專利名稱：草果油在制備治療陰道炎的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及草果油的新用途，屬醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
陰道炎是陰道粘膜及粘膜下結(jié)締組織的炎癥，是婦科門診的常見疾病。正常健康婦女，由于解剖學(xué)及生物化學(xué)特點，陰道對病原體的侵入有自然防御功能，當(dāng)陰道的自然防御功能遭到破壞，則病原體易于侵入，導(dǎo)致陰道炎癥。目前，對陰道炎的治療以抗感染、抗炎為主，同時輔以物理治療，常用的治療方法有藥用陰道沖洗、局部放藥、口服用藥等。常見的陰道炎有細(xì)菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、老年性陰道炎。
細(xì)菌性陰道炎，是陰道內(nèi)正常菌群失調(diào)所致的一種混合感染，是陰道內(nèi)有大量的細(xì)菌、伴有陰道分泌物性質(zhì)改變的一組癥候群，主要癥狀為陰道分泌物增多，呈稀薄均質(zhì)狀或稀糊狀，為灰白色或灰黃色，有魚腥臭味，性交后加重，可伴有輕度外陰瘙癢或燒灼感，有的人可發(fā)生下腹部疼痛、性交困難或尿痛。治療細(xì)菌性陰道炎的常見藥物為四環(huán)素等抗生素和磺甲硝咪唑等廣譜抗細(xì)菌化藥。念珠菌性陰道炎，是由念珠菌感染引起的陰道炎，主要致病菌為白色念珠菌，表現(xiàn)為白帶增多，外陰、陰道瘙癢、灼燒感，小便疼痛，外陰周圍常發(fā)紅、水腫，表皮變化多種多樣；可發(fā)生很淺的水皰丘疹，成群出現(xiàn)；亦可形成濕疹狀糜爛，局限于外陰或向周圍擴(kuò)展至?xí)帯⒏亻T周圍及股生殖皺襞，直至大腿內(nèi)側(cè)、外表，完全類似急性或亞急性濕疹；陰唇及陰蒂附近黏膜增厚，互相接觸的皮膚表面潮紅糜爛；個別可引起微小的白色膿皰，嚴(yán)重時發(fā)生潰瘍、外陰疼痛及局部淋巴結(jié)腫大。治療念珠菌性陰道炎的常見藥物為制霉菌素等抗生素和氟康唑、伊曲康唑等廣譜抗真菌化藥。滴蟲陰道炎(trichomonas vaginitis)是常見的陰道炎，由陰道毛滴蟲所引起。臨床上以白帶增多、質(zhì)稀有泡沫、穢臭，陰道瘙癢為主要表現(xiàn)。檢查時可見陰道粘膜充血，嚴(yán)重者有散在的出血斑點，后穹窿有多量白帶，呈灰黃色、黃白色稀薄液體或為黃綠色膿性分泌物，常呈泡沫狀。常見治療藥物為甲硝唑等滅蟲化藥。老年性陰道炎常見于絕經(jīng)后的老年婦女，因卵巢功能衰退，雌激素水平降低，陰道壁萎縮，粘膜變薄，上皮細(xì)胞內(nèi)糖原含量減少，陰道內(nèi)PH值上升，局部抵抗力降低，致病菌容易入侵繁殖并且引起炎癥。主要癥狀為陰道分泌物增多及外陰瘙癢、灼熱感。檢查見陰道呈老年性改變，上皮萎縮，皺襞消失，上皮變平滑、菲薄。陰道粘膜充血，有小出血點，有時見淺表潰瘍，若潰瘍面與對側(cè)粘連，陰道檢查時粘連可被分開而引起出血，粘連嚴(yán)重時可造成陰道狹窄甚至閉鎖，炎癥分泌物引流不暢可形成陰道積膿甚或?qū)m腔積膿。補(bǔ)充少量雌激素是老年性陰道炎的治療原則，可使陰道黏膜增厚，增強(qiáng)抵抗力。目前，常用治療陰道炎的藥物大多為抗生素和廣譜抗菌藥物，副作用大，且廣泛使用會產(chǎn)生耐藥。中藥來源廣泛，毒性小，藥效長，因此，從中草藥中尋求治療陰道炎的新藥非
常必要。草果為姜科豆蘧屬植物草果Amomum tsa-ko Crevost et Lemaire的成熟果實，主產(chǎn)于云南、廣西、貴州等地。中醫(yī)認(rèn)為，其性溫，味辛，歸脾、胃經(jīng)，有燥濕，溫中的功效，用于寒濕阻中證，適用于胸腹?jié)M悶，不思飲食，或胸悶脘痛，氣逆作嘔，噎膈反胃及痰飲積聚等。草果含有揮發(fā)油和黃酮類物質(zhì)，其揮發(fā)油為黃色油狀透明物質(zhì)，具有特殊的刺激性氣味。草果油在食品、醫(yī)藥工業(yè)中被廣泛應(yīng)用，其具有抗氧化、抗誘變、鎮(zhèn)定、抗乙肝病毒以及抗霉菌等作用(馮雪等，調(diào)味香料草果揮發(fā)油的研究進(jìn)展，中國調(diào)味品，2009年8期。)此夕卜，草果油還具有抗炎、驅(qū)蟲、鎮(zhèn)咳、治療腸胃病等功效，如專利申請?zhí)?00410022726. 1，發(fā)明名稱一種含草果揮發(fā)油的制劑、制備方法及用途的專利申請，公開了姜科植物草果Amomumtaso-kocrevost etIemaire的果仁、果實、莖、葉、根提取揮發(fā)油制得的中藥制劑可用于治療腸胃病的藥劑；專利申請?zhí)?00410008132. 5，發(fā)明名稱草果精粉及其制備方法的專利申請，公開了草果揮發(fā)油制備的草果精粉可用作食品增香調(diào)味料和抗炎、驅(qū)蟲、鎮(zhèn)咳、化痰、散寒等的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供草果油的新用途，即草果油在制備治療陰道炎的藥物中的新用途，還提供了以草果油為活性成分的治療陰道炎的藥物組合物。
