專利名稱：：一種茶葉及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種茶葉，其制備方法和應(yīng)用。技術(shù)背景茶葉為世界三大飲料之一。迄今為止，茶葉的基源為山茶科茶屬茶組植物茶(小葉茶)(W'/7朋Si'S)及其變種大葉茶w'/7e77W'svar.a^a射'ca)的新鮮葉片。多酚類化合物是茶葉的主要特征成分，也是茶葉的主要生理活性物質(zhì)。其中，以兒茶素類衍生物為主，包括表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)及表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)等。茶葉中含有大量的咖啡因?？Х纫?qū)χ袠猩窠?jīng)系統(tǒng)有興奮作用，不僅影響睡眠，對(duì)心血管系統(tǒng)和消化系統(tǒng)均有影響。因此，低咖啡因或無咖啡因的茶飲品已成為當(dāng)今的熱點(diǎn)。已開發(fā)成功脫咖啡因的制茶工藝，但工藝復(fù)雜、成本昂貴。除咖啡因外，茶葉中還含有茶堿等嘌呤類生物堿。茶堿有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、松弛支氣管平滑肌、促進(jìn)支氣管粘膜的纖毛運(yùn)動(dòng)等作用。但其有效血濃度和中毒血濃度接近，易產(chǎn)生惡心、嘔吐、心律失常等毒副作用，過多攝取不利于身體健康。迄今，不含包括咖啡因、茶堿、可可堿等在內(nèi)的嘌呤類生物堿的茶葉，及其天然資源至今尚未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種茶葉，該茶葉不含咖啡因和茶堿以及其他嘌呤類生物堿，同時(shí)提供其制備方法和應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案一禾中茶葉，以光萼厚軸茶[Ca巡ej7iacras5"/coi"/!7/7a邁〃7"'/7ex(ChangetTan)Ming]為原料，不含嘌呤類生物堿。茶葉，以光萼厚軸茶為原料，經(jīng)殺青、揉捻、干燥制成。上述茶葉的制備方法，以光萼厚軸茶為原料，經(jīng)殺青、揉捻、干燥制成。茶葉用作抗氧化劑。茶葉用作為抗菌劑。茶飲料，含有上述的茶葉。食品添加劑，含有上述的茶葉。護(hù)膚品或護(hù)發(fā)品，含有上述的茶葉。功能性保健食品，含有上述的茶葉。藥品，含有上述的茶葉。本發(fā)明茶葉的制作具體為采摘光萼厚軸茶的新鮮葉片，按制茶的常規(guī)工序，經(jīng)過殺青、揉捻、干燥即可得到由茶樹新資源光萼厚軸茶新鮮葉片制作的茶葉。光萼厚軸茶新鮮葉片可以加工制作綠茶，也可以制成普洱茶、紅茶、花茶等多種茶類。還可作為各種茶飲料的原料，例如罐裝茶飲料、瓶裝茶飲料、袋泡茶、速溶茶等。上述技術(shù)方案中提供的原料，為山茶科茶組植物光萼厚軸茶[^巡eL^acras57'co/〃巡"3節(jié)7"http://ex(ChangetTan)Ming]的新鮮葉片。該植物分布于中國云南省東南鄰地區(qū)，特別是文山苗族壯族自治州境內(nèi)，為該地區(qū)的特有植物。本發(fā)明使用的該植物原料可以是野生的，也可以是通過無性繁殖栽培的。本發(fā)明的茶葉可用作為各種茶飲料和功能保健食品的原料；亦可作為食品添加劑用于食品工業(yè)；亦可作為特殊用途化妝品的原料用于各種護(hù)膚和護(hù)發(fā)的個(gè)人護(hù)理用品；亦可作為天然原料用于開發(fā)新型藥物。圖1為本發(fā)明的光萼厚軸茶制作的綠茶與大葉茶制作的綠茶的HPLC比較；圖2.為本發(fā)明茶葉樣品的HPLC和LC-MS分析圖；圖3.為本發(fā)明的光萼厚軸茶制作的綠茶多酚類成分的液相色譜分析；圖中(±)沒食子兒茶素-3，5-0-二沒食子酸酯(1)，(-)-表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(ECG)(2)，(-)-表兒茶素(EC)(3)，(-)表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯(EGCG)(4)，春枝紫萁甙(6)，阿福豆甙(7),槲皮甙(8),蘆丁(9),小木麻黃素(ll)，1，3-二沒食子酰基葡萄糖(12)，1，2，3，4-四沒食子酰基葡萄糖(13)，3，5-二羥基-4-咖啡?