甲萘醌作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用圖
【專利摘要】本發(fā)明通過甲萘醌或其藥學(xué)上可接受的鹽作為吲哚胺2,3?雙加氧酶?1抑制劑（IDO1）的用途，甲萘醌對于吲哚胺2,3?雙加氧酶?1的抑制作用，對IDO1在疾病發(fā)生發(fā)展中的促進(jìn)作用進(jìn)行阻礙和/或破壞，從而為治療IDO1介導(dǎo)的疾病提供良好的前景。
【專利說明】
甲萘醌作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及甲萘醌(Menadione)作為吲哚胺2,3_雙加氧酶-I(IDOl)的新用途及其 在制備治療IDOl介導(dǎo)的疾病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 吲哚胺2,3_雙加氧酶-I [EC 1.13.11.17KID01)是一種在細(xì)胞內(nèi)、單體的含血紅 素蛋白質(zhì)，催化1-色氨酸（Trp)分解代謝成犬尿氨酸途徑的第一步。IDOl代謝產(chǎn)物，N-甲 酰犬尿氨酸(N-formyIkynurenine)，進(jìn)一步代謝成其它生物活性分子。IDOl在多個(gè)組織有 表達(dá)，包括肺、小腸、胎盤、脾臟及中樞神經(jīng)。IDOl在許多細(xì)胞類型中可由炎性細(xì)胞因子(如 干擾素 γ、大腸桿菌內(nèi)毒素和腫瘤壞死因子等)刺激引起表達(dá)。IDOl也在宿主抗原提呈細(xì) 胞（APC)、單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。
[0003] IDOl已作為免疫抑制和耐受性的一種重要機(jī)制，在自身免疫性疾病、移植排斥反 應(yīng)中起到重要作用。IDOl通過消耗局部Trp的濃度，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞的形成。通過這些機(jī)制，IDO提供反饋控制的免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，如果IDO在卵巢癌、 結(jié)直腸癌及其他腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，則腫瘤病人預(yù)后較差，因而它可起到腫瘤治療的預(yù)測 作用。
[0004] IDOl作為靶點(diǎn)也可以在多種腫瘤中起作用。例如，在卵巢癌、大腸癌和子宮內(nèi)膜腫 瘤中，IDOl表達(dá)水平升高。在臨床前的模型中，IDOl通過抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)促進(jìn)腫瘤的生 長。在這些模型中，小分子抑制劑IDOl可以恢復(fù)腫瘤免疫排斥現(xiàn)象和提高常用化療藥物的 活性。這些數(shù)據(jù)支持IDOl抑制劑作為新型抗癌藥物，可與現(xiàn)有療法結(jié)合。除了治療癌癥， IDOl抑制劑對其他疾病，如膿毒癥誘發(fā)低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病、 白內(nèi)障也起到作用。這些發(fā)現(xiàn)促使對IDO抑制劑藥物的開發(fā)興趣，特別是癌癥免疫治療。最 廣泛研究的IDO抑制劑是1-甲基-色氨酸。最近的實(shí)驗(yàn)證明，1-甲基-色氨酸可與大量的臨床 相關(guān)的化療藥物聯(lián)合使用，起到協(xié)同作用。1-甲基-色氨酸與環(huán)磷酰胺、順鉑、阿霉素或紫杉 醇的組合可以治愈neu誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌模型。
[0005] 目前，國際市場上有幾類IDOl抑制劑在臨床實(shí)驗(yàn)，如新型IDOl抑制劑INCB024360 由Incyte公司開發(fā)治療晚期惡性腫瘤。然而，IDOl抑制劑總體上數(shù)量仍較少，并且實(shí)驗(yàn)室或 臨床效果仍有待提尚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明一方面涉及甲萘醌或其藥學(xué)上可接受的鹽作為一種吲哚胺2,3_雙加氧酶-1抑制劑（IDOl)的用途。
[0007] 本發(fā)明另一方面提甲萘醌或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療IDOl介導(dǎo)的疾病的 藥物中的應(yīng)用。
[0008] 在一些實(shí)施方式中，所述IDOl介導(dǎo)的疾病是指IDOl表達(dá)上調(diào)的疾病，包括但不限 于，腫瘤、膿毒癥誘發(fā)低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內(nèi)障。
[0009] 在一些實(shí)施方式中，所述腫瘤選自在卵巢癌、結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜腫瘤。在一些實(shí) 施方式中，所述疾病不包括腫瘤。
[0010] 甲萘醌的結(jié)構(gòu)式如下式所示，現(xiàn)有文獻(xiàn)顯示其抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用（馬馳. 聯(lián)合應(yīng)用甲萘醌、維生素 C和鹽霉素治療膠質(zhì)瘤的體外研究[D].吉林大學(xué)，2014)，并且與其 他抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用可以起到協(xié)同作用。甲萘醌可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當(dāng)方法 制得，一種不例性的制備方法參見 Basak, Shyam and Mal，Dipakranjan, Tetrahedron, 72(14)， 1758-1772; 2016。
[0011]
本發(fā)明預(yù)期甲萘醌的"藥學(xué)上可接受的鹽"也具有相同的活性。通常，該鹽例如通過將 游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)算量的適當(dāng)堿或酸在水中或在有機(jī)溶劑中或在兩 者的混合物中制備。通常，非水性介質(zhì)如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸 加成鹽的實(shí)例包括無機(jī)酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝酸鹽，和有 機(jī)酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽， 蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實(shí)例包括無機(jī)鹽如鈉、鉀、鈣、銨、鎂、鋁和 鋰鹽；以及有機(jī)堿如乙二胺、乙醇胺、N，N-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和堿性氨基酸 鹽。
