皮膚中動力蛋白的調(diào)節(jié)的制作方法
【專利摘要】提供了用于預(yù)防、改善、或減少衰老的皮膚病學(xué)跡象的方法，其采用調(diào)節(jié)皮膚中動力蛋白表達(dá)的活性試劑。還提供了用于篩選調(diào)節(jié)動力蛋白表達(dá)水平的物質(zhì)的方法以及使用通過篩選方案所鑒別的活性試劑來處理皮膚的方法。
【專利說明】皮膚中動力蛋白的調(diào)節(jié)
[0001]相關(guān)申請
[0002]本申請要求2010年12月30日遞交的美國臨時專利申請系列號61/428，272的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容在此以其全部通過引用而并入。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明一般性地涉及改進(jìn)人皮膚的美學(xué)外觀和健康的方法，也涉及用于鑒別可用于處理皮膚的化合物的方法。特別地，本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)皮膚中動力蛋白水平的化合物。
【背景技術(shù)】
[0004]動力蛋白是沿著微管向負(fù)端方向移動的蛋白家族。動力蛋白將來自ATP水解的化學(xué)能量轉(zhuǎn)變成為沿著微管步進(jìn)式移動所需的機(jī)械能量。纖毛軸動力蛋白僅在具有纖毛和鞭毛的細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，其引起微管在那些結(jié)構(gòu)的軸絲中滑動。另一方面，細(xì)胞質(zhì)動力蛋白被認(rèn)為存在于所有的動物細(xì)胞中。與纖毛軸動力蛋白相比，其更為最近地被鑒別和表征。見Paschal B.M.,Shpetner H.S.,Vallee R.B./iMAPlC is a microtubule-activated ATPasewhich translocates microtubules in vitro and has dynein-like properties,，，J.Cell Biol.，1987S ??；105 (3):1273-82 ;以及 Shpetner H.S., Paschal B.M.，和 ValleeR.B.,“Characterization of the microtubule-activated ATPase of brain cytoplasmicdynein (MAPlC), ” J.Cell Biol.，1988S印;107 (3): 1001-9，其公開在此通過引用而并入。
[0005]細(xì)胞質(zhì)動力蛋白是細(xì)胞骨架分子馬達(dá),其負(fù)責(zé)有絲分裂,細(xì)胞極化,囊泡、核內(nèi)體和溶酶體的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，以及細(xì)胞內(nèi)的其它運動。細(xì)胞質(zhì)動力蛋白具有約1.5兆道爾頓(MDa)的分子量并且具有十二個或更多個多肽亞基，所述多肽亞基包含約530kDa/鏈的兩條相同的重鏈，約74kDa的兩條中間鏈，約53至59kDa的四條中間鏈，以及約10至約14kDa的數(shù)條輕鏈。每條重鏈含有四個ATP結(jié)合位點(包括ATP-水解位點)以及微管結(jié)合位點。中間鏈被認(rèn)為將動力蛋白結(jié)合至其承載(cargo )。
[0006]因為動力蛋白產(chǎn)生細(xì)胞中許多材料的運動，它們對于許多細(xì)胞和發(fā)育功能而言是關(guān)鍵的，這包括細(xì)胞器運動，發(fā)育決定子的定位，以及潛在地神經(jīng)元中的遠(yuǎn)程信號傳導(dǎo)。動力蛋白也被顯示調(diào)控中心體重新定向，細(xì)胞骨架重塑，前緣形成，以及單層細(xì)胞培養(yǎng)物傷口愈合過程中的細(xì)胞遷移。它們也介導(dǎo)被吞噬的黑素體在人角化細(xì)胞中的核周聚集(其導(dǎo)致形成核上黑色素)。
[0007]在由神經(jīng)元中損壞的軸突運輸引起的運動神經(jīng)元疾病中的神經(jīng)元變性中牽涉到了動力蛋白功能的缺陷。已將對編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白鏈的基因的破壞與呼吸系統(tǒng)疾病，原發(fā)性纖毛運動障礙(卡塔格內(nèi)綜合征)相關(guān)聯(lián)，并且其可被牽涉到運動神經(jīng)元疾病(例如肌萎縮性側(cè)索硬化)中。迄今為止，還未認(rèn)識到動力蛋白在維持健康皮膚和減緩皮膚衰老中的作用。
[0008]本發(fā)明的目標(biāo)是提供用于治療、改善、抑制和/或預(yù)防衰老的皮膚病學(xué)跡象的組合物和方法。本發(fā)明的另一個目標(biāo)是提供通過調(diào)節(jié)皮膚細(xì)胞中的動力蛋白水平而治療、改善、抑制和/或預(yù)防衰老的皮膚病學(xué)跡象的方法。本發(fā)明的其它目標(biāo)是提供基于調(diào)節(jié)皮膚細(xì)胞中動力蛋白水平的能力而鑒別可用于治療、改善、抑制和/或預(yù)防衰老的皮膚病學(xué)跡象的化合物的方法。
[0009]上述討論的呈遞僅是為了提供對現(xiàn)有技術(shù)中所面臨問題的性質(zhì)的更好理解而不應(yīng)以任何方式被解釋為對現(xiàn)有技術(shù)的承認(rèn)。
[0010]發(fā)明概述
