Artalbic acid衍生物的組合物用于制備抗慢性阻塞性肺病藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗慢性阻塞性肺病藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有抗慢性阻塞性肺病的作用，具有開發(fā)抗慢性阻塞性肺病藥物的價(jià)值。
【專利說明】
Arta I b i c ac i d衍生物的組合物用于制備抗慢性阻塞性肺病 藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，C0PD)是一種全 球范圍內(nèi)常見的慢性病，目前在全球死亡原因中排名第四，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2020 年，coro將在全球疾病發(fā)病中排名第五，死亡原因中排名第三。
[0003] coro是一種不完全可逆的氣流受限特征的疾病，與肺部對有害氣體或有毒顆粒的 異常炎癥反應(yīng)有關(guān)，其慢性炎癥反應(yīng)遍及氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管。參與coro的細(xì)胞有中性粒 細(xì)胞、τ淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞被激活后釋放多種炎性介質(zhì)，如白三烯B 4 (LTB4)、白細(xì)胞介素8(IL-8)、RANTES、Eotaxin、腫瘤壞死因子Ct(TNFa)、基質(zhì)金屬蛋白酶9 (MMP-9)等，參與肺實(shí)質(zhì)破壞、肺血管等炎癥反應(yīng)。病理變化特征表現(xiàn)為肺泡腔炎性細(xì)胞(如 巨噬細(xì)胞)浸潤、小支氣管和細(xì)支氣管周圍灶性炎性細(xì)胞浸潤，肺組織邊緣肺泡腔擴(kuò)張、破 壞，肺泡壁變寬，其上皮細(xì)胞腫脹、變圓、部分脫落。COPD與慢性支氣管炎和肺氣腫密切相 關(guān)，但定義上有所不同，支氣管哮喘與特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，其氣流受限具可逆性(與慢性 氣管炎合并時會出現(xiàn)氣流受限不完全可逆）?，F(xiàn)在尚無藥物能遏制coro病情的進(jìn)行性發(fā)展， 其藥物治療的研究進(jìn)展相當(dāng)緩慢，目前臨床常常將治療哮喘的藥物用于治療C0PD，由于 coro的發(fā)病機(jī)制不同于哮喘，難以取得滿意的療效。
[0004] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價(jià)值。
[0005] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al .， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily·Tetrahedron Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗慢性阻塞性肺病活性進(jìn)行了評價(jià)，其具有 抗慢性阻塞性肺病活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為60%和40%。
[0007]
[0008] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0009] 長期吸煙是最常見的人類COPD致病因素，我們實(shí)驗(yàn)室用香煙誘導(dǎo)模擬小鼠 COPD 模型，擬研究本發(fā)明組合物對香煙誘導(dǎo)的小鼠 coro的緩解作用。
[0010]本發(fā)明目的在于提供本發(fā)明組合物在制備抗coro疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明組合 物在劑量l〇mg/kg下灌胃給藥，對香煙誘導(dǎo)的coro小鼠 MLF中炎性細(xì)胞因子TNFa的生成有 抑制作用;對趨化因子RANTES的分泌有抑制作用;對BALF中的炎性細(xì)胞的募集有抑制作用。 [0011]以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 實(shí)施例1化合物Artalbic acid的制備
[0013] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻(xiàn) (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0014]
[0015] 實(shí)施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0016] 將化合物I(266mg，l.OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在40攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然 后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，V/ V)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0017] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0018] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0019] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0020]
[0021] 實(shí)施例3 Artalbic acid的0_(苯并咪唑基）乙基衍生物（III)的合成
[0022] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，碘化鉀(84mg，0 · 5mmol)和苯并咪唑（1180mg，IOmmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/V)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮 即得到化合物ΠI的棕色固體(80.0 mg，39 % )。
[0023] 1H MMR(500MHz，DMS0-d6)Sl6.65(s，lH)，8.22(s，lH)，7.61(d，J = 25.0Hz，2H)， 7.25(s，lH)，7·16(s，lH)，6.05(s，lH)，5.76(s，lH)，4.90(s，lH)，4.67(s，lH)， 4.58(s， 1H)，4.12(s，1H)，4.00(s，1H)，3.85(s，2H)，2.63(s，1H)，2.43(s，2H)，2.35(s，2H)，1.95(s, 1H), 1.61(s,3H), 1.52(s,2H), 1.37(s,1H),0.94(s,3H).
