專利名稱：扁藻胞內(nèi)活性物質(zhì)的集成提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，涉及扁藻胞內(nèi)活性物質(zhì)的集成提取。
背景技術(shù)：
海洋微藻因其不同于陸地的生長環(huán)境而具有許多特異的生物活性物質(zhì)，目前，許多國家和地區(qū)對其進(jìn)行了有關(guān)培養(yǎng)、營養(yǎng)價(jià)值分析及開發(fā)利用研究，從中生產(chǎn)出了大量用途廣泛的產(chǎn)品，如食品添加劑、保健食品、殺蟲劑、植物生長調(diào)節(jié)劑以及抗菌、抗病毒和抗癌物質(zhì)。在從微藻提取各種物質(zhì)的過程中，一般只注重目標(biāo)產(chǎn)物的提取和純化，而對微藻中其它的活性物質(zhì)往往因?yàn)樘崛」に嚥贿m合而被破壞，或當(dāng)作廢物被忽略，這大大地浪費(fèi)了寶貴的生物資源；而有些提取過程比較繁瑣、耗時(shí)，增加了能源消耗，提高了產(chǎn)品的成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從新鮮的海洋亞心型扁藻細(xì)胞中提取活性物質(zhì)的集成提取方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是提供一種扁藻胞內(nèi)活性物質(zhì)的集成提取方法，是以新鮮的海洋亞心型扁藻為原料，經(jīng)浸提、萃取、凝析、離心分離和干燥過程提取制得色素、粗蛋白和扁藻糖蛋白；包括如下步驟A、將用海水培養(yǎng)至平衡期后的扁藻培養(yǎng)液于3000-3500rpm離心3-5分鐘，得原藻泥；B、將原藻泥分別用1倍體積的去離子水反復(fù)清洗3遍，得清洗液和一級藻泥；
C、將一級藻泥循環(huán)凍融3次后，再分別與去離子水按1∶4和1∶2的體積比例攪拌混勻，離心2次，收集上清液得一級清液和二級藻泥；D、一級清液中加入飽和(NH4)2SO4溶液得蛋白質(zhì)沉淀和二級清液；蛋白質(zhì)沉淀用去離子水復(fù)溶后，透析去除(NH4)2SO4，溶液減壓干燥得蛋白質(zhì)；E、合并步驟B、D中的清洗液和二級清液，按1∶1的體積比例加入乙酸乙酯，萃取色素，分離得有機(jī)層和三級清液，將有機(jī)層減壓干燥，得副產(chǎn)物色素；F、將步驟E三級清液與步驟C二級藻泥混合均勻，在60-80℃加熱2小時(shí)后離心，得四級清液和沉淀，沉淀作為副產(chǎn)物用于農(nóng)作物生長的促進(jìn)劑和肥料；G、將四級清液加熱濃縮至原體積的1/4，冷卻至室溫，再加入無水乙醇于4℃過夜使沉淀老化，離心分別獲取乙醇濃度為0-50％和50-75％的兩種級分的扁藻粗糖蛋白；剩余的上清液按步驟E提取色素；H、兩種粗糖蛋白沉淀重新溶于去離子水后，再用無水乙醇重沉淀1次，洗2次，最后用丙酮沖洗2次，通過水浴加熱、干燥，得淡乳白色粉末，即為扁藻糖蛋白。
用乙醇濃度為0-50％級分的扁藻粗糖蛋白提純得到的扁藻糖蛋白，呈淡乳白色粉末，易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，對體外培養(yǎng)的QGY-7701肝癌細(xì)胞、紅白血病K562細(xì)胞的抑制率為60-75％；對純系小鼠BL/C57體內(nèi)黑色素瘤的抑制率為34％，并可促使小鼠的生長。所提取的副產(chǎn)物蛋白質(zhì)和色素可用于食品添加劑和化妝品，藻泥用于農(nóng)作物生長的促進(jìn)劑和肥料。
本制備工藝充分利用海洋扁藻資源，特別是利用用作海珍品幼體培養(yǎng)的優(yōu)良餌料亞心型扁藻(Platymonas subcordiformis))，在提取扁藻糖蛋白的過程中結(jié)合其他副產(chǎn)物的特點(diǎn)，同時(shí)提取了蛋白質(zhì)、色素，而剩下的藻泥用于農(nóng)作物生長的促進(jìn)劑和肥料。工藝簡潔，提高了原料的利用率，降低了能源消耗，縮短了生產(chǎn)過程，降低了生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例可以幫助本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1.
