一種藏紅花素的酵母微膠囊及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藏紅花素的酵母微膠囊及其制備方法，以水梔子果實經(jīng)提取、純化、冷凍干燥制備的凍干粉為芯材，酵母細胞為包埋壁材，經(jīng)水浴恒溫振蕩、離心、冷凍干燥制備得到酵母微膠囊產(chǎn)品，不僅保留了藏紅花素的抗心肌缺血缺氧、改善行為認知、抗脂質(zhì)過氧化、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等特性，而且為藏紅花素吸收率較低的問題提供了解決方案，增加了藏紅花素的穩(wěn)定性；干燥粉末狀的微膠囊更易于保存應用。酵母微膠囊安全、無毒、營養(yǎng)豐富等特點也使其在食品藥品制備應用上具有優(yōu)勢。
【專利說明】
一種藏紅花素的酵母微膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種藏紅花素的酵母微膠囊及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鸞尾科植物番紅花(Crocus sativus L )和茜草科植物梔子(Gar den i ajasminoides Ellis)中含有藏紅花素以及藏紅花酸，其中藏紅花素是西紅花和梔子的水溶性類胡蘿卜素的天然活性成分。藏紅花素多用于醫(yī)藥、保健、食品添加及工業(yè)染料方面，在藥理方面藏紅花素及其代謝產(chǎn)物藏花酸具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂、增加膽汁分泌量、增強免疫力等功能，但由于通過血液循環(huán)吸收多存在吸收率不高的問題，其吸收利用率較低。藏紅花素的微膠囊技術(shù)可為該問題提供新的解決思路。
[0003]微膠囊是一種聚合物壁殼的微型容器或包裝物，包括壁材和芯材兩部分，是具有半透性或密封性的微小粒子。微膠囊應用廣泛于食品、醫(yī)藥、紡織、涂料、農(nóng)業(yè)、化妝品工業(yè)。它具有改善物料狀態(tài)、體積的性能，能夠去除雜質(zhì)、提高芯材穩(wěn)定性、隔離組分、掩蓋不良味道、降低揮發(fā)性、控制芯材釋放等。現(xiàn)今，微膠囊的制備材料大部分是水溶性的，其中包含了合成的材料。而且目前常用的微膠囊方法多為復凝聚法和噴霧干燥法等物理化學方法，但均有化學試劑殘留、設(shè)備昂貴等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了一種藏紅花素的酵母微膠囊及其制備方法，通過對水梔子果實中藏紅花素進行提取、分離、純化、冷凍干燥制得凍干粉，另以酵母細胞為壁材，使藏紅花素與酵母細胞高頻度接觸進入酵母細胞，再經(jīng)離心、水洗除雜制得。本方法具有制備設(shè)備簡單、藥物活性穩(wěn)定、酵母微膠囊操作條件溫和、能控制藥物緩慢釋放的特點，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是:
[0006]—種藏紅花素的酵母微膠囊的制備方法，所述酵母微膠囊中，酵母細胞為包埋壁材，藏紅花素為芯材，該制備方法包括:
[0007]a)取粒徑為30?70目的水梔子果實粉末，加入10?35倍量(質(zhì)量-體積比)的10?90% (質(zhì)量濃度)乙醇，常溫下用頻率30?50kHz，功率150?600W超聲提取I?4次，每次10?150min，過濾，合并濾液；
[0008]期間采用HPLC法測定藏紅花素含量。濾液減壓濃縮蒸干，乙醇溶解，定容為10mL，用微孔濾膜過濾器過濾，取0.2mL用乙醇稀釋至1mL，得樣品制備液，用于HPLC檢測，條件:Dikma kromasil C18(4.6mmX 250mm，5μηι)色譜柱，甲醇-水洗脫(50: 50)，流速為1.0mL/min，柱溫25 °C，檢測波長為440nm，進樣量1yL，后繪制標準曲線。
[0009]b)步驟a)的合并后的濾液用ADS-5、ADS-8、ADS-7、ADX-17、D-101等大孔樹脂處理精制，吸附流速I?3BV/h，吸附飽和后用含有0.05?0.2mol/L HCl的40?90 %乙醇為洗脫劑，在45?55°C、解吸流速I?3BV/h下洗脫3?5BV;洗脫液濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉；
[0010]C)取干酵母，加入18?22倍量的4?6% (質(zhì)量濃度)NaCl溶液，52?56°C水浴振蕩4?I Oh后，離心，洗滌，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0011]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比(即藏紅花素凍干粉與預處理后的酵母細胞的質(zhì)量比)為1:0.2?5的比例混合，加入18?22倍量的水，20?80°C下，恒溫水浴振蕩包埋I?12h后，離心，洗滌，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為80?90%。
[0012]上述步驟涉及的計算公式:
[0013]吸附量=【(上樣液中藏紅花素質(zhì)量濃度-吸附平衡后上清液中藏紅花素質(zhì)量濃度)X溶液體積】/樹脂質(zhì)量
[0014]解吸率=(提取液中藏紅花素質(zhì)量濃度X提取液體積)/(吸附量X樹脂質(zhì)量)X100%
[0015]純度=上柱后所得藏紅花素質(zhì)量/干燥后所得水梔子果質(zhì)量X100%
[0016]收率=上柱后所得藏紅花素質(zhì)量/上樣液相當?shù)乃畻d子干果質(zhì)量X100%
[0017]酵母微膠囊包埋率的計算:
[0018]測定方法通過酵母細胞包埋前后干燥后的質(zhì)量差來計算包埋率:W% = (ma-mb)/ma*100%;式中:W(%)為包埋率，mb為包埋前凍干酵母細胞的質(zhì)量，ma為包埋后獲得的酵母細胞總質(zhì)量。
[0019]一實施例中:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-1OI大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?I Ih后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為87?88%。
[0020]一實施例中:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-1OI大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的45?55%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩7.5?8.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?I Ih后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為85?86%。
[0021]一實施例中:所述步驟a)中，加入19?21倍量的45?55%乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-1OI大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的45?55%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?I Ih后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為86?87%。
[0022]一實施例中:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次55?65min ；所述步驟b)中，用D-1OI大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，45?55 °C下，恒溫水浴振蕩包埋9?I Ih后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為85?86%。