[0024] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5201.70(s),175.59(s),149.00(s),147.93(s),146.20 (s),139.75(s),133.40(s),123.95(s),123.48(s),118.46(s),116.84(s),110.97(s), 109.08(s),81,62(s),67.86(s),57.36(s),44.96(s),41.15(s),38.72(s) ,38.62(s), 35.56(s),30.41(s),20.19(s),18.28(s).
[0025] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C24H3IN2O4^ll .2284；found:411.2281 〇
[0026]
[0027] 實(shí)施例4 Artalbic acid的0-(二輕乙胺基）乙基衍生物的合成
[0028] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0_31)，碘化鉀（25211^，1.5_31)和二乙醇胺（105111^，10_31)，混合物加熱回流111。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶 并揮去溶劑即得到化合物IV的淡黃色固體(146.9mg，74% )。
[0029] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl8.72(s，lH)，S6.11(s，lH)，5.80(s，lH)，5.14(s，lH)， 4.73(s,lH),4.63(s,lH),3.57(s,2H),3.45(s,4H),2.70(d,J=15.6Hz,3H),2.60(s,4H), 2.50(s,2H),2.46(s,2H),2.33(s,lH),1.88(s,2H),1.68(s,3H),1.62(d,J=19.9Hz,3H), 1.02(s,3H).
[0030] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5202.01(s),176.11(s),149.21(s),148.55(s),117.15 (s),109.60(s),81.93(s),67.25(s),59.28(s),57.88(s),56.83(s),53.74(s),41.36(s), 39.24(s),38.93(s),35.88(s),30.82(s),20.61(s),18.49(s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for C2iH36Ni〇6:398.2543;found:398.2547〇
[0032]
[0033] 實(shí)施例5組合物抗慢性阻塞性肺病實(shí)驗(yàn)
[0034] 方法：SPF級雌性BALB/c小鼠，18-20g，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、藥物處 理組(組合物、化合物III和化合物IV 10mg/kg，灌胃給藥），每組10只。將小鼠置于4L容器 內(nèi)，每日煙熏（南京牌香煙一紅殼，焦油含量小于16mg)，一周五次，連續(xù)四周，每日煙熏前1 小時灌胃給藥，小鼠在末次煙熏后1小時，以苯巴比妥鈉麻醉，用0.6mL預(yù)冷的PBS緩沖液 (pH7.0)肺部灌流，沖洗3次，吸出支氣管肺泡灌洗液(BALF)，250 X g離心10min，上清用于分 析TNFa、RANTES的含量。細(xì)胞用PBS緩沖液重懸，計(jì)數(shù)，細(xì)胞涂片后用瑞氏-吉姆薩染色，分析 BALF中炎性細(xì)胞的變化。
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的60mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的40mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036]實(shí)驗(yàn)例1組合物對COB)小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中炎癥介質(zhì)生成抑制作用 [0037] (1)組合物對COB)小鼠 BALF中TNFa生成抑制作用
[0038] 前炎性細(xì)胞因子TNFa是COB)的發(fā)病過程中的啟動因子。COB)患者的TNFa水平高于 正常人，培養(yǎng)的支氣管上皮細(xì)胞與香煙的煙霧接觸可分泌TNFa JNFa可促使中性粒細(xì)胞脫 顆粒，誘導(dǎo)起到粘膜細(xì)胞增生和高分泌，增加上皮細(xì)胞IL-8生成，增加巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋 白酶生成，促進(jìn)氣道高反應(yīng)性。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對COB)小鼠 BALF中TNFa生成的 影響，結(jié)果見表1.
