專利名稱：黑素細胞的樹突伸長抑制劑以及含有該抑制劑的皮膚外用劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及黑素細胞樹突伸長抑制劑以及以該抑制劑作為有效成分的皮膚外用劑。
背景技術：
保持肌膚潔白美麗，這是大多數(shù)女性的愿望，因此開發(fā)出很多美白化妝品。例如含有抗壞血酸及其衍生物、曲酸及其衍生物、凝血酸及其衍生物、氫醌苷等的化妝品。但是，它們大多數(shù)的作用機理是抑制酪氨酸酶，從而抑制黑素的生物合成，而對黑素本身的效果則有限。也就是說，在以這些成分為有效成分的美白化妝品中，即使對起因于黑素生成異?？哼M的色斑、雀斑、膚色深等癥狀有效，但對于與黑素生成量不大相關的色素異常也只能說是單一的效果。換言之，由于存在用酪氨酸酶抑制劑沒有效或者有效性低的色素異常癥，所以人們希望開發(fā)出可以改善這樣的色素異常癥的方法。
另一方面，與黑素生成量不大有關系的色素異常例如有來自黑素細胞樹突的黑素顆粒移動亢進導致的色素異常。對于這樣的色素異常，人們考慮抑制黑素細胞在使黑素顆粒移動時，樹突的伸長。但這樣機理的美白劑尚不為人所知太多。也就是說，需要開發(fā)這樣機理的美白劑。
麥冬(麥門冬)是漢方生藥，在生津方面得到廣泛應用(日本特開2000-103718)。并且已知在化妝品等皮膚外用劑領域，含有麥冬作為具有保濕性的有效成分(日本特開平11-29968)、作為黑素生成抑制劑(日本特開平08-133949)、作為脂質(zhì)分解劑(日本特開2000-103718)，但所述麥冬中含有的成分甲基麥冬二氫高異黃酮B(methylophiopogonanoneB；2，3-二氫-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5，7-二羥基-6，8-二甲基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；以下稱為“化合物1”)等下述通式(1)所示的化合物和/或其鹽可抑制黑素細胞樹突的伸長，以及通過該作用，對通常的作用機理為酪氨酸酶抑制作用的黑素生成抑制劑無效或不太奏效的色素異常癥的改善有效，這完全未被人所知。
另外，已知麥冬等中含有甲基麥冬二氫高異黃酮B等通式(1)所示的化合物和/或其鹽(Watanabe Yoshiaki等.，Chemical&Pharmaceutical Bulltin，(1985)，33(12)，5358-5363)，其分離方法也是已知的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明基于上述狀況而進行，其目的在于提供一種成分，該成分抑制黑素細胞樹突的伸長，并通過該作用，對色素異常癥的改善有效，其中所述色素異常癥是對通常的作用機理為酪氨酸酶抑制作用的黑素生成抑制劑無效或者不太奏效的病癥。
本發(fā)明人鑒于上述狀況，為了獲得抑制黑素細胞樹突的伸長，并通過該作用，對通常的作用機理為酪氨酸酶抑制作用的黑素生成抑制劑無效或者不太奏效的色素異常癥的改善有效的成分，進行了深入的研究，結果發(fā)現(xiàn)麥冬中含有的通式(1)所示的化合物和/或其鹽具有所述作用，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明涉及以下所示的技術。
(1)含有下述通式(1)所示化合物和/或其鹽的黑素細胞的樹突伸長抑制劑。
