一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法
【專利摘要】一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。本發(fā)明是為了解決釋藥平臺無法有效地監(jiān)測藥物的釋放量的問題。方法：一、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核；二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子；三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅；四、合成4?氧?4?(芘?4?甲氧基)丁酸；五、納米粒子表面功能化修飾；六、納米粒子載藥及孔道封堵。本發(fā)明用于癌癥治療中，實現(xiàn)了抗癌藥物釋放的實時監(jiān)控。
【專利說明】
一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著納米醫(yī)學的快速發(fā)展，設(shè)計與構(gòu)建智能響應(yīng)型藥物控釋平臺，將抗癌藥無泄漏地輸送到癌細胞周圍，并在指定的時間及地點釋放藥物，減少藥物對正常細胞的損害，提高治療效率，已成為納米醫(yī)藥科學的重要發(fā)展方向。目前文獻報導的智能響應(yīng)控釋平臺主要有:pH、溫度、酶、光響應(yīng)等幾種。其中pH、溫度、酶為體內(nèi)響應(yīng)，響應(yīng)靈敏度差，難以精確調(diào)控。由于光響應(yīng)平臺為體外調(diào)控，又具有響應(yīng)靈敏性高、光波長及強度可調(diào)等優(yōu)點而備受重視。在傳統(tǒng)的光響應(yīng)平臺中，紫外光或可見光因穿透力弱及對細胞組織可能造成損傷等因素，在應(yīng)用中受到了一定限制。
[0003]近紅外光因為具有穿透力強、細胞損傷小等優(yōu)點，成為各種光控釋平臺的理想光源。在構(gòu)建近紅外光響應(yīng)的藥物控釋平臺中，稀土摻雜上轉(zhuǎn)換納米粒子可作為一種“納米轉(zhuǎn)換器”，將近紅外光轉(zhuǎn)換成能量較高的可見光或紫外光，用于激發(fā)各種光化學反應(yīng)。為了負載藥物分子，通常以上轉(zhuǎn)換納米粒子為核，在其表面可包覆一層藥物載體。介孔二氧化硅因具有生物相容性好、表面易于修飾等優(yōu)點可作為良好的載體。最后，在藥物載體(上轉(zhuǎn)換/介孔二氧化硅)的表面修飾光響應(yīng)的分子開關(guān)。當近紅外光照射時，近紅外光被上轉(zhuǎn)換納米粒子轉(zhuǎn)換為能量較高的紫外光，打開二氧化硅表面的開關(guān)分子，使二氧化硅孔道內(nèi)的藥物得以釋放。
[0004]在光控釋藥的過程中，實時監(jiān)測藥物的釋放量具有重要意義。研究者可根據(jù)監(jiān)測的結(jié)果來改變光源強度及照射時間，調(diào)整藥物的釋放量，以獲得理想的藥物濃度。然而，監(jiān)測藥物的釋放量卻存在著一些困難，許多藥物自身不產(chǎn)生熒光，難以被檢測;藥物在釋放的同時會被細胞代謝，故無法有效地監(jiān)測藥物的釋放量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明是為了解決釋藥平臺無法有效地監(jiān)測藥物的釋放量的問題，而提供了一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法。
[0006]—種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進行的:
[0007]—、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將六水合氯化釔、六水合氯化鐿和六水氯化銩混合，得到混合物，然后向混合物中加入油酸和十八烯進行反應(yīng)，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，并在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子，將NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核;所述六水合氯化釔與六水合氯化鐿的質(zhì)量比為1:(0.5?0.6);所述六水合氯化乾與六水氯化鎊的質(zhì)量比為1:(0.008?0.01);所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為Img: (0.03?0.04)mL;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img: (0.06?0.08)mL;所述混合液A是將氟化錢和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07)mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.08?0.12)mL;所述六水合氯化乾與混合液A中氟化錢的質(zhì)量比為1: (0.6?