；鼘幩?15)，沒食子酸(16)，茶掊素(peaka)，茶掊素的差向異構(gòu)體(peakd)，(-)表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯的差向異構(gòu)體(peake)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖，先用本發(fā)明的試驗(yàn)例來證明本發(fā)明產(chǎn)品的活性和效果試驗(yàn)例1:本發(fā)明茶葉的茶多酚組成與含量的測(cè)定試驗(yàn)采摘光粵厚車由茶[6，a邁eJ7上aora5^ycoJw邁/ara_r,邁〃i"/7ejr(ChangetTan)Ming]的新鮮葉片，按制茶的常規(guī)工序，經(jīng)過殺青、揉捻、干燥即可。按上述技術(shù)方案制作的茶葉，用高壓液相色譜法(HPLC)檢測(cè)茶多酚的組成與含量。用光萼厚軸茶的新鮮葉片制作的茶葉，其多酚類成分以兒茶素類衍生物為主，包括表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)及表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)等，與通常由大葉茶和小葉茶制作的茶葉相類似(如圖1所示)。按上述技術(shù)方案以光萼厚軸茶的新鮮葉片制作的茶葉，經(jīng)系統(tǒng)的化學(xué)研究證明，除兒茶素類衍生物外還含有，春枝紫萁甙(asiaticalin)，阿福豆武(afzelin)，槲皮式(quercetrin),戸丁(rutin),小木麻黃素(strictinin),1,3-二沒食子?；咸烟?1，3-di-O"galloyl-p-D-glucopyranose)，1，2，3，4-四沒食子?；咸烟?l，2，3,4-tetra_<9~galloylfD-glucopyr訓(xùn)se)，3,5_二羥基-4-咖啡?；鼘幩?3a，5a-dihydroxy-4a-<9~caffeoyl-quinicacid)，沒食子酸(gallicacid),茶掊素(theogallin)，茶掊素的差向異構(gòu)體(印imeroftheogallin，peakd)，(-)表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯的差向異構(gòu)體(印imersofEGCG，peake)等多酚類成分。試驗(yàn)例2:本發(fā)明茶葉含嘌呤類生物堿含量檢測(cè)試驗(yàn)用試驗(yàn)例l制作的茶葉，用高壓液相色譜法(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)檢測(cè)嘌呤類生物堿。結(jié)果表明，用光萼厚軸茶的新鮮葉片制作的茶葉不含咖啡因、茶堿等嘌呤類生物堿(如圖2所示)。試驗(yàn)例3:本發(fā)明茶葉抗氧化活性檢測(cè)試驗(yàn)按試驗(yàn)例1制作的茶葉，經(jīng)DPPH清除自由基試驗(yàn)證明具有顯著的抗氧化活性(見表1)。表l.光萼厚軸茶茶葉的清除自由基活性樣品SC5。(yM)ab光萼厚軸茶的甲醇提取物19.7±1.5(±)沒食子兒茶素-3，5-0-二沒食子酸酯8.9±0.4(-)-表兒茶素-3-0-沒食子酸酯13.3±1.2(-)-表兒茶素24.8±0,4(-)表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯11.1±0.1紫云英苷405±4春枝紫萁甙744±33阿福豆甙1039±49槲皮甙31.0±0.5蘆丁32.6±0.9楊梅苷18.3±0.6小木麻黃素10.0±0.61，3-二沒食子?；咸烟?3.2±0.81,2,3，4-四沒食子?；咸烟?0.1±0.4綠原酸57.8±3.03,5-二羥基-4-咖啡?；鼘幩?7.9±2.9沒食子酸15.4±1.23,4-二甲氧基苯酚196±11維生素C(陽性對(duì)照)42.8±0.6aSC5。半數(shù)清除自由基濃度.Valuesrepresentmeans土SD(n二3)試驗(yàn)例4:本發(fā)明茶葉抑菌試驗(yàn)按試驗(yàn)例l制作的茶葉，經(jīng)抑菌圈試驗(yàn)證明具有顯著的抗菌活性(見表2)。表2.光萼厚軸茶茶葉的抑菌活性細(xì)菌和真菌光萼厚軸茶茶葉的甲醇提取物(濃度1.0mg/ml)大腸桿菌7.0綠膿桿菌1.1白色念珠菌2.0金色葡萄球菌6.8曲霉菌0.8按上述技術(shù)方案中制作的茶葉，可作為各種茶飲料的原料，亦可作為食品添加劑用于各種食品中，亦可作為特殊用途化妝品的原料用于各種護(hù)膚和護(hù)發(fā)的個(gè)人護(hù)理用品，亦可作為天然原料用于開發(fā)各種功能性食品和新型藥物。