專利名稱：美容嫩膚液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥美容制劑，特別涉及一種由鮮益母草和鮮白芷的汁液組成的美容嫩膚液。
背景技術(shù)：
益母草味苦、辛，性微寒，主歸肝、心、膀胱經(jīng)。主要有活血、去瘀、調(diào)經(jīng)等功能，為婦科經(jīng)產(chǎn)良藥。其在美容方面的功效也早有運(yùn)用和記載陳藏器日其入面藥，能治粉刺，使人顏面光澤；唐天后武則天亦用“煉益母澤通法”。但是還未見將其制成美容嫩膚制劑的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以益母草為主要原料，輔以其它中草藥，制成中藥美容制劑——美容嫩膚液。該嫩膚液無(wú)毒，對(duì)皮膚無(wú)刺激，對(duì)皮膚黑色素有抑制作用和抗皮膚衰老作用。
本發(fā)明的一種中藥美容嫩膚制劑，主要由鮮益母草榨出的汁液和鮮白芷榨出的汁液組成，其鮮益母草榨出的汁液和鮮白芷榨出的汁液體積比為1∶1。
本發(fā)明的中藥美容嫩膚制劑的制備方法是，先將等質(zhì)量鮮益母草和鮮白芷分別榨出汁液，然后按榨出的鮮益母草汁液和鮮白芷汁液體積比為1∶1混合均勻，即制得中藥美容嫩膚制劑—美容嫩膚液。
經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的美容嫩膚液對(duì)B-16黑素瘤細(xì)胞株抑制率達(dá)17.2％，對(duì)在黑素生成過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用的酪氨酸酶活性呈抑制作用，有防止皮膚衰老作用趨向，有促進(jìn)真皮中成纖維細(xì)胞分裂及其合成和分泌膠原蛋白和彈性蛋白的能力，促進(jìn)了皮膚彈性活力的恢復(fù)，無(wú)毒，對(duì)皮膚無(wú)刺激，對(duì)痢疾、金黃色葡萄球菌有抑菌作用；對(duì)綠膿桿菌、大腸、變形菌無(wú)抑菌作用