0.8);所述六水合氯化釔的質(zhì)量與環(huán)己烷的體積比為Img:(0.04?0.06)mL；
[0008]二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化镥中加入油酸和十八稀，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核和混合液B，然后在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb, Tm/NaLuF4納米粒子，然后將NaYF4: Yb, Tm/NaLuF4納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與油酸的體積比為Img:(0.06?0.07)mL;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:(0.11?0.14)mL;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的體積比為Img:(0.02?0.04)mL;所述混合液B是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07 )mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.08?0.12)mL;所述六水合氯化镥與混合液B中氟化銨的質(zhì)量比為1:(0.4?0.6);所述六水合氯化镥的質(zhì)量與環(huán)己烷的體積比為Img:(0.07?0.09)mL ；
[0009]三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將十六烷基三甲基溴化銨加入到水中配成溶液，將溶液與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌0.5h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為9?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整PH后的超聲溶液中加入體積濃度為25%的正硅酸乙酯乙醇溶液后，在室溫下反應(yīng)24h后，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;所述十六燒基三甲基溴化錢的質(zhì)量與水的體積比為Img:0.04mL;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液的體積比為Img: (0.001?0.005)mL;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與體積濃度為25%的正硅酸乙酯乙醇溶液的體積比為Img: 0.05mL；
[0010]四、合成4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸:將丁二酸酐溶解在二氯甲烷中，再加入一芘甲醇，得到混合液，向混合液中滴加吡啶，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后再加入質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸，然后再采用二氯甲烷進行萃取，采用水對萃取物洗滌3次，采用無水硫酸鈉干燥，最后通過柱層析得到淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸;所述丁二酸酐的質(zhì)量與二氯甲烷的體積比為lmg: (0.1?0.2)mL;所述丁二酸酐與一芘甲醇的質(zhì)量比為1:(1.5?1.8);所述丁二酸酐的質(zhì)量與吡啶的體積比為Img: (0.07?0.08)mL;所述丁二酸酐的質(zhì)量與質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸的體積比為lmg:(0.3?0.4)mL；
[0011]五、納米粒子表面功能化修飾:將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散到無水乙醇I，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液;將淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸溶解到無水乙醇Π中，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)0.5h后得到混合體系;將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液加入到混合體系中，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)12h，離心分離，得到表面修飾了 PYBA的納米粒子;步驟五中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與無水乙醇I的體積比Img: (0.3?0.4)mL;步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(花-4-甲氧基)丁酸的質(zhì)量與無水乙醇Π的體積比lmg:(0.5?0.7)mL;步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(花-4-甲氧基)丁酸與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1: (3?4);步驟五中所述的無水乙醇I與無水乙醇Π的體積比為1:0.5;
[0012]六、納米粒子載藥及孔道封堵:將表面修飾了PYBA的納米粒子加入到羅丹明B水溶液中超聲分散30min，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌20h?40h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體;所述羅丹明B水溶液的濃度為lmg/mL;所述表面修飾了 PYBA的納米粒子的質(zhì)量與羅丹明B水溶液的體積比lmg:(0.05?0.2)mL；所述步驟五得到的表面修飾了PYBA的納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1: (8?12)。
[0013]本發(fā)明制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的應(yīng)用是將近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體用于體外近紅外光控制藥物釋放的實時監(jiān)控中，具體使用方法如下:稱量2.0mg近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體，放置到比色皿的底腳處，緩慢加入2mL磷酸鹽緩沖溶液(pH = 7.4)，保證納米粒子在角落集中靜止，之后用激光對準粒子照射60min，每隔1min對上清液進行紫外-可見分析，測定藥物模型羅丹明B的紫外-可見吸收峰值，通過計算得出不同時間的累計釋放量，繪制釋放曲線。
