新型smb方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種用于從進(jìn)料混合物中回收多元不飽和脂肪酸（PUFA）產(chǎn)物的色譜分離方法，所述方法包括以下步驟：（i）在第一分離步驟中，在模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置中對(duì)所述進(jìn)料混合物進(jìn)行純化以得到中間產(chǎn)物，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱；以及（ii）在第二分離步驟中，使用模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置對(duì)在（i）中得到的所述中間產(chǎn)物進(jìn)行純化以得到所述PUFA產(chǎn)物，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱；其中（a）所述第一分離步驟和所述第二分離步驟在同一色譜裝置上按順序進(jìn)行，在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間將所述中間產(chǎn)物回收，并且在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間對(duì)所述色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而在每個(gè)分離步驟中使所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離；或（b）所述第一分離步驟和所述第二分離步驟分別在獨(dú)立的第一色譜裝置和第二色譜裝置上進(jìn)行，將從所述第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物引入至所述第二色譜裝置中，并且在每個(gè)分離步驟中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離。
【專(zhuān)利說(shuō)明】新型SMB方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于純化多元不飽和脂肪酸(PUFA)及其衍生物的改進(jìn)的色譜分離方法。具體地，本發(fā)明涉及用于純化PUFA及其衍生物的改進(jìn)的模擬移動(dòng)床色譜分離方法或真實(shí)移動(dòng)床色譜分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂肪酸(特別是PUFA)及其衍生物是生物學(xué)上重要分子的前體，它們?cè)谡{(diào)節(jié)諸如血小板聚集、炎癥和免疫反應(yīng)等生物學(xué)功能中起著重要作用。因此，PUFA及其衍生物在治療上可用于治療廣泛的病理病癥，這些病理病癥包括CNS病癥、包括糖尿病神經(jīng)病變的神經(jīng)病變、心血管疾病、包括炎性皮膚疾病的全身免疫系統(tǒng)病癥和炎性病癥。
[0003]在諸如蔬菜油和海洋油等天然原材料中發(fā)現(xiàn)PUFA。然而，這些PUFA經(jīng)常以與飽和脂肪酸和許多其他雜質(zhì)的混合物存在于這些油中。因此，在用于營(yíng)養(yǎng)或用于藥物之前，應(yīng)該對(duì)PUFA進(jìn)行合意的純化。
[0004]不幸的是，PUFA極易被破壞。因此，當(dāng)在氧存在下加熱時(shí)，它們易于發(fā)生異構(gòu)化反應(yīng)、過(guò)氧化反應(yīng)和低聚反應(yīng)。因此，難以通過(guò)PUFA產(chǎn)物的分餾和純化來(lái)制備純脂肪酸。即使在真空條件下蒸餾也能導(dǎo)致不可接受的產(chǎn)物降解。
[0005]模擬移動(dòng)床色譜和真實(shí)移動(dòng)床色譜是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的已知技術(shù)。操作原理涉及液體洗脫劑相和固體吸附劑相的逆流移動(dòng)。該操作使溶劑的使用量最小化，從而該方法經(jīng)濟(jì)可行。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種分離技術(shù)在不同領(lǐng)域中的若干應(yīng)用，這些領(lǐng)域包括碳?xì)浠衔?、工業(yè)化學(xué)品、油、糖和API中。
[0006]眾所周知，在常規(guī)的固定床色譜系統(tǒng)中，其組分待被分離的混合物滲透通過(guò)容器。該容器一般是圓柱形的，并且通常被稱(chēng)為柱。該柱含有對(duì)流體表現(xiàn)出高滲透率的多孔材料的填充物(一般稱(chēng)為固定相)?；旌衔镏懈鹘M分的滲透速度取決于該組分的物理性質(zhì)，從而組分接連地且選擇性地從柱中出來(lái)。因此，一些組分趨向于牢固地固定到固定相，并且因此將緩慢地滲透出，然而其他組分趨向于薄弱地固定到固定相并更快速地從柱中出來(lái)。已經(jīng)提出許多不同的固定床色譜系統(tǒng)并且這些固定床色譜系統(tǒng)被用于分析目的和工業(yè)生產(chǎn)目的。
[0007]相比之下，模擬移動(dòng)床色譜裝置由含有吸附劑的若干單獨(dú)的柱組成，這些柱以串聯(lián)的方式連接在一起。洗脫劑沿第一方向通過(guò)這些柱。在系統(tǒng)中原料和洗脫劑的注入點(diǎn)與被分離的組分的收集點(diǎn)借助于一系列閥門(mén)而周期性地變換。整體效果是為了模擬含有固體吸附劑的移動(dòng)床的單個(gè)柱的操作，該固體吸附劑以相對(duì)于洗脫劑流動(dòng)的逆流的方向移動(dòng)。因此，如在常規(guī)的固定床系統(tǒng)中一樣，模擬移動(dòng)床系統(tǒng)由含有固體吸附劑的固定床的柱組成，其中，洗脫劑通過(guò)該固體吸附劑，但是，在模擬移動(dòng)床系統(tǒng)中，操作以使得模擬連續(xù)的逆流的移動(dòng)床。
[0008]在下列若干專(zhuān)利中描述了用于模擬移動(dòng)床色譜的方法和設(shè)備，這些專(zhuān)利包括:US2985589、US3696107、US3706812、US3761533、FR-A-2103302、FR-A-2651148 和FR-A-2651149,通過(guò)引用將這些專(zhuān)利的全文并入本文中。該主題還在Ganetsos和Barker編輯的“Preparative and Production Scale Chromatography，，, Marcel Dekker Inc, NewYork, 1993中得以充分論述，通過(guò)引用將其全文并入本文中。
[0009]真實(shí)移動(dòng)床系統(tǒng)在操作上類(lèi)似于模擬移動(dòng)床系統(tǒng)。但不是借助于閥門(mén)系統(tǒng)來(lái)變換進(jìn)料混合物和洗脫劑的注入點(diǎn)與被分離的組分的收集點(diǎn)，而是使一系列吸附單元(即，柱)相對(duì)于進(jìn)料點(diǎn)和排出點(diǎn)進(jìn)行物理移動(dòng)。再者，操作以使得模擬連續(xù)的逆流的移動(dòng)床。
[0010]在以下若干專(zhuān)利中描述了用于真實(shí)移動(dòng)床色譜的方法和設(shè)備，這些專(zhuān)利包括:US6979402、US5069883和US4764276，通過(guò)引用將這些專(zhuān)利的全文并入本文中。
[0011 ] PUFA產(chǎn)物的純化特別具有挑戰(zhàn)性。因此，用于制備PUFA產(chǎn)物的許多合適的原料是極其復(fù)雜的混合物，該極其復(fù)雜的混合物含有大量在色譜裝置中具有非常類(lèi)似的保留時(shí)間的不同組分。因此，非常難以將某些PUFA與這些原料分離。然而，特別是對(duì)于藥物應(yīng)用和營(yíng)養(yǎng)食品應(yīng)用來(lái)講，需要高純度的PUFA產(chǎn)物。因此歷史上，當(dāng)需要高純度PUFA產(chǎn)物時(shí)，已經(jīng)使用了蒸餾。然而，如上所討論，使用蒸餾作為用于難以處理的PUFA的分離技術(shù)具有顯著的缺點(diǎn)。
[0012]到目前為止，還沒(méi)有色譜技術(shù)能夠用于獲得高純度的PUFA產(chǎn)物，特別是由可商購(gòu)的原料如魚(yú)油來(lái)獲得高純度的PUFA產(chǎn)物，例如純度大于95%或97%的PUFA產(chǎn)物。
[0013]參照?qǐng)D1，示出了模擬移動(dòng)床色譜裝置中的典型裝置。通過(guò)考慮含有被分成多段的固定相S的豎直的色譜柱(更準(zhǔn)確地說(shuō)，從柱的底部到柱的頂部該固定相S被分為四個(gè)成階層的子區(qū)域1、I1、III和IV)來(lái)解釋模擬移動(dòng)床色譜分離方法或真實(shí)移動(dòng)床色譜分離方法的概念。借助于泵P在底部的IE處引入洗脫劑。在子區(qū)域II和子區(qū)域III之間的IA+B處引入待被分離的組分A和B的混合物。在子區(qū)域I和子區(qū)域II之間的SB處收集主要含有B的提取物，并且在子區(qū)域III和子區(qū)域IV之間的SA處收集主要含有A的提余物。
[0014]在模擬移動(dòng)床系統(tǒng)的情況下，通過(guò)引入點(diǎn)和收集點(diǎn)相對(duì)于固體相的移動(dòng)而引起固定相S的模擬向下移動(dòng)。在真實(shí)移動(dòng)床系統(tǒng)的情況下，通過(guò)多個(gè)色譜柱相對(duì)于引入點(diǎn)和收集點(diǎn)的移動(dòng)而引起固定相S的模擬向下移動(dòng)。在圖1中，洗脫劑向上流動(dòng)，并且在子區(qū)域II和子區(qū)域III之間注入混合物A+B。組分將根據(jù)它們與固定相的色譜相互作用(例如多孔介質(zhì)上的吸附)而移動(dòng)。對(duì)固定相表現(xiàn)出較強(qiáng)的親和力的組分B (較慢流動(dòng)的組分)將會(huì)更慢地被洗脫劑帶走并且將會(huì)有延遲地跟隨著洗脫劑。對(duì)固定相表現(xiàn)出較弱的親和力的組分A (較快流動(dòng)的組分)將會(huì)更容易地被洗脫劑帶走。如果恰當(dāng)?shù)卦u(píng)估和控制參數(shù)的合適設(shè)置(特別是在每個(gè)子區(qū)域的流速)，那么對(duì)固定相表現(xiàn)出較弱的親和力的組分A將作為提余物在子區(qū)域III和子區(qū)域IV之間被收集，而對(duì)固定相表現(xiàn)出較強(qiáng)的親和力的組分B將作為提取物將在子區(qū)域I和子區(qū)域II之間被收集。
