一種膠原蛋白藥物磁性緩釋載體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種膠原蛋白藥物磁性緩釋載體的制備方法，屬于藥物載體合成領(lǐng)域。本發(fā)明以廉價(jià)易得的鯽魚魚鱗為原料，洗凈風(fēng)干后用碳酸鈉和EDTA溶液浸泡除去雜質(zhì)蛋白、色素和礦物質(zhì)成分，再用乙酸配合胃蛋白酶溶解魚鱗中的膠原蛋白，經(jīng)透析純化后，在磷酸氫二鉀緩沖液中，配合超聲處理，包覆納米四氧化三鐵，經(jīng)分離干燥后，得到膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。本發(fā)明所得緩釋載體主要成分為膠原蛋白成分，和人體生物相容性好，對人體無害，不會引起免疫排斥反應(yīng)，在使用過程中，利用四氧化三鐵的磁性，可直接到達(dá)指定部位緩釋藥物有效成分，充分發(fā)揮藥效，使患者提前康復(fù)。
【專利說明】
一種膠原蛋白藥物磁性緩釋載體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明公開了一種膠原蛋白藥物磁性緩釋載體的制備方法，屬于藥物載體合成領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]藥物釋放系統(tǒng)又稱給藥系統(tǒng)、藥物傳輸系統(tǒng)、藥物投遞系統(tǒng)，是指人們在防治疾病的過程中所采用的各種治療藥物的不同給藥形式。傳統(tǒng)的藥物釋放體系是活性藥物成分?jǐn)U散的過程?，F(xiàn)代技術(shù)希望在規(guī)定時(shí)間內(nèi)控制或者減緩藥物釋放的速率，充分發(fā)揮活性藥物成分的作用，使機(jī)體內(nèi)血藥濃度保持恒定，避免出現(xiàn)血藥濃度過高或低的現(xiàn)象，盡可能降低藥物對機(jī)體的毒副作用，提高藥物的利用率和治療效果，減少用藥劑量，降低或防止藥物對身體器官的損害。
[0003]目前所應(yīng)用的藥物緩釋材料是一些合成的(如PEG、PVA、PCL等)，合成高分子載體常常生物相容性不好，易引起機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)，有時(shí)還含有痕量引發(fā)劑等毒性雜質(zhì)，如在聚乳酸的一般生產(chǎn)方法中使用有機(jī)錫催化劑，會產(chǎn)生細(xì)胞毒性。
[0004]藥物緩釋體系雖然已經(jīng)研究的相當(dāng)成熟，但是在植入生物體后釋放的藥物仍然會對正常器官造成損害，為了進(jìn)一步避免藥物傷害正常器官，必須使緩釋載體具有靶向性，直接到達(dá)指定部位，釋放藥物有效成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對傳統(tǒng)藥物緩釋材料在制備和使用過程中出現(xiàn)的生物相容性不好，易引起機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)，而且靶向性差，造成藥物中有效成分的損失的問題，提供了一種膠原蛋白藥物磁性緩釋載體的制備方法，本發(fā)明以廉價(jià)易得的鯽魚魚鱗為原料，洗凈風(fēng)干后用碳酸鈉和EDTA溶液浸泡除去雜質(zhì)蛋白、色素和礦物質(zhì)成分，再用乙酸配合胃蛋白酶溶解魚鱗中的膠原蛋白，經(jīng)透析純化后，在磷酸氫二鉀緩沖液中，配合超聲處理，包覆納米四氧化三鐵，經(jīng)分離干燥后，得到膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。本發(fā)明所得緩釋載體主要成分為膠原蛋白成分，和人體生物相容性好，對人體無害，不會引起免疫排斥反應(yīng)，在使用過程中，利用四氧化三鐵的磁性，可直接到達(dá)指定部位緩釋藥物有效成分，充分發(fā)揮藥效，使患者提前康復(fù)。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)稱取新鮮鯽魚魚鱗200?300g，經(jīng)人工清洗除雜后，平鋪于菠蘿篩中，再將菠蘿篩轉(zhuǎn)至避光通風(fēng)處，風(fēng)干處理3?5天，收集風(fēng)干后的鯽魚魚鱗，將其倒入盛有200?300mL濃度為0.3?0.5mol/L碳酸鈉溶液的燒杯中，浸泡處理3?5h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3?5次，再將鯽魚魚鱗倒入盛有180?260mL濃度為0.2?0.4mol/LEDTA溶液的燒杯中，浸泡處理I?3h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3?5次，得預(yù)處理鯽魚魚鱗；
