專利名稱：：一種可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：目前對于微孔板式化學(xué)發(fā)光及其他一些生物檢測方法，在免疫反應(yīng)結(jié)束后，通常使用洗滌液進(jìn)行沖洗，以去除沒有參加反應(yīng)物質(zhì)，經(jīng)過沖洗后，再利用儀器檢測保留下的結(jié)合物信號，從而實(shí)現(xiàn)對樣本檢測項(xiàng)目的檢測。在化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)中，洗滌液是一個(gè)十分關(guān)鍵的組分，目前生產(chǎn)者都是通過在成品試劑盒中配置一瓶濃縮洗滌液或一袋化學(xué)固體配料袋的方式提供給用戶，實(shí)驗(yàn)人員在每次實(shí)驗(yàn)前必須按照產(chǎn)品說明書的要求用去離子水稀釋相應(yīng)的倍數(shù)，然后才能使用。化學(xué)發(fā)光免疫分析屬于高精度分析，對洗滌這一步的要求較高，由于用戶使用的純化水或雙蒸水質(zhì)量參差不齊，或是操作者稀釋錯(cuò)誤倍數(shù)等因素常常會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)配制過程也浪費(fèi)了用戶的時(shí)間。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述濃縮洗滌液或化學(xué)固體配料袋在使用中存在的問題而提出并完成了本發(fā)明。本發(fā)明的目的之一是提供一種直接可用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液。本發(fā)明的目的之二是提供一種直接可用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液的制備方法。根據(jù)本發(fā)明的直接可用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液，由工作濃度的化學(xué)發(fā)光免疫分析洗滌液分裝制成，在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌步驟時(shí)，直接使用所述洗滌工作液。根據(jù)本發(fā)明的洗滌工作液，其中，所述洗滌液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，所述磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的濃度為0.01mol/L-0.lmol/U根據(jù)本發(fā)明的洗滌工作液，其中，所述洗滌工作液含有表面活性劑和/或生物防腐劑，所述表面活性劑可以為Tween20、Tween80的至少一種，其濃度為0.005%-0.05%，所述生物防腐劑可以為Proclin300、硫柳汞鈉的至少一種，Proclin300最佳濃度為0.1%，硫柳汞鈉最佳濃度為lmmol/L。將本發(fā)明中添加有表面活性劑和生物防腐劑的洗滌工作液與傳統(tǒng)的沒有加入上述物質(zhì)的洗漆液各5瓶同時(shí)放入37'C烤箱內(nèi)，進(jìn)行考核，在30天后傳統(tǒng)洗滌液有3瓶出現(xiàn)肉眼可見直徑lmra-3mm大小的白色絮狀浮游菌落，本發(fā)明的洗滌工作液在37。C下考核180天及室溫(17t:-32。C)放置365天沒有出現(xiàn)肉眼可見的菌落。本發(fā)明通過在潔凈度高達(dá)10萬級的生產(chǎn)條件下，使用去離子水(電阻率大于16MQ，cm)配制工作濃度的洗滌液，較傳統(tǒng)的使用前將濃縮液或配料袋稀釋到工作濃度的方法相比，能夠徹底避免由于不同水質(zhì)的原因或是操作者稀釋錯(cuò)誤倍數(shù)等原因所導(dǎo)致的測定結(jié)果的誤差，同時(shí)給用戶提供直接可用的洗滌工作液(無需稀釋)就可使用，節(jié)約了用戶的時(shí)間并避免了風(fēng)險(xiǎn)。通過添加表面活性劑提高了洗滌的效果；通過添加生物防腐劑抑制細(xì)菌真菌等微生物滋生。本發(fā)明的洗滌工作液可以直接使用，而傳統(tǒng)洗滌液需要稀釋相應(yīng)倍數(shù)后才可使用。本發(fā)明的洗漆工作液區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)在于現(xiàn)有技術(shù)使用方法是通過在成品試劑盒中配置一瓶濃縮洗滌液或一袋化學(xué)固體配料袋的方式提供給用戶，實(shí)驗(yàn)人員在每次實(shí)驗(yàn)前必須按照產(chǎn)品說明書的要求用水稀釋相應(yīng)的倍數(shù)，然后才能使用根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案通過生產(chǎn)者直接向使用者提供無需稀釋或溶解處理直接使用的洗滌液，從而解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的弊端。根據(jù)本發(fā)明的直接可用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液的制備方法包括以下步驟-1)根據(jù)洗滌液配方配制工作濃度的洗滌液；2)將上述配制好的洗滌液分裝到容器內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，發(fā)明人通過對比試驗(yàn)從眾多緩沖液中優(yōu)選出洗滌效果最好的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，最佳的濃度為0.01mol/L0.lmol/L，作為本發(fā)明洗滌工作液的基礎(chǔ)液。