脫氫α?拉帕醌作為吲哚胺2,3?雙加氧酶?1抑制劑的用圖
【專利摘要】本發(fā)明通過天然產(chǎn)物脫氫α?拉帕醌或其藥學(xué)上可接受的鹽作為吲哚胺2,3?雙加氧酶?1抑制劑（IDO1）的用途，脫氫α?拉帕醌對于吲哚胺2,3?雙加氧酶?1的抑制作用，對IDO1在疾病發(fā)生發(fā)展中的促進(jìn)作用進(jìn)行阻礙和/或破壞，從而為治療IDO1介導(dǎo)的疾病提供良好的前景。
【專利說明】
脫氫α-拉帕醌作為η引噪胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ] 本發(fā)明涉及脫氫<1-拉帕醌((16117(11'〇-3]^1^-13。3〇11〇116)作為[1引噪胺2,3-雙加氧 酶-I(IDOl)的新用途及其在制備治療IDOl介導(dǎo)的疾病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 吲哚胺2,3_雙加氧酶-I [EC 1.13.11.17KID01)是一種在細(xì)胞內(nèi)、單體的含血紅 素蛋白質(zhì)，催化1-色氨酸（Trp)分解代謝成犬尿氨酸途徑的第一步。IDOl代謝產(chǎn)物，N-甲 酰犬尿氨酸(N-formyIkynurenine)，進(jìn)一步代謝成其它生物活性分子。IDOl在多個組織有 表達(dá)，包括肺、小腸、胎盤、脾臟及中樞神經(jīng)。IDOl在許多細(xì)胞類型中可由炎性細(xì)胞因子(如 干擾素 γ、大腸桿菌內(nèi)毒素和腫瘤壞死因子等)刺激引起表達(dá)。IDOl也在宿主抗原提呈細(xì) 胞（APC)、單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。
[0003] IDOl已作為免疫抑制和耐受性的一種重要機制，在自身免疫性疾病、移植排斥反 應(yīng)中起到重要作用。IDOl通過消耗局部Trp的濃度，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞的形成。通過這些機制，IDO提供反饋控制的免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，如果IDO在卵巢癌、 結(jié)直腸癌及其他腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，則腫瘤病人預(yù)后較差，因而它可起到腫瘤治療的預(yù)測 作用。
[0004] IDOl作為靶點也可以在多種腫瘤中起作用。例如，在卵巢癌、大腸癌和子宮內(nèi)膜腫 瘤中，IDOl表達(dá)水平升高。在臨床前的模型中，IDOl通過抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)促進(jìn)腫瘤的生 長。在這些模型中，小分子抑制劑IDOl可以恢復(fù)腫瘤免疫排斥現(xiàn)象和提高常用化療藥物的 活性。這些數(shù)據(jù)支持IDOl抑制劑作為新型抗癌藥物，可與現(xiàn)有療法結(jié)合。除了治療癌癥， IDOl抑制劑對其他疾病，如膿毒癥誘發(fā)低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病、 白內(nèi)障也起到作用。這些發(fā)現(xiàn)促使對IDO抑制劑藥物的開發(fā)興趣，特別是癌癥免疫治療。最 廣泛研究的IDO抑制劑是1-甲基-色氨酸。最近的實驗證明，1-甲基-色氨酸可與大量的臨床 相關(guān)的化療藥物聯(lián)合使用，起到協(xié)同作用。1-甲基-色氨酸與環(huán)磷酰胺、順鉑、阿霉素或紫杉 醇的組合可以治愈neu誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌模型。
[0005] 目前，國際市場上有幾類IDOl抑制劑在臨床實驗，如新型IDOl抑制劑INCB024360 由Incyte公司開發(fā)治療晚期惡性腫瘤。然而，IDOl抑制劑總體上數(shù)量仍較少，并且實驗室或 臨床效果仍有待提尚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明一方面涉及脫氫α-拉帕醌或其藥學(xué)上可接受的鹽作為一種吲哚胺2,3_雙 加氧酶-1抑制劑（IDOl)的用途。
[0007] 本發(fā)明另一方面提供脫氫α-拉帕醌或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療IDOl介導(dǎo) 的疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 在一些實施方式中，所述IDOl介導(dǎo)的疾病是指IDOl表達(dá)上調(diào)的疾病，包括但不限 于，腫瘤、膿毒癥誘發(fā)低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內(nèi)障。
[0009]在一些實施方式中，所述腫瘤選自在卵巢癌、結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜腫瘤。在一些實 施方式中，所述疾病不包括腫瘤。
[0010]脫氫α_拉帕醌的結(jié)構(gòu)式如下式所示，現(xiàn)有文獻(xiàn)顯示其具有抗血管生成作用（TO/ 2012/162627)，并且毒性很低（小鼠體內(nèi)實驗中，在高達(dá)100 mg/kg劑量時未發(fā)現(xiàn)顯著毒 性）。脫氫α-拉帕醌可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當(dāng)方法制得，一種示例性的制備方法參 見中國專利申請公布CN 105294638 Α。
[0011] 本發(fā)明預(yù)期脫氫α-拉帕醌的"藥學(xué)上可接受的鹽"也具有相同的活性。通常，該鹽 例如通過將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計算量的適當(dāng)堿或酸在水中或在有機溶 劑中或在兩者的混合物中制備。通常，非水性介質(zhì)如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是 優(yōu)選的。酸加成鹽的實例包括無機酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝 酸鹽，和有機酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽， 酒石酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實例包括無機鹽如鈉、鉀、鈣、 銨、鎂、鋁和鋰鹽；以及有機堿如乙二胺、乙醇胺、Ν，Ν-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和堿 性氨基酸鹽。