本發(fā)明提供了草果油在制備治療陰道炎的藥物中的用途。其中，所述藥物是治療念珠菌性陰道炎或者滴蟲性陰道炎的藥物。優(yōu)選地，所述藥物是治療白色念珠菌引起的念珠菌性陰道炎。其中，所述的草果油來源于姜科豆蘧屬植物草果Amomum tsa-ko Crevost etLemaire的成熟果實提取的揮發(fā)油。其中，所述的草果油是通過如下方法制備得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸餾水，浸泡I飛小時后，采用水蒸氣蒸餾法提取2飛小時，即得草果油。本發(fā)明還提供了一種治療陰道炎的藥物組合物，它是以草果油為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的草果油是通過如下方法制備得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸餾水，浸泡I飛小時后，采用水蒸氣蒸餾法提取2飛小時，即得草果油。其中，所述的藥劑是外用制劑、口服制劑或注射制劑。優(yōu)選地，所述外用制劑為洗劑、栓劑、涂膜劑或搽劑。其中，所述的制劑中含有草果油的含量為0. 1% 100% w/w。本發(fā)明草果油具有治療陰道炎的作用，尤其是對念珠菌性陰道炎和滴蟲性陰道炎具有確切的療效，具有良好的臨床應(yīng)用前景。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖I本發(fā)明藥物對陰道毛滴蟲超微結(jié)構(gòu)的影響。圖A為未經(jīng)任何藥物作用的陰道毛滴蟲的正常超微結(jié)構(gòu)，其中I為細(xì)胞核，2為粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，3為過氫化酶體，4為鞭毛橫斷面；圖B至圖H為藥物作用后陰道毛滴蟲的超微結(jié)構(gòu)變化，a :空泡，b :自噬泡，c :核周隙增寬，d :粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，e :染色質(zhì)積聚，f :核糖體消失，g :核膜消失，細(xì)胞核逐漸崩解，h :核固縮，i :細(xì)胞器崩解，j :胞膜損壞，胞漿漏出，蟲體死亡。
具體實施例方式實施例I本發(fā)明草果油的制備取草果，粉碎過20-40目篩，加入10-14倍重量的蒸餾水，浸泡1-5小時后，采用水蒸氣蒸餾法提取2-6小時，即得本發(fā)明草果油。本發(fā)明草果油也可按照藥典(2005年版)附錄XD揮發(fā)油測定法提取，還可采用有機(jī)溶劑提取、超臨界CO2萃取等現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行提取，或者通過購買市售產(chǎn)品的方式獲得。以下通過藥效試驗證明本發(fā)明的有益效果 實驗例I本發(fā)明草果油治療念珠菌性陰道炎的活性I材料及儀器I. I實驗菌株①標(biāo)準(zhǔn)株白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC14053)，來自美國臨床實驗室菌種保藏中心；白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株(CICC32819)和白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株(CICC31284)，購自中國工業(yè)微生物