[0015]因此，應(yīng)該知曉的是，示意性地示出在圖1中的常規(guī)模擬移動(dòng)床系統(tǒng)受限于雙組分分懼。
[0016]有鑒于此，需要一種模擬移動(dòng)床色譜分離方法或真實(shí)移動(dòng)床色譜分離方法，該方法能夠?qū)UFA或其衍生物與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大和極性較小的雜質(zhì))分離以由可商購(gòu)的原料(例如魚(yú)油)來(lái)生產(chǎn)高純度的PUFA產(chǎn)物。進(jìn)一步希望該方法應(yīng)該涉及在標(biāo)準(zhǔn)溫度和壓力條件下操作的廉價(jià)的洗脫劑。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0017]現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用含水有機(jī)溶劑洗脫劑的模擬移動(dòng)床裝置或真實(shí)移動(dòng)床裝置能夠有效地從可商購(gòu)的原料(例如魚(yú)油)中純化PUFA產(chǎn)物。因此，本發(fā)明提供一種用于從進(jìn)料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，所述方法包括以下步驟:
[0018](i)在第一分離步驟中，在模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置中對(duì)所述進(jìn)料混合物進(jìn)行純化以得到中間產(chǎn)物，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱；以及
[0019](ii)在第二分離步驟中，使用模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置對(duì)在
(i)中得到的所述中間產(chǎn)物進(jìn)行純化以得到所述PUFA產(chǎn)物，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱；其中
[0020](a)所述第一分離步驟和所述第二分離步驟在同一色譜裝置上按順序進(jìn)行，在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間將所述中間產(chǎn)物回收，并且在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間對(duì)所述色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離；或
[0021](b)所述第一分離步驟和所述第二分離步驟分別在獨(dú)立的第一色譜裝置和第二色譜裝置上進(jìn)行，將從所述第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物引入至所述第二色譜裝置中，并且在每個(gè)分離步驟中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0022]還提供了通過(guò)本發(fā)明的方法而得到的PUFA產(chǎn)物。
[0023]通過(guò)本發(fā)明的方法而生產(chǎn)的PUFA產(chǎn)物以高產(chǎn)率而生產(chǎn)并具有高純度。另外，通常由PUFA的蒸餾而產(chǎn)生的特有的雜質(zhì)的含量非常低。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“同分異構(gòu)雜質(zhì)”用來(lái)表示通常在含PUFA的天然油的蒸餾過(guò)程中所產(chǎn)生的那些雜質(zhì)。這些雜質(zhì)包括PUFA同分異構(gòu)體、過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)物和低聚反應(yīng)產(chǎn)物。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0024]圖1示出了用于分離雙組分混合物的模擬移動(dòng)床方法或真實(shí)移動(dòng)床方法的基本原理。
[0025]圖2不出了本發(fā)明第一優(yōu)選的實(shí)施方式,該實(shí)施方式適合于將EPA與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))分離。
[0026]圖3示出了本發(fā)明第二優(yōu)選的實(shí)施方式，該實(shí)施方式適合于將DHA與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))分離。
[0027]圖4更詳細(xì)地示出了本發(fā)明第一優(yōu)選的實(shí)施方式，該實(shí)施方式適合于將EPA與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))分離。
[0028]圖5更詳細(xì)地示出了本發(fā)明第二優(yōu)選的實(shí)施方式，該實(shí)施方式適合于將DHA與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))分離。
[0029]圖6更詳細(xì)地示出了本發(fā)明第一優(yōu)選的實(shí)施方式的替代方法，該替代方法適合于將EPA與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))分離。
[0030]圖7更詳細(xì)地示出了本發(fā)明第二優(yōu)選的實(shí)施方式的替代方法，該替代方法適合于將DHA與較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))分離。[0031]圖8示出了本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方式，該實(shí)施方式用于從較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))中純化EPA。
[0032]圖9示出了本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方式的替代方法，該替代方法用于從較快流動(dòng)的組分和較慢流動(dòng)的組分(即極性較大的雜質(zhì)和極性較小的雜質(zhì))中純化EPA。
[0033]圖10示出了可以進(jìn)行本發(fā)明的色譜分離方法的三種方式。
[0034]圖11示出了富含EPA的原料的HPLC分析，該富含EPA的原料能夠合適地用作本發(fā)明方法的進(jìn)料混合物。
[0035]圖12示出了來(lái)自根據(jù)本發(fā)明方法的第一分離步驟的提余物流(R)和提取物流(E)的HPLC分析。
[0036]圖13示出了來(lái)自根據(jù)本發(fā)明方法的第二分離步驟的提余物流(R)和提取物流(E)的HPLC分析。
[0037]圖14更詳細(xì)地示出了來(lái)自根據(jù)本發(fā)明方法的第二分離步驟的提取物流的HPLC分析。
[0038]圖15示出了通過(guò)SMB而生產(chǎn)的DHA產(chǎn)物的GC FAMES跡線。
[0039]圖16示出了通過(guò)蒸餾而生產(chǎn)的DHA產(chǎn)物的GC FAMES跡線。
【具體實(shí)施方式】
[0040]不同于用于回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，本發(fā)明的色譜分離方法通常是從進(jìn)料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物，本發(fā)明的方法包括將所述進(jìn)料混合物引入至模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水醇的多個(gè)連接的色譜柱，其中，該裝置具有至少包括第一區(qū)域和第二區(qū)域的多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由上述提取物流和提余物流能夠收集液體，并且其中，Ca)從在所述第一區(qū)域中的柱中收集含有所述PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分的提余物流并且將該提余物流引入至在所述第二區(qū)域中的非相鄰的柱中，和/或(b)從在所述第二區(qū)域中的柱中收集含有所述PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的提取物流并且將該提取物流引入至在所述第一區(qū)域中的非相鄰的柱中，在每個(gè)區(qū)域中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0041]如本文中所使用，在該實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“區(qū)域”指多個(gè)連接的色譜柱，所述多個(gè)連接的色譜柱含有作為洗脫劑的含水醇，并且具有用于進(jìn)料混合物流的一個(gè)或多個(gè)注入點(diǎn)，用于水和/或醇的一個(gè)或多個(gè)注入點(diǎn)，來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提余物離開(kāi)流(從該提余物離開(kāi)流中能夠收集液體)，以及來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物離開(kāi)流(從該提取物離開(kāi)流中能夠收集液體)。通常，每個(gè)區(qū)域僅具有一個(gè)用于進(jìn)料混合物的注入點(diǎn)。在一種實(shí)施方式中，每個(gè)區(qū)域僅具有用于含水醇洗脫劑的一個(gè)注入點(diǎn)。在又一實(shí)施方式中，每個(gè)區(qū)域具有用于水和/或醇的兩個(gè)或更多個(gè)注入點(diǎn)。