試驗(yàn)例5:用光萼厚軸茶的新鮮葉片制作茶葉，其制備步驟及試驗(yàn)如下(1)采摘光萼厚軸茶新鮮葉片，瞬時(shí)加熱殺青，手工或機(jī)械揉捻，曬干、或烘干、或炒干，即得到光萼厚軸茶制作的厚軸綠茶。(2)用光萼厚軸茶新鮮葉片制作的曬青毛茶，按常規(guī)渥堆工藝，可制作為厚軸熟茶。(3)光萼厚軸茶新鮮葉片按常規(guī)加工工藝，經(jīng)萎凋、揉捻、發(fā)酵、干燥等工序，即可制作為厚軸紅茶。8(4)用光萼厚軸茶新鮮葉片制作的茶葉，經(jīng)再加工工藝，可制作為袋泡茶、速溶茶等茶產(chǎn)品。(5)用光萼厚軸茶新鮮葉片制作的茶葉，可作為各種茶飲料和功能保健食品的原料；亦可作為食品添加劑用于食品工業(yè)；亦可作為特殊用途化妝品的原料用于各種護(hù)膚和護(hù)發(fā)的個(gè)人護(hù)理用品。亦可作為天然原料用于開發(fā)新型藥物。(6)用光萼厚軸茶新鮮葉片制作的綠茶，其茶多酚的組成與含量用高壓液相色譜法(HPLC)檢測(cè)。檢測(cè)方法按如下步驟實(shí)施，高壓液相色譜法(HPLC)檢測(cè)條件和結(jié)果如下(見圖3)。儀器與試劑島津10AT高效液相色譜儀，高壓二元泵，SPD-10Avp二極管陣列檢測(cè)器，CLASS-LC10工作站，色譜純乙腈，超純水。色譜條件及檢測(cè)波長的選擇方法一固定相為AgilentZorbaxSB-C18(4.6X250mm，5他)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.34%磷酸水梯度洗脫(0-45min，4%-40%乙腈)，流速lmL/min，柱溫30。C，檢測(cè)波長280nm。方法二固定相為AgilentZorbaxSB-C18(4.6X250mm，5Min)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈_0.34%磷酸水梯度洗脫(0-45min，5%-15%乙腈)，流速lmL/min，柱溫30。C，檢測(cè)波長280nm。實(shí)驗(yàn)材料精密稱取以光萼厚軸茶新鮮葉為原料制備得到的茶葉樣品2.5g，置于100ml容量瓶中，加入70%的甲醇溶液90ml，放置過夜，間隔超聲波提取兩次，每次15min，定容至刻度線，搖勻，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，待測(cè)。樣品測(cè)定進(jìn)樣量10W。重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。(7)用光萼厚軸茶新鮮葉片制作的綠茶，其咖啡因及茶堿等嘌呤類生物堿用液-質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)檢測(cè)。檢測(cè)方法按如下步驟實(shí)施儀器與試劑APIQstarPulsarLC/T0F液質(zhì)聯(lián)用儀，色譜純甲醇，分析純乙酸，超純水。色譜條件及檢測(cè)波長的選擇固定相為AgilentZorbaxSB-C18(4.6X250mm，5Wn)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.5%乙酸水梯度洗脫0-20min，5%-20%甲醇;20-30min,20%-60%甲醇；30-31min，60%-100%甲醇和31-40min，100%甲醇)，流速lmL/min，柱溫30。C，檢測(cè)波長280nm。實(shí)驗(yàn)材料精密稱取以光萼厚軸茶新鮮葉片為原料制作的茶葉樣品2.5g，置于100ml容量瓶中，加入70%的甲醇溶液90ml，放置過夜，間隔超聲波提取兩次，每次15min，定容至刻度線，搖勻，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，待測(cè)。樣品測(cè)定進(jìn)樣量10W。根據(jù)液相色譜的保留時(shí)間和紫外圖譜，結(jié)合質(zhì)譜特征碎片分析，判斷嘌呤生物堿的存在與含量。結(jié)果表明，厚軸綠茶不含茶堿。以甲醇-O.5%乙酸為移動(dòng)相梯度洗脫系統(tǒng)，咖啡因的保留時(shí)間為18.77min，位于圖3的A區(qū)域。采用乙腈-水梯度洗脫系統(tǒng)，將A區(qū)域的幾個(gè)峰完全分開。