一種油用牡丹葉片多酚的提取方法【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種油用牡丹葉片多酚的提取方法，該方法包括如下步驟：稱取油用牡丹幼嫩葉葉片粉末，對(duì)牡丹葉片粉末進(jìn)行內(nèi)部滲透解吸，解吸后的混合料液中瞬間加入70?90℃的醇溶液作為提取劑，恒溫提取，離心，提取液經(jīng)減壓回收醇溶劑后冷凍干燥，制得油用牡丹葉片多酚提取物。本發(fā)明采用非常規(guī)技術(shù)提取高品質(zhì)多酚類物質(zhì)，制備而得的油用牡丹多酚提取物中總酚重量含量為可達(dá)15.51mg/g，具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、提取速度快、效率高、耗能少、收率高等優(yōu)點(diǎn)，而且還解決了設(shè)備投資大的問(wèn)題，同時(shí)本發(fā)明制備過(guò)程中還可減少對(duì)產(chǎn)品的污染和電源輻射等問(wèn)題?！緦＠f(shuō)明】一種油用牡丹葉片多酚的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)副產(chǎn)品深加工及綜合利用領(lǐng)域，更具體地涉及一種用于提取油用牡丹葉片多酚的方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]植物單寧(Vegetabletannins)，又稱植物多酸(PlantPolyphenol)，是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚類化合物，在維管植物中的含量?jī)H次于纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，廣泛存在于植物的皮、根、葉、果中，含量可達(dá)20%。植物單寧是植物的次生代謝產(chǎn)物，屬于天然有機(jī)化合物。多酚具有較強(qiáng)的抗氧化功效，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌紊亂，促進(jìn)新陳代謝，調(diào)理心腦血管，延緩衰老等，對(duì)慢性病具有較好的預(yù)防作用。此外，以色列的研究人員發(fā)現(xiàn)在進(jìn)食高脂食物的同時(shí)攝入多酚可以減輕高脂食物對(duì)人體健康的威脅，這是首次發(fā)現(xiàn)該類化合物可以有效地預(yù)防高脂食物在人體內(nèi)產(chǎn)生的衍生物對(duì)人體產(chǎn)生不利的影響。[0003]近年來(lái)，植物類多酚的開(kāi)發(fā)利用越來(lái)越多，如蘋果渣多酚的提取，食用茶葉中茶多酚的提取，葡萄籽中多酚的提取，朝鮮蘚葉片中多酚的提取，板栗種皮中多酚的提取等。植物多酚是一類豐富的資源，它具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗腫瘤等多種生理功能。從人類健康和資源利用看，植物多酚必將得到更廣泛的應(yīng)用，因此，如何正確、合理、科學(xué)地開(kāi)發(fā)多酚，將成為研究者的重要課題。[0004]牡丹(PeaoniasuffruticosaAndr.)屬茍藥科茍藥屬灌木，是我國(guó)特有的藥用及觀賞花卉資源，近年來(lái)人們逐漸意識(shí)到牡丹籽的油用價(jià)值，于是油用牡丹這一概念邊應(yīng)運(yùn)而生。油用牡丹指的是芍藥科芍藥屬牡丹組植物中產(chǎn)籽出油率高(大于或等于22%)的種的統(tǒng)稱，含油率可達(dá)到24.12%-37.83%，不飽和脂肪酸的含量可達(dá)到92.0%，其中α-亞麻酸含量為32%-67%，高于山茶油、核桃油、葵花籽油、花生油和芝麻油等常見(jiàn)食用油，是有"液體黃金"之稱的橄欖油的50多倍，被稱為"植物腦黃金"。隨著油用牡丹資源的全面開(kāi)發(fā)利用，人們對(duì)其各部位成分及藥理作用的研究越來(lái)越多。據(jù)報(bào)道，牡丹根含有芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰、丹皮酚等，還含0.15%-0.4%的揮發(fā)油、苯甲酸和植物留醇等。油用牡丹除了其根皮是一種重要的中藥外，其花還具有重要的藥用價(jià)值和抗氧化的功效。而對(duì)油用牡丹葉片的研究多從栽培學(xué)角度進(jìn)行考慮，功能性成分研究鮮有報(bào)道。[0005]隨著國(guó)家和各級(jí)政府對(duì)油用牡丹產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重視，全國(guó)各地開(kāi)始大規(guī)模發(fā)展油用牡丹種植基地。但油用牡丹實(shí)生苗定植后3-4年才進(jìn)入產(chǎn)量期，那么前期如何確保種植效益?