(2)將上述所得預(yù)處理鯽魚魚鱗用液氮冷卻處理3?5min，然后迅速鋪于石磨磨盤上，混入60?80mL濃度為0.3?0.5mol/L乙酸溶液，研磨處理3?5min，收集研磨楽液，將其置于燒杯中，再加入0.6?0.Sg胃蛋白酶，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器中，升溫至38?45°C，啟動攪拌器，以600?800r/min轉(zhuǎn)速攪拌反應(yīng)30?50min，過濾，除去濾渣，得濾液；
(3)將上述所得濾液轉(zhuǎn)入透析袋中，在自來水中透析處理24?36h，隨后轉(zhuǎn)入去離子水中，透析處理36?48h，每6h更換一次去離子水，透析結(jié)束，將透析袋中溶液抽濾，得膠原蛋白溶液；
(4)稱取0.6?0.8g納米四氧化三鐵粉末，加入盛有30?50mL上述所得膠原蛋白溶液的燒杯中，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入超聲振蕩儀中，以15?25kHz功率超聲處理8?12min，再向燒杯中加入150?250mL質(zhì)量濃度為12?16%磷酸氫二鉀溶液，繼續(xù)超聲處理6?8min，隨后將混合液轉(zhuǎn)入2?4°C冰箱中冷藏6?Sh，取出靜置，待分層后，轉(zhuǎn)入離心機(jī)離心分離，棄去上清液，得下層黑色沉淀物，用去離子水洗滌沉淀物3?5次，再將其轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理6?Sh，得黑色粉末，即為膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。
[0007]本發(fā)明的具體應(yīng)用方法:稱取0.6?0.Sg本發(fā)明所得膠原蛋白藥物磁性緩釋載體，加入盛有100?120mL質(zhì)量濃度為15?20%磷酸二氫鉀緩沖溶液的燒杯中，再加入10?20mL濃度為0.2?0.5g/L阿霉素溶液，在室溫條件下，以600?800r/min轉(zhuǎn)速攪拌混合8?12h，離心分離，棄去上清液，將下層沉淀轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理6?Sh，將得到的藥品給患者服用，在患者需要治療的部位施加磁場，使藥物到達(dá)指定位置后緩釋，患者在使用過程中未出現(xiàn)任何不良反應(yīng)，用藥量減少了 50?60%，且患者康復(fù)時(shí)間提前10?15天。
[0008]本發(fā)明的有益效果:
(1)本發(fā)明以鯽魚魚鱗為原料，減少了魚鱗的隨意丟棄而造成的環(huán)境污染，同時(shí)為漁民增加了經(jīng)濟(jì)收入來源；
(2)本發(fā)明所的藥物載體可以使藥物有效成分在指定位置緩釋，避免了藥物濫用，減少了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，使患者更快康復(fù)，減少患病帶來的痛苦，值得推廣使用。
【具體實(shí)施方式】
[0009]稱取新鮮鯽魚魚鱗200?300g，經(jīng)人工清洗除雜后，平鋪于菠蘿篩中，再將菠蘿篩轉(zhuǎn)至避光通風(fēng)處，風(fēng)干處理3?5天，收集風(fēng)干后的鯽魚魚鱗，將其倒入盛有200?300mL濃度為0.3?0.5mol/L碳酸鈉溶液的燒杯中，浸泡處理3?5h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3?5次，再將鯽魚魚鱗倒入盛有180?260mL濃度為0.2?0.4mo