通式(1)(其中，式中R1、R2、R3分別獨立表示碳原子數(shù)1～4的烷基或氫原子)(2)(1)中所述的黑素細胞樹突伸長抑制劑，其特征在于通式(1)所示的化合物為下式所示的甲基麥冬二氫高異黃酮B(methylophiopogonanone B)。
甲基麥冬二氫高異黃酮B(methylophiopogonanone B)(3)黑素細胞樹突伸長抑制劑用皮膚外用劑，其含有(1)或(2)中所述的黑素細胞樹突伸長抑制劑作為有效成分。
(4)(3)中所述的黑素細胞樹突伸長抑制劑用皮膚外用劑，其特征在于可用于改善酪氨酸酶抑制劑效果不充分的色素異常癥。
(5)(3)或(4)中所述的黑素細胞樹突伸長抑制劑用皮膚外用劑，其特征在于該皮膚外用劑為化妝品。
實施發(fā)明的最佳方式(1)本發(fā)明的黑素細胞樹突伸長抑制劑本發(fā)明的黑素細胞樹突伸長抑制劑含有上述通式(1)所示化合物和/或其鹽。
上述通式(1)中，R1、R2、R3分別獨立表示烷基或氫原子。
烷基優(yōu)選碳原子數(shù)1～4的烷基，例如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、正丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基等。其中特別優(yōu)選甲基。
通式(1)所表示的化合物可優(yōu)選例舉甲基麥冬二氫高異黃酮B(methylophiopogonanone B；化合物1)。
所述通式(1)所示的化合物可以直接使用，也可以與堿一起處理，成鹽后使用。
只要是生理上可接受的鹽均可使用，沒有特別限定，例如優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽；鈣鹽、鎂鹽等堿土金屬鹽；銨鹽、三乙醇胺鹽、三乙胺鹽等有機胺鹽類；賴氨酸鹽、精氨酸鹽等堿性氨基酸鹽等。特別優(yōu)選的是容易制備的堿金屬鹽。
本發(fā)明的皮膚外用劑中，可以單獨含有上述通式(1)所示化合物和/或其鹽，也可以將兩種或以上組合含有。
所述通式(1)所示化合物和/或其鹽可以是提純的，也可以是含有有效量的通式(1)所示化合物和/或其鹽的植物提取液或級分等。
這樣的植物可以使用百合科(Liliaceae)的沿階草屬(Ophiopogon)植物，優(yōu)選麥冬(Ophiopogon Japonicus Ker-Gawler)。用于提取通式(1)所示化合物和/或其鹽的植物可以是整株植物，也可以是含有通式(1)所示化合物和/或其鹽的植物的一部分，還可以是它們的加工品。例如可通過將百合科沿階草屬植物的塊狀根麥冬的提取物純化分級得到。通式(1)所示的化合物和/或其鹽的鑒定可通過X射線分析進行。
提取物特別優(yōu)選由高極性溶劑提取的提取物。高極性溶劑優(yōu)選例舉二乙醚、異丙醚、四氫呋喃等醚類；二氯甲烷、氯仿等鹵代烴類；乙酸乙酯、甲酸甲酯等酯類；丙酮或甲乙酮等酮類；乙腈等腈類；1，3-丁二醇、乙醇、異丙醇等醇類；水等。其中特別優(yōu)選醇類。上述溶劑可以是1種，也可以是2種或以上的混合物。
提取通常相對于植物體或其一部分加入1～10倍重量的溶劑，如果在室溫下則浸漬數(shù)日，如果是沸點附近的溫度則浸漬數(shù)小時。提取后，可根據(jù)需要進行減壓濃縮等除去溶劑。除去了溶劑的提取物用乙酸乙酯和水等進行液液萃取，或者以氯仿-甲醇等作為洗脫溶劑通過硅膠層析等進行純化，由此可以分離出上述通式(1)所示的化合物。