[0014]工作原理:
[0015]本發(fā)明首先采用溶劑熱的方法合成了稀土摻雜核殼結(jié)構(gòu)上轉(zhuǎn)換粒子(NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4)。再通過溶膠-凝膠法在上轉(zhuǎn)換納米粒子表面包覆一層介孔二氧化硅，介孔二氧化娃可作為負載藥物的基質(zhì)。最后在介孔二氧化娃表面修飾一花甲酯，用于藥物的控釋。在介孔二氧化硅孔道內(nèi)負載藥物后，加入主體分子環(huán)糊精，其與一芘甲酯間通過主客體作用相結(jié)合，堵住介孔從而阻止藥物分子的泄露。當采用近紅外光照射時，上轉(zhuǎn)換納米粒子作為“納米轉(zhuǎn)換器”，將近紅外光轉(zhuǎn)化為紫外光和藍光，其中紫外光可將開關(guān)分子與納米粒子間的酯鍵斷開，芘衍生物與環(huán)糊精離去，實現(xiàn)藥物的釋放。
[0016]本發(fā)明的有益效果:
[0017]1、本發(fā)明近紅外光具有的穿透深、低毒性的特點，結(jié)合上轉(zhuǎn)換納米粒子實現(xiàn)近紅外光響應(yīng)的藥物控釋。近紅外控釋精度高，操作簡單。無光照時，無藥物泄露，避免了不必要的生物毒性。
[0018]2、設(shè)計合成了新型的分子開關(guān)不僅實現(xiàn)藥物的光控釋放，也可對釋放過程進行監(jiān)控。
[0019]3、該控釋平臺適用范圍廣，可負載多種藥物，不依賴于細胞內(nèi)環(huán)境，適合用于細胞及活體實驗。
[0020]4、文獻報導應(yīng)用于癌癥診療平臺的理想粒子直徑應(yīng)在10nm以下，以避免粒子隨血液體內(nèi)循環(huán)時堵塞毛細血管。本發(fā)明制備的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子直徑小于80nm。
【附圖說明】
[0021 ]圖1為實施例一步驟二得到的NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子的透射電鏡圖；
[0022]圖2為實施例一步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的透射電鏡圖；
[0023]圖3為實施例一步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的氮氣吸脫附表征圖；
[0024]圖4為實施例一步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的介孔孔徑分布曲線；
[0025]圖5為近紅外激光激發(fā)下實施例一步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核、步驟二得到的NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子和步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的熒光發(fā)射光譜對比圖；其中a為步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核，b為步驟二得到的NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子，c為步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子；
[0026]圖6為近紅外光照射下實施例一步驟四得到的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸、步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射前和步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射后的光斷鍵的紫外可見吸收光譜對比圖；其中a為步驟四得到的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸，b為步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射前，c為步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射后；
[0027]圖7為不同功率近紅外光照射時的實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放效果圖，其中a為未光照的實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，b為近紅外光功率為1.5W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，c為近紅外光功率為3W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，d為近紅外光功率為6W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，e為近紅外光功率為9W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，I為光照停止位置；
[0028]圖8為對實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體間歇性近紅外光照射時的藥物模型釋放曲線，其中I為近紅外光源開，2為近紅外光源關(guān)，a為羅丹明B，b為一芘甲醇；
[0029]圖9為一芘甲醇與羅丹明B紫外-可見吸收關(guān)系曲線。
【具體實施方式】
[0030]【具體實施方式】一:本實施方式的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進行的:
[0031]—、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將六水合氯化釔、六水合氯化鐿和六水氯化銩混合，得到混合物，然后向混合物中加入油酸和十八烯進行反應(yīng)，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，并在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子，將NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核;所述六水合氯化釔與六水合氯化鐿的質(zhì)量比為1:(0.5?0.6);所述六水合氯化乾與六水氯化鎊的質(zhì)量比為1:(0.008?0.01);所述六水合氯化乾的質(zhì)量與油酸的體積比為Img: (0.03?0.04)mL;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img: (0.06?0.08)mL;所述混合液A是將氟化錢和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07)mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為lmg: (0.08?0.12)mL;所述六水合氯化乾與混合液A中氟化錢的質(zhì)量比為1: (0.6?