[0042]在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)PCT/GB10/002339中發(fā)現(xiàn)該實(shí)施方式進(jìn)一步的細(xì)節(jié)，通過(guò)引用將其全文并入在本文中。本發(fā)明的色譜分離方法通常不同于PCT/GB10/002339中描述的方法。
[0043]如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“PUFA產(chǎn)物”是指含有一種或多種多元不飽和脂肪酸(PUFA)和/或其衍生物的產(chǎn)物，該產(chǎn)物通常在營(yíng)養(yǎng)學(xué)或藥學(xué)上是重要的。通常，上述PUFA產(chǎn)物是單種PUFA或其衍生物?；蛘?，上述PUFA產(chǎn)物是兩種或更多種PUFA或其衍生物的混合物，例如兩種。
[0044]術(shù)語(yǔ)“多元不飽和脂肪酸”(PUFA)是指含有多于一個(gè)雙鍵的脂肪酸。這些PUFA是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。如本文中所使用，PUFA衍生物是指單、雙或三甘油酯、酯、磷酯、酰胺、內(nèi)酯或鹽形式的PUFA。優(yōu)選甘油三酯和酯。更優(yōu)選酯。酯通常是烷基酯，優(yōu)選C1?C6烷基酯，更優(yōu)選C1-C4烷基酯。酯的實(shí)例包括甲酯和乙酯。最優(yōu)選乙酯。
[0045]通常，PUFA產(chǎn)物含有至少一種ω-3或ω-6PUFA，優(yōu)選含有至少一種(0-3PUFA。co-3PUFA的實(shí)例包括α -亞麻酸(ALA)、十八碳四烯酸(SDA)、二十碳三烯酸(ΕΤΕ)、二十碳四烯酸(ETA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。優(yōu)選SDA、EPA、DPA和DHA。更優(yōu)選EPA和DHA。(0-6PUFA的實(shí)例包括亞油酸(LA)、Y -亞麻酸(GLA)、二十碳二烯酸、二高-Y-亞麻酸(DGLA)、花生四烯酸(ARA)、二十二碳二烯酸、腎上腺酸以及二十二碳五(ω -6)烯酸。優(yōu)選LA、ARA, GLA和DGLA。
[0046]在一種實(shí)施方式中，上述PUFA產(chǎn)物是EPA和/或EPA乙酯(ΕΕ)。
[0047]在另一實(shí)施方式中，上述PUFA產(chǎn)物是DHA和/或DHA乙酯(EE)。
[0048]在又一實(shí)施方式中，上述PUFA產(chǎn)物是EPA和DHA和/或EPA EE和DHA EE的混合物。
[0049]在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述PUFA產(chǎn)物是EPA或EPA乙酯，該EPA或EPA乙酯以大于90%的純度，優(yōu)選以大于95%的純度，并且更優(yōu)選以大于97%的純度被生產(chǎn)。
[0050]通常，除所述PUFA產(chǎn)物外，在本發(fā)明的色譜分離方法中收集另外的第二 PUFA產(chǎn)物。優(yōu)選地，上述PUFA產(chǎn)物是EPA并且上述另外的第二 PUFA產(chǎn)物是DHA。
[0051]在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，裝置被配置用來(lái)收集作為EPA和DHA的濃縮混合物的PUFA產(chǎn)物。因此，使用含有EPA、DHA、極性大于EPA和DHA的組分以及極性小于EPA和DHA的組分的進(jìn)料混合物。在第一分離步驟中，通常除去極性小于EPA和DHA的材料。在第二分離步驟中，通常除去極性大于EPA和DHA的材料，并且收集作為PUFA產(chǎn)物的EPA和DHA的濃縮混合物。
[0052]通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)分餾的合適的進(jìn)料混合物可以從包括蔬菜油和動(dòng)物油和動(dòng)物脂肪的天然源中獲得并且可以從包括從基因修飾的植物、動(dòng)物和包括酵母的微生物中得到油的合成源中獲得。實(shí)例包括魚(yú)油、海藻油和微藻油以及植物油，例如琉璃苣油、藍(lán)薊油和月見(jiàn)草油。在一實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物是魚(yú)油。在另一實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物是海藻油。當(dāng)期望的PUFA產(chǎn)物是EPA和/或DHA時(shí)，海藻油是特別合適的。當(dāng)期望的PUFA產(chǎn)物是GLA時(shí)，基因修飾的紅花油是特別合適的。當(dāng)期望的PUFA產(chǎn)物是EPA時(shí)，基因修飾的酵母是特別合適的。
[0053]在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，進(jìn)料混合物是魚(yú)油或魚(yú)油衍生的原料。有利地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用魚(yú)油或魚(yú)油衍生的原料時(shí)，通過(guò)本發(fā)明的方法能夠生產(chǎn)出純度大于90%，優(yōu)選純度大于95%，更優(yōu)選純度大于97%的EPA或EPA乙酯的PUFA產(chǎn)物。
[0054]在通過(guò)本發(fā)明的方法進(jìn)行分餾之前，進(jìn)料混合物可以進(jìn)行化學(xué)處理。例如，原料可以進(jìn)行甘油酯酯交換或甘油酯水解，隨后在某些情況下進(jìn)行選擇性的處理，例如結(jié)晶、分子蒸餾、尿素分餾、用硝酸銀或其他金屬鹽溶液萃取、鹵內(nèi)酯化反應(yīng)或超臨界流體分餾?；蛘撸梢灾苯邮褂眠M(jìn)料混合物，而不進(jìn)行初始處理步驟。
[0055]進(jìn)料混合物通常含有PUFA產(chǎn)物和至少一種極性較大的組分和至少一種極性較小的組分。與PUFA產(chǎn)物相比，上述極性較小的組分對(duì)在本發(fā)明的方法中使用的吸附劑具有較強(qiáng)的粘附力。在操作過(guò)程中，上述極性較小的組分隨固體吸附劑相的移動(dòng)通常優(yōu)先于隨液體洗脫劑相的移動(dòng)。與PUFA產(chǎn)物相比，極性較大的組分對(duì)在本發(fā)明的方法中使用的吸附劑具有較弱的粘附力。在操作過(guò)程中，上述極性較大的組分隨液體洗脫劑相的移動(dòng)通常優(yōu)先于隨固體吸附劑相的移動(dòng)?？傮w來(lái)講，極性較大的組分將被分離成提余物流，而極性較小的組分將被分離成提取物流。
[0056]極性較大的組分和極性較小的組分的實(shí)例包括(I)存在于天然油(例如，海洋油或蔬菜油)中的其他化合物，(2)在貯藏、精煉和先前的濃縮步驟過(guò)程中形成的副產(chǎn)物以及(3)來(lái)自在先前濃縮或純化步驟過(guò)程中使用的溶劑或試劑的致污物。
[0057]實(shí)例(I)包括其他不需要的PUFA ;飽和脂肪酸；留醇，例如膽固醇；維生素；以及環(huán)境污染物，例如多氯聯(lián)苯(PCB)、多環(huán)芳烴(PAH)殺蟲(chóng)劑、氯化殺蟲(chóng)劑、二噁英和重金屬。PCB、PAH、二噁英和氯化殺蟲(chóng)劑都是高度非極性組分。
[0058]實(shí)例(2)包括來(lái)自PUFA產(chǎn)物的同分異構(gòu)體以及氧化產(chǎn)物或分解產(chǎn)物，例如，脂肪酸及其衍生物的自氧化聚合產(chǎn)物。
[0059]實(shí)例(3 )包括可以加入以從進(jìn)料混合物中除去飽和脂肪酸或單不飽和脂肪酸的尿素。
[0060]優(yōu)選地，進(jìn)料混合物是含PUFA的海洋油(例如，魚(yú)油)，更優(yōu)選的是含有EPA和/或DHA的海洋油(例如，魚(yú)油)。
[0061]用于通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)制備濃縮的EPA (EE)的典型進(jìn)料混合物包含50?75%的EPA (EE),O?10%的DHA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。
[0062]用于通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)制備濃縮的EPA (EE)的優(yōu)選的進(jìn)料混合物包含55%的EPA (ΕΕ)、5%的DHA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。DHA (EE)的極性小于EPA (EE)的極性。
[0063]用于通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)制備濃縮的DHA (EE)的典型進(jìn)料混合物包含50?75%的DHA (EE),O?10%的EPA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。
[0064]用于通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)制備濃縮的DHA (EE)的優(yōu)選的進(jìn)料混合物包含75%的DHA (ΕΕ)、7%的EPA (EE)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。EPA (EE)的極性大于DHA (EE)的極性。
[0065]用于通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)制備EPA (EE)和DHA (EE)的濃縮混合物的典型的進(jìn)料混合物包含大于33%的EPA (EE)和大于22%的DHA (ΕΕ)。
[0066]本發(fā)明方法中的每一個(gè)分離步驟都在模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置中進(jìn)行。