I/LEDTA溶液的燒杯中，浸泡處理I?3h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3?5次，得預(yù)處理鯽魚魚鱗;將上述所得預(yù)處理鯽魚魚鱗用液氮冷卻處理3?5min，然后迅速鋪于石磨磨盤上，混入60?80mL濃度為0.3?0.5mol/L乙酸溶液，研磨處理3?5min，收集研磨楽液，將其置于燒杯中，再加入0.6?0.8g胃蛋白酶，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器中，升溫至38?45°C，啟動攪拌器，以600?800r/min轉(zhuǎn)速攪拌反應(yīng)30?50min，過濾，除去濾渣，得濾液;將上述所得濾液轉(zhuǎn)入透析袋中，在自來水中透析處理24?36h，隨后轉(zhuǎn)入去離子水中，透析處理36?48h，每6h更換一次去離子水，透析結(jié)束，將透析袋中溶液抽濾，得膠原蛋白溶液;稱取0.6?0.Sg納米四氧化三鐵粉末，加入盛有30?50mL上述所得膠原蛋白溶液的燒杯中，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入超聲振蕩儀中，以15?25kHz功率超聲處理8?12min，再向燒杯中加入150?250mL質(zhì)量濃度為12?16%磷酸氫二鉀溶液，繼續(xù)超聲處理6?Smin，隨后將混合液轉(zhuǎn)入2?4°C冰箱中冷藏6?Sh，取出靜置，待分層后，轉(zhuǎn)入離心機(jī)離心分離，棄去上清液，得下層黑色沉淀物，用去離子水洗滌沉淀物3?5次，再將其轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理6?Sh，得黑色粉末，即為膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。
[0010]實(shí)例 I
稱取新鮮鯽魚魚鱗200g，經(jīng)人工清洗除雜后，平鋪于菠蘿篩中，再將菠蘿篩轉(zhuǎn)至避光通風(fēng)處，風(fēng)干處理3天，收集風(fēng)干后的鯽魚魚鱗，將其倒入盛有200mL濃度為0.3mol/L碳酸鈉溶液的燒杯中，浸泡處理3h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3次，再將鯽魚魚鱗倒入盛有180mL濃度為0.2moI/LEDTA溶液的燒杯中，浸泡處理Ih，取出魚鱗，用去離子水洗滌3次，得預(yù)處理鯽魚魚鱗;將上述所得預(yù)處理鯽魚魚鱗用液氮冷卻處理3min，然后迅速鋪于石磨磨盤上，混入60mL濃度為0.3mol/L乙酸溶液，研磨處理3min，收集研磨漿液，將其置于燒杯中，再加入0.6g胃蛋白酶，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器中，升溫至38 V，啟動攪拌器，以600r/min轉(zhuǎn)速攪拌反應(yīng)30min，過濾，除去濾渣，得濾液;將上述所得濾液轉(zhuǎn)入透析袋中，在自來水中透析處理24h，隨后轉(zhuǎn)入去離子水中，透析處理36h，每6h更換一次去離子水，透析結(jié)束，將透析袋中溶液抽濾，得膠原蛋白溶液；稱取0.6g納米四氧化三鐵粉末，加入盛有30mL上述所得膠原蛋白溶液的燒杯中，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入超聲振蕩儀中，以15kHz功率超聲處理Smin，再向燒杯中加入150mL質(zhì)量濃度為12%磷酸氫二鉀溶液，繼續(xù)超聲處理6min，隨后將混合液轉(zhuǎn)入2 °C冰箱中冷藏6h，取出靜置，待分層后，轉(zhuǎn)入離心機(jī)離心分離，棄去上清液，得下層黑色沉淀物，用去離子水洗滌沉淀物3次，再將其轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理6h，得黑色粉末，即為膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。
[0011 ]本發(fā)明的具體應(yīng)用方法:稱取0.6g本發(fā)明所得膠原蛋白藥物磁性緩釋載體，加入盛有10mL質(zhì)量濃度為15%磷酸二氫鉀緩沖溶液的燒杯中，再加入1mL濃度為0.2g/L阿霉素溶液，在室溫條件下，以600r/min轉(zhuǎn)速攪拌混合8h，離心分離，棄去上清液，將下層沉淀轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理6h，將得到的藥品給患者服用，在患者需要治療的部位施加磁場，使藥物到達(dá)指定位置后緩釋，患者在使用過程中未出現(xiàn)任何不良反應(yīng)，用藥量減少了 50%，且患者康復(fù)時(shí)間提前1天。