其中，b和c兩個(gè)峰的保留時(shí)間與咖啡因接近。結(jié)合紫外圖譜的特征吸收峰分析，提示光萼厚軸茶不存在咖啡因。LC-MS特征碎片離子的分析結(jié)果表明，保留時(shí)間分別為11.75和22.57min的d和e兩個(gè)峰的分子量分別為巡/z343[M-H]—(peakd)和457[M-H]—(peake),其碎片離子峰分別為邁/z191[M-153(galloy1)]—(peakd)，305[M-153(galloyl)]-(peake)和169(galloyl)。因此，d和e兩個(gè)峰分別指認(rèn)為茶倍素(theogallin)和表沒食子兒茶素3-^沒食子酰酯(EGCG)的差向異構(gòu)體。分析結(jié)果進(jìn)一步證明，以光萼厚軸茶新鮮葉片為原料制作的茶葉不含咖啡因、茶堿、可可豆堿等嘌呤類生物堿。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有下述優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明提供的茶葉是以野生或人工栽培的光萼厚軸茶的新鮮葉片為原料，經(jīng)殺青、揉捻、干燥等加工工藝制成?？梢允蔷G茶，也可以加工為普洱茶、紅茶、花茶等多種茶類。以光萼厚軸茶的新鮮葉片制成的茶葉，可作為優(yōu)質(zhì)茶飲料、功能保健食品、特殊用途化妝品、以及天然藥物的原料，也可作為食品添加劑用于食品加工工業(yè)中，用途廣泛。(2)以光萼厚軸茶的新鮮葉片制作茶葉，制備方法簡(jiǎn)單，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)，一般的茶葉加工廠均可采用，具有很高的實(shí)用性。(3)以光萼厚軸茶的新鮮葉片制成的茶葉，以不含咖啡因及茶堿等嘌呤類生物堿為特色。其茶多酚組成和含量與由通常的茶樹(大葉茶和小葉茶)制成的茶葉相似，并具有顯著的抗氧化和抗菌作用。因此，本發(fā)明提供的茶樹原料及由其制備的各種產(chǎn)品，具有很大的應(yīng)用價(jià)值。下面以本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例1:以光萼厚軸茶的新鮮葉片為原料制備厚軸綠茶。(1)按制茶的規(guī)范工序，采摘光萼厚軸茶新鮮葉片，瞬時(shí)加熱殺青，手工或機(jī)械揉捻，炒干，即得到光萼厚軸茶制作的厚軸綠茶。(2)采用高壓液相色譜法(HPLC)檢測(cè)茶多酚的組成和含量。HPLC分析條件及結(jié)果如下-儀器與試劑島津10AT高效液相色譜儀，高壓二元泵，SPD-10Avp二極管陣列檢測(cè)器，CLASS-LC10工作站，色譜純乙腈，超純水。(1)色譜條件固定相為AgilentZorbaxSB-C18(4.6X250mm，5他)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-O.34%磷酸水梯度洗脫(0-45min，4%-40%乙腈)，流速lraL/min，柱溫30°C，檢測(cè)波采用高壓液相色譜法(HPLC)和液-質(zhì)聯(lián)用法(LC一MS)檢測(cè)咖啡因及茶堿等嘌呤類生物堿的組成和含量。-儀器與試劑APIQstarPulsarLC/TOF液質(zhì)聯(lián)用儀，色譜純甲醇，分析純乙酸，超純水。色譜條件及檢測(cè)波長的選擇固定相為安杰倫zorbaxSB-C18(4.6X250mm，5陶)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.5%乙酸水梯度洗脫(0-20min，5%-20%甲醇；20-30min，20%-600/。甲醇；30-31min,60%-100%甲醇和31-40min，100%甲醇)，流速lmL/min，柱溫30°C，檢測(cè)波長280nm。實(shí)驗(yàn)材料精密稱取以光萼厚軸茶為原料制備得到的茶葉樣品2.5g，置于100ml容量瓶中，加入7(B的甲醇溶液90ml，放置過夜，間隔超聲波提取兩次，每次15min，定容至刻度線，搖勻，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，待測(cè)。樣品測(cè)定進(jìn)樣量10W。分析結(jié)果如表3。12表3.厚軸綠茶的主要成分含量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例2:以光萼厚軸茶鮮葉片為原料制備厚軸曬青毛茶(1)按制茶的規(guī)范工序，采摘光萼厚軸茶新鮮葉片，瞬時(shí)加熱殺青，手工或機(jī)械揉捻，曬千，即得到光萼厚軸茶制作的厚軸曬青毛茶。