[0067]任何已知的模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置，只要根據(jù)本發(fā)明的方法來(lái)使用，這些裝置都可以用于本發(fā)明方法的目的。如果根據(jù)本發(fā)明的方法來(lái)配置，可以使用那些在 US2985589、US3696107、US3706812、US3761533、FR-A-2103302、FR-A-2651148、FR-A-2651149、US6979402、US5069883 和 US4764276 中描述的所有的裝置。
[0068]如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置”通常是指多個(gè)連接的色譜柱，所述多個(gè)連接的色譜柱含有作為洗脫劑的含水醇，并且具有用于進(jìn)料混合物流的一個(gè)或多個(gè)注入點(diǎn)，用于水和/或醇的一個(gè)或多個(gè)注入點(diǎn)，來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提余物離開(kāi)流(從該提余物離開(kāi)流中能夠收集液體)，以及來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物離開(kāi)流(從該提取物離開(kāi)流中能夠收集液體)。
[0069]在本發(fā)明方法的每個(gè)步驟中使用的色譜裝置具有以串聯(lián)的方式連接在一起的色譜柱的單一陣列，這些色譜柱含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑。通常，每個(gè)色譜柱被連接到在裝置中與該色譜柱相鄰的兩個(gè)柱上。因此，在該陣列中的給定柱的出口連接到該陣列中相鄰柱的入口，相對(duì)于陣列中洗脫劑的流動(dòng)該相鄰柱的入口是下游。因此，洗脫劑能夠流遍上述連接的色譜柱的陣列。通常，不將色譜柱連接到在裝置中不相鄰的色譜柱上。
[0070]如在本文所使用，術(shù)語(yǔ)“不相鄰”是指在例如同一裝置中被一個(gè)或多個(gè)柱，優(yōu)選3個(gè)或更多個(gè)柱，更優(yōu)選5個(gè)或更多個(gè)柱，最優(yōu)選約5個(gè)柱隔開(kāi)的柱。
[0071]通常，每個(gè)裝置僅具有一個(gè)用于進(jìn)料混合物的注入點(diǎn)。在一實(shí)施方式中，每個(gè)裝置僅具有一個(gè)用于含水有機(jī)溶劑洗脫劑的注入點(diǎn)。在另一實(shí)施方式中，每個(gè)裝置具有兩個(gè)或更多個(gè)用于水和/或有機(jī)溶劑的注入點(diǎn)。
[0072]術(shù)語(yǔ)“提余物”是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。在真實(shí)移動(dòng)床色譜和模擬移動(dòng)床色譜的情況下，它是指隨液體吸附劑相的移動(dòng)比隨固體洗脫劑相的移動(dòng)更快的組分的流。因此，與進(jìn)料流相比，提余物流通常富集極性較大的組分，并且耗盡極性較小的組分。
[0073]術(shù)語(yǔ)“提取物”是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。在真實(shí)移動(dòng)床色譜和模擬移動(dòng)床色譜的情況下，它是指隨固體吸附劑相的移動(dòng)比隨液體洗脫劑相的移動(dòng)更快的組分的流。因此，與進(jìn)料流相比，提取物流通常富集極性較小的組分，并且耗盡極性較大的組分。
[0074]在每個(gè)裝置中使用的柱的數(shù)量沒(méi)有特別限制。技術(shù)人員能夠容易地確定使用的柱的合適數(shù)量。柱的數(shù)量通常為4個(gè)或多于4個(gè)，優(yōu)選為6個(gè)或多于6個(gè)，更優(yōu)選為8個(gè)或多于8個(gè),例如4、5、6、7、8、9或10個(gè)柱。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用5個(gè)或6個(gè)柱,更優(yōu)選使用6個(gè)柱。在另一優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用7個(gè)或8個(gè)柱，更優(yōu)選使用8個(gè)柱。通常，不超過(guò)25個(gè)柱，優(yōu)選不超過(guò)20個(gè)柱，更優(yōu)選不超過(guò)15個(gè)柱。
[0075]在第一分離步驟和第二分離步驟中使用的色譜裝置通常具有相同數(shù)量的柱。對(duì)于某些應(yīng)用，它們可以具有不同數(shù)量的柱。
[0076]在上述裝置中使用的柱的尺寸沒(méi)有特別限制，并且其尺寸將取決于待純化的進(jìn)料混合物的體積。技術(shù)人員將能夠容易地確定使用的合適尺寸的柱。每個(gè)柱的直徑通常在IOmm和IOOOmm之間，優(yōu)選在IOmm和500mm之間，更優(yōu)選在25mm和250mm之間，甚至更優(yōu)選在50mm和IOOmm之間，且最優(yōu)選在70mm和80mm之間。每個(gè)柱的長(zhǎng)度通常在IOcm和300cm之間，優(yōu)選在IOcm和200cm之間，更優(yōu)選在25cm和150cm之間，甚至更優(yōu)選在70cm和IlOcm之間，最優(yōu)選在80cm和IOOcm之間。
[0077]在第一分離步驟和第二分離步驟中使用的色譜裝置中的柱通常具有一致的尺寸，但對(duì)于某些應(yīng)用，可以具有不同的尺寸。
[0078]柱的流速受橫跨(across)在整個(gè)系列的柱上的最大壓力限制，并且將取決于柱的尺寸和固體相的粒徑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地建立用于每種柱尺寸所需的流速以確保有效的解吸附。較大直徑的柱通常需要較大的流量以保持線性地流經(jīng)柱。
[0079]對(duì)于上文列出的通常的柱尺寸，通常進(jìn)入在第一分離步驟中使用的色譜裝置的洗脫劑的流速是I?4.5L/min,優(yōu)選1.5?2.5L/min。通常,來(lái)自在第一分離步驟中使用的色譜裝置的提取物的流速是0.1?2.5L/min，優(yōu)選0.5?2.25L/min。在將來(lái)自第一分離步驟的提取物的一部分循環(huán)回在第一分離步驟中使用的裝置中的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速通常是0.7?1.4L/min，優(yōu)選約lL/min。通常，來(lái)自在第一分離步驟中使用的色譜裝置的提余物的流速是0.2?2.5L/min,優(yōu)選0.3?2.0L/min。在將來(lái)自第一分離步驟的提余物的一部分循環(huán)回在第一分離步驟中使用的裝置中的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速通常是0.3?
1.0L/min，優(yōu)選約0.5L/min。通常，將進(jìn)料混合物引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的流速是5?1 50mT,/mi η,優(yōu)選10?100mL/min,更優(yōu)選20?BOmT,/mi η。
[0080]對(duì)于上文列出的典型的柱尺寸，通常進(jìn)入在第二分離步驟中使用的色譜裝置的洗脫劑的流速是I?4L/min,優(yōu)選1.5?3.5L/min。通常,來(lái)自在第二分離步驟中使用的色譜裝置的提取物的流速是0.5?2L/min，優(yōu)選0.7?1.9L/min。在將來(lái)自第二分離步驟的提取物的一部分循環(huán)回在第二分離步驟中使用的裝置中的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速通常是0.6?1.4L/min,優(yōu)選0.7?1.lL/min,更優(yōu)選約0.9L/min。通常，來(lái)自在第二分離步驟中使用的色譜裝置的提余物的流速是0.5?2.5L/min，優(yōu)選0.7?1.8L/min，更優(yōu)選約1.4L/min。在將來(lái)自第二分離步驟的提余物的一部分循環(huán)回在第二分離步驟中使用的裝置中的實(shí)施方式中，循環(huán)的流速通常是0.3?1.0L/min,優(yōu)選約0.5L/min。
[0081]本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉，經(jīng)由多種提取物流和提余物流來(lái)收集或除去液體的速率的基準(zhǔn)是指在一定時(shí)間內(nèi)除去的液體的體積，通常為L(zhǎng)/min。類(lèi)似地，將液體循環(huán)至裝置中，通常是循環(huán)至該裝置中的相鄰的柱中的速率的基準(zhǔn)是指在一定時(shí)間內(nèi)循環(huán)的液體的體積，通常為L(zhǎng)/min。
[0082]步驟時(shí)間，即變換進(jìn)料混合物和洗脫劑的注入點(diǎn)與收集的餾分的各個(gè)離開(kāi)點(diǎn)之間的時(shí)間，沒(méi)有特別限制，并且將取決于所使用的柱的數(shù)量和尺寸以及穿過(guò)該裝置的流速。技術(shù)人員將能夠容易地確定在本發(fā)明的方法中使用的合適的步驟時(shí)間。步驟時(shí)間通常是100?1000秒，優(yōu)選是200?800秒，更優(yōu)選是約250?約750秒。在一些實(shí)施方式中，100?400秒，優(yōu)選200?300秒，更優(yōu)選約250秒的步驟時(shí)間是合適的。在其他實(shí)施方式中，600?900秒，優(yōu)選700?800秒，更優(yōu)選約750秒的步驟時(shí)間是合適的。
[0083]在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選真實(shí)移動(dòng)床色譜。
[0084]在本領(lǐng)域中已知的用于真實(shí)移動(dòng)床系統(tǒng)和模擬移動(dòng)床系統(tǒng)的常規(guī)吸附劑可用于本發(fā)明的方法中。每個(gè)色譜柱可包含相同或不同的吸附劑。通常，每個(gè)柱包含相同的吸附齊U。這些常用的材料的實(shí)例是聚合物珠(優(yōu)選具有DVB (二乙烯基苯)的聚苯乙烯網(wǎng))，和硅膠(優(yōu)選具有C8或C18烷烴特別是C18烷烴的反相鍵合硅膠)。優(yōu)選C18鍵合反相硅膠。在本發(fā)明的方法中使用的吸附劑優(yōu)選是非極性的。