[0012] 本發(fā)明證實了天然產(chǎn)物脫氫α-拉帕醌對于吲哚胺2,3_雙加氧酶-1的抑制作用，對 IDOl在疾病發(fā)生發(fā)展中的促進(jìn)作用進(jìn)行阻礙和/或破壞，從而為治療IDOl介導(dǎo)的疾病提供 良好的前景。
【附圖說明】
[0013]圖1是脫氫α-拉帕醌對吲哚胺2，3-雙加氧酶-I (ID01)的抑制作用的曲線圖。
【具體實施方式】
[0014] 本發(fā)明現(xiàn)將結(jié)合以下實驗及附圖進(jìn)一步闡釋，需要說明的是，這些實驗例及附圖 不應(yīng)解釋為對本發(fā)明的限制。
[0015] 犬尿氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 1.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（20(^1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為5〇111]\1;2(^1^ 的0.2Μ抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為10 μΜ;4μL的5mg/ml過氧 化氫酶，終濃度為l〇〇μg/ml;132 yL的dd-H20;20yL的犬尿氨酸溶液，終濃度分別為0，1， 5， 7.5， 10， 25， 50， 75及 100 mM。
[0016] 2.加入40yL的IM NaOH溶液后，離心培養(yǎng)基（ll，500rpm, 4°C, 15min)。
[0017] 3.將200yL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測定熒光強度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0018] 蛋白質(zhì)定量 通過BCA法測定蛋白質(zhì)IDOl含量。在Amax 570nm處測定溶液吸收值，隨后以牛血清白蛋 白標(biāo)準(zhǔn)曲線(0-2 mg/ml)檢查，以獲得蛋白質(zhì)濃度。
[0019] 活性實驗 1.標(biāo)準(zhǔn)實驗培養(yǎng)基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為50 1111;20 yL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為100 μg/ml;20yL的 2mM左旋色氨酸，終濃度為200 μΜ;112 yL的dd-H20;20yL的ID01，終濃度為0至10 μg/ml。
[0020] 2.對照：以20yL的Cld-H2O替代IDOl。
[0021] 3.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲?；虬彼崴?解為犬尿氨酸。隨后離心培養(yǎng)基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0022] 4.將200yL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測定熒光強度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0023] 抑制試驗 1.標(biāo)準(zhǔn)實驗培養(yǎng)基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為50 1111;20 yL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍(lán)，終濃度為10 μΜ;4μL的5mg/ml 過氧化氫酶，終濃度為l〇〇μg/ml;112 yL的dd-H2〇;10yL的4mM左旋色氨酸，終濃度為200 μ Μ; 20yL的5 μg/ml IDOl和10 μL在DMSO中的抑制劑（1-甲基-L-色氨酸)溶液，終濃度分別 為0， 0.1， 0.5和ImM。
[0024] 2.對照（i):以IOyL的Cld-H2O替代L-色氨酸。
[0025] 3.對照（ii):以30yL的Cld-H2O替代L-色氨酸和IDOl。
[0026] 4.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲?；虬彼崴?解為犬尿氨酸。隨后離心培養(yǎng)基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0027] 5.將200yL的上清液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板上，測定熒光強度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0028] 6.以公式（100-(A/Bx100 ))計算抑制率，其中A表示存在抑制劑時IDOl的活性，B 表示不存在抑制劑時IDOl的活性。結(jié)果見圖1，從圖中得到的相關(guān)參數(shù)見表1。 Γ 00291 豐1 臘訇Π -枋釀的油剌作田
【主權(quán)項】
1. 脫氫α-拉帕醌或其藥學(xué)上可接受的鹽作為吲哚胺2,3_雙加氧酶-1抑制劑的用途。2. 脫氫α_拉帕醌或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療ID01介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述ID01介導(dǎo)的疾病是指ID01表達(dá)上調(diào)的疾病。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其中所述ID01介導(dǎo)的疾病選自腫瘤、膿毒癥誘發(fā)低 血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內(nèi)障。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述腫瘤選自在卵巢癌、結(jié)直腸癌和子宮內(nèi)膜腫 瘤。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述疾病不包括腫瘤。
【文檔編號】A61P27/12GK106074491SQ201610410369
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月13日
【發(fā)明人】李慶, 王 忠
【申請人】中山大學(xué)