0.8);所述六水合氯化釔的質(zhì)量與環(huán)己烷的體積比為lmg:(0.04?0.06)mL；
[0032]二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化镥中加入油酸和十八稀，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核和混合液B，然后在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb, Tm/NaLuF4納米粒子，然后將NaYF4: Yb, Tm/NaLuF4納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與油酸的體積比為lmg:(0.06?0.07)mL;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:(0.11?0.14)mL;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的體積比為Img:(0.02?0.04)mL;所述混合液B是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07 )mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.08?0.12)mL;所述六水合氯化镥與混合液B中氟化銨的質(zhì)量比為1:(0.4?0.6);所述六水合氯化镥的質(zhì)量與環(huán)己烷的體積比為lmg:(0.07?0.09)mL ；
[0033]三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將十六烷基三甲基溴化銨加入到水中配成溶液，將溶液與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌0.5h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為9?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整PH后的超聲溶液中加入體積濃度為25%的正硅酸乙酯乙醇溶液后，在室溫下反應(yīng)24h后，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;所述十六燒基三甲基溴化錢的質(zhì)量與水的體積比為Img:0.04mL;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液的體積比為lmg: (0.001?0.005)mL;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與體積濃度為25%的正硅酸乙酯乙醇溶液的體積比為Img: 0.05mL；
[0034]四、合成4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸:將丁二酸酐溶解在二氯甲烷中，再加入一芘甲醇，得到混合液，向混合液中滴加吡啶，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后再加入質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸，然后再采用二氯甲烷進行萃取，采用水對萃取物洗滌3次，采用無水硫酸鈉干燥，最后通過柱層析得到淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸;所述丁二酸酐的質(zhì)量與二氯甲烷的體積比為lmg: (0.1?0.2)mL;所述丁二酸酐與一芘甲醇的質(zhì)量比為1:(1.5?1.8);所述丁二酸酐的質(zhì)量與吡啶的體積比為lmg: (0.07?0.08)mL;所述丁二酸酐的質(zhì)量與質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸的體積比為lmg:(0.3?0.4)mL；
[00；35]五、納米粒子表面功能化修飾:將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散到無水乙醇I，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液;將淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸溶解到無水乙醇Π中，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)0.5h后得到混合體系;將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液加入到混合體系中，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)12h，離心分離，得到表面修飾了 PYBA的納米粒子;步驟五中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與無水乙醇I的體積比lmg: (0.3?0.4)mL;步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(花-4-甲氧基)丁酸的質(zhì)量與無水乙醇Π的體積比lmg:(0.5?0.7)mL;步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(花-4-甲氧基)丁酸與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1: (3?4);步驟五中所述的無水乙醇I與無水乙醇Π的體積比為1:0.5;
[0036]六、納米粒子載藥及孔道封堵:將表面修飾了PYBA的納米粒子加入到羅丹明B水溶液中超聲分散30min，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌20h?40h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體;所述羅丹明B水溶液的濃度為lmg/mL;所述表面修飾了 PYBA的納米粒子的質(zhì)量與羅丹明B水溶液的體積比lmg:(0.05?0.2)mL；所述步驟五得到的表面修飾了PYBA的納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1: (8?12)。
[0037]本實施方式中步驟二中將溫度從50°C升溫至75°C，在溫度為75°C的條件下保持30min中的目的是將甲醇蒸出。
[0038]本實施方式中步驟三中在溫度為80°C的條件下加熱0.5h待超聲溶液透明的目的是將環(huán)己烷蒸出。
[0039]本實施方式步驟四中加入鹽酸的目的是去除多余的吡啶。
