阿掏比克酸三唑基與1h?四氮唑基衍生物的組合物用于制備抗紅細胞低下性貧血藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物在抗紅細胞低下性貧血藥物中的應用，本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物、制備方法及其在制備抗紅細胞低下性貧血藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物具有抗紅細胞低下性貧血的作用，具有開發(fā)抗紅細胞低下性貧血藥物的價值。
【專利說明】
阿掏比克酸三唑基與1H-四氮唑基衍生物的組合物用于制備 抗紅細胞低下性貧血藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 基于不同的臨床特點，貧血有不同的分類。如:按貧血進展速度分急、慢性貧血;按 骨髓紅系增生情況分增生性貧血(如溶血性貧血、缺鐵性貧血、巨幼細胞貧血等）和增生低 下性貧血(如再生障礙性貧血）。
[0003] 臨床上常從貧血發(fā)病機制和病因的分類：
[0004] 1.紅細胞生成減少性貧血
[0005] 造血細胞、骨髓造血微環(huán)境和造血原料的異常影響紅細胞生成，可形成紅細胞生 成減少性貧血。
[0006] (1)造血干祖細胞異常所致貧血
[0007] 1)再生障礙性貧血(AA)AA是一種骨髓造血功能衰竭癥，與原發(fā)和繼發(fā)的造血干祖 細胞損害有關(guān)。部分全血細胞減少癥的發(fā)病機制與B細胞產(chǎn)生抗骨髓細胞自身抗體，進而破 壞或抑制骨髓造血細胞有關(guān)。
[0008] 2)純紅細胞再生障礙貧血(PRCA)PRCA是指骨髓紅系造血干祖細胞受到損害，進而 引起貧血。依據(jù)病因，該病可分為先天性和后天性兩類。先天性PRCA即Diamond-Blackfan綜 合征，系遺傳所致;后天性PRCA包括原發(fā)、繼發(fā)兩類。有學者發(fā)現(xiàn)部分原發(fā)性PRCA患者血清 中有自身EPO或幼紅細胞抗體。繼發(fā)性PRCA主要有藥物相關(guān)型、感染相關(guān)型(細菌和病毒，如 微小病毒出 9、肝炎病毒等）、自身免疫病相關(guān)型、淋巴細胞增殖性疾病相關(guān)型（如胸腺瘤、淋 巴瘤、漿細胞病和淋巴細胞白血病等）以及急性再生障礙危象等。
[0009] 3)先天性紅細胞生成異常性貧血(CDA) CDA是一類遺傳性紅系干祖細胞良性克隆 異常所致的、以紅系無效造血和形態(tài)異常為特征的難治性貧血。根據(jù)遺傳方式，該病可分為 常染色體隱陛遺傳型和顯性遺傳型。
[0010] 4)造血系統(tǒng)惡性克隆性疾病這些疾病造血干祖細胞發(fā)生了質(zhì)的異常，包括骨髓增 生異常綜合征及各類造血系統(tǒng)腫瘤性疾病如白血病等。前者因為病態(tài)造血，高增生，高凋 亡，出現(xiàn)原位溶血;后者腫瘤性增生、低凋亡和低分化，造血調(diào)節(jié)也受到影響，從而使正常成 熟紅細胞減少而發(fā)生貧血。
[0011] (2)造血微環(huán)境異常所致貧血
[0012] 造血微環(huán)境包括骨髓基質(zhì)，基質(zhì)細胞和細胞因子。
[0013] 1)骨髓基質(zhì)和基質(zhì)細胞受損所致貧血骨髓壞死、骨髓纖維化、骨髓硬化癥、大理石 病、各種髓外腫瘤性疾病的骨髓轉(zhuǎn)移以及各種感染或非感染性骨髓炎，均可因損傷骨髓基 質(zhì)和基質(zhì)細胞，造血微環(huán)境發(fā)生異常而影響血細胞生成。
[0014] 2)造血調(diào)節(jié)因子水平異常所致貧血干細胞因子(SCF)、白細胞介素（IL)、粒-單系 集落刺激因子(GM-CSF)、粒系集落刺激因子(G-CSF)、紅細胞生成素(EPO)、血小板生成素 (TPO)、血小板生長因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素（IFN)等均具有正負調(diào)控造血 作用。腎功能不全、肝病和垂體或甲狀腺功能低下等時產(chǎn)生EPO不足;腫瘤性疾病或某些病 毒感染會誘導機體產(chǎn)生較多的造血負調(diào)控因子如TNF、IFN、炎癥因子等，均可導致慢性病性 貧血(ACD)。
[0015] (3)造血原料不足或利用障礙所致貧血
[0016] 造血原料是指造血細胞增殖、分化、代謝所必需的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂類、維生素 (葉酸、維生素 B12等）、微量元素(鐵、銅、鋅等)等。任一種造血原料不足或利用障礙都可能 導致紅細胞生成減少。
[0017] 1)葉酸或維生素 B12缺乏或利用障礙所致貧血由于各種生理或病理因素導致機體 葉酸或維生素 B12絕對或相對缺乏或利用障礙可引起的巨幼細胞貧血。
[0018] 2)缺鐵和鐵利用障礙性貧血這是臨床上最常見的貧血。缺鐵和鐵利用障礙影響血 紅素合成，有稱該類貧血為血紅素合成異常性貧血。該類貧血的紅細胞形態(tài)變小，中央淡染 區(qū)擴大，屬于小細胞低色素性貧血。
[0019] 2.溶血性貧血(HA)
[0020] 即紅細胞破壞過多性貧血。
[0021] 3.失血性貧血
[0022] 根據(jù)失血速度分急性和慢性，慢性失血性貧血往往合并缺鐵性貧血?？煞譃槌瞿?血性疾?。ㄈ缣匕l(fā)性血小板減少性紫癜、血友病和嚴重肝病等)所致和非出凝血性疾病(如 外傷、腫瘤、結(jié)核、支氣管擴張、消化性潰瘍、痔和婦科疾病等)所致兩類。
[0023] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0024] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al ·， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily·Tetrahedron Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗紅細胞低下性貧血活性進行了評價，其具 有抗紅細胞低下性貧血活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0025] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為35%和65%。
[0026]
[0027]
[0028] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0029] 本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明組合物在制藥領(lǐng)域中的新的應用。
[0030] 本發(fā)明涉及組合物作為制備治療紅細胞低下性貧血藥物中的應用。
[0031]以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0032] 實施例1化合物Artalbic acid的制備
[0033] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0034]
[0035] 實施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0036] 將化合物I(266mg，l .OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在40攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然 后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0037] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0038] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0039] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0040]