[0011]根據(jù)前述目標(biāo)及其它目標(biāo)，本發(fā)明提供了動力蛋白、優(yōu)選細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的調(diào)節(jié)子，以改進(jìn)衰老的一種或多種皮膚病學(xué)跡象。取決于所需的效果，所述調(diào)節(jié)子可上調(diào)或下調(diào)皮膚中動力蛋白的水平。認(rèn)為皮膚成纖維細(xì)胞和角化細(xì)胞中所產(chǎn)生的動力蛋白的上調(diào)子將引起細(xì)胞中增加的蛋白生產(chǎn)，包括成纖維細(xì)胞特異性蛋白膠原蛋白、彈性蛋白和原纖維蛋白，以及角化細(xì)胞蛋白角蛋白。鑒于成纖維細(xì)胞所產(chǎn)生的蛋白對于總體皮膚強(qiáng)度和健康的重要性，上調(diào)動力蛋白在減少皮膚上的衰老外觀方面將具有有益效果。
[0012]本發(fā)明還包括調(diào)節(jié)子，其下調(diào)皮膚中動力蛋白的水平。因為動力蛋白也介導(dǎo)人角化細(xì)胞中被吞噬的黑素體的核周聚集(這導(dǎo)致形成核上黑色素)，動力蛋白的下調(diào)子(特別是在角化細(xì)胞和/或黑素細(xì)胞中)對于治療老年斑和皮膚中其它形式的過度色素沉著將是有用的。還料想了動力蛋白的下調(diào)子在治療皮膚的增殖性病癥(包括銀屑病)方面將是有效的。`
[0013]在本發(fā)明的一個方面，提供了用于篩選候選物質(zhì)以鑒別可用于改進(jìn)皮膚的美學(xué)外觀的活性成分的方法。所述方法包括測定候選物質(zhì)調(diào)節(jié)皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞中動力蛋白表達(dá)的能力。所述方法通常涉及用候選物質(zhì)孵育人皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞并隨后通過定量技術(shù)(例如定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR))來測量編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNCIHl的mRNA的水平。
[0014]因此，提供了用于改進(jìn)人皮膚美學(xué)外觀的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的調(diào)節(jié)人皮膚成纖維細(xì)胞和角化細(xì)胞中動力蛋白水平的物質(zhì)。在本文中，所述動力蛋白調(diào)節(jié)子被稱作“活性物質(zhì)”并且可以是上調(diào)子或下調(diào)子，且通常將在化妝品上可接受的載體中配制并局部應(yīng)用至人皮膚(例如面，頸，手，胸，腿等的皮膚)足以增強(qiáng)其健康或美學(xué)外觀的時間。
[0015]在本發(fā)明的一個方面，提供了用于改進(jìn)人皮膚美學(xué)外觀的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的調(diào)節(jié)(例如上調(diào)或下調(diào))細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的細(xì)胞水平的活性試劑，其中通過測量與所述活性試劑接觸過的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平的測定來確定所述活性試劑調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的能力。所述測定中所使用的細(xì)胞可以是表達(dá)動力蛋白的任何細(xì)胞，但優(yōu)選是哺乳動物的細(xì)胞、更優(yōu)選為人或小鼠細(xì)胞。所述細(xì)胞可以是皮膚細(xì)胞，例如成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞。所述測定可以測量動力蛋白的任何片段或標(biāo)記物的水平，包括完整的復(fù)合物，但通常所測量的是細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的表達(dá)水平，其是由人基因DYNC1H1或小鼠基因Dynclhl表達(dá)的?？衫缤ㄟ^由任何合適的技術(shù)(例如定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR))測量相應(yīng)mRNA的表達(dá)水平來確定人基因DYNC1H1或小鼠基因Dynclhl的表達(dá)水平。
[0016]提供了處理皺紋和/或細(xì)紋的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的上調(diào)動力蛋白的活性試劑，其中通過測量與所述活性試劑接觸過的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平的測定來確定所述活性試劑調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的能力。所述測定步驟最通常包括用候選物質(zhì)孵育人皮膚成纖維細(xì)胞并隨后測量編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的mRNA水平，其中部分地基于候選物質(zhì)上調(diào)動力蛋白表達(dá)的能力而選擇所述候選物質(zhì)用作活性試劑。