[0012] 本發(fā)明證實(shí)了甲萘醌對于吲哚胺2,3_雙加氧酶-1的抑制作用，對IDOl在疾病發(fā)生 發(fā)展中的促進(jìn)作用進(jìn)行阻礙和/或破壞，從而為治療IDOl介導(dǎo)的疾病提供良好的前景。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 本發(fā)明現(xiàn)將結(jié)合以下實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡釋，需要說明的是，這些實(shí)驗(yàn)例不應(yīng)解釋為對 本發(fā)明的限制。
[0014] 犬尿氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 1.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（20(^1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為5〇111]\1;2(^1^ 的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為10 μΜ;4μL的5mg/ml過氧 化氫酶，終濃度為l〇〇μg/ml;132 yL的dd-H20;20yL的犬尿氨酸溶液，終濃度分別為0，1， 5， 7.5， 10， 25， 50， 75及 100 mM。
[0015] 2.加入40yL的IM NaOH溶液后，離心培養(yǎng)基（ll，500rpm, 4°C, 15min)。
[0016] 3.將200yL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測定熒光強(qiáng)度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0017] 蛋白質(zhì)定量 通過BCA法測定蛋白質(zhì)IDOl含量。在Amax 570nm處測定溶液吸收值，隨后以牛血清白蛋 白標(biāo)準(zhǔn)曲線(0-2 mg/ml)檢查，以獲得蛋白質(zhì)濃度。
[0018] 活性實(shí)驗(yàn) 1.標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為50 1111;20 yL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為100 μg/ml;20yL的 2mM左旋色氨酸，終濃度為200 μΜ;112 yL的dd-H20;20yL的ID01，終濃度為0至10 μg/ml。
[0019] 2.對照：以20yL的dd-H20替代IDOl。
[0020] 3.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲?；虬彼崴?解為犬尿氨酸。隨后離心培養(yǎng)基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0021] 4.將200yL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測定熒光強(qiáng)度(Aex 360nm，Aem 480nm)〇
[0022] 抑制試驗(yàn) 1.標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為50 1111;20 yL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為10 μΜ;4μL的5mg/ml 過氧化氫酶，終濃度為l〇〇μg/ml;112 yL的dd-H2〇;10yL的4mM左旋色氨酸，終濃度為200 μ Μ; 20yL的5 μg/ml IDOl和10 μL在DMSO中的抑制劑（1-甲基-L-色氨酸)溶液，終濃度分別 為0， 0.1， 0.5和ImM。
[0023] 2.對照（i):以IOyL的Cld-H2O替代L-色氨酸。
[0024] 3.對照（ii):以30yL的Cld-H2O替代L-色氨酸和IDOl。
[0025] 4.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲酰基犬尿氨酸水 解為犬尿氨酸。隨后離心培養(yǎng)基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0026] 5.將200yL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測定熒光強(qiáng)度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0027] 6.以公式（100-(A/Bx100 ))計(jì)算抑制率，其中A表示存在抑制劑時(shí)IDOl的活性，B 表示不存在抑制劑時(shí)IDOl的活性。結(jié)果見表1。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 甲萘醌或其藥學(xué)上可接受的鹽作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用途。2. 甲萘醌或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療ID01介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述ID01介導(dǎo)的疾病是指ID01表達(dá)上調(diào)的疾病。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其中所述ID01介導(dǎo)的疾病選自腫瘤、膿毒癥誘發(fā)低 血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內(nèi)障。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述腫瘤選自在卵巢癌、結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜腫 瘤。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述疾病不包括腫瘤。
【文檔編號】A61P27/12GK106074470SQ201610419123
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月13日 公開號201610419123.8, CN 106074470 A, CN 106074470A, CN 201610419123, CN-A-106074470, CN106074470 A, CN106074470A, CN201610419123, CN201610419123.8
【發(fā)明人】李慶, 王 忠
【申請人】中山大學(xué)