[0040]本實施方式步驟六在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌20h?40h，目的是使藥物分子進入到介孔二氧化硅的孔道內(nèi)。加入環(huán)糊精，其通過與芘衍生物相結(jié)合，將介孔二氧化硅的孔道堵住。
[0041 ] 本實施方式中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為10000r/min。
[0042]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同的是:步驟二中所述六水合氯化镥的質(zhì)量與油酸的體積比為lmg:0.067mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一相同。
[0043]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二不同的是:步驟二中所述六水合氯化镥的質(zhì)量與十八烯的體積比為lmg:0.125mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一或二相同。
[0044]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同的是:步驟二中所述六水合氯化镥的質(zhì)量與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的體積比為Img: 0.033mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至三之一相同。
[0045]【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一不同的是:步驟三中所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液的體積比為Img:0.004mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至四之一相同。
[0046]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一不同的是:步驟四中所述丁二酸酐的質(zhì)量與二氯甲烷的體積比為lmg:0.133mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】
一至五之一相同。
[0047]【具體實施方式】七:本實施方式與【具體實施方式】一至六之一不同的是:步驟四中所述丁二酸酐與一芘甲醇的質(zhì)量比為1: 1.67。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至六之一相同。
[0048]【具體實施方式】八:本實施方式與【具體實施方式】一至七之一不同的是:步驟四中所述丁二酸酐的質(zhì)量與卩比啶的體積比為lmg: 0.075mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至七之一相同。
[0049]【具體實施方式】九:本實施方式與【具體實施方式】一至八之一不同的是:步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1:3.25。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至八之一相同。
[0050]【具體實施方式】十:本實施方式與【具體實施方式】一至九之一不同的是:步驟六中所述的表面修飾了PYBA的納米粒子的質(zhì)量與羅丹明B水溶液的體積比Img: 0.1mL。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至九之一相同。
[0051 ]【具體實施方式】十一:本實施方式與【具體實施方式】一至十之一不同的是:步驟六中所述的表面修飾了PYBA的納米粒子與β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1:10。其他步驟及參數(shù)與【具體實施方式】一至十之一相同。
[0052 ]通過以下實施例驗證本發(fā)明的有益效果:
[0053]實施例一:本實施例的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進行的:
[0054]—、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將210.58mg六水合氯化乾、116.22mg六水合氯化鐿和1.9mg六水氯化銩混合，得到混合物，然后向混合物中加入SmL油酸和15mL十八烯進行反應(yīng)，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為1600C的條件下攪拌Ih，然后將溫度從1600C自然冷卻至50 V，再加入混合液A，并在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75 0C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75 °C升溫至300 °C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子，將NaYF4:Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核;所述混合液A是將148.16mg氟化錢和10mg氫氧化鈉溶解在1mL甲醇中；
[0055]二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向119.7mg六水合氯化镥中加入8mL油酸和15mL十八烯，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核和混合液B，然后在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子，然后將NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散于環(huán)己燒中，得到NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液;所述混合液B是將59.2mg氟化錢和40mg氫氧化鈉溶解在4mL甲醇中；