[0085]吸附劑固定相的材料的形狀可以是例如球形珠或非球形珠，優(yōu)選基本上為球形珠。這樣的珠的直徑通常是5?500微米，優(yōu)選10?500微米，更優(yōu)選為15?500微米，更優(yōu)選40?500微米，更優(yōu)選100?500微米，更優(yōu)選250?500微米，甚至更優(yōu)選250?400微米，最優(yōu)選250?350微米。在一些實(shí)施方式中，可以使用直徑是5?35微米，通常是10?30微米,優(yōu)選是15?25微米的珠。一些優(yōu)選的粒徑稍微大于過(guò)去在模擬移動(dòng)床方法和真實(shí)移動(dòng)床方法中使用的珠的粒徑。使用較大的顆粒使能夠在系統(tǒng)中使用較低壓力的洗脫劑。反過(guò)來(lái)，這在成本節(jié)約、裝置的效率和壽命方面具有優(yōu)點(diǎn)。已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，大粒徑的吸附劑珠可以在本發(fā)明的方法中使用(伴隨著它們相關(guān)的優(yōu)點(diǎn))，而在分辨率方面沒(méi)有任何損失。
[0086]吸附劑通常具有10?50nm的孔徑，優(yōu)選15?45nm，更優(yōu)選20?40nm，最優(yōu)選25 ?35nm。
[0087]通常，本發(fā)明的方法在15?55°C下進(jìn)行，優(yōu)選在20?40°C下進(jìn)行，更優(yōu)選在約30°C下進(jìn)行。因此，該方法通常在室溫下進(jìn)行，但也可在升高的溫度下進(jìn)行。
[0088]本發(fā)明的方法包括第一分離步驟和第二分離步驟。
[0089]這兩個(gè)步驟可以容易地在單個(gè)色譜裝置上進(jìn)行。因此，在一實(shí)施方式中，(a)第一分離步驟和第二分離步驟在同一色譜裝置上按順序進(jìn)行，在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間回收中間產(chǎn)物，并且在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間對(duì)所述色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。圖1Oa示出了這種分離方法的優(yōu)選的實(shí)施方式。因此，第一分離步驟(左手側(cè))是在具有8個(gè)柱的SMB裝置上進(jìn)行。在第一分離步驟和第二分離步驟之間將中間產(chǎn)物回收在例如容器中，對(duì)色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。然后第二分離步驟(右手側(cè))是在具有8個(gè)柱的同一 SMB裝置上進(jìn)行。
[0090]在實(shí)施方式(a)中，調(diào)節(jié)工藝條件通常是指整體調(diào)節(jié)裝置中的工藝條件，即物理地改動(dòng)(modify)該裝置，使得條件是不同的。它不是指簡(jiǎn)單地將中間產(chǎn)物重新引入至工藝條件可能湊巧不同的同一裝置的不同部分。
[0091]或者，在第一分離步驟和第二分離步驟中可以使用第一分離色譜裝置和第二分離色譜裝置。因此，在另一實(shí)施方式中，(b)第一分離步驟和第二分離步驟分別在獨(dú)立的第一色譜裝置和第二色譜裝置上進(jìn)行，將從第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物引入至第二色譜裝置中，并且在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0092]在實(shí)施方式(b)中，兩個(gè)分離步驟既可以按順序進(jìn)行也可以同時(shí)進(jìn)行。
[0093]因此，在實(shí)施方式(b)中，在兩個(gè)分離步驟是按順序進(jìn)行的情況下，第一分離步驟和第二分離步驟按順序分別在獨(dú)立的第一色譜裝置和第二色譜裝置上進(jìn)行，在第一分離步驟和第二分離步驟之間將中間產(chǎn)物回收，并且對(duì)第一色譜裝置和第二色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。圖1Ob示出了這種分離方法的優(yōu)選的實(shí)施方式。因此，第一分離步驟(左手側(cè))在具有8個(gè)柱(即I至8)的SMB裝置上進(jìn)行。在第一分離步驟和第二分離步驟之間將中間產(chǎn)物回收在例如容器中，然后將中間產(chǎn)物引入至第二分離SMB裝置中。第二分離步驟(右手側(cè))在具有8個(gè)柱(SP9至16)的第二分離SMB裝置上進(jìn)行。對(duì)兩個(gè)色譜裝置中的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0094]在實(shí)施方式(b)中，在兩個(gè)分離步驟是同時(shí)進(jìn)行的情況下，第一分離步驟和第二分離步驟分別在獨(dú)立的第一色譜裝置和第二色譜裝置上進(jìn)行，將中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置中，并且對(duì)第一色譜裝置和第二色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。圖1Oc示出了這種分離方法的優(yōu)選的實(shí)施方式。因此，第一分離步驟(左手側(cè))在具有8個(gè)柱(即I至8)的SMB裝置上進(jìn)行。然后將在第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的第二分離色譜裝置中。中間產(chǎn)物可以直接或間接(例如，經(jīng)由容器)從第一分離步驟傳到第二分離步驟。第二分離步驟(右手側(cè))在具有8個(gè)柱(即9至16)的第二分離SMB裝置上進(jìn)行。對(duì)兩個(gè)色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0095]在實(shí)施方式(b)中，在兩個(gè)分離步驟是同時(shí)進(jìn)行的情況下，洗脫劑在兩個(gè)獨(dú)立的色譜裝置中獨(dú)立地流通。因此，除在中間產(chǎn)物中作為溶劑存在的洗脫劑外，在兩個(gè)獨(dú)立的色譜裝置之間不共享洗脫劑，上述中間產(chǎn)物在第二分離步驟中被純化并且被引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置中。在第一分離步驟和第二分離步驟中使用的兩個(gè)獨(dú)立的色譜裝置之間不共享色譜柱。
[0096]在第一分離步驟中得到中間產(chǎn)物之后,在第二分離步驟中純化中間產(chǎn)物之前可以部分或全部除去含水有機(jī)溶劑洗脫劑?；蛘?，在第二分離步驟中對(duì)中間產(chǎn)物進(jìn)行純化而不除去任何存在的溶劑。
[0097]如上面所提到的，在每個(gè)分離步驟中將PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。在實(shí)施方式(a)中，在第一分離步驟和第二分離步驟之間對(duì)在兩個(gè)分離步驟中使用的單個(gè)SMB裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。在實(shí)施方式(b)中，對(duì)在第一分離步驟和第二分離步驟中使用的兩個(gè)獨(dú)立的色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行設(shè)置從而在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。
[0098]因此，在第一分離步驟和第二分離步驟中的工藝條件是變動(dòng)的。工藝條件的變動(dòng)可以包括例如使用的柱的尺寸、使用的柱的數(shù)量、柱內(nèi)使用的填充物、SMB裝置的步驟時(shí)間、裝置的溫度，或在分離步驟中使用的洗脫劑。
[0099]與進(jìn)料混合物相比，在第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物通常富集PUFA產(chǎn)物。
[0100]然后，將在第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置中。
[0101]中間產(chǎn)物通常作為提余物流或提取物流而從在第一分離步驟中使用的色譜裝置中被收集。
[0102]通常，在第一分離步驟中，中間產(chǎn)物作為提余物流被收集；而在第二分離步驟中，PUFA產(chǎn)物作為提取物流被收集。因此，在第一分離步驟中收集的提余物流被用作在第二分離步驟中的進(jìn)料混合物。在第一分離步驟中收集的提余物流通常含有PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分。
[0103]或者，在第一分離步驟中，中間產(chǎn)物作為提取物流被收集；而在第二分離步驟中，PUFA產(chǎn)物作為提余物流被收集。因此，在第一分離步驟中收集的提取物流被用作在第二分離步驟中的進(jìn)料混合物。在第一分離步驟中收集的提取物流通常含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分。
[0104]在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的不同組分分離。通常，在本發(fā)明的方法的每個(gè)分離步驟中分離的組分具有不同的極性。
[0105]優(yōu)選地，在第一分離步驟中，PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的極性較小的組分分離；而在第二分離步驟中，PUFA產(chǎn)物與進(jìn)料混合物的極性較大的組分分離。
[0106]通常，(a)將來(lái)自在第一分離步驟中使用的裝置中的提取物流的一部分循環(huán)回在第一分離步驟中使用的裝置中；和/或
[0107](b)將來(lái)自在第一分離步驟中使用的裝置中的提余物流的一部分循環(huán)回在第一分離步驟中使用的裝置中；和/或
[0108](c)將來(lái)自在第二分離步驟中使用的裝置中的提取物流的一部分循環(huán)回在第二分離步驟中使用的裝置中；和/或
[0109](d)將來(lái)自在第二分離步驟中使用的裝置中的提余物流的一部分循環(huán)回在第二分離步驟中使用的裝置中。