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，其中所述洗滌液中含有表面活性劑和/或生物防腐劑，所述表面活性劑為Tween20和/或Tween80，所述生物防腐劑為Proclin300和/或硫柳汞鈉，所述表面活性劑Tween20和/或Tween80的濃度為0.005%-0.05%v/v，所述Proclin300的濃度為0.1%，硫柳汞鈉的濃度為lmmol/L。圖1為實(shí)施例5中使用本發(fā)明洗滌工作液后的校準(zhǔn)品線性圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1配制本發(fā)明的用于化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌工作液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液濃度為0.01M)用去離子水(電阻率18.2MQ)按照如下配方進(jìn)行配制0.01mol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液磷酸氫二鈉(Na2HP04'12H20)257.9g磷酸二氫鈉(NaH2P04*2H20)43.7gProclin300100mlTween2010ml去離子水100L在100升不銹鋼容器使用攪拌器轉(zhuǎn)速為200rpm攪拌10分鐘。溶解后溶液應(yīng)澄清、透明、無色、無混濁、無沉淀或絮狀物。檢測pH應(yīng)為7.07.5之間。用0.45微米孔徑的濾膜進(jìn)行過濾處理，液體分裝機(jī)進(jìn)行分裝2L/瓶，擰緊蓋。按照要求貼上標(biāo)簽，室溫保存，有效期12個(gè)月。實(shí)施例2配制本發(fā)明的用于化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌工作液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液濃度為0.1M)用去離子水(電阻率18.2MQ)按照如下配方進(jìn)行配制0.1mol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液磷酸氫二鈉(Na2HP04*12H20)2579g磷酸二氫鈉(NaH2P(V2H20)437gProclin300100mlTween8010ml去離子水100L在100升不銹鋼容器使用攪拌器轉(zhuǎn)速為200rpm攪拌10分鐘。溶解后溶液應(yīng)澄清、透明、無色、無混濁、無沉淀或絮狀物。檢測pH應(yīng)為7.07.5之間。用0.45微米孔徑的濾膜進(jìn)行過濾處理，液體分裝機(jī)進(jìn)行分裝2L/瓶，擰緊蓋。按照要求貼上標(biāo)簽，室溫保存，有效期12個(gè)月。實(shí)施例3配制本發(fā)明的用于化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌工作液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液濃度為0.05M)用去離子水(電阻率18.2MQ)按照如下配方進(jìn)行配制0.05raol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液-磷酸氫二鈉(Na2HP04*12H20)1289.5g磷酸二氫鈉(NaH2P(V2H20)218.5g硫柳汞鈉40.18gTween2010ml去離子水100L在100升不銹鋼容器使用攪拌器轉(zhuǎn)速為200rpm攪拌10分鐘。溶解后溶液應(yīng)澄清、透明、無色、無混濁、無沉淀或絮狀物。檢測pH應(yīng)為7.07.5之間。用0.45微米孔徑的濾膜進(jìn)行過濾處理，液體分裝機(jī)進(jìn)行分裝2L/瓶，擰緊蓋。按照要求貼上標(biāo)簽，室溫保存，有效期12個(gè)月。實(shí)施例4配制本發(fā)明的用于化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌工作液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液濃度為0.02M)用去離子水(電阻率18.2MQ)按照如下配方進(jìn)行配制0.05mol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液磷酸氫二鈉(Na2HP04*12H20)515.8g磷酸二氫鈉(NaH2P04*2H20)87.4g硫柳汞鈉40.18gTween206mlTween804ml去離子水100L在100升不銹鋼容器使用攪拌器轉(zhuǎn)速為200rpm攪拌10分鐘。溶解后溶液應(yīng)澄清、透明、無色、無混濁、無沉淀或絮狀物。檢測pH應(yīng)為7.07.5之間。用0.45微米孔徑的濾膜進(jìn)行過濾處理，液體分裝機(jī)進(jìn)行分裝2L/瓶，擰緊蓋。按照要求貼上標(biāo)簽，室溫保存，有效期12個(gè)月。實(shí)施例5使用本發(fā)明的洗滌工作液進(jìn)行前列腺特異性抗原(PSA)化學(xué)發(fā)光免疫分析測定以前列腺特異性抗原(PSA)化學(xué)發(fā)光免疫分析測定試劑盒為例。實(shí)驗(yàn)前，需先取出固相抗體包被板、校準(zhǔn)品/檢測樣品、標(biāo)記抗體溶液在室溫放置1530分鐘，使它們平衡到室溫；同時(shí)將恒溫溫箱調(diào)至37'C;然后，準(zhǔn)備好合適的微量加樣器及對應(yīng)吸頭并且檢査化學(xué)發(fā)光儀以及輔助儀器，如洗板機(jī)等，是否正常工作。具體操作步驟如下a)將實(shí)驗(yàn)需要的板條(已包被好抗體，96/48孔可拆為12/6*8*1孔)放置在板架上；b)反應(yīng)孔中分別加待測樣品和各濃度校準(zhǔn)品，校準(zhǔn)品每孔加0、5、10、25、50、100ng/mL各50uL，每次試驗(yàn)設(shè)空白l孔，然后除空白孔外各孔加酶標(biāo)記抗體溶液50uL;c)微量振蕩器上振蕩20秒混勻；d)37。