[0056]三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將200mg十六烷基三甲基溴化銨加入到8mL水中配成溶液，將溶液與800yL NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌0.5h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為9?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整pH后的超聲溶液中加入ImL體積濃度為25 %的正硅酸乙酯乙醇溶液后，在室溫下反應(yīng)24h后，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子；
[0057]四、合成4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸:將60mg丁二酸酐溶解在8mL二氯甲烷中，再加入10mg—芘甲醇，得到混合液，向混合液中滴加4.5mL吡啶，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后再加入20mL質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸，然后再采用二氯甲烷進行萃取，采用水對萃取物洗滌3次，采用無水硫酸鈉干燥，最后通過柱層析得到淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸；
[0058]五、納米粒子表面功能化修飾:將30mg核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散到1mL無水乙醇I，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液;然后將Smg淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸溶解到5mL無水乙醇Π中，再向無水乙醇Π中加入26mg 1_乙基_(3_二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)0.5h后得到混合體系;將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液加入到混合體系中，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)12h，離心分離，得到表面修飾了 PYBA的納米粒子；
[0059]六、納米粒子載藥及孔道封堵:將30mg表面修飾了PYBA的納米粒子加入到3ml濃度為lmg/mL的羅丹明B水溶液中超聲分散30min，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入300mg
環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌24h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體。
[0060]圖1為實施例一步驟二得到的NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子的透射電鏡圖；從圖中可以看出所合成的上轉(zhuǎn)換納米粒子單分散性好，尺寸均一，大小約為55nm。
[0061]圖2為實施例一步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的透射電鏡圖；從圖中可以看出所合成的納米粒子分散良好，尺寸均一，大小約為75nm，核殼結(jié)構(gòu)明顯。
[0062]圖3為實施例一步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的氮氣吸脫附表征圖；圖4為實施例一步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的介孔孔徑分布曲線;從圖3和圖4中可以看出氮氣吸附脫附高壓區(qū)滯后環(huán)的存在表明合成材料為介孔材料，其孔徑大小約3.2nm，比表面積為257.14m2/g。所合成納米粒子介孔內(nèi)可負載藥物，表面可修飾分子開關(guān)，用于藥物控釋。
[0063]圖5為近紅外激光激發(fā)下實施例一步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核、步驟二得到的NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子和步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的熒光發(fā)射光譜對比圖；其中a為步驟一得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核，b為步驟二得到的NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子，c為步驟三得到的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;從圖中可以看出所合成材料紫外區(qū)發(fā)光(340?365nm)能夠被開關(guān)分子吸收，用于光控釋。由曲線a、b可知，核殼結(jié)構(gòu)上轉(zhuǎn)換材料所發(fā)射熒光比核上轉(zhuǎn)換材料顯著增強，這保證了足夠強度的紫外光用于光斷鍵過程。而曲線b、c上轉(zhuǎn)換發(fā)光強度接近，這表明包覆介孔二氧化硅對其發(fā)光影響小。
[0064]圖6為近紅外光照射下實施例一步驟四得到的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸、步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射前和步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射后的光斷鍵的紫外可見吸收光譜對比圖；其中a為步驟四得到的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸，b為步驟五得到的表面修飾了 PYBA的納米粒子照射前，c為步驟五得到的表面修飾了PYBA的納米粒子照射后；由曲線a、b可知，納米粒子表面成功地修飾了光響應(yīng)分子PYBA。由曲線b、c可知，近紅外光照射后PYBA的吸收峰消失(曲線c)，這表明納米粒子表面所修飾的PYBA已被近紅外光分解，驗證了光致斷鍵發(fā)生