[0017]還提供了處理過度色素沉著的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的下調(diào)動力蛋白的活性試劑，其中通過測量與所述活性試劑接觸過的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平的測定來確定所述活性試劑調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的能力。此實施中的測定步驟通常包括 用候選物質(zhì)孵育人皮膚角化細(xì)胞并隨后測量編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的mRNA水平，其中部分地基于候選物質(zhì)下調(diào)動力蛋白表達(dá)的能力而選擇所述候選物質(zhì)用作活性試劑。
[0018]在閱讀發(fā)明詳述之后將更好地理解本發(fā)明的其它方面、特征和優(yōu)勢。
[0019]發(fā)明詳述
[0020]除非另外提供，本文中所使用的所有術(shù)語都意在具有其平常的意義?！盎瘖y品上可接受的”是指在所采用的水平時，特定組分通常被認(rèn)為是安全和非毒性的。如本文中所使用的，術(shù)語“預(yù)防”包括延遲皮膚衰老的特定跡象的開始或進(jìn)展。術(shù)語“薄皮膚”包括隨時序性衰老變得更薄的皮膚以及過早變薄的皮膚，其可由例如光老化引起。用語“有需要的個體”是指能夠受益于改進(jìn)的皮膚外觀或健康的人，包括男性或女性。術(shù)語“皮膚”包括而不限于唇，面、手、臂、頸和胸的皮膚。如本文中所使用的，術(shù)語“主要由...組成”意在將發(fā)明限于指定的材料或步驟以及不實質(zhì)上影響要求保護(hù)的發(fā)明的基本和新穎特征的那些材料或步驟，如由閱讀本說明書所理解的。
[0021]如本文中所使用的，術(shù)語動力蛋白是指細(xì)胞質(zhì)動力蛋白以及纖毛軸動力蛋白，雖然根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選調(diào)節(jié)子將調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的水平。細(xì)胞質(zhì)動力蛋白包括細(xì)胞質(zhì)動力蛋白I復(fù)合物，以及細(xì)胞質(zhì)動力蛋白2復(fù)合物，雖然根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的調(diào)節(jié)子將調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白I復(fù)合物的水平。動力蛋白可以來自任何動物，但是通常是人或小鼠動力蛋白，且優(yōu)選人動力蛋白。本文中對所描述的細(xì)胞質(zhì)動力蛋白所使用的命名為Pfister等人，“Cytoplasmic dynein nomenclature^J.Cell Biol., 2005November7 ;171 (3):411 - 413的命名，其公開在此通過引用而并入，并將其總結(jié)在表1中。
[0022]表1
【權(quán)利要求】
1.用于改進(jìn)人皮膚的美學(xué)外觀的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的細(xì)胞水平的活性試劑，其中通過測量與所述活性試劑接觸過的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平的測定來確定所述活性試劑調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的能力。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞質(zhì)動力蛋白為人或小鼠細(xì)胞質(zhì)動力蛋白。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述測定測量細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的表達(dá)水平。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述測定測量編碼重鏈亞基DYNC1H1的人基因DYNC1H1或小鼠基因Dynclhl的表達(dá)水平。
5.權(quán)利要求4的方法，其中通過測量相應(yīng)mRNA的表達(dá)水平來確定所述編碼重鏈亞基DYNC1H1的人基因DYNC1H1或小鼠基因Dynclhl的表達(dá)水平。
6.權(quán)利要求4的方法，其中通過定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)qPCR來測量所述mRNA的表達(dá)水平。
7.權(quán)利要求2的方法，其中所述細(xì)胞是皮膚成纖維細(xì)胞。
8.權(quán)利要求2的方法，其中所述細(xì)胞是皮膚角化細(xì)胞。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述試劑增加細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述試劑降低細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述皮膚的所述美學(xué)改進(jìn)選自: (a)處理，減少和/或防止細(xì)紋或皺紋， (b)減小皮膚毛孔大小， (C)改進(jìn)皮膚厚度，飽滿度和/或緊實度； (d)改進(jìn)皮膚柔韌性和/或柔軟度； (e)改進(jìn)皮膚色澤，光澤和/或透明度； (f)改進(jìn)彈性蛋白的維持和重塑； (g)改進(jìn)皮膚肌理和/或促進(jìn)再肌理化； (h)改進(jìn)皮膚屏障修復(fù)和/或功能； (i)改進(jìn)皮膚輪廓的外觀； (j)恢復(fù)皮膚光澤和/或明亮； (k)改進(jìn)由絕經(jīng)減少的皮膚外觀； (I)改進(jìn)皮膚增濕性； (m)增加皮膚彈性和/或回彈性； (η)處理，減少和/或防止皮膚松弛；或 (ο)減少色素斑點。