[0041 ] 實施例3 Artalbic acid的0_(三唑基）乙基衍生物（III)的合成 [0042] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0 · 5mmol)和 1，2，3-三氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。 反應結(jié)束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: ι.ο，v/v)，收集淡黃色集中洗脫 帶即得到化合物III的淡黃色膠狀固體(124.5mg，69% )。
[0043] 1H MMR(500MHz，DMS0-d6)Sl6.23(s，lH)，7.99(d，J = 29.4Hz，2H)，6.11(s，lH)， 5.82(s，lH)，4.76(d，J=17.3Hz，2H)，4.62(s，lH)，4.24(s，lH)，4.18(s，lH)，3.84(s，2H), 2.70(s,lH),2.52(d J=16.3Hz,4H),2.02(s,lH),1.69(s,3H),1.62(s,2H),1.51(s,lH), 1.02(s,3H).
[0044] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5201.95(s),175.95(s),149.17(s),148.18(s),136.99 (s),120.76(s),117.09(s),109.44(s),81.89(s),65.54(s),57.72(s),46.43(s),41.30 (s),39.08(s),38.89(s),35.71(s),30.77(s),20.46(s),18.43(s).
[0045] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for Ci9H28N3〇4:362.2080;found:362.2085〇
[0046]
[0051] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for Ci8H27N4〇4:363.2032;found:363.2029〇
[0052]
[0053] 實施例5組合物抗紅細胞低下性貧血實驗
[0054] -、組合物對失血小鼠的治療作用
[0055] ICR小鼠30只，早d各半，均分成5組(n = 10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從 眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測全部各組指標，然后連續(xù)灌胃給藥1周且給藥之后每天 放血0.5ml，末次給藥Ih后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀進行紅細胞計數(shù) (IO12A)。
[0056] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的35mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的65mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0057]表1組合物對因失血所致紅細胞減少的治療作用
[0059] 與模型組比較:*ρ〈0·05
[0060] 結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用組合物治療7天后，與模型組比較，其紅細胞顯著高于 模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV無此作用。
[0061 ]二、組合物對環(huán)磷酰胺致紅細胞減少的治療作用
[0062] 對小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，??用，均分成5組(n=10)， 即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg 組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環(huán)磷酸胺 80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后lh，從眼眶靜脈叢取血，測紅細胞數(shù)(10 12/L)。
[0063] 表2組合物對環(huán)磷酰胺所致紅細胞的影響
[0065] 與模型組比較:林ρ〈0·01
[0066] 結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細胞下 降，組合物組與模型組比較，可明顯對抗環(huán)磷酸胺所致小鼠紅細胞下降。而化合物III和化 合物IV無此作用。
[0067] 三、組合物對苯所致紅細胞減少的治療作用
[0068] 對再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，罕痛用，均分成5組(n = 10)，除 生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當日，同時口服給藥，每 天1次，共18天，末次給藥后lh，眼眶靜脈叢取血，測紅細胞。
[0069]表3組合物對苯所致紅細胞減少的治療作用
[0071] 與模型組比較:#ρ〈0·01
[0072] 結(jié)果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對抗苯所致再生障礙性貧血小鼠紅細 胞的下降。而化合物III和化合物IV無此作用。
[0073] 結(jié)論:組合物能夠顯著升高紅細胞，可以用來制備治療貧血的藥物。而化合物III 和化合物IV不能夠顯著升高紅細胞，不能用來制備治療貧血的藥物。
[0074] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0075] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0076] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0077] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為35%和65%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為35%和65%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應用，其特征為:所述 紅細胞低下性貧血是由失血所引起的。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應用，其特征為:所述 紅細胞低下性貧血是由化學物質(zhì)所引起的紅細胞低下。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應用，其特征為:所述 化學物質(zhì)為苯，所述紅細胞低下性貧血是由苯所致的再生障礙性貧血。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細胞低下性貧血藥物中的應用，其特征為:所述 化學物質(zhì)為環(huán)憐酸胺，所述紅細胞低下性貧血是由環(huán)憐酸胺所致紅細胞下降。
【文檔編號】A61K31/41GK106074528SQ201610347281
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司