[0023]一實施例中:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取I?3次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用ADS-5大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?7 5 °C下，恒溫水浴振蕩包埋7?9h后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為88?89%。
[0024]一實施例中:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次85?95min ；所述步驟b)中，用D-1OI大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:2?4的比例混合，加入19?21倍量的水，45?55°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?I Ih后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為83?84%。
[0025]一實施例中:所述步驟a)中，加入24?26倍量的45?55%乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取I?3次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-1OI大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，55?65°C下，恒溫水浴振蕩包埋7?9h后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為86?87%。
[0026]一實施例中:所述步驟a)中，加入29?31倍量的45?55%乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取I?2次，提取25?35min ；所述步驟b)中，用ADX-17大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV；所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5 %NaCl溶液，53?55°(:水浴振蕩4.5?5.5h ；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，25?35 °C下，恒溫水浴振蕩包埋4?6h后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為85?86%。
[0027]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是:
[0028]—種根據(jù)上述制備方法所制備的藏紅花素的酵母微膠囊，所述酵母微膠囊中，酵母細胞為包埋壁材，藏紅花素為芯材，其包埋率為80?90 %。
[0029]本技術(shù)方案與【背景技術(shù)】相比，它具有如下優(yōu)點:
[0030]本發(fā)明利用不同的滲透壓，使藏紅花素滲透過酵母細胞壁進入細胞內(nèi)，形成以酵母細胞為包埋壁材、藏紅花素為芯材的微膠囊，酵母本身作為天然材料，相比傳統(tǒng)合成的水溶性材料，柔韌度，韌性與穩(wěn)定性更強，能夠保證細胞的完整性和存活率，制成的酵母微膠囊既保留了藏紅花素的抗心肌缺血缺氧、改善行為認知、抗脂質(zhì)過氧化、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等特性，也具有酵母本身的豐富營養(yǎng)物質(zhì)。且該藏紅花素的酵母微膠囊無毒性，生物相容性高，在水中分散性優(yōu)良，能夠?qū)崿F(xiàn)藥物緩慢釋放，藥物生物活性穩(wěn)定;微膠囊的大小均在幾十微米級，凍干后成粉末狀，方便應用，易保存；制取條件溫和、制取設(shè)備簡單、操作方便，基本不需要引入有毒有害化學試劑，沒有溶劑殘留的危險，非常適合藥物和食品添加劑的包埋;同時酵母可以使發(fā)酵工廠回收的廢酵母，來源廣泛、價格低廉，易生物降解，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0031]圖1為本發(fā)明的工藝流程示意圖。
【具體實施方式】
[0032]下面通過實施例具體說明本發(fā)明的內(nèi)容:
[0033]實施例1
[0034]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入12倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取3次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0035]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.38%，純度為85.34%;
[0036]c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0037]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，70°C下，恒溫水浴振蕩包埋1h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為87.24%。
[0038]實施例2
[0039]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入12倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取3次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0040]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.1mo I/L HCl的50 %乙醇為洗脫劑，在50 °C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.21%,純度為85.34%；
[0041 ] c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩8h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0042]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，70°C下，恒溫水浴振蕩包埋1h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為85.5%。
[0043]實施例3
[0044]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入20倍量的50%乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取3次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0045]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.1mo I/L HCl的50 %乙醇為洗脫劑，在50 °C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.83%，純度為83.21%;
[0046]c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0047]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，70°C下，恒溫水浴振蕩包埋1h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為86.35%。
[0048]實施例4
[0049]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入12倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率400W超聲提取3次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0050]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.78%,純度為86.37%；