12.鑒別可用于改進(jìn)皮膚的美學(xué)外觀的活性試劑的方法，所述方法包括測定候選物質(zhì)調(diào)節(jié)皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞中動力蛋白表達(dá)的能力。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述測定步驟包括用所述候選物質(zhì)孵育人皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞，以及隨后測量編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的mRNA的水平。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述測量步驟是通過定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)qPCR進(jìn)行的。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述細(xì)胞是皮膚成纖維細(xì)胞。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述細(xì)胞是皮膚角化細(xì)胞。
17.處理過度色素沉著的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的下調(diào)動力蛋白的活性試劑，其中通過測量與所述活性試劑接觸過的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平的測定來確定所述活性試劑調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的能力。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述測定步驟包括用所述候選物質(zhì)孵育人皮膚角化細(xì)胞，以及隨后測量編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的mRNA的水平。
19.處理皺紋和/或細(xì)紋的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的上調(diào)動力蛋白的活性試劑，其中通過測量與所述活性試劑接觸過的細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的表達(dá)水平的測定來確定所述活性試劑調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)動力蛋白的能力。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述測定步驟包括用所述候選物質(zhì)孵育人皮膚成纖維細(xì)胞，以及隨后測量編碼細(xì)胞質(zhì)動力蛋白重鏈亞基DYNC1H1的mRNA的水平。
21.包含有效上調(diào)皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞中動力蛋白的量的植物提取物和局部可接受的載體的組合物，其中所述植物提取物選自:大花雞腳參，鱷嘴花，管花肉蓯蓉，刺桐，盒果藤，白花菜，Erthrina Flabelliformis,香臘菊，伊利諾合歡草，OzothamnusObcordatus,萬壽菊，蘇木，Medemia nobilis,牛角瓜,繼木,大尾搖，山菅，黑面神，神農(nóng)香菊，接骨草，野甘草，黑木相思，Clerodendrum f 1ribundum,山麻樹,車桑子,澳洲爺,厚殼樹，天仙果，Goodenia ovata,黃海桐花，普通花葵，白千層，Omolanthes populifolius,Mammea siamensis, Clerodendron fragrans, Chalara microspora,以及它們的組合。
22.改進(jìn)人皮膚美學(xué)外觀的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的權(quán)利要求21的組合物。
23.權(quán)利要求22的方法，其 中所述皮膚受到細(xì)紋和/或皺紋困擾。
24.一種組合物，其包含與有效上調(diào)皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞中動力蛋白的另一種植物提取物相組合的來自Melicope hayesii的提取物，以及局部可接受的載體。
25.—種組合物,其包含有效上調(diào)皮膚成纖維細(xì)胞或角化細(xì)胞中動力蛋白的量的化合物和局部可接受的載體，其中所述化合物選自:
26.改進(jìn)人皮膚的美學(xué)外觀的方法，所述方法包括向有需要的皮膚區(qū)域局部應(yīng)用有效量的權(quán)利要求25的組合物。
【文檔編號】A61Q19/08GK103561718SQ201180063233
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2011年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2010年12月30日
【發(fā)明者】鄭謙, J·W·萊加, R·J·維博爾斯基 申請人:雅芳產(chǎn)品公司