菌種保藏管理中心。②臨床分離株14株，于2011年9月至12月期間分離于四川省婦幼保健院婦科門診患者的陰道分泌物，并經(jīng)BIO-KONT公司的KC-16鑒定板條與藥敏紙片鑒定為白色念珠菌。I. 2 藥物試驗藥物本發(fā)明藥物草果油。陽性藥物克霉唑陰道片(濟(jì)南利民制藥有限公司，批號1108148)，潔爾陰洗液(四川恩威制藥有限公司，批號:1107102)。I. 3實驗動物小鼠(SPF級)[成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物研究中心，生產(chǎn)許可證號SCXK (川)2008-11，使用合格證號=SCXK (川)2008-049]。I. 4培養(yǎng)基、試劑及耗材沙氏瓊脂培養(yǎng)基(每升含氯霉素O. lg，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)。苯甲酸雌二醇注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批號1007061)，一次性無菌培養(yǎng)皿(江蘇康健生物有限公司)等。I. 5主要儀器多點接種儀(日本佐久間制作所，SAKUMA MIT-P型)，實驗室用高壓滅菌器(SANYO，MLS-3780型)，C02INCUBAT0R (SANY0，M0C_15A)，節(jié)能凈化工作臺(成都新光非蘭特凈化工程有限公司)。2實驗方法2. I本發(fā)明藥物治療念珠菌性陰道炎的體內(nèi)活性( I)念珠菌性陰道炎模型的建立
受試菌活化將白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株CICC32819接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基，37 °C培養(yǎng)48h，活化后備用。模型制備通過預(yù)實驗對影響模型建立的各項因素進(jìn)行優(yōu)化，確定念珠菌性陰道炎小鼠模型的建立方法。在正式實驗中，選取SPF昆明小鼠70只，體重(20±2) g，其中60只在感染前6天開始，每只小鼠隔日背部皮下注射lmg/ml苯甲酸雌二醇油劑O. 1ml，并于最后I次注射后接種白色念珠菌I. 5 X IO7CFU/只，24h后重復(fù)感染I次。并于最后I次感染后48h和72h分別取陰道分泌物進(jìn)行涂片鏡檢，觀察菌絲及芽生孢子生成情況，同時接種于沙氏瓊脂平板上，觀察菌株的生長情況；并觀察陰道分泌物等變化。在最后I次感染48h后用接種環(huán)取小鼠陰道分泌物接種于沙氏瓊脂平板上培養(yǎng)24tT48h，觀察平板上白色念珠菌的菌落生長情況，顯微鏡觀察菌絲生長情況。若小鼠陰道出現(xiàn)明顯分泌物，且陰道分泌物在沙氏瓊脂平板中生長有典型的白色念珠菌，顯微鏡下觀察到菌絲及芽生孢子，說明念珠菌性陰道炎模型小鼠制備成功。
(2)實驗分組待小鼠造模成功后，每只小鼠用O. Iml無菌生理鹽水進(jìn)行陰道沖洗，將沖洗液進(jìn)行菌落計數(shù)，根據(jù)小鼠陰道菌落計數(shù)結(jié)果將小鼠隨機(jī)分為6組，包括本發(fā)明藥物高、中、低三個劑量組，陽性藥物克霉唑組和潔爾陰組，模型組，每組10只。另以10只未感染白色念珠菌的小鼠作為空白對照。其中各組小鼠陰道感染白色念珠菌的情況分析見表I。表I :各組小鼠陰道感染白色念珠菌的情況分析
項H空η模掣沽爾陰— 克霉_高剖^屮劑鼠低衝轅
圍落數(shù)(X^'
O. 00±0. 00 36.00 土 .8δΑ 36. 00 土 7.仍1 35. 00 ±28. 06A 10.00 土 28,5 )Α K). 0(丨 I 16. 37, 12 土 24.32A
I O3CFUZiiil)注A表示與空白組比較有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)。(3)念珠菌性陰道炎模型小鼠的治療采用藥物陰道內(nèi)給藥法對念珠菌性陰道炎模型小鼠進(jìn)行治療，即每天分別采用高、中、低三個劑量的本發(fā)明草果油對造模成功的小鼠進(jìn)行治療，每天I次，連續(xù)20d。陽性藥分別用克霉唑和潔爾陰，模型組用生理鹽水。分別在給藥前(0d)，以及第3d、5d和7d給藥6h后用O. Iml無菌生理鹽水沖洗陰道，對沖洗液內(nèi)的白色念珠菌進(jìn)行菌落計數(shù)，統(tǒng)計分析給藥前(0d)、給藥3d、給藥5d和給藥7d小鼠陰道內(nèi)菌落數(shù)的變化情況，觀察藥物對感染小鼠陰道內(nèi)白色念珠菌的殺滅或抑制作用。在給藥第7d后每天接種觀察陰道分泌物的菌絲及芽生孢子生長情況以及在沙氏瓊脂平板中的生長情況，并每天觀察小鼠陰道分泌物等的變化情況。