[0051 ] c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0052]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，70°C下，恒溫水浴振蕩包埋1h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為83.42 %。
[0053]實施例5
[0054]a)取水梔子果100g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入12倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取3次，每次60min，過濾，合并濾液；
[0055]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.25%,純度為83.15%；
[0056]c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0057]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:3的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，50°C下，恒溫水浴振蕩包埋1h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為85.14%。
[0058]實施例6
[0059]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入12倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率200W超聲提取2次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0060]b)步驟a)的合并后的濾液用ADS-5大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.22%，純度為83.24%;
[0061 ] c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0062]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，70°C下，恒溫水浴振蕩包埋Sh后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為88.75%。
[0063]實施例7
[0064]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過50目篩，加入12倍量的40%乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取3次，每次90min，過濾，合并濾液；
[0065]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.18%，純度為83.18% ;
[0066]c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0067]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:3的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，50°C下，恒溫水浴振蕩包埋1h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為83.63 %。
[0068]實施例8
[0069]a)取水梔子果100g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入25倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取2次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0070]b)步驟a)的合并后的濾液用D-101大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.19%，純度為82.54% ;
[0071 ] c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0072] d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，60°C下，恒溫水浴振蕩包埋Sh后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為86.31 %。
[0073]實施例9
[0074]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入30倍量的50%乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率300W超聲提取I次，提取30min，過濾，得濾液；
[0075]b)步驟a)的濾液用ADX-17大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80 %乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.47%，純度為83.23% ;
[0076]c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0077]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1:4的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，30°C下，恒溫水浴振蕩包埋5h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為85.96 %。
[0078]實施例10
[0079]a)取水梔子果2000g，中藥粉碎機粉碎，過40目篩，加入15倍量的50 %乙醇，常溫下用頻率40kHz，功率500W超聲提取3次，每次30min，過濾，合并濾液；
[0080]b)步驟a)的合并后的濾液用ADS-7大孔樹脂純化，大孔樹脂預處理后，裝柱，吸附流速2BV/h，吸附飽和后用含有0.lmol/L HCl的80%乙醇為洗脫劑，在50°C、解吸流速2BV/h下洗脫4BV;洗脫液抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉，藏紅花素的產(chǎn)率為1.48%,純度為86.55%；
[0081 ] c)取一定量的安琪干酵母，加入20倍量的5 % NaCl溶液，54 °C水浴振蕩5h后，5000印111離心1()1]1；[11，水洗2次，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0082]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為4:1的比例混合，加入20倍量的蒸餾水，40°C下，恒溫水浴振蕩包埋2h后，5000rpm離心1min，蒸餾水水洗3次，多次離心后，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為81.36 %。
[0083]本領(lǐng)域技術(shù)人員可知，當本發(fā)明的技術(shù)參數(shù)在如下范圍內(nèi)變化時，可以預期得到與上述實施例相同或相近的技術(shù)效果:
[0084]a)取粒徑為40?60目的水梔子果實粉末，加入12?30倍量的20?80%乙醇，常溫下用頻率30?50kHz，功率200?500W超聲提取I?3次，每次20?120min，過濾，合并濾液；
[0085]b)步驟a)的合并后的濾液用大孔樹脂處理，吸附流速I?3BV/h，吸附飽和后用含有0.05?0.2mol/L HCl的50?80%乙醇為洗脫劑，在45?55°C、解吸流速I?3BV/h下洗脫3?5BV;洗脫液濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉；