[0065]圖7為不同功率近紅外光照射時的實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放效果圖，其中a為未光照的實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，b為近紅外光功率為1.5W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，c為近紅外光功率為3W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，d為近紅外光功率為6W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，e為近紅外光功率為9W/cm2時實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體藥物釋放曲線，I為光照停止位置；圖8為對實施例一制備的近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體間歇性近紅外光照射時的藥物模型釋放曲線，其中I為近紅外光源開，2為近紅外光源關(guān)，a為羅丹明B，b為一芘甲醇；圖9為一芘甲醇與羅丹明B紫外-可見吸收關(guān)系曲線;從圖7中可以看出當無激光照射時(曲線a)，藥物釋放量少，接近于零釋放，這表明β-環(huán)糊精有效封堵了孔道，避免了藥物的泄漏。當采用近紅外激光照射時(曲線b-e)，羅丹明B逐漸釋放，并且隨著激光功率密度的增加，藥物釋放速率逐漸增大，這表明藥物的釋放是由激光光照引起的，并可通過調(diào)節(jié)激光功率的大小來調(diào)控藥物的釋放。這也間接證明近紅外光引發(fā)了斷鍵，打開了分子開關(guān)，使得堵孔分子環(huán)糊精離去，孔道內(nèi)藥物分子得以釋放。當光照停止后，藥物釋放也隨之停止，表明該平臺可能對光源的開關(guān)有著敏感的響應(yīng)。為此，我們設(shè)計了脈沖式光照藥物釋放實驗，結(jié)果顯示羅丹明b的釋放量隨著間歇性的光照呈現(xiàn)階梯型趨勢(見圖8曲線a)，該結(jié)果表明可通過激光的開關(guān)來精確地控制藥物的釋放。此外，在上清液中也可檢測到斷裂的開關(guān)分子(一芘甲醇；曲線b)，這近一步驗證了光斷鍵控釋的機理。當近紅外照射時，上清液中開關(guān)分子(一芘甲醇)的濃度與模型藥物(羅丹明b)的濃度成線性關(guān)系(見圖9)，故可通過檢測開關(guān)分子的濃度來監(jiān)測藥物的釋放。并根據(jù)此結(jié)果，調(diào)整激光的功率大小來調(diào)控藥物的釋放量，實現(xiàn)近紅外光響應(yīng)的可監(jiān)控釋放。
【主權(quán)項】
1.一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法具體是按以下步驟進行的: 一、合成上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核:將六水合氯化釔、六水合氯化鐿和六水氯化銩混合，得到混合物，然后向混合物中加入油酸和十八烯進行反應(yīng)，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)溫度從室溫升溫至160°c，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入混合液A，并在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子，將NaYF4: Yb/Tm上轉(zhuǎn)換納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核;所述六水合氯化釔與六水合氯化鐿的質(zhì)量比為1:(0.5?0.6)；所述六水合氯化釔與六水氯化銩的質(zhì)量比為1:(0.008?0.01)；所述六水合氯化?乙的質(zhì)量與油酸的體積比為Img: (0.03?0.04 )mL;所述六水合氯化乾的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img: (0.06?0.08)mL;所述混合液A是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07)mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.08?0.12)mL;所述六水合氯化釔與混合液A中氟化銨的質(zhì)量比為1: (0.6?0.8);所述六水合氯化釔的質(zhì)量與環(huán)己烷的體積比為Img:(0.04?0.06)mL； 二、合成包覆外殼的上轉(zhuǎn)換納米粒子:向六水合氯化镥中加入油酸和十八稀，得到反應(yīng)體系，在氬氣保護和攪拌的條件下將反應(yīng)體系的溫度從室溫升溫至160°C，并在氬氣保護和溫度為160°C的條件下攪拌lh，然后將溫度從160°C自然冷卻至50°C，再加入上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核和混合液B，然后在氬氣保護和溫度為50°C的條件下攪拌40min，再將溫度從50°C升溫至75°C，并在氬氣保護和溫度為75°C的條件下保持30min，然后將反應(yīng)體系的溫度在20min內(nèi)從75°C升溫至300°C，并在氬氣保護和溫度為300°C的條件下磁力攪拌lh，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，采用乙醇作為溶劑進行離心分離得到固體，將固體采用甲醇清洗3?5次，得到NaYF4: Yb, Tm/NaLuF4納米粒子，然后將NaYF4: Yb, Tm/NaLuF4納米粒子分散于環(huán)己烷中，得到NaYF4:Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與油酸的體積比為Img:(0.06?0.07)mL;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img:(0.11?0.14)mL;所述六水合氯化镥的質(zhì)量與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的體積比為Img:(0.02?0.04)mL;所述混合液B是將氟化銨和氫氧化鈉溶解在甲醇中，其中氟化銨的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.06?0.07 )mL，氫氧化鈉的質(zhì)量與甲醇的體積比為Img: (0.08?0.12)mL;所述六水合氯化镥與混合液B中氟化銨的質(zhì)量比為1:(0.4?0.6);所述六水合氯化镥的質(zhì)量與環(huán)己烷的體積比為Img:(0.07?0.09)mL ； 三、在上轉(zhuǎn)換納米粒子外層包覆介孔二氧化硅:將十六烷基三甲基溴化銨加入到水中配成溶液，將溶液與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液混合后在室溫下攪拌0.5h后超聲0.5h，得到超聲溶液，在溫度為80°C的條件下加熱至待超聲溶液透明后采用氫氧化鈉溶液調(diào)整超聲溶液的PH為9?10，得到調(diào)整pH后的超聲溶液，然后采用蠕動栗以0.5mL/h的速度向調(diào)整PH后的超聲溶液中加入體積濃度為25 %的正硅酸乙酯乙醇溶液后，在室溫下反應(yīng)24h后，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與水的體積比為Img:0.04mL;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液的體積比為Img: (0.0Ol?0.005)mL;所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與體積濃度為25%的正硅酸乙酯乙醇溶液的體積比為Img: 0.05mL； 四、合成4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸:將丁二酸酐溶解在二氯甲烷中，再加入一芘甲醇，得到混合液，向混合液中滴加吡啶，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后再加入質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸，然后再采用二氯甲烷進行萃取，采用水對萃取物洗滌3次，采用無水硫酸鈉干燥，最后通過柱層析得到淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸;所述丁二酸酐的質(zhì)量與二氯甲烷的體積比為Img: (0.1?0.2)mL;所述丁二酸酐與一芘甲醇的質(zhì)量比為1:(1.5?1.8);所述丁二酸酐的質(zhì)量與吡啶的體積比為Img: (0.07?0.08)mL;所述丁二酸酐的質(zhì)量與質(zhì)量分數(shù)為30%的鹽酸的體積比為Img:(0.3?0.4)mL； 五、納米粒子表面功能化修飾:將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散到無水乙醇I，得到核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液;將淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸溶解到無水乙醇Π中，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，反應(yīng)0.5h后得到混合體系;將核殼結(jié)構(gòu)納米粒子分散液加入到混合體系中，在溫度為50°C的條件下反應(yīng)12h，離心分離，得到表面修飾了 PYBA的納米粒子;步驟五中所述的核殼結(jié)構(gòu)納米粒子的質(zhì)量與無水乙醇I的體積比Img:(0.3?0.4)mL;步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸的質(zhì)量與無水乙醇Π的體積比Img: (0.5?0.7)mL;步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(花-4-甲氧基)丁酸與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1: (3?4);步驟五中所述的無水乙醇I與無水乙醇Π的體積比為1:0.5; 六、納米粒子載藥及孔道封堵:將表面修飾了PYBA的納米粒子加入到羅丹明B水溶液中超聲分散30min，然后在室溫下攪拌24h，再向其中加入β-環(huán)糊精后持續(xù)在室溫下攪拌20h?40h，反應(yīng)結(jié)束后離心分離，通過離心分離得到固體，將固體采用乙醇清洗3?5次，然后在真空干燥箱內(nèi)真空干燥24h，得到近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體;所述羅丹明B水溶液的濃度為lmg/mL;所述表面修飾了 PYBA的納米粒子的質(zhì)量與羅丹明B水溶液的體積比Img:(0.05?0.2)mL；所述步驟五得到的表面修飾了PYBA的納米粒子與β_環(huán)糊精的質(zhì)量比為1:(8?12)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟二中所述六水合氯化镥的質(zhì)量與油酸的體積比為Img: 0.067mL。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟二中所述六水合氯化镥的質(zhì)量與十八稀的體積比為Img: 0.125mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟二中所述六水合氯化镥的質(zhì)量與上轉(zhuǎn)換納米粒子內(nèi)核的體積比為lmg:0.033mLo5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟三中所述十六烷基三甲基溴化銨的質(zhì)量與NaYF4: Yb，Tm/NaLuF4納米粒子分散液的體積比為Img: 0.004mL。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟四中所述丁二酸酐的質(zhì)量與二氯甲烷的體積比為lmg:0.133mL。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟四中所述丁二酸酐與一芘甲醇的質(zhì)量比為1:1.67。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟四中所述丁二酸酐的質(zhì)量與卩比啶的體積比為Img: 0.075mL。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟五中所述的淡黃色固體4-氧-4-(芘-4-甲氧基)丁酸與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為I:3.25o10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種近紅外光激發(fā)實時監(jiān)控釋藥的核殼結(jié)構(gòu)藥物載體的制備方法，其特征在于步驟六中所述的表面修飾了 PYBA的納米粒子的質(zhì)量與羅丹明B水溶液的體積比Img:0.1mL。
【文檔編號】A61K47/40GK106075437SQ201610421621
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月12日 公開號201610421621.6, CN 106075437 A, CN 106075437A, CN 201610421621, CN-A-106075437, CN106075437 A, CN106075437A, CN201610421621, CN201610421621.6
【發(fā)明人】劉宗俊, 王鈾
【申請人】哈爾濱工業(yè)大學