分別統(tǒng)計給藥14d和給藥20d的治愈時間和治愈率。以連續(xù)3d陰道內(nèi)容物在沙氏瓊脂平板上未見白色念珠菌生長，且陰道無分泌物，無明顯充血、腫脹等臨床癥狀判定為治愈，治愈小鼠不再用藥。采用SPSS 17. O軟件中的單因素方差分析法比較分析各組之間的差異顯著性，用配對T檢驗分析本發(fā)明草果油各劑量組在給藥前后及不同給藥時間的差異顯著性。2. 2本發(fā)明藥物抗白色念珠菌的體外活性含藥平板的制備采用倍比稀釋法對本發(fā)明藥草果油進(jìn)行稀釋，分別稀釋成I :2^1 :1024共11個梯度，在一次性無菌培養(yǎng)皿中分別加入不同濃度梯度的藥液Iml和14ml滅菌的沙氏瓊脂培養(yǎng)基，即各藥物在平板中的稀釋梯度分別為30. 70mg/mf59. 95yg/ml,充分混勻，烘干后備用，以平板內(nèi)加入等量生理鹽水代替藥物制備陽性對照平板。菌液配置將白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株用無菌生理鹽水調(diào)至菌液濃度
I.5X106CFU/ml。最低抑菌濃度(MIC)的測定采用多點接種儀將實驗菌株的菌液加入不同濃度梯度的含藥平板和陽性對照平板，并以生理鹽水代替菌液作陰性對照。37°C恒溫培養(yǎng)24tT48h，觀察各菌株在含不同濃度梯度藥物平板中的生長情況。結(jié)果判定以平板內(nèi)無白色念珠菌生長的藥物最小濃度為此藥對該菌株的最低抑菌濃度。3、實驗結(jié)果3. I本發(fā)明藥物體內(nèi)活性其中菌落計數(shù)分析結(jié)果見表2，治愈時間和治愈率分析見表3。表2 :本發(fā)明草果油對陰道炎模型小鼠陰道內(nèi)白色念珠菌生長的影響
權(quán)利要求
1.草果油在制備治療陰道炎的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述藥物是治療念珠菌性陰道炎或者滴蟲性陰道炎的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述藥物是治療白色念珠菌引起的念珠菌性陰道炎。
4.根據(jù)權(quán)利要求f3任意一項所述的用途，其特征在于所述的草果油來源于姜科豆蘧屬植物草果Amomum tsa-ko Crevost et Lemaire的成熟果實提取的揮發(fā)油。
5.根據(jù)權(quán)利要求f3任意一項所述的用途，其特征在于所述的草果油是通過如下方法制備得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸餾水，浸泡1飛小時后，采用水蒸氣蒸餾法提取2飛小時，即得草果油。
6.一種治療陰道炎的藥物組合物，其特征在于它是以草果油為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的草果油是通過如下方法制備得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸餾水，浸泡1飛小時后，采用水蒸氣蒸餾法提取2飛小時，即得草果油。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是外用制劑、口服制劑或注射制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于所述外用制劑為洗劑、栓劑、涂膜劑或搽劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述制劑中草果油的含量為.0. I 100% w/w。
全文摘要
本發(fā)明公開了草果油在制備治療陰道炎的藥物中的用途。本發(fā)明還公開了一種治療陰道炎的藥物組合物，它是以草果油為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。本發(fā)明草果油具有治療陰道炎的作用，有較強(qiáng)的實際應(yīng)用價值。
文檔編號C11B9/02GK102716408SQ20121021559
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月27日
發(fā)明者代敏, 彭成, 曹小玉 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué), 成都醫(yī)學(xué)院