[0086]c)取干酵母，加入18?22倍量的4?6%NaCl溶液，52?56°C水浴振蕩5?8h后，離心，洗滌，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理；
[0087]d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1: 0.2?5的比例混合，加入18?22倍量的水，30?70 °C下，恒溫水浴振蕩包埋2?1h后，離心，洗滌，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為80?90%。
[0088]以上所述，僅為本發(fā)明較佳實施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種藏紅花素的酵母微膠囊的制備方法，其特征在于:所述酵母微膠囊中，酵母細胞為包埋壁材，藏紅花素為芯材，該制備方法包括: a)取粒徑為30?70目的水梔子果實粉末，加入10?35倍量的10?90%乙醇，常溫下用頻率30?50kHz，功率150?600W超聲提取I?4次，每次10?150min，過濾，合并濾液； b)步驟a)的合并后的濾液用大孔樹脂處理，吸附流速I?3BV/h，吸附飽和后用含有0.05?0.2mol/L HCl的40?90%乙醇為洗脫劑，在45?55°C、解吸流速I?3BV/h下洗脫3?5BV;洗脫液濃縮得到浸膏，冷凍干燥，制得藏紅花素凍干粉； c)取干酵母，加入18?22倍量的4?6%NaCl溶液，52?56°C水浴振蕩4?1h后，離心，洗滌，冷凍干燥，完成酵母細胞預處理； d)將步驟b)得到的藏紅花素凍干粉與步驟c)得到的預處理后的酵母細胞按照芯壁比為1: 0.2?5的比例混合，加入18?22倍量的水，20?80 °C下，恒溫水浴振蕩包埋I?12h后，離心，洗滌，冷凍干燥，即得所述之藏紅花素的酵母微膠囊，其包埋率為80?90%。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-101大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?Ilh后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為87?88%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-101大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的45?55%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩7.5?8.5h；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?Ilh后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為85?86%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入19?21倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-101大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的45?55%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?Ilh后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為86?87%。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次55?65min ；所述步驟b)中，用D-101大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h;所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，45?55 °C下，恒溫水浴振蕩包埋9?Ilh后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為85?86%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取I?3次，每次25?35min ；所述步驟13)中，用403-5大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.58￥/11，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h；所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，65?75°C下，恒溫水浴振蕩包埋7?9h后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為88?89%。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入11?13倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取2?4次，每次85?95min ；所述步驟b)中，用D-101大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h；所述步驟d)中，芯壁比為1: 2?4的比例混合，加入19?21倍量的水，45?55°C下，恒溫水浴振蕩包埋9?Ilh后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為83?84%。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入24?26倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取I?3次，每次25?35min ；所述步驟b)中，用D-101大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h;所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，55?65 °C下，恒溫水浴振蕩包埋7?9h后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為86?87%。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a)中，加入29?31倍量的45?55 %乙醇，常溫下用頻率38?42kHz，功率250?350W超聲提取I?2次，提取25?35min ；所述步驟b)中，用ADX-17大孔樹脂處理，吸附流速1.5?2.5BV/h，吸附飽和后用含有0.08?0.15mol/L HCl的75?85%乙醇為洗脫劑，在48?52°C、解吸流速1.5?2.5BV/h下洗脫3.5?4.5BV;所述步驟c)中，加入19?21倍量的4.5?5.5%NaCl溶液，53?55°C水浴振蕩4.5?5.5h;所述步驟d)中，芯壁比為1:3?5的比例混合，加入19?21倍量的水，25?35 °C下，恒溫水浴振蕩包埋4?6h后，得到的藏紅花素的酵母微膠囊包埋率為85?86%。10.—種根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的制備方法所制備的藏紅花素的酵母微膠囊，其特征在于:所述酵母微膠囊中，酵母細胞為包埋壁材，藏紅花素為芯材，其包埋率為80?90% ο
【文檔編號】A61K47/46GK106074449SQ201610696548
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月19日 公開號201610696548.3, CN 106074449 A, CN 106074449A, CN 201610696548, CN-A-106074449, CN106074449 A, CN106074449A, CN201610696548, CN201610696548.3
【發(fā)明人】湯須崇, 李東梅, 黃承生, 鄧愛華, 彭倩倩, 陳清清, 雷廷平
【申請人】華僑大學