A、將用海水培養(yǎng)至平衡期后的扁藻培養(yǎng)液于3000-3500rpm離心3-5分鐘，得原藻泥；B、將原藻泥分別用1倍體積的去離子水反復(fù)清洗3遍，得清洗液和一級藻泥；C、將一級藻泥循環(huán)凍融3次后，再分別與去離子水按1∶4和1∶2的體積比例攪拌混勻，離心2次，收集上清液得一級清液和二級藻泥；D、一級清液中加入飽和(NH4)2SO4溶液得粗蛋白質(zhì)沉淀和二級清液；粗蛋白質(zhì)沉淀用去離子水復(fù)溶后，透析去除(NH4)2SO4，溶液減壓干燥得蛋白質(zhì)；E、合并步驟B、D中的清洗液和二級清液，按1∶1的體積比例加入乙酸乙酯，萃取色素，分離得有機(jī)層和三級清液，將有機(jī)層減壓干燥，得副產(chǎn)物色素；F、將步驟E三級清液與步驟C二級藻泥混合均勻，在60-80℃加熱2小時(shí)后離心，得四級清液和沉淀，沉淀作為副產(chǎn)物用于農(nóng)作物生長的促進(jìn)劑和肥料；G、將四級清液加熱濃縮至原體積的1/4，冷卻至室溫，再加入無水乙醇于4℃過夜使沉淀老化，離心分別獲取乙醇濃度為0-50％和50-75％的兩種級分的扁藻粗糖蛋白；剩余的上清液按步驟E提取色素；H、兩種扁藻粗糖蛋白沉淀重新溶于去離子水后，按1∶1的體積比例再用無水乙醇重沉淀1次，洗2次，最后用丙酮沖洗2次，通過水浴加熱、干燥，得淡乳白色粉末，即為扁藻糖蛋白。
權(quán)利要求
1.一種扁藻胞內(nèi)活性物質(zhì)的集成提取方法，其特征是以新鮮的海洋亞心型扁藻為原料，經(jīng)浸提、萃取、凝析、離心分離和干燥過程制得色素、粗蛋白和扁藻糖蛋白；包括如下步驟A、將用海水培養(yǎng)至平衡期后的扁藻培養(yǎng)液于3000-3500rpm離心3-5分鐘，得原藻泥；B、將原藻泥分別用1倍體積的去離子水反復(fù)清洗3遍，得清洗液和一級藻泥；C、將一級藻泥循環(huán)凍融3次后，再分別與去離子水按1∶4和1∶2的體積比例攪拌混勻，離心2次，收集上清液得一級清液和二級藻泥；D、一級清液中加入飽和(NH4)2SO4溶液得粗蛋白質(zhì)沉淀和二級清液；粗蛋白質(zhì)沉淀用去離子水復(fù)溶后，透析去除(NH4)2SO4，溶液減壓干燥得蛋白質(zhì)；E、合并步驟B、D中的清洗液和二級清液，按1∶1的體積比例加入乙酸乙酯，萃取色素，分離得有機(jī)層和三級清液，將有機(jī)層減壓干燥，得副產(chǎn)物色素；F、將步驟E三級清液與步驟C二級藻泥混合均勻，在60-80℃加熱2小時(shí)后離心，得四級清液和沉淀，沉淀作為副產(chǎn)物用于農(nóng)作物生長的促進(jìn)劑和肥料；G、將四級清液加熱濃縮至原體積的1/4，冷卻至室溫，再加入無水乙醇于4℃過夜使沉淀老化，離心分別獲取乙醇濃度為0-50％和50-75％的兩種級分的扁藻粗糖蛋白；剩余的上清液按步驟E提取色素；H、兩種粗糖蛋白沉淀重新溶于去離子水后，再用無水乙醇重沉淀1次，洗2次，最后用丙酮沖洗2次，通過水浴加熱、干燥，得淡乳白色粉末，即為扁藻糖蛋白。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，涉及扁藻胞內(nèi)活性物質(zhì)的集成提取方法，是利用乙酸己酯提取扁藻細(xì)胞中的色素、用飽和(NH
文檔編號A61Q1/00GK1844259SQ200610046500
公開日2006年10月11日 申請日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者楊海波, 劉艷, 于媛, 趙蓮華, 呂玉瑤, 王曉紅 申請人:大連大學(xué)