[0110]優(yōu)選地，(a)將來(lái)自在第一分離步驟中使用的裝置中的提取物流的一部分循環(huán)回在第一分離步驟中使用的裝置中；和
[0111](b)將來(lái)自在第一分離步驟中使用的裝置中的提余物流的一部分循環(huán)回在第一分離步驟中使用的裝置中；和
[0112](C)將來(lái)自在第二分離步驟中使用的裝置中的提取物流的一部分循環(huán)回在第二分離步驟中使用的裝置中；和
[0113](d)將來(lái)自在第二分離步驟中使用的裝置中的提余物流的一部分循環(huán)回在第二分離步驟中使用的裝置中。
[0114]該循環(huán)涉及將從在第一分離步驟或第二分離步驟中使用的色譜裝置中出來(lái)的提取物流或提余物流的一部分供回至在該步驟中使用的裝置中，通常供回至相鄰的柱中。該相鄰的柱是相對(duì)于系統(tǒng)中洗脫劑的流動(dòng)是下游的相鄰的柱。
[0115]將在第一分離步驟或第二分離步驟中經(jīng)由提取物流或提余物流而被收集的液體循環(huán)回在該步驟中使用的色譜裝置中的速率是將經(jīng)由該提取物流或提余物流而被收集的液體供回至在該步驟中使用的裝置中(通常供回至相鄰的柱中，即，相對(duì)于系統(tǒng)中洗脫劑的流動(dòng)是下游的柱)的速率。
[0116]參見(jiàn)圖9中示出的優(yōu)選的實(shí)施方式可以看出這一點(diǎn)。在第一分離步驟中的提取物的循環(huán)的速率是將從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱2的底部收集的提取物供給至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部的速率，即進(jìn)入在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部的液體的流速。
[0117]在第二分離步驟中的提取物的循環(huán)的速率是將從在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱2的底部收集的提取物供給至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部的速率，即進(jìn)入在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部的液體的流速。
[0118]在第一分離步驟和/或第二分離步驟中的提取物流和/或提余物流的循環(huán)通常是這樣實(shí)現(xiàn)的:通過(guò)將經(jīng)由在該第一分離步驟和/或第二分離步驟中的該提取物流和/或提余物流而被收集的液體供給到容器中，并且隨后將一定量的該液體從容器中泵入回在該分離步驟中使用的裝置，通常泵入回相鄰的柱。在這種情況下，在第一分離步驟和/或第二分離步驟中經(jīng)由具體的提取物流或提余物流而被收集的液體循環(huán)速率，通常循環(huán)回相鄰柱的速率為將液體泵出容器而泵回至色譜裝置中的速率，通常泵回至相鄰的柱的速率。
[0119]正如技術(shù)人員將知曉的是，經(jīng)由洗脫劑流和原料流被引入至色譜裝置的液體的量與從裝置中除去并且循環(huán)回裝置的液體量相平衡。
[0120]因此，參見(jiàn)圖9，對(duì)于提取物流，進(jìn)入在第一分離步驟和第二分離步驟中使用的色譜裝置中的洗脫劑(解吸劑)的流速(D)等于在該分離步驟中經(jīng)由提取物流而被收集的液體積累在容器中的速率(El和E2)加上將提取物循環(huán)回在該具體分離步驟中使用的色譜裝置中的速率(D-EI和D-E2)。
[0121]對(duì)于來(lái)自分離步驟的提余物流，將提取物循環(huán)回在該具體分離步驟中所使用的色譜裝置的速率(D-E1和D-E2)加上將原料引入至在該具體分離步驟中使用的色譜裝置的速率(F和Rl)等于將在該具體分離步驟中經(jīng)由提余物流而被收集的液體積累在容器中的速率(Rl和R2)加上將提余物循環(huán)回在該具體分離步驟中使用的色譜裝置中的速率(D+F-E1-R1 和 D+R1-E2-R2)。
[0122]將從色譜裝置的具體提取物流或具體提余物流中收集的液體積累在容器中的速率也可被認(rèn)為是從該色譜裝置中除去該提取物流或提余物流的凈速率。
[0123]在本發(fā)明的方法中使用的洗脫劑為含水有機(jī)溶劑。
[0124]上述含水有機(jī)溶劑通常包括水和一種或多種醇、醚、酯、酮或腈，或它們的混合物。
[0125]醇溶劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。醇通常為短鏈的醇。醇通常為分子式R0H，其中R為直鏈或支鏈的C1?C6烷基。優(yōu)選地，C1?C6烷基是未被取代的。醇的實(shí)例包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇和叔丁醇。甲醇和乙醇是優(yōu)選的。甲醇是更優(yōu)選的。
[0126]醚溶劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。醚通常為短鏈的醚。醚通常為分子式R-0-R’，其中R和R’為相同的或不同的，并且表示直鏈或支鏈的C1?C6烷基。優(yōu)選地，C1?C6烷基是未被取代的。優(yōu)選的醚包括乙醚、二異丙醚和甲基叔丁基醚(MTBE)。
[0127]酯溶劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。酯通常為短鏈的酯。酯通常為分子式R-(C=0)0-R’，其中R和R’為相同的或不同的，并且表示直鏈或支鏈的C1?C6烷基。優(yōu)選的酯包括乙酸甲酯和乙酸乙酯。
[0128]酮溶劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。酮通常為短鏈的酮。酮通常為分子式R-(C=O)-R’，其中R和R’為相同的或不同的，并且表示直鏈或支鏈的C1?C6烷基。優(yōu)選地，C1?C6烷基是未被取代的。優(yōu)選的酮包括丙酮、甲基乙基酮和甲基異丁基酮(MTBK)。
[0129]腈溶劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。腈通常為短鏈的腈。腈通常為分子式R-CN，其中R表示直鏈或支鏈的C1?C6烷基。優(yōu)選地，C1?C6烷基是未被取代的。優(yōu)選的腈包括乙腈。
[0130]通常，含水有機(jī)溶劑為含水醇或含水乙腈。
[0131]優(yōu)選地，含水有機(jī)溶劑為含水甲醇或含水乙腈。含水甲醇是更優(yōu)選的。
[0132]通常，洗脫劑并未處于超臨界狀態(tài)。通常，洗脫劑為液體。
[0133]通常，在整個(gè)裝置中洗脫劑的平均水與有機(jī)溶劑的比例，例如水與甲醇的比例為0.1:99.9至9:91體積份，優(yōu)選0.25:99.75至7:93體積份，更優(yōu)選0.5:99.5至6:94體積份。
[0134]當(dāng)含水有機(jī)溶劑為含水乙腈時(shí)，洗脫劑通常含有至多30wt%的水，余量的乙腈。優(yōu)選地，洗脫劑含有5?25wt%的水，余量的乙腈。更優(yōu)選地，洗脫劑含有10?20wt%的水，余量的乙腈。甚至更優(yōu)選地，洗脫劑含有15?25wt%的水,余量的乙腈。
[0135]通常，在每個(gè)分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑洗脫劑具有不同的水與有機(jī)溶劑的比例。優(yōu)選地，對(duì)在每個(gè)分離步驟中使用的水與有機(jī)溶劑的比例進(jìn)行調(diào)節(jié)以在每個(gè)分離步驟中使PUFA產(chǎn)物能夠與進(jìn)料混合物的不同組分分離。[0136]在每個(gè)分離步驟中使用的洗脫劑的洗脫能力通常是不同的。優(yōu)選地，在第一分離步驟中使用的洗脫劑的洗脫能力高于在第二分離步驟中使用的洗脫劑的洗脫能力。實(shí)際上，這可通過(guò)改變?cè)诿總€(gè)分離步驟中使用的水和有機(jī)溶劑的相對(duì)量來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0137]取決于有機(jī)溶劑的選擇，它們可以是比水更強(qiáng)有力的解吸劑。或者，它們可以是比水更弱的解吸劑。例如，乙腈和醇是比水更強(qiáng)有力的解吸劑。因此，當(dāng)含水有機(jī)溶劑為含水醇或含水乙腈時(shí)，在第一分離步驟中使用的洗脫劑中的醇或乙腈的量通常大于在第二分離步驟中使用的洗脫劑中的醇或乙腈的量。
[0138]通常，在第一分離步驟中洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例低于在第二分離步驟中洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例。因此，在第一分離步驟中的洗脫劑通常比在第二分離步驟中的洗脫劑含有更多的有機(jī)溶劑，優(yōu)選醇，更優(yōu)選甲醇。
[0139]在每個(gè)分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑具有不同的水與有機(jī)溶劑的比例的實(shí)施方式中，在第一分離步驟中洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例通常為O:1O O?5:9 5體積份，優(yōu)選0.1:99.9?2.5:97.5體積份，更優(yōu)選0.25:99.75?2:98體積份，并且最優(yōu)選
0.5:99.5?1.5:98.5體積份。在這些實(shí)施方式中，在第二分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例通常為2:98?8:92體積份，優(yōu)選3:97?7:93體積份，更優(yōu)選4:96?6:94體積份，并且甚至更優(yōu)選4.5:95.5?5.5:94.5體積份。
[0140]在每個(gè)分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑具有不同的水和有機(jī)溶劑含量的特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，在第一分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例為0.5:99.5?