相對于皮膚外用劑總量通式(1)所示化合物和/或其鹽在本發(fā)明的皮膚外用劑中優(yōu)選的含量為0.001～10重量％，進一步優(yōu)選0.005～5重量％。過少，可能無法發(fā)揮黑素細胞樹突伸長抑制效果；過多，其效果也有上限，可能阻礙配方的自由度。
(制備例)將3kg麥冬(百合科沿階草屬麥冬的塊狀根)切碎，加入10L乙醇，加熱回流3小時。冷卻至室溫后減壓濃縮，向其中加入1L的乙酸乙酯和水，進行液液萃取，取乙酸乙酯相，減壓濃縮。將殘余物溶解于氯仿，進行硅膠柱層析，用洗脫溶劑氯仿∶甲醇＝100∶1→70∶30純化，得到225mg化合物1。其結構由X射線分析確定。
(2)本發(fā)明的皮膚外用劑本發(fā)明的皮膚外用劑的特征在于含有上述本發(fā)明的黑素細胞樹突伸長抑制劑。本發(fā)明中所述皮膚外用劑是指適合皮膚外用的組合物的總稱，可以例舉包括醫(yī)藥部外品的化妝品、皮膚外用藥、皮膚外用制品等。其中特別優(yōu)選化妝品。這是由于，上述本發(fā)明的黑素細胞的樹突伸長抑制劑具有優(yōu)異的安全性，因此可以向化妝品那樣連續(xù)、習慣性地使用，這樣的使用方式可以充分地發(fā)揮美白作用。
化妝品的劑型并沒有特別限定，由于本發(fā)明的樹突伸長抑制劑具有極性極高的物性，因此不僅在乳膏或乳液等乳化劑型中使用，也可以在化妝水或精華液等溶液劑型中使用。
本發(fā)明的皮膚外用劑中，除上述黑素細胞樹突伸長抑制劑以外，還可以含有通常的皮膚外用劑所使用的任何成分。所述任何成分例如有角鯊烷、液體石蠟、輕質(zhì)液體石蠟、重質(zhì)液體石蠟、微晶蠟、固體石蠟等烴類；二甲基硅油、フエメチコン、環(huán)甲基硅酮、アモジメチコン、聚醚改性硅氧烷等硅氧烷類；霍霍巴油、巴西棕櫚蠟、木蠟、蜜蠟、鯨蠟、油酸辛基十二醇酯、肉豆蔻酸異丙酯、新戊二醇二異硬脂酸酯、蘋果酸二異硬脂酸酯等的酯類；硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、異硬脂酸、異棕櫚酸、山萮酸、油酸等脂肪酸類；山萮醇、鯨蠟醇、油醇、十八烷醇等高級醇類；蓖麻油、椰子油、氫化椰子油、山茶油、小麥胚芽油、異硬脂酸甘油三酯、異辛酸甘油三酯、橄欖油等甘油三酯類；1，3-丁二醇、甘油、雙甘油、雙丙甘醇、聚乙二醇、1，2-戊二醇、1，2-己二醇、異戊二醇等多元醇類；脫水山梨糖醇倍半油酸酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇三油酸酯、脫水山梨糖醇倍半硬脂酸酯、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯油酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯硬化蓖麻油等非離子表面活性劑類；月桂基硬脂酸鈉、聚氧乙烯烷基硫酸鹽、磺基琥珀酸酯鹽等陰離子表面活性劑類；烷基季銨鹽等陽離子表面活性劑類；烷基甜菜堿等兩性表面活性劑類；結晶纖維素或交聯(lián)型聚甲基硅氧烷、聚乙烯粉末、丙烯酸樹脂粉體等有機粉體類；滑石粉、云母、絹云母、碳酸鎂、碳酸鈣、二氧化鈦、氧化鐵、深藍、群青、云母鈦、絹云母鈦、二氧化硅等可進行表面處理的粉體類；丙烯酸·甲基丙烯酸烷基酯共聚物和/或其鹽、羧基乙烯基聚合物和/或其鹽、黃原酸膠或羥丙基纖維素等增稠劑；視黃醇、視黃酸、生育酚、核黃素、吡哆醇、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯鹽等維生素或者甘草酸鹽、甘草亭、烏索酸、齊墩果醇酸等萜類；雌二醇、乙炔雌二醇、雌三醇等類固醇類等的有效成分；苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸酯類、洗必泰葡糖酸酯、苯扎氯銨等防腐劑；二甲基氨基苯甲酸酯類、肉桂酸酯類、二苯酮類等紫外吸收劑等。