油用牡丹葉片多酚的開(kāi)發(fā)利用便是一個(gè)值得探索的途徑。據(jù)報(bào)道，牡丹中的多酚還可以延長(zhǎng)人體內(nèi)其它抗氧化劑如維生素Ε、維生素C的作用時(shí)間，并可以促進(jìn)血管舒張，降低炎癥反應(yīng)和降低血凝塊形成，從而起到預(yù)防心血管病的作用。也就是說(shuō)，從牡丹中提取的多酚物質(zhì)內(nèi)服可以預(yù)防心腦血管疾病，延緩衰老，改善面部肌膚干燥、粗糙，淡化色斑等;外用還可以具有美白、保濕、改善皮膚晦暗、發(fā)黃、延緩皮膚衰老等功效。[0006]《食品科學(xué)》期刊2008年報(bào)道了牡丹不同部位多酚含量的研究，采用的方法是：將牡丹葉片在55°C烘箱中進(jìn)行烘干，然后用粉碎機(jī)粉碎，各10g放入500ml三角瓶中，按1:1的料液比加入80%的乙醇進(jìn)行浸提，再將其放入55°C恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提，反復(fù)浸提3次，每次12h，收集浸提液，即為粗提液，然后經(jīng)過(guò)沉淀、調(diào)pH值、離心、沉淀物、硫酸轉(zhuǎn)溶、乙酸乙酯萃取等牡丹多酚粗成品，但該過(guò)程僅對(duì)后期多酚沉淀進(jìn)行優(yōu)化條件探索并未對(duì)前期提取進(jìn)行工藝優(yōu)化，且提取時(shí)間長(zhǎng)、提取成本高。另外《一種牡丹花多酚的提取工藝》（申請(qǐng)?zhí)朇N201410040798.2)，公開(kāi)了利用牡丹花瓣為原料，按照料液比1:500加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液，在溫度為30°C的水浴鍋中，進(jìn)行超聲波提取，提取時(shí)間為20min，功率為1000w，最終得到產(chǎn)品。該方法存在著儀器設(shè)備投入大，電源輻射等問(wèn)題，且提取率僅為0.393%?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0007]為了充分利用和開(kāi)發(fā)油用牡丹資源，彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于以牡丹葉片為原料，通過(guò)對(duì)提取工藝的改進(jìn)和技術(shù)參數(shù)的優(yōu)化，提供一種油用牡丹葉片多酚的提取方法，該方法操作安全、耗時(shí)短、收率高、成本低，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和良好的產(chǎn)業(yè)化前景。[0008]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過(guò)大量試驗(yàn)研究并不懈探索，最終獲得了如下技術(shù)方案:一種油用牡丹葉片多酚的提取方法，該提取方法包括如下步驟：[0009]1)以油用牡丹幼嫩葉為原料，將嫩葉經(jīng)液氮速凍或冷凍干燥后充分研磨成粉末；[0010]2)稱取步驟1)預(yù)處理后的葉片粉末，加入3-8倍、體積分?jǐn)?shù)為50-90%的常溫醇溶液作為解吸劑，對(duì)牡丹葉片粉末進(jìn)行內(nèi)部滲透解吸，解吸時(shí)間為l〇_3〇min;[0011]3)在步驟2)解吸后的混合料液中瞬間加入相當(dāng)于解吸劑3-7倍量、70-90°C的醇溶液作為提取劑，保持提取劑的溫度進(jìn)行恒溫提取，然后離心，倒出上清液，得首次提取液，備用；[0012]4)將離心后得到的提取物殘?jiān)貜?fù)步驟2)和步驟3)至少一次，得再次提取液；[0013]5)將首次提取液和再次提取液合并后，減壓回收醇溶劑，7令凍干燥后，制得油用牡丹葉片多酚提取物。[0014]優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟2)中的醇溶液為甲醇或乙醇的水溶液。[0015]進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟2)中的醇溶液為體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇水溶液。[0016]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟2)中加入解吸劑乙醇溶液的體積為油用牡丹葉片粉末重量的5倍。[0017]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟2)中乙醇溶液的解吸時(shí)間為15min。[0018]優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中加入的提取劑為體積分?jǐn)?shù)為30%-50%的乙醇水溶液。