1.5:98.5體積份，而在第二分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例為4.5:95:5至
5.5:94.5體積份。
[0141]將要知曉的是，上述所提到的在每個(gè)分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例為在整個(gè)色譜裝置中的平均比例。
[0142]通常，通過(guò)將水和/或有機(jī)溶劑引入至在分離步驟中使用的色譜裝置中的一個(gè)或多個(gè)柱來(lái)控制在每個(gè)分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例。因此，例如，與被引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置相比，水通常被更慢地引入至在第一分離步驟中使用的色譜分離裝置，以實(shí)現(xiàn)在第一分離步驟中水與有機(jī)溶劑的比例低于在第二分離步驟中水與有機(jī)溶劑的比例。
[0143]在一些實(shí)施方式中，在不同點(diǎn)處將基本上純的有機(jī)溶劑和基本上純的水引入至在每個(gè)分離步驟中使用的色譜裝置。這兩個(gè)流的相對(duì)流速將決定在色譜裝置中的溶劑整體組成分布(profile)。在其他實(shí)施方式中，在不同點(diǎn)處可將不同的有機(jī)溶劑/水混合物引入至在每個(gè)分離步驟中使用的每個(gè)色譜裝置。這將涉及將兩種或更多種不同的有機(jī)溶劑/水混合物引入至在具體分離步驟中使用的色譜裝置，每種有機(jī)溶劑/水混合物具有不同的有機(jī)溶劑與水的比例。在該實(shí)施方式中的有機(jī)溶劑/水混合物的相對(duì)流速和相對(duì)濃度將決定在該分離步驟中使用的色譜分離裝置中的溶劑整體組成分布。
[0144]在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，(I)在第一分離步驟中含有PUFA產(chǎn)物和極性較大的組分的中間產(chǎn)物作為提余物流而被收集，而在第二分離步驟中PUFA產(chǎn)物作為提取物流而被收集；或
[0145](2)在第一分離步驟中含有PUFA產(chǎn)物和極性較小的組分的中間產(chǎn)物作為提取物流而被收集，而在第二分離步驟中PUFA產(chǎn)物作為提余物流而被收集。[0146]特別優(yōu)選的實(shí)施方式(I)適用于從進(jìn)料混合物中純化EPA。
[0147]圖2示出了該特別優(yōu)選的實(shí)施方式(I)。在第一分離步驟中純化含有PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F。在第一分離步驟中，極性較小的組分(A)作為提取物流El被除去。PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物流Rl被收集。提余物流Rl為中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物隨后在第二分離步驟中被純化。在第二分離步驟中，極性較大的組分(C)作為提余物流R2被除去。PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2被收集。
[0148]圖4中更詳細(xì)地示出了該實(shí)施方式。除了示出了用于將有機(jī)溶劑解吸劑(D)和水(W)引入至每個(gè)色譜裝置的點(diǎn)外，圖4和圖2是一致的。有機(jī)溶劑解吸劑(D)和水(W)—起形成洗脫劑。(D)相通常為基本上純的有機(jī)溶劑，但是在某些實(shí)施方式中也可以是主要包括有機(jī)溶劑的有機(jī)溶劑/水混合物。(W)相通常為基本上純的水，但是在某些實(shí)施方式中也可以是主要包括水的有機(jī)溶劑/水混合物，例如98%水/2%甲醇混合物。
[0149]圖6中示出了該特別優(yōu)選的實(shí)施方式的進(jìn)一步圖示。在該圖中，不存在單獨(dú)的水注入點(diǎn)，而是替代為在(D)處注入含水有機(jī)溶劑解吸劑。
[0150]通過(guò)改變每個(gè)色譜裝置內(nèi)的洗脫劑的解吸能力可輔助提余物流和提取物流的分離。這可通過(guò)在不同點(diǎn)處將洗脫劑的有機(jī)溶劑(或富含有機(jī)溶劑)組分和水(或富含水)組分引入至每個(gè)色譜裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)。因此，通常，相對(duì)于在系統(tǒng)中的洗脫劑的流動(dòng)，在提取物離開(kāi)點(diǎn)的上游引入有機(jī)溶劑，而在提取物離開(kāi)點(diǎn)和用于將原料引入至色譜裝置的點(diǎn)之間引入水。圖4中示出了該實(shí)施方式。
[0151]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中使用的典型溶劑為含水醇或含水乙腈，優(yōu)選為含水甲醇。
[0152]通常，在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，與在第二分離步驟中使用的洗脫劑相比，在第一分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑洗脫劑含有更多的有機(jī)溶劑，即，在第一步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例低于在第二步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例。
[0153]在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將進(jìn)料混合物引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的下游除去在第一分離步驟中的第一提余物流。
[0154]在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將進(jìn)料混合物引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的上游除去在第一分離步驟中的第一提取物流。
[0155]在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的下游除去在第二分離步驟中的第二提余物流。
[0156]在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的上游收集在第二分離步驟中的第二提取物流。
[0157]通常，在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在第一提取物流的除去點(diǎn)的上游，將有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置。
[0158]通常，在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，當(dāng)將水引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置時(shí)，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在進(jìn)料混合物的引入點(diǎn)的上游并且第一提取物流的除去點(diǎn)的下游，將水引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置。[0159]通常，在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在第二提取物流的除去點(diǎn)的上游，將有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置。
[0160]通常，在該特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，當(dāng)將水引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置時(shí)，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在中間產(chǎn)物的引入點(diǎn)的上游并且第二提取物流的除去點(diǎn)的下游，將水引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置。
[0161]特別優(yōu)選的實(shí)施方式(2)適用于從進(jìn)料混合物中純化DHA。
[0162]圖3中示出了特別優(yōu)選的實(shí)施方式(2)。在第一分離步驟中純化含有PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F。在第一分離步驟中，極性較大的組分(C)作為提余物流Rl被除去。PUFA產(chǎn)物(B )和極性較小的組分(A)作為提取物流El被收集。提取物流El為中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物隨后在第二分離步驟中被純化。在第二分離步驟中，極性較小的組分(A)作為提取物流E2被除去。PUFA產(chǎn)物(B)作為提余物流R2被收集。
[0163]圖5更加詳細(xì)地示出了該實(shí)施方式。除了示出了用于將有機(jī)溶劑解吸劑(D)和水(W)引入至每個(gè)色譜裝置的點(diǎn)外，圖5和圖3是一致的。如上所述，(D)相通常為基本上純的有機(jī)溶劑，但是在某些實(shí)施方式中也可以是主要包括有機(jī)溶劑的有機(jī)溶劑/水混合物。(W)相通常為基本上純的水，但是在某些實(shí)施方式中也可以是主要包括水的有機(jī)溶劑/水混合物，例如，98%水/2%甲醇混合物。
[0164]圖7中示出了該特別優(yōu)選的實(shí)施方式的進(jìn)一步圖示。在該圖中，不存在單獨(dú)的水注入點(diǎn)，而是替代為在(D)處注入含水有機(jī)溶劑解吸劑。
[0165]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中使用的典型溶劑為含水醇或含水乙腈，優(yōu)選為含水甲醇。
[0166]通常，在該實(shí)施方式中，與在第二分離步驟中使用的洗脫劑相比，在第一分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑洗脫劑含有更少的有機(jī)溶劑，即，在第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例高于在第二分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例。
[0167]在該實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將進(jìn)料混合物引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的下游除去在第一分離步驟中的第一提余物流。
[0168]在該實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將進(jìn)料混合物引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的上游除去在第一分離步驟中的第一提取物流。
[0169]在該實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的下游除去在第二分離步驟中的第二提余物流。
[0170]在該實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，通常在用于將中間產(chǎn)物引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的點(diǎn)的上游收集在第二分離步驟中的第二提取物流。
[0171]通常，在該實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在第一提取物流的除去點(diǎn)的上游，將有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置。
[0172]通常，在該實(shí)施方式中，當(dāng)將水引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置時(shí)，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在進(jìn)料混合物的引入點(diǎn)的上游并且第一提取物流的除去點(diǎn)的下游，將水引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置。
[0173]通常，在該實(shí)施方式中，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在第二提取物流的去除點(diǎn)的上游，將有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置。[0174]通常，在該實(shí)施方式中，當(dāng)將水引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置時(shí)，相對(duì)于洗脫劑的流動(dòng)，在中間產(chǎn)物的引入點(diǎn)的上游并且第二提取物流的除去點(diǎn)的下游，將水引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置。