(2)高壓液相色譜法(HPLC)和液質(zhì)聯(lián)用法(LC—MS)檢測(cè)茶多酚、咖啡因及茶堿等成分。分析表明，以光萼厚軸茶新鮮葉片制作的曬青毛茶含有豐富的多酚類成分，不含咖啡因及茶堿。HPLC分析條件同實(shí)施例1，結(jié)果見表4。表4.厚軸曬青毛茶的主要成分含量分析主要成分含量(％)泰兀案素—....................................................................................................表兒茶素3-^"沒食子酰酯(ECG)0.32%表沒食子兒茶素3-^"沒食子酰酯(EGCG)1.87%茶倍素(theogal1in)0.95%咖啡因0%茶堿.0%13實(shí)施例3:以光萼厚軸茶葉為原料制備茶飲料。(1)以光萼厚軸茶新鮮葉片制作的茶葉為原料，按常規(guī)的加工工藝，制作袋泡茶和速溶茶。高壓液相色譜法(HPLC)和液質(zhì)聯(lián)用法(LC一MS)檢測(cè)結(jié)果表明，該茶飲料富含多酚類成分，不含咖啡因及茶堿。HPLC分析條件同實(shí)施例l，其結(jié)果表5:表5.厚軸茶茶飲料的主要成分含量分析主要成分含量(％)表兒茶素(EC)0.42%表兒茶素3-^沒食子酰酯(ECG)0.38%表沒食子兒茶素3-^沒食子酰酯(EGCG)1.89%茶倍素(theogallin)0.89%咖啡因0%茶堿0%實(shí)施例4:以光萼厚軸茶茶葉為原料制備食品添加劑(1)以光萼厚軸茶茶葉為原料，按常規(guī)加工工藝制成食品添加劑。(2)高壓液相色譜法(HPLC)和液質(zhì)聯(lián)用法(LC一MS)檢測(cè)該食品添加劑的茶多酚、咖啡因及茶堿等成分。分析結(jié)果表明，該產(chǎn)品富含多酚類成分，不含咖啡因和茶堿等嘌呤類生物堿。HPLC分析條件同實(shí)施例l，其結(jié)果見表6:表6.厚軸茶食品添加劑的主要成分含量分析主要成分含量(％)表兒茶素(EC)0.45%表兒茶素3-^沒食子酰酯(ECG)0.32%表沒食子兒茶素3-^沒食子酰酯(EGCG)1.71%茶倍素(theogallin)0.88%咖啡因0%茶堿0%實(shí)施例5:以光萼厚軸茶茶葉為原料制備藥品以光萼厚軸茶茶葉為原料，加入藥品常用載體，按常規(guī)加工工藝制成藥品。1權(quán)利要求1、一種茶葉，以光萼厚軸茶[Camelliacrassicolumnavar.multiplex(ChangetTan)Ming]為原料，不含嘌呤類生物堿。2、如權(quán)利要求1所述的茶葉，以光萼厚軸茶為原料，經(jīng)殺青、揉捻、干燥制成。3、權(quán)利要求1所述的茶葉的制備方法，以光萼厚軸茶為原料，經(jīng)殺青、揉捻、干燥。4、權(quán)利要求1所述的茶葉用作為抗氧化劑。5、權(quán)利要求1所述的茶葉用作為抗菌劑。6、茶飲料，含有權(quán)利要求l所述的茶葉。7、食品添加劑，含有權(quán)利要求1所述的茶葉。8、護(hù)膚品或護(hù)發(fā)品，含有權(quán)利要求l所述的茶葉。9、保健品，含有權(quán)利要求l所述的茶葉。10、藥品，含有權(quán)利要求l所述的茶葉。全文摘要本發(fā)明提供一種新的茶葉，以及其制備方法和應(yīng)用。以特有的茶組植物光萼厚軸茶[Camelliacrassicolumnavar.multiplex(ChangetTan)Ming]的新鮮葉片為原料，經(jīng)殺青、揉捻、干燥等加工工藝制成的茶葉，以不含咖啡因及茶堿等嘌呤類生物堿為特色。其茶多酚的組成和含量與由通常的茶樹(大葉茶和小葉茶)制成的茶葉相似，富含表兒茶素(EC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)等茶多酚類成分，具有顯著的抗氧化活性和抗菌作用。該茶葉可作為優(yōu)質(zhì)茶飲料、功能保健食品、特殊用途化妝品、以及天然藥物的原料，也可作為食品添加劑用于食品加工工業(yè)。文檔編號(hào)A61Q19/00GK101530143SQ20091009403公開日2009年9月16日申請(qǐng)日期2009年1月12日優(yōu)先權(quán)日2009年1月12日發(fā)明者青劉,張穎君,楊崇仁,敏許申請(qǐng)人:中國科學(xué)院昆明植物研究所