[0019]進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中的恒溫提取時(shí)間為3_8min。[0020]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中加入的提取劑為體積分?jǐn)?shù)為35%-40%的乙醇水溶液。[0021]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中加入的提取劑的體積為步驟2)中解吸劑體積的3倍。[0022]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中瞬間加入的提取劑溫度為80_85°C。[0023]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中的恒溫提取時(shí)間為5min。[0024]優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中步驟3)中所述旋轉(zhuǎn)離心，轉(zhuǎn)速為8000-16000rpm,離心時(shí)間為2_8min。優(yōu)化轉(zhuǎn)速為14000rpm,離心時(shí)間為3min。[0025]再進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其中的油用牡丹品種為芍藥科芍藥屬牡丹組植物鳳丹P.ostiiT.HongetJ.X.zhang。[0026]在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法包括如下步驟:稱取步驟1)中預(yù)處理后的鳳丹葉片粉末，加入5倍體積的體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液解吸15min，然后瞬間加入3倍于解吸劑體積、溫度為85°C且體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液并保持在85°C進(jìn)行恒溫提取，提取時(shí)間為5min。[0027]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以油用牡丹幼葉為原料，選用未進(jìn)入產(chǎn)量期的油用牡丹葉片為原料提取活性物質(zhì)，一方面提升了牡丹葉片的價(jià)值，變廢為寶，實(shí)現(xiàn)了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)廢棄物的資源化利用；另一方面填補(bǔ)了油用牡丹幼苗期產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，有效提高了油用牡丹的利用率。采用非常規(guī)技術(shù)提取高品質(zhì)多酚類物質(zhì)，制備而得的油用牡丹多酚提取物中總酚重量含量為可達(dá)15.51mg/g，具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、提取速度快、效率高、耗能少、收率高等優(yōu)點(diǎn)，而且還解決了設(shè)備投資大的問(wèn)題，同時(shí)本發(fā)明制備過(guò)程中還可減少對(duì)產(chǎn)品的污染和電源輻射等問(wèn)題，為油用牡丹的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)?！靖綀D說(shuō)明】[0028]圖1為解吸劑濃度對(duì)多酚提取率的影響圖；[0029]圖2為解吸劑用量對(duì)多酚提取率的影響圖；[0030]圖3為解吸時(shí)間對(duì)多酚提取率的影響圖；[0031]圖4為提取劑濃度對(duì)多酚提取率的影響圖；[0032]圖5為提取劑用量對(duì)多酚提取率的影響圖；[0033]圖6為提取劑溫度對(duì)多酚提取率的影響圖；[0034]圖7為提取時(shí)間對(duì)多酚提取率的影響圖；[0035]圖8為不同工藝提取對(duì)多酚提取率的影響圖。【具體實(shí)施方式】[0036]以下采用實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明方法的實(shí)施過(guò)程和有益效果，實(shí)施例僅用于例證的目的，并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，同時(shí)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明所做的顯而易見(jiàn)的變換或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。