常規(guī)方法制備并可以通過腸 道或非腸道或局部途徑給藥?？诜苿┌z囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹 劑、膏劑等;非腸道給藥制劑包括注射液等；局部給藥制劑包括霜劑、貼劑、軟膏劑、噴霧劑 等。優(yōu)選為口服制劑。
[0034] 本發(fā)明的竹葉提取物以及其藥物組合物的給藥途徑可以為口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌 肉或皮下、皮膚粘膜、靜脈、尿道、陰道等。
[0035] 除了制成藥劑之外，亦可在本發(fā)明的竹葉提取物中加入抗氧化劑、色素、酶制劑等 各種食品添加劑，按本領域的常規(guī)方法制成保健食品。
[0036] 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條 件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數(shù)、比率、比例、或份數(shù)按 重量計。
[0037] 除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。文中 所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。
[0038] 本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本專利說明書所揭 示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相 同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似 特征的一般性例子。
[0039]實施例1制備竹葉提取物A
[0040] 步驟一，將竹葉粉碎至40目，取120kg竹葉干粉投入反應釜，加入360kg稀釋乙醇 (醇:水= 2:1)，浸泡6小時；
[0041] 步驟二，在反應釜中加入360kg水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到45 °C，加入纖維 素酶6000萬單位，以每分鐘50轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應24小時，控制反應釜內(nèi)溫度在50°C;
[0042] 步驟三，停止加熱和攪拌，靜置沉淀6小時，濾出浸出液M 500kg備用，保留固體殘 渣于反應爸中；
[0043]步驟四，在反應釜中加入500kg水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到45°C，將12kg糊 精與24kg水混合，溶解，加入α淀粉酶24萬單位，攪拌均勻，將該混合物投入反應釜，以每分 鐘50轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應24小時，控制反應釜內(nèi)溫度在50 °C ;
[0044] 步驟五，停止加熱和攪拌，靜置沉淀6小時，濾出浸出液N 450kg;
[0045] 步驟六，將浸出液Μ和浸出液N混合，回收乙醇，濃縮，干燥得竹葉提取物18kg。
[0046] 用分光光度法測定該竹葉提取物中總黃酮的含量：
[0047] 稱量13.2mg蘆丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作為標準溶液。
[0048] 準確吸取0，0.4,0.8,1.2,1.6,2.0ml蘆丁標準溶液，放入10毫升容量瓶內(nèi)（寫明標 記），分別加入2 · 0、1 · 6、1 · 2、0 · 8、0 · 4、0ml的60 %乙醇溶液;再加入5 %亞硝酸鈉溶液0 · 5ml 搖勻，放置6min;加入10 %硝酸鋁溶液0.5ml，放置6min后；加入4 %氫氧化鈉溶液4. Oml，加 60%乙醇定容，搖勻后，放置15min;(掃描找到最大吸收)在510nm處測定吸光度。用0.0ml作 為空白，用蘆丁含量的濃度作為橫坐標，縱坐標作為一定濃度下所對應的吸光度，作標準曲 線。
[0049]總黃酮提取與測定和計算
[0050] 稱取0.6~0.8g樣品粉末，加入60ml 60%乙醇放于100ml圓底燒瓶內(nèi)，置于水浴鍋 上，70°C條件下回流提取60min。過濾、定容于100ml.
[0051] 吸取樣品量(根據(jù)樣品的吸光度調(diào)整）1.0ml，放入10毫升容量瓶內(nèi)（寫明標記），用 60 %乙醇加到2. Oml;加入5 %亞硝酸鈉溶液0.5ml搖勻，放置6min;加入10 %硝酸鋁，溶液 0.5ml，放置6min后；加入4 %氫氧化鈉溶液4. Oml，搖勻后，加60 %乙醇定容，放置15min;在 510nm處測定吸光度。根據(jù)標準曲線計算總黃酮的含量。
[0052] 總黃酮含量=A/M*100X稀釋倍數(shù) [0053] A為標準曲線中的含量。
[0054]經(jīng)檢測，本發(fā)明的竹葉提取物含總黃酮1.05kg(5.8wt % )。
[0055]實施例2制備竹葉提取物B
[0056] 步驟一，將竹葉粉碎至20目，取80kg竹葉干粉投入反應釜，加入320kg稀釋乙醇 (醇:水= 2:1)，浸泡4小時；
[0057]步驟二，在反應釜中加入320kg水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到40°C，加入纖維 素酶1200萬單位，以每分鐘80轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45 °C ;
[0058]步驟三，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4小時，濾出浸出液M 450kg備用，保留固體殘 渣于反應爸中；
[0059]步驟四，在反應釜中加入450kg水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到45°C，將6.4kg糊 精與12.8kg水混合，溶解，加入α淀粉酶12.8萬單位，攪拌均勻，將該混合物投入反應釜，以 每分鐘80轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45°C;
[0060]步驟五，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4小時，濾出浸出液N 500kg;