C恒溫溫育60分鐘；e)直接使用實(shí)施例1制備的洗滌工作液，用自動洗板機(jī)或者手工洗板5次，在吸水紙上拍干；f)每孔加發(fā)光底物100uL，振蕩混勻，室溫(2228°C)反應(yīng)3090分鐘；g)用化學(xué)發(fā)光儀測相對發(fā)光值(RLU)，測量時(shí)間l秒/孔；h)分別對校準(zhǔn)品濃度和對應(yīng)RLU取對數(shù)，在建立的雙對數(shù)曲線上建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以各待測血清RLU值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上査出該血清的PSA的濃度，計(jì)算檢測結(jié)果。實(shí)施例6對比本發(fā)明的洗滌工作液與傳統(tǒng)的洗滌液(沒有加入表面活性劑和生物防腐劑的洗滌液)使用實(shí)施例5所用品種的試劑盒，按照說明書要求在所有步驟都相同的情況下，做兩組試驗(yàn)，一半試劑用本發(fā)明的洗滌工作液洗滌，另一半用傳統(tǒng)洗滌液(沒有加入表面活性劑和生物防腐劑的洗滌液)，試驗(yàn)結(jié)果如下表1傳統(tǒng)洗滌液與本發(fā)明的洗滌工作液洗滌效果的對比<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>對比結(jié)果顯示新洗滌液洗滌效果更好，本底SO(Ong/mL)平均發(fā)光值更低;最低檢出量更低；最低、最高信噪比更大有利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精密度；同時(shí)相關(guān)系數(shù)也有相應(yīng)的提高。權(quán)利要求1、一種可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液，其特征在于，所述洗滌工作液由工作濃度的化學(xué)發(fā)光免疫分析洗滌液分裝制成，在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌步驟時(shí)，直接使用所述洗滌工作液。2、如權(quán)利要求1所述的洗滌工作液，其特征在于，所述洗滌液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液。3、如權(quán)利要求2所述的洗滌工作液，其特征在于，所述磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的濃度為0.01mol/L-0.lmol/L。4、如權(quán)利要求1所述的洗滌工作液，其特征在于，所述洗滌工作液含有表面活性劑和生物防腐劑，表面活性劑為Tween20和/或Tween80，濃度為0.005%-0.05%;所述生物防腐劑為Proclin300，其濃度為0.1%,和/或硫柳汞鈉，其濃度為lmmol/L。5、一種可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)根據(jù)洗滌液配方配制工作濃度的洗滌液；2)將上述配制好的洗滌液分裝到容器內(nèi)。6、如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述洗滌液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液。7、如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的濃度為0.01mol/L-0.lraol/L。8、如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟l)中，所述工作濃度洗滌液含有表面活性劑和生物防腐劑。9、如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述表面活性劑為Tween20和/或Tween80，所述生物防腐劑為Proclin300和/或硫柳汞鈉。10、如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述表面活性劑Tween20和/或Tween80的濃度為0.005%_0.05%;所述Proclin300的濃度為0.1%，硫柳汞鈉的濃度為1mmol/L。全文摘要本發(fā)明公開了一種可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液及其制備方法。本發(fā)明的洗滌工作液由工作濃度的化學(xué)發(fā)光免疫分析洗滌液分裝制成，在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析的洗滌步驟時(shí)，直接使用所述洗滌工作液。本發(fā)明制備上述可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液的方法包括根據(jù)洗滌液配方配制工作濃度的洗滌液和將上述配制好的洗滌液分裝到容器內(nèi)的步驟。本發(fā)明可直接使用的化學(xué)發(fā)光洗滌工作液能夠徹底避免由于不同水質(zhì)的原因或是操作者稀釋錯(cuò)誤倍數(shù)等原因所導(dǎo)致的測定結(jié)果的誤差，同時(shí)給用戶提供可直接使用的洗滌工作液(無需稀釋)，節(jié)約了用戶的時(shí)間并避免了風(fēng)險(xiǎn)。文檔編號C11D3/06GK101551386SQ20081010325公開日2009年10月7日申請日期2008年4月2日優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日發(fā)明者于尚永,宋勝利,應(yīng)希堂,王宏銳,胡國茂,鄭金來申請人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司