圖1為本發(fā)明的美容嫩膚液的制備工藝流程本嫩膚液的制備工藝首先將等質(zhì)量的鮮益母草和鮮白芷分別榨出汁液，然后將榨出的鮮益母草汁液和鮮白芷汁液按體積比為1∶1混合，即制得美容嫩膚液。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1美容嫩膚液的制備取洗凈晾干的鮮益母草和鮮白芷各500克，分別榨出汁液，得到鮮益母草汁液150毫升，鮮白芷汁液50毫升，然后取鮮益母草汁液50毫升和鮮白芷汁液50毫升混合均勻，即制得中藥美容嫩膚制劑—美容嫩膚液100毫升，每毫升含生藥6.65克。
用實(shí)施例1制得的美容嫩膚液做實(shí)施例2～實(shí)施例8實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2美容嫩膚液對(duì)B-16黑素瘤細(xì)胞株抑制率實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料和方法
1、實(shí)驗(yàn)材料(1)、試劑采用中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC武漢大學(xué)細(xì)胞庫(kù))提供的B-16黑素瘤細(xì)胞株，美國(guó)GIBCO的RPMI1640培養(yǎng)基(RPMImedium1640，Gibcobrl；瓊脂糖，華美生物工程公司)，美國(guó)SIGMA的胰蛋白酶(TYPSIN)，武漢市北郊農(nóng)場(chǎng)的胎牛血清(FatalBovine Serum，F(xiàn)BS)，美國(guó)SIGMA的噻唑藍(lán)(甲基噻唑基四唑MTT)和北京北化精細(xì)化學(xué)公司產(chǎn)的二甲基亞砜(DMSO)為實(shí)驗(yàn)材料。
(2)、藥物高劑量相當(dāng)于生藥33毫克/毫升；中劑量相當(dāng)于生藥的3.3毫克/毫升；低劑量相當(dāng)于生藥的0.33毫克/毫升。
2、實(shí)驗(yàn)方法(1)、RPMI1640培養(yǎng)液稱10.4克粉末(市售進(jìn)口產(chǎn)品一般為一包)，溶于1000毫升三蒸水中，按200ul/毫升和100ul/毫升分別加入青霉素及鏈霉素，待溶解后通入CO2約5分鐘，至液體呈檸檬色后加入0.3克/升谷氨酰胺，或先用1N HCl調(diào)至pH6.8以下，后用濃度為1當(dāng)量NaOH調(diào)至pH7.2～pH7.4；用無(wú)菌玻璃濾器或金屬濾器0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，按所需量分裝，置4℃低溫保存。
(2)、質(zhì)量濃度為0.25％胰蛋白酶用pH7.6無(wú)血清1640配制，0.22μm微膜孔過(guò)濾。
(3)、甲基噻唑基四唑液37℃水浴中溶解于0.01毫升/升，PH 7.4的磷酸緩沖液(PBS)，濃度為5毫克/毫升，0.22μm微膜孔過(guò)濾，置棕色小瓶中，4℃保存。
(4)、B-16黑素瘤細(xì)胞株的培養(yǎng)B-16黑素瘤細(xì)胞株用質(zhì)量濃度為0.25％胰蛋白酶消化2分鐘，然后加入RPM1640培養(yǎng)基，用吸管反復(fù)吹打，分別加入卡氏培養(yǎng)瓶置PCS-100電腦C細(xì)胞培養(yǎng)傳代培養(yǎng)，一般2-3天傳一代待細(xì)胞匯合作以后制備成細(xì)胞懸液備用。
(5)、MTT法檢測(cè)B-16細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制率1)、檢測(cè)原理活細(xì)胞的線粒體中琥珀膠氫酶能使外源性的甲基噻唑基四唑還原為難溶的藍(lán)色結(jié)晶物，而死細(xì)胞無(wú)此功能，二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)在490納米波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，可間接地反映活細(xì)胞數(shù)量。
2)、檢測(cè)步驟①質(zhì)量濃度為0.25％胰蛋白酶消化培養(yǎng)的B-16細(xì)胞株，將RPMI1640常規(guī)培養(yǎng)基配成的細(xì)胞懸液以7×103個(gè)/孔種入96孔板，培養(yǎng)板周邊的孔不加入細(xì)胞，防止有邊緣效應(yīng)，另留空白孔調(diào)零，以只加細(xì)胞不加中藥作空白對(duì)照；②待細(xì)胞貼壁后，分別加入含生藥33毫克/毫升(30ul/孔)3孔，3.3毫克/毫升(30ul/孔)3孔和0.33毫克/毫升(30ul/孔)3孔，培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時(shí)后棄培養(yǎng)基。
③吸棄舊液，加磷酸緩沖液洗1次，加入甲基噻唑基四唑溶液20毫升，37℃，5％CO2繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，終止培養(yǎng)。
④吸凈孔內(nèi)培養(yǎng)液棄之，加入二甲基亞砜100ul/孔，振蕩10分鐘，使結(jié)晶充分溶解。
⑤在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上(490納米波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光度光密度OD值，OD值與活細(xì)胞成正比。
⑥根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率＝(空白對(duì)照OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/空白對(duì)照組OD值×100％。
主要技術(shù)與性能指標(biāo)

模數(shù)混合型控制電路，雙DSP完成數(shù)據(jù)采集、數(shù)學(xué)計(jì)算和控制指令信號(hào)的產(chǎn)生。電流跟蹤采用模擬式控制，具有很好的快速性。
主要技術(shù)與性能指標(biāo)

正常對(duì)照組，每組10只。
(2)、給藥方法給大鼠背部脫毛；前三組大鼠背部脫毛處，分別均勻涂抹嫩膚液、維生素E膠囊和生理鹽水，并均用保鮮膜保護(hù)2小時(shí)，每日1次，連續(xù)給藥30天。
(3)、取材及檢測(cè)方法于第31天斷頸處死動(dòng)物，取背部涂藥處皮膚，用質(zhì)量濃度為20％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色法(HE染色)，在光電顯微鏡下進(jìn)行成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)。每片計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，記錄其中成纖維細(xì)胞數(shù)目。
結(jié)果涂抹嫩膚液的大鼠皮膚組織中，成纖維細(xì)胞數(shù)明顯增加，與模型組比較，有高顯著性差異(t＝4.62，P＜0.001)。結(jié)果如表4表4嫩膚液對(duì)衰老大鼠皮膚中成纖維細(xì)胞含量影響(X±S)