[0037]實(shí)施例1:油用牡丹葉片多酚的提取工藝參數(shù)優(yōu)化[0038]將油用牡丹幼嫩葉經(jīng)液氮速凍后充分研磨成粉末，4°C保存?zhèn)溆?。稱取l.Og備用的鳳丹牡丹葉片粉末于5ml燒杯中，用3-8ml體積分?jǐn)?shù)為50-90%的乙醇溶液作為解吸劑進(jìn)行濕潤(rùn)滲透解吸，解吸10_30min;然后瞬間加入15-35ml、溫度為70-90°C、體積分?jǐn)?shù)為30-50%的乙醇溶液作為提取劑，保持提取劑溫度恒溫提取3-8分鐘，旋轉(zhuǎn)離心，轉(zhuǎn)速為14000rpm，離心時(shí)間為3min，倒出上清液，濾渣按上述方法再提取一次，將濾液與第一次的濾液合并。用移液管準(zhǔn)確移取20μ1油用牡丹葉片提取液于10ml離心管中，依次加入3.8ml蒸餾水和2.OmlFolin-Ciocalten試劑，充分震蕩后靜置4-5min，再依次加入10%的Na2C03溶液2.0ml和70%的乙醇溶液2.0ml，在25°C的條件下恒溫反應(yīng)2h，在765nm下測(cè)定吸光度。結(jié)合繪制的多酚類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算多酚提取率，計(jì)算公式為：[0039]多酸提取率=樣品中多酸的含量/樣品的質(zhì)量[0040]本發(fā)明選取解吸劑濃度、解吸劑用量、解吸時(shí)間、提取劑濃度、提取劑用量、提取劑溫度和提取時(shí)間7個(gè)因素為單因素，它們對(duì)多酚的提取率影響見(jiàn)圖1、圖2、圖3、圖4、圖5、圖6和圖7。綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果，在解吸過(guò)程中選取解吸劑用量為5mL，在提取的過(guò)程中選取提取時(shí)間為5min，提取劑用量15ml，然后設(shè)計(jì)L9(34)即4因素3水平正交試驗(yàn)，見(jiàn)表1，考察解吸劑濃度、解吸時(shí)間、提取劑濃度、提取溫度對(duì)油用牡丹葉片多酚類物質(zhì)提取的影響，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。[0041]表1考察因素與水平對(duì)比表[0042][0043]表2正交試驗(yàn)結(jié)果[0044][0046]注:K表示任意列上水平號(hào)為i時(shí)所對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)結(jié)果的平均值;R表示極差，用最大的K減去最小的K。[0047]試驗(yàn)選取解吸劑濃度、解吸時(shí)間、提取劑濃度、提取溫度作為油用牡丹葉片多酚提取的考察因素，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2,極差R值反應(yīng)了各因素對(duì)多酚浸出率的貢獻(xiàn)大小，因此各因素對(duì)油用牡丹葉片多酚浸出率貢獻(xiàn)大小由高到低依次為解吸時(shí)間、提取溫度、解吸劑濃度和提取劑濃度，浸提的最佳組合為&B3C3D3,即作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明的優(yōu)選工藝參數(shù)為:稱取備用的鳳丹葉片粉末，加入5倍體積的體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液解吸15min，然后瞬間加入3倍于解吸劑體積的溫度為85°C體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液并保持在85°C進(jìn)行恒溫提取，提取時(shí)間為5min。在此條件下油用牡丹葉片多酚的提取率可達(dá)到15.51mg/g。[0048]實(shí)施例2:不同工藝提取油用牡丹葉片多酚提取率的比較[0049]試驗(yàn)設(shè)置3中不同優(yōu)化工藝提取油用牡丹葉片多酚，方法1為《一種牡丹花多酚的提取工藝》（申請(qǐng)?zhí)朇N201410040798.2)公開(kāi)的方法，選用油用牡丹葉片為原料，進(jìn)行優(yōu)化后的工藝為:按照料液比1:15加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液，在溫度為80°C的水浴鍋中，進(jìn)行超聲波提取，提取時(shí)間為35min，功率為lOOOw，得到粗提液;方法2為《食品科學(xué)》期刊2008年報(bào)道的牡丹不同部位多酚含量的研究疑問(wèn)所采用的方法:將牡丹葉片在55°C烘箱中進(jìn)行烘干，然后用粉碎機(jī)粉碎，各1〇g放入500ml三角瓶中，按1:1的料液比加入80%的乙醇進(jìn)行浸提，再將其放入55°C恒溫水浴鍋中進(jìn)行浸提，反復(fù)浸提3次，每次12h，收集浸提液，即為粗提液;方法3為本發(fā)明實(shí)施例1優(yōu)化工藝方法。