當然，還可以含有與本發(fā)明的樹突伸長抑制劑機理不同的美白劑、例如抗壞血酸及其衍生物、曲酸及其衍生物、凝血酸及其衍生物、氫醌苷等，含有上述物質(zhì)時至少可以獲得協(xié)同效果，因而優(yōu)選。相對于皮膚外用劑總量與所述樹突伸長抑制劑機理不同的美白劑的優(yōu)選以總含量計為0.01～5重量％。
本發(fā)明的皮膚外用劑適應癥優(yōu)選為酪氨酸酶抑制劑的效果不充分的色素異常癥。本說明書中，“酪氨酸酶抑制劑的效果不充分的色素異常癥”是指使用酪氨酸酶抑制劑(例如熊果苷等)，通過實施例2所述的方法等進行試驗時，70％或以上的專業(yè)評價人員判斷為“色素異常未改善”的色素異常癥。
本發(fā)明的皮膚外用劑可通過按照常規(guī)方法處理上述必須成分和任意成分來制備。
實施例以下給出實施例，對本發(fā)明進行更詳細的說明，當然本發(fā)明并不僅限于所述實施例。
<實施例1>
使用人黑素細胞，按照以下方法研究樹突伸長抑制作用。
(試劑類)細胞、基礎培養(yǎng)基、增殖添加劑均購自倉敷紡織(株)。
(細胞)正常人黑素細胞(培養(yǎng)基)基礎培養(yǎng)基(Medium 154S)中添加以下試劑。
(試劑)增殖添加劑牛腦垂體提取液(BPE)(培養(yǎng)基中的終濃度為0.4％v/v)、胎牛血清(FBS)(培養(yǎng)基中的終濃度為0.5％v/v)、重組人堿性成纖維細胞生長因子(rFGF-B)(培養(yǎng)基中的終濃度為3ng/ml)、氫化可的松(培養(yǎng)基中的終濃度為0.18μg/ml)、胰島素(培養(yǎng)基中的終濃度為5μg/ml)、運鐵蛋白(培養(yǎng)基中的終濃度為5μg/ml)、12-肉豆蔻13-乙酸-佛波醇酯(PMA)(培養(yǎng)基中的終濃度為10ng/ml)、肝素(培養(yǎng)基中的終濃度為3μg/ml)、PSA溶液(青霉素濃度50,000單位/ml、鏈霉素濃度50μg/ml、兩性霉素B濃度12.5μg/ml的混合溶液。每500ml培養(yǎng)基添加1ml。)(方法)·將上述制備例中所得化合物1(甲基麥冬二氫高異黃酮B)用基礎培養(yǎng)基稀釋為濃度100μg/ml，制備樣品溶液。對照為只有基礎培養(yǎng)基的溶液。
·將正常人黑素細胞接種于48孔板中(3000細胞/孔、200μl培養(yǎng)基)，在37℃下培養(yǎng)。
·24小時后加入50μl樣品溶液。
·添加樣品24小時后觀察對樹突伸長的抑制。
(結果)以樹突的長度為結果，如表1所示?？芍獙φ罩幸蛏L因子的添加效果，樹突伸長，但化合物1添加組中伸長被抑制。
表1

<實施例2>
按照下述配方制備作為本發(fā)明的皮膚外用劑的化妝品。即，將(一)、(二)、(三)的成分分別加熱到70℃，將(二)用(三)中和，邊攪拌邊慢慢加入(一)，乳化，用均化器進行均化，然后攪拌冷卻，得到乳液。同時制備比較例1，其中將化合物1置換為角鯊烷，采用通常使用抑制黑素生成的化妝品而沒有改善的因膚色深而煩惱的人，10名為一組，共采用20名，進行早晚共兩次，連續(xù)使用30天的使用測試，研究膚色深度的改善程度。使用30天后，由專業(yè)評價人員打分評價改善程度，5分顯著改善，4分明顯改善，3分改善，2分稍有改善，1分未改善。結果如表2所示。由此可知作為本發(fā)明的皮膚外用劑的化妝品具有優(yōu)異的美白效果。