[0012]實(shí)例2
稱取新鮮鯽魚魚鱗260g，經(jīng)人工清洗除雜后，平鋪于菠蘿篩中，再將菠蘿篩轉(zhuǎn)至避光通風(fēng)處，風(fēng)干處理4天，收集風(fēng)干后的鯽魚魚鱗，將其倒入盛有260mL濃度為0.4mol/L碳酸鈉溶液的燒杯中，浸泡處理4h，取出魚鱗，用去離子水洗滌4次，再將鯽魚魚鱗倒入盛有240mL濃度為0.3moI/LEDTA溶液的燒杯中，浸泡處理2h，取出魚鱗，用去離子水洗滌4次，得預(yù)處理鯽魚魚鱗;將上述所得預(yù)處理鯽魚魚鱗用液氮冷卻處理4min，然后迅速鋪于石磨磨盤上，混入70mL濃度為0.4mol/L乙酸溶液，研磨處理4min，收集研磨漿液，將其置于燒杯中，再加入
0.7g胃蛋白酶，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器中，升溫至40 V，啟動攪拌器，以700r/min轉(zhuǎn)速攪拌反應(yīng)40min，過濾，除去濾渣，得濾液;將上述所得濾液轉(zhuǎn)入透析袋中，在自來水中透析處理28h，隨后轉(zhuǎn)入去離子水中，透析處理42h，每6h更換一次去離子水，透析結(jié)束，將透析袋中溶液抽濾，得膠原蛋白溶液；稱取0.7g納米四氧化三鐵粉末，加入盛有40mL上述所得膠原蛋白溶液的燒杯中，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入超聲振蕩儀中，以20kHz功率超聲處理lOmin，再向燒杯中加入180mL質(zhì)量濃度為14%磷酸氫二鉀溶液，繼續(xù)超聲處理7min，隨后將混合液轉(zhuǎn)入3 °C冰箱中冷藏7h，取出靜置，待分層后，轉(zhuǎn)入離心機(jī)離心分離，棄去上清液，得下層黑色沉淀物，用去離子水洗滌沉淀物4次，再將其轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理7h，得黑色粉末，即為膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。
[0013]本發(fā)明的具體應(yīng)用方法:稱取0.7g本發(fā)明所得膠原蛋白藥物磁性緩釋載體，加入盛有I1mL質(zhì)量濃度為18%磷酸二氫鉀緩沖溶液的燒杯中，再加入15mL濃度為0.4g/L阿霉素溶液，在室溫條件下，以700r/min轉(zhuǎn)速攪拌混合1h，離心分離，棄去上清液，將下層沉淀轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理7h，將得到的藥品給患者服用，在患者需要治療的部位施加磁場，使藥物到達(dá)指定位置后緩釋，患者在使用過程中未出現(xiàn)任何不良反應(yīng)，用藥量減少了 55%，且患者康復(fù)時(shí)間提前12天。
[0014]實(shí)例3
稱取新鮮鯽魚魚鱗300g，經(jīng)人工清洗除雜后，平鋪于菠蘿篩中，再將菠蘿篩轉(zhuǎn)至避光通風(fēng)處，風(fēng)干處理5天，收集風(fēng)干后的鯽魚魚鱗，將其倒入盛有300mL濃度為0.5mol/L碳酸鈉溶液的燒杯中，浸泡處理5h，取出魚鱗，用去離子水洗滌5次，再將鯽魚魚鱗倒入盛有260mL濃度為0.4moI/LEDTA溶液的燒杯中，浸泡處理3h，取出魚鱗，用去離子水洗滌5次，得預(yù)處理鯽魚魚鱗;將上述所得預(yù)處理鯽魚魚鱗用液氮冷卻處理5min，然后迅速鋪于石磨磨盤上，混入SOmL濃度為0.5mol/L乙酸溶液，研磨處理5min，收集研磨漿液，將其置于燒杯中，再加入