與模型組相比較以△表示，△(P＜0.05)，△△(P＜0.01)；與正常組相比較以▲表示，▲(P＜0.05)，▲▲(P＜0.01)；與陽(yáng)性組相比較以*表示，*(P＜0.05)，**(P＜0.01)；結(jié)論據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，自然老化的皮膚其成纖維細(xì)胞減少，膠原和彈性纖維合成能力下降。因此，成纖維細(xì)胞減少，皮膚彈性降低是皮膚衰老的重要標(biāo)志。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示嫩膚液對(duì)真皮中成纖維細(xì)胞產(chǎn)生了刺激作用，促進(jìn)了成纖維細(xì)胞分裂及其合成和分泌膠原蛋白和彈性蛋白的能力，促進(jìn)了皮膚彈性活力的恢復(fù)。
實(shí)施例6美容嫩膚液對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚的急性毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料和方法1、實(shí)驗(yàn)材料(1)、藥物實(shí)施例1的嫩膚液嫩膚液。
(2)、動(dòng)物健康成年白色家兔(由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)JJLA2004-038)，雌雄各半，體重1.5千克左右。
2、實(shí)驗(yàn)方法(1)、將6只家兔隨機(jī)分為2組，A組賦形劑組；B組嫩膚液大劑量組(含生藥6.65克/毫升)。常規(guī)給家兔背部脫毛，去毛面積約為體表面積的10％(約150cm2)。去毛后24小時(shí)給脫毛部位涂藥，24小時(shí)內(nèi)涂藥2次。給藥24小時(shí)后，用溫水除去殘留的藥物，觀察1、24、48、72小時(shí)至第七日。每日觀察并記錄動(dòng)物的體重、皮膚毛發(fā)、眼和粘膜的變化、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等表現(xiàn)。
(2)、另取6只家兔，分組情況、給藥劑量及用藥途徑同前。用400號(hào)細(xì)砂紙?jiān)诿撁课辉斐刹羵?，使皮膚出現(xiàn)密集出血點(diǎn)，立即在擦傷部位涂藥，觀察指標(biāo)同前并與對(duì)照組比較。
主要技術(shù)與性能指標(biāo)

模數(shù)混合型控制電路，雙DSP完成數(shù)據(jù)采集、數(shù)學(xué)計(jì)算和控制指令信號(hào)的產(chǎn)生。電流跟蹤采用模擬式控制，具有很好的快速性。
主要技術(shù)與性能指標(biāo)

模數(shù)混合型控制電路，雙DSP完成數(shù)據(jù)采集、數(shù)學(xué)計(jì)算和控制指令信號(hào)的產(chǎn)生。電流跟蹤采用模擬式控制，具有很好的快速性。
權(quán)利要求
1.一種中藥美容嫩膚制劑，其特征在于主要由鮮益母草榨出的汁液和鮮白芷榨出的汁液組成，其鮮益母草榨出的汁液和鮮白芷榨出的汁液體積比為1∶1。
2.權(quán)利要求1所述的中藥美容嫩膚制劑的制備方法，其特征在于，先將等質(zhì)量鮮益母草和鮮白芷分別榨出汁液，然后按榨出的鮮益母草汁液和鮮白芷汁液體積比為1∶1混合均勻，制得中藥美容嫩膚制劑—美容嫩膚液。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種中藥美容嫩膚制劑。該制劑的制備方法是，先將等質(zhì)量鮮益母草和鮮白芷分別榨出汁液，然后按榨出的鮮益母草汁液和鮮白芷汁液體積比為1∶1混合均勻，即制得中藥美容嫩膚制劑一美容嫩膚液。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的美容嫩膚液對(duì)B－16黑素瘤細(xì)胞株抑制率達(dá)17.2％，對(duì)在黑素生成過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用的酪氨酸酶活性呈抑制作用，有防止皮膚衰老作用趨向，有促進(jìn)真皮中成纖維細(xì)胞分裂及其合成和分泌膠原蛋白和彈性蛋白的能力，促進(jìn)了皮膚彈性活力的恢復(fù)，無(wú)毒，對(duì)皮膚無(wú)刺激，對(duì)痢疾、金黃色葡萄球菌有抑菌作用；對(duì)綠膿桿菌、大腸、變形菌無(wú)抑菌作用。
文檔編號(hào)A61Q19/00GK1839795SQ20061001826
公開日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月19日
發(fā)明者張介眉, 張耕 申請(qǐng)人:張介眉