[0061 ] 步驟六，將浸出液Μ和浸出液N混合，回收乙醇，濃縮，干燥得竹葉提取物10.5kg。 [0062]經(jīng)檢測(方法同實施例1)，該竹葉提取物含總黃酮0.23kg(2.2wt % )。
[0063]實施例3制備竹葉提取物C
[0064] 步驟一，將竹葉粉碎至100目，取100kg竹葉干粉投入反應爸，加入200kg稀釋乙醇 (醇:水= 2:1)，浸泡12小時；
[0065]步驟二，在反應釜中加入200kg水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到40°C，加入纖維 素酶3000萬單位，以每分鐘100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在55°C;
[0066]步驟三，停止加熱和攪拌，靜置沉淀8小時，濾出浸出液M 300kg備用，保留固體殘 渣于反應爸中；
[0067]步驟四，在反應釜中加入300kg水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到45°C，將15kg糊 精與30kg水混合，溶解，加入α淀粉酶30萬單位，攪拌均勻，將該混合物投入反應釜，以每分 鐘100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在55°C;
[0068] 步驟五，停止加熱和攪拌，靜置沉淀8小時，濾出浸出液N 350kg;
[0069] 步驟六，將浸出液Μ和浸出液N混合，回收乙醇，濃縮，干燥得竹葉提取物12.5kg。
[0070] 經(jīng)檢測(方法同實施例1)，該竹葉提取物含總黃酮1.2kg(9.6wt%)。
[0071] 實施例4竹葉提取物治療小鼠酒精性肝損傷試驗
[0072] 一、動物準備
[0073] 將48只小鼠隨機分成6組，每組8只，編號G1、G2、G3、G4、G5、G6，分別為空白對照組 和酒精組和4個試驗組，每組10只小鼠。
[0074] 二、試驗過程
[0075]將本發(fā)明的竹葉提取物A、B和C(分別按實施例1、2和3制備)分別配成如下表1所列 濃度，共喂養(yǎng)3周。以Dyets公司生產(chǎn)的Lieber-Decarli液體小鼠糧食飼喂，喂食及給藥方案 見圖1、表1。試驗前5天，每天以液體飼料飼喂小鼠，試驗第6天開始連續(xù)10天，空白組小鼠依 舊以液體飼料飼喂，酒精組及試驗組在飼料中添加5%的酒精飼喂，同時在試驗組的飲用水 中添加相應百分比的竹葉提取物，在試驗的最后一天，給酒精組及試驗組用35%酒精灌胃， 空白組以麥芽糊精灌胃，灌胃9小時后，麻醉小鼠，取血及其他待測組織，冷凍保存待用。 [0076] 表1小鼠分組給藥量 [0077]
[0078]三、實驗結(jié)果
[0079] 1、AST、ALT 測定
[0080] 采用速率法測定小鼠血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (ALT)，試劑盒購自上海申索佑福醫(yī)學診斷用品有限公司。結(jié)果如圖2、圖3所示。
[0081 ] 2、甘油三脂測定
[0082] 采用酶法測定小鼠肝臟甘油三酯，試劑盒購自上海申索佑福醫(yī)學診斷用品有限公 司。結(jié)果如圖4所示。
[0083] 四、結(jié)論：
[0084] 試驗結(jié)果表明：與空白對照組相比，酒精能夠?qū)е赂闻K損害(血清轉(zhuǎn)氨酶升高，肝 臟甘油三脂升高），不同劑量的本發(fā)明的竹葉提取物能夠減輕酒精導致的血清轉(zhuǎn)氨酶升高 和脂肪肝，證實本發(fā)明的竹葉提取物對酒精導致的肝臟損害具有一定的治療功能。
[0085]本發(fā)明所涉及的多個方面已做如上闡述。然而，應理解的是，在不偏離本發(fā)明精神 之前提下，本領域?qū)I(yè)人員可對其進行等同改變和修飾，所述改變和修飾同樣落入本申請 所附權利要求的覆蓋范圍。
【主權項】
1. 竹葉提取物在制備防治酒精性肝損傷的藥物或食品中的應用，所述竹葉提取物含有 2~10wt%竹葉總黃酮。2. 如權利要求1所述的竹葉提取物的應用，其特征在于，所述竹葉總黃酮的含量為 5 · 8wt% 〇3. 如權利要求1所述的竹葉提取物的應用，其特征在于，所述竹葉提取物由如下方法制 得： 步驟一，將竹葉粉碎至20~100目，投入反應爸，加入竹葉粉重量2~4倍量的用乙醇與 水按照2:1的體積比形成的混合溶液，浸泡4~12小時； 步驟二，在反應爸中加入竹葉粉重量2~4倍量的水，攪拌加熱至反應爸內(nèi)溫度達到40 ~45°C，加入纖維素酶，所述纖維素酶的用量為每千克竹葉粉加入纖維素酶15~50萬單位， 以每分鐘50~100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12~36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45~55 °C之間； 步驟三，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4~8小時，濾出浸出液Μ備用，保留固體殘渣于反應 釜中； 步驟四，在反應釜中加入與浸出液Μ等量的水，攪拌加熱至反應釜內(nèi)溫度達到40~45 °C，將相當于竹葉粉重量0.08~0.15倍量的糊精與水按照1:2的重量比混合，溶解，加入α淀 粉酶，所述α淀粉酶的用量為每千克糊精加入α淀粉酶2萬單位，攪拌均勻，將該混合物投入 反應釜，以每分鐘50~100轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速攪拌，反應12~36小時，控制反應釜內(nèi)溫度在45~55°C 之間； 步驟五，停止加熱和攪拌，靜置沉淀4~8小時，濾出浸出液N; 步驟六，將浸出液Μ和浸出液N混合，回收乙醇，濃縮，干燥。
【文檔編號】A61K36/899GK106039094SQ201610633775
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月4日 公開號201610633775.1, CN 106039094 A, CN 106039094A, CN 201610633775, CN-A-106039094, CN106039094 A, CN106039094A, CN201610633775, CN201610633775.1
【發(fā)明人】許海良
【申請人】上海海中實業(yè)有限公司