0.Sg胃蛋白酶，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器中，升溫至45 V，啟動攪拌器，以800r/min轉(zhuǎn)速攪拌反應(yīng)50min，過濾，除去濾渣，得濾液;將上述所得濾液轉(zhuǎn)入透析袋中，在自來水中透析處理36h，隨后轉(zhuǎn)入去離子水中，透析處理48h，每6h更換一次去離子水，透析結(jié)束，將透析袋中溶液抽濾，得膠原蛋白溶液；稱取0.Sg納米四氧化三鐵粉末，加入盛有50mL上述所得膠原蛋白溶液的燒杯中，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入超聲振蕩儀中，以25kHz功率超聲處理12min，再向燒杯中加入250mL質(zhì)量濃度為16%磷酸氫二鉀溶液，繼續(xù)超聲處理8min，隨后將混合液轉(zhuǎn)入4 °C冰箱中冷藏Sh，取出靜置，待分層后，轉(zhuǎn)入離心機(jī)離心分離，棄去上清液，得下層黑色沉淀物，用去離子水洗滌沉淀物5次，再將其轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理Sh，得黑色粉末，即為膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。
[0015]本發(fā)明的具體應(yīng)用方法:稱取0.Sg本發(fā)明所得膠原蛋白藥物磁性緩釋載體，加入盛有120mL質(zhì)量濃度為20%磷酸二氫鉀緩沖溶液的燒杯中，再加入20mL濃度為0.5g/L阿霉素溶液，在室溫條件下，以800r/min轉(zhuǎn)速攪拌混合12h，離心分離，棄去上清液，將下層沉淀轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理8h，將得到的藥品給患者服用，在患者需要治療的部位施加磁場，使藥物到達(dá)指定位置后緩釋，患者在使用過程中未出現(xiàn)任何不良反應(yīng)，用藥量減少了 60%，且患者康復(fù)時(shí)間提前15天。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種膠原蛋白藥物磁性緩釋載體的制備方法，其特征在于具體制備步驟為: (1)稱取新鮮鯽魚魚鱗200?300g，經(jīng)人工清洗除雜后，平鋪于菠蘿篩中，再將菠蘿篩轉(zhuǎn)至避光通風(fēng)處，風(fēng)干處理3?5天，收集風(fēng)干后的鯽魚魚鱗，將其倒入盛有200?300mL濃度為.0.3?0.5mol/L碳酸鈉溶液的燒杯中，浸泡處理3?5h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3?5次，再將鯽魚魚鱗倒入盛有180?260mL濃度為0.2?0.4mol/LEDTA溶液的燒杯中，浸泡處理I?3h，取出魚鱗，用去離子水洗滌3?5次，得預(yù)處理鯽魚魚鱗； (2)將上述所得預(yù)處理鯽魚魚鱗用液氮冷卻處理3?5min，然后迅速鋪于石磨磨盤上，混入60?80mL濃度為0.3?0.5mol/L乙酸溶液，研磨處理3?5min，收集研磨楽液，將其置于燒杯中，再加入0.6?0.Sg胃蛋白酶，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入數(shù)顯測速恒溫磁力攪拌器中，升溫至38?45°C，啟動攪拌器，以600?800r/min轉(zhuǎn)速攪拌反應(yīng)30?50min，過濾，除去濾渣，得濾液； (3)將上述所得濾液轉(zhuǎn)入透析袋中，在自來水中透析處理24?36h，隨后轉(zhuǎn)入去離子水中，透析處理36?48h，每6h更換一次去離子水，透析結(jié)束，將透析袋中溶液抽濾，得膠原蛋白溶液； (4)稱取0.6?0.8g納米四氧化三鐵粉末，加入盛有30?50mL上述所得膠原蛋白溶液的燒杯中，隨后將燒杯轉(zhuǎn)入超聲振蕩儀中，以15?25kHz功率超聲處理8?12min，再向燒杯中加入150?250mL質(zhì)量濃度為12?16%磷酸氫二鉀溶液，繼續(xù)超聲處理6?8min，隨后將混合液轉(zhuǎn)入2?4°C冰箱中冷藏6?Sh，取出靜置，待分層后，轉(zhuǎn)入離心機(jī)離心分離，棄去上清液，得下層黑色沉淀物，用去離子水洗滌沉淀物3?5次，再將其轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)中干燥處理6?Sh，得黑色粉末，即得膠原蛋白藥物磁性緩釋載體。
【文檔編號】C07K14/78GK106075463SQ201610462046
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月23日
【發(fā)明人】袁春華, 許博偉
【申請人】袁春華