(一)角鯊烷10重量份脫水山梨糖醇倍半硬脂酸酯 2重量份化合物1 0.005重量份對羥基苯甲酸丁酯 0.1重量份(二)1，3-丁二醇 5重量份黃原酸膠 0.1重量份丙烯酸·甲基丙烯酸烷基酯(C10～C30)0.4重量份對羥基苯甲酸甲酯 0.1重量份水 50重量份(三)氫氧化鉀 0.2重量份水 32.095重量份表2

<實施例3>
與實施例2同樣，改變化合物1的量，制備皮膚外用劑(化妝品)，仍使用上述10名專業(yè)評價人員進行同樣的評價?？纱_認該皮膚外用劑也取得了同樣的效果。
(一)角鯊烷 10重量份脫水山梨糖醇倍半硬脂酸酯 2重量份化合物1 0.01重量份對羥基苯甲酸丁酯 0.1重量份(二)1，3-丁二醇 5重量份黃原酸膠 0.1重量份丙烯酸·甲基丙烯酸烷基酯(C10～C30) 0.4重量份對羥基苯甲酸甲酯 0.1重量份水 50重量份(三)氫氧化鉀 0.2重量份水 32.09重量份表3

<實施例4>
按照以下配方，與實施例2、3同樣地制備皮膚外用劑(化妝品)，由同樣的專業(yè)評價人員進行同樣的評價。將化合物1置換為熊果苷，以此作為比較例2，進行同樣的評價，。結果見表4。專業(yè)評價人員未證實酪氨酸酶抑制劑的美白效果，但這些專業(yè)評價人員證實了本發(fā)明的黑素細胞樹突伸長抑制劑有效地發(fā)揮了作用。
(一)角鯊烷 10重量份脫水山梨糖醇倍半硬脂酸酯2重量份化合物1 1重量份對羥基苯甲酸丁酯0.1重量份(二)1，3-丁二醇 5重量份黃原酸膠0.1重量份丙烯酸·甲基丙烯酸烷基酯(C10～C30) 0.4重量份對羥基苯甲酸甲酯0.1重量份水 50重量份(三)氫氧化鉀0.2重量份水 31.1重量份表4

產(chǎn)業(yè)實用性本發(fā)明提供一種成分，該成分抑制黑素細胞樹突的伸長，并通過該作用，對通常的機理為酪氨酸酶抑制作用的黑素生成抑制劑無效或者不太奏效的色素異常癥的改善有效。
權利要求
1.一種黑素細胞樹突伸長抑制劑，該抑制劑含有下述通式(1)所示的化合物和/或其鹽 通式(1)其中，式中R1、R2、R3分別獨立表示碳原子數(shù)1～4的烷基或氫原子。
2.如權利要求1所述的黑素細胞樹突伸長抑制劑，其特征在于通式(1)所示的化合物為下式所表示的甲基麥冬二氫高異黃酮B 甲基麥冬二氫高異黃酮B(methylophiopogonanone B)
3.黑素細胞樹突伸長抑制劑用皮膚外用劑，其含有權利要求1或2所述的黑素細胞樹突伸長抑制劑作為有效成分。
4.如權利要求3所述的黑素細胞樹突伸長抑制用皮膚外用劑，其特征在于可用于改善酪氨酸酶抑制劑的作用效果不充分的色素異常癥。
5.權利要求3或4所述的黑素細胞樹突伸長抑制的用皮膚外用劑，其特征在于該皮膚外用劑為化妝品。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有下述通式(1)所示的化合物和/或其鹽的黑素細胞樹突伸長抑制劑以及以其為有效成分的皮膚外用劑其中，式中R
文檔編號A61Q19/00GK1720019SQ200380104810
公開日2006年1月11日 申請日期2003年11月28日 優(yōu)先權日2002年12月2日
發(fā)明者多田明弘, 金丸晶子, 佐伯夕子 申請人:寶麗化學工業(yè)有限公司