[0039] 表1組合物對COB)小鼠 BALF中TNFa生成的影響
[0041 ] 注:*P〈0.05，與模型對照組相比;#P〈0.05，與正常對照組相比。η= 10。
[0042] 結(jié)果:組合物在10mg/kg下對COB)模型小鼠灌胃給藥，可顯著降低小鼠 MLF中TNFa 的生成，而化合物III和化合物IV無此作用。
[0043] (2)組合物對COro小鼠 BALF中RANTES分泌抑制作用
[0044] 炎癥細(xì)胞的迀移受到趨化因子的調(diào)節(jié)，各種結(jié)構(gòu)細(xì)胞核炎性細(xì)胞均可分泌這些小 分子蛋白，COro發(fā)病過程中RANTES分泌增加，趨化單核/巨噬細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞，嗜酸性細(xì)胞。 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對COro小鼠 BALF中RANTES分泌的影響，結(jié)果見表2。
[0045] 表2組合物對COro小鼠 BALF中RANTES分泌的影響
[0047] 注:*P〈0.05，與模型對照組相比;#P〈0.01，與正常對照組相比。n= 10。
[0048] 結(jié)果:組合物在10mg/kg下對COB)模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠 MLF中RANTES的 分泌，而化合物III和化合物IV無此作用。
[0049] 實(shí)驗(yàn)例2組合物對COro小鼠 BALF中炎性細(xì)胞募集的抑制作用
[0050] (1)組合物對COB)小鼠 BALF中中性粒細(xì)胞募集的抑制作用
[0051] 中性粒細(xì)胞在COPD發(fā)病中具有重要作用，它可以釋放兩種絲氨酸蛋白酶，彈性蛋 白酶和半胱氨酰蛋白酶-3,誘導(dǎo)動物產(chǎn)生人類肺氣腫樣的病理變化。中性粒細(xì)胞生命短暫， 它循環(huán)招募到氣道以及穿越間隙腔的過程十分迅速。病理研究證明有些coro患者支氣管組 織內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目增加與氣流阻塞的程度有關(guān)。吸煙的coro患者氣道內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目 增加，特別是那些伴有慢性支氣管炎的患者。影響COPD患者肺內(nèi)中性粒細(xì)胞募集的主要因 素為IL-8趨化活性增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對coro小鼠 BALF中中性粒細(xì)胞募集的 影響，結(jié)果見表3。
[0052] 表3組合物對coro小鼠 BALF中中性粒細(xì)胞募集的影響
[0054]注:*P〈0 · 05; #P〈0 · 01，與正常對照組相比。n = 10。
[0055]結(jié)果:組合物在I Omg/kg下對COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠 BALF中中性粒細(xì) 胞的募集，而化合物ΠI和化合物IV無此作用。
[0056] (2)組合物對coro小鼠 BALF中巨噬細(xì)胞募集的抑制作用
[0057]吸煙者和COPD患者肺內(nèi)巨噬細(xì)胞較正常人群水平增加，多聚集在肺泡、細(xì)支氣管 和小氣道。肺泡壁巨噬細(xì)胞數(shù)目和輕中度肺氣腫以及COPD患者的小氣道疾病程度呈正相 關(guān)。組織病變和損傷部位可見到COPD緩慢進(jìn)展和慢性病變與巨噬細(xì)胞長期增加平行。巨噬 細(xì)胞可能通過釋放基質(zhì)金屬蛋白酶導(dǎo)致彈性組織降解能力異常增高，誘發(fā)肺氣腫的發(fā)生。 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對COB)小鼠 BALF中巨噬細(xì)胞募集的影響，結(jié)果見表4。
[0058] 衷4鉬合物對COPD小鼠 RALF中巨噬細(xì)朐慕隼的影晌
[0060] 注:*P〈0 · 05，與模型對照組相比；#P〈0 ·01，與正常對照組相比。η= 10。
[0061]結(jié)果:組合物在10mg/kg下對COPD模型小鼠灌胃給藥，可顯著降低小鼠 BALF中巨噬 細(xì)胞的募集，而化合物III和化合物IV無此顯著作用。
[0062] 結(jié)論:組合物在10mg/kg下灌胃給藥，對香煙誘導(dǎo)的小鼠慢性阻塞性肺病過程中的 炎性介質(zhì)的生成和趨化因子的分泌有顯著抑制作用，對炎性細(xì)胞的浸潤有顯著的抑制，對 慢性阻塞性肺病有顯著的治療作用。而化合物III和化合物IV在10mg/kg下灌胃給藥，對香 煙誘導(dǎo)的小鼠慢性阻塞性肺病過程中的炎性介質(zhì)的生成和趨化因子的分泌無顯著抑制作 用，對炎性細(xì)胞的浸潤無顯著抑制，對慢性阻塞性肺病無任何治療作用。
[0063] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0064] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0065] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0066] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為60%和40%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為60%和40%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述慢 性阻塞性肺病是由吸煙引起的。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組 合物抑制慢性阻塞性肺病過程中炎性介質(zhì)的釋放。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述炎 性介質(zhì)為TNFa。7. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組 合物抑制慢性阻塞性肺病過程中趨化因子的分泌。8. 如權(quán)利要求7所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述趨 化因子為RANTES。9. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組 合物抑制炎性細(xì)胞的募集。10. 如權(quán)利要求9所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 炎性細(xì)胞為中性粒細(xì)胞或者巨隧細(xì)胞。
【文檔編號】A61K31/195GK106074519SQ201610404775
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司