用移液管依次準(zhǔn)確移取上述3種方法所得的油用牡丹葉片粗提液各20ul于3支10ml離心管中，依次加入3.8ml蒸餾水和2.0mlFolin-(^〇〇&1七611試劑，充分震蕩后靜置4-51^11，再依次加入10%的似2〇)3溶液2.01111和70%的乙醇溶液2.〇1111，在25°(：的條件下恒溫反應(yīng)211，在76511111下測(cè)定吸光度。并計(jì)算多酚提取率。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3和圖8。[0050]表3不同工藝提取油用牡丹葉片多酚的提取率[0052]注:字母表示在P<0.05條件下差異顯著性分析結(jié)果，相同字母表示差異不顯著，不同字母代表差異性顯著。[0053]由表3和圖8的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同工藝對(duì)油用牡丹葉片多酚的提取率差異顯著，方法3即本發(fā)明的多酚提取率明顯高于方法1和方法2,前后相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Ρ<0·05)?！局鳈?quán)項(xiàng)】1.一種油用牡丹葉片多酚的提取方法，該提取方法包括如下步驟：1)以油用牡丹幼嫩葉為原料，將嫩葉經(jīng)液氮速凍或冷凍干燥后充分研磨成粉末；2)稱取步驟1)預(yù)處理后的葉片粉末，加入3-8倍、體積分?jǐn)?shù)為50-90%的常溫醇溶液作為解吸劑，對(duì)牡丹葉片粉末進(jìn)行內(nèi)部滲透解吸，解吸時(shí)間為10_30min;3)在步驟2)解吸后的混合料液中瞬間加入相當(dāng)于解吸劑3-7倍量、70-90Γ的醇溶液作為提取劑，保持提取劑的溫度進(jìn)行恒溫提取，然后離心，倒出上清液，得首次提取液，備用；4)將離心后得到的提取物殘?jiān)貜?fù)步驟2)和步驟3)至少一次，得再次提取液；5)將首次提取液和再次提取液合并后，減壓回收醇溶劑，冷凍干燥后，制得油用牡丹葉片多酚提取物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟2)中所述的醇溶液為甲醇或乙醇的水溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟2)中所述的醇溶液為體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟2)中加入解吸劑乙醇溶液的體積為油用牡丹葉片粉末質(zhì)量的5倍。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟3)中加入的提取劑為體積分?jǐn)?shù)為30%-50%的乙醇水溶液。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟3)中的恒溫提取時(shí)間為3_8min。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟3)中加入的提取劑為體積分?jǐn)?shù)為35%-40%的乙醇水溶液。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟3)中加入的提取劑的體積為步驟2)中解吸劑體積的3倍。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，步驟3)中所述離心步驟的轉(zhuǎn)速為8000-16000rpm,離心時(shí)間為2-8min。10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的油用牡丹葉片多酚的提取方法，其特征在于，所述的油用牡丹品種為芍藥科芍藥屬牡丹組植物鳳丹P.ostiiT.HongetJ.X.zhang?！疚臋n編號(hào)】A61K127/00GK106063828SQ201610447218【公開(kāi)日】2016年11月2日【申請(qǐng)日】2016年6月20日公開(kāi)號(hào)201610447218.0,CN106063828A,CN106063828A,CN201610447218,CN-A-106063828,CN106063828A,CN106063828A,CN201610447218,CN201610447218.0【發(fā)明人】戢小梅,陳法志,李秀麗,譚慶,鄭承翔,陳鎮(zhèn),楊陽(yáng)【申請(qǐng)人】武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院林業(yè)果樹(shù)科學(xué)研究所