[0175]在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式中，在第一分離步驟和第二分離步驟中使用的每個(gè)模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置包括八個(gè)色譜柱。這些柱稱(chēng)為柱I至柱8。在每個(gè)裝置中，八個(gè)柱以串聯(lián)的方式布置從而柱I的底部連接至柱2的頂部，柱2的底部連接至柱3的頂部……以及柱8的底部連接至柱I的頂部。可選地，這些連接可經(jīng)由具有進(jìn)入下一個(gè)柱的循環(huán)流的存儲(chǔ)容器(holding container)來(lái)實(shí)現(xiàn)。洗脫劑為從柱I至柱2至柱3等來(lái)流經(jīng)系統(tǒng)。吸附劑穿過(guò)系統(tǒng)的有效流動(dòng)為從柱8至柱7至柱6等。
[0176]圖8示出了最優(yōu)選的實(shí)施方式。將含有PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱5的頂部。將有機(jī)溶劑解吸劑引入至在第一分離裝置中使用的色譜裝置的柱I的頂部。將水引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱4的頂部。在第一分離步驟中，極性較小的組分(A)作為提取物流El從柱2的底部被除去。PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物流Rl從柱7的底部被除去。提余物流Rl為中間產(chǎn)物，通過(guò)在柱5的頂部將其引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置，該中間產(chǎn)物隨后在第二分離步驟中被純化。將有機(jī)溶劑解吸劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱I的頂部。將水引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱4的頂部。在第二分離步驟中，極性較大的組分(C)作為提余物流R2在柱7的底部被除去。PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2在柱2的底部被收集。
[0177]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將有機(jī)溶劑引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱I的頂部。
[0178]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將水引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱4的頂部。
[0179]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將有機(jī)溶劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱I的頂部。
[0180]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將有機(jī)溶劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱4的頂部。
[0181]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將進(jìn)料流引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱5的頂部。
[0182]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，第一提余物流通常作為中間產(chǎn)物從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱7的底部被收集。該中間產(chǎn)物隨后在第二分離步驟中被純化，并且通常將其引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱5的頂部?？蛇x地，在第一提余物流在第二分離步驟中被純化之前，可被收集在容器中。
[0183]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱2的底部除去第一提取物流。可選地，可將第一提取物流收集在容器中并且重新引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部。
[0184]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常從在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱7的底部除去第二提余物流。
[0185]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常從在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱2的底部收集第二提取物流。該第二提取物流通常含有經(jīng)純化的PUFA產(chǎn)物。可選地，可將第二提取物流收集在容器中并且重新引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部。
[0186]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用的洗脫劑通常為含水醇，優(yōu)選含水甲醇。水與醇的比例通常為0.5:99.5至6:94體積份。
[0187]通常，在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，在第一分離步驟中使用的色譜裝置中的水與有機(jī)溶劑的比例低于在第二分離步驟中使用的色譜裝置中的水與有機(jī)溶劑的比例。因此，與在第二步驟中使用的洗脫劑相比，在第一分離步驟中的洗脫劑通常含有更多的有機(jī)溶劑。
[0188]在第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例通常為0.5:99.5至1.5:98.5體積份。在第二分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例通常為2:98至6:94體積份。
[0189]盡管圖8的實(shí)施方式被配置為圖1Oa中所示出的，圖1Ob和圖1Oc示出的配置也可用于該實(shí)施方式中。
[0190]圖9示出了另一最優(yōu)選的實(shí)施方式。將含有PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)和極性較小的組分(A)的進(jìn)料混合物F引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱5的頂部。將含水有機(jī)溶劑解吸劑引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱I的頂部。在第一分離步驟中，極性較小的組分(A)作為提取物流El從柱2的底部被除去。PUFA產(chǎn)物(B)和極性較大的組分(C)作為提余物Rl從柱7的底部被除去。提余物流Rl為中間產(chǎn)物，通過(guò)將其引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱4的頂部，該中間產(chǎn)物在第二分離步驟中被純化。將含水有機(jī)溶劑解吸劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱I的頂部。在第二分離步驟中，極性較大的組分(C)作為提余物流R2在柱7的底部被除去。PUFA產(chǎn)物(B)作為提取物流E2在柱2的底部被收集。
[0191]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將含水有機(jī)溶劑引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱I的頂部。
[0192]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將含水有機(jī)溶劑引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱9的頂部。
[0193]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常將進(jìn)料流引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱5的頂部。
[0194]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，第一提余物流通常作為中間產(chǎn)物從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱7的底部而被收集。該中間產(chǎn)物隨后在第二分離步驟中被純化，并且通常將其引入至在第二分離步驟中使用的色譜裝置的柱5的頂部?？蛇x地，在第一提余物流在第二分離步驟中被純化之前，可被收集在容器中。
[0195]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱2的底部除去第一提取物流?？蛇x地，可將第一提取物流收集在容器中，并且將其一部分重新引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部。將經(jīng)由第一分離步驟中的提取物流而被收集的液體循環(huán)回在第一分離步驟中使用的色譜裝置的速率為將液體從該容器泵入柱3的頂部的速率。
[0196]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱7的底部除去第二提余物流。
[0197]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，通常從在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱2的底部收集第二提取物流。該第二提取物流通常含有經(jīng)純化的PUFA產(chǎn)物。可選地，可將第二提取物流收集在容器中并且將其一部分重新引入至在第一分離步驟中使用的色譜裝置的柱3的頂部。將經(jīng)由第二分離步驟的提取物流而被收集的液體循環(huán)回在第二分離步驟中使用的色譜裝置的速率為將液體從該容器泵入柱3的頂部的速率。
[0198]在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用的洗脫劑通常為含水醇，優(yōu)選含水甲醇。水與醇的比例通常為0.5:99.5至6:94體積份。
[0199]通常，在該最優(yōu)選的實(shí)施方式中，在第一分離步驟中使用的色譜裝置中的水與有機(jī)溶劑的比例低于在第二分離步驟中使用的色譜分離裝置中的水與有機(jī)溶劑的比例。因此，與在第二步驟中使用的洗脫劑相比，在第一分離步驟中使用的洗脫劑通常含有更多的有機(jī)溶劑。
[0200]在第一分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例通常為0.5:99.5至1.5:98.5體積份。在第二分離步驟中的水與有機(jī)溶劑的比例通常為2:98至6:94體積份。
[0201]盡管圖9的實(shí)施方式被配置為圖1Oa中所示出的，圖1Ob和圖1Oc示出的配置也可用于該實(shí)施方式中。
[0202]本發(fā)明的方法使能夠得到純度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于常規(guī)色譜技術(shù)所達(dá)到的純度的PUFA產(chǎn)物。通過(guò)本發(fā)明的方法而生產(chǎn)的PUFA產(chǎn)物還具有尤其有利的雜質(zhì)組成分布，該雜質(zhì)譜與通過(guò)已知技術(shù)而制備的油中觀察到那些相當(dāng)不同。因此，本發(fā)明還涉及一種包括PUFA產(chǎn)物的組合物，例如包括通過(guò)本發(fā)明的方法所得到的PUFA產(chǎn)物。
[0203]實(shí)際上，本發(fā)明的方法一般將通過(guò)計(jì)算機(jī)來(lái)控制。因此，本發(fā)明還提供了一種用于控制如本文所限定的色譜裝置的計(jì)算機(jī)程序，該計(jì)算機(jī)程序包括代碼模塊，當(dāng)所述計(jì)算機(jī)程序運(yùn)行時(shí)，所述代碼模塊指示所述裝置執(zhí)行本發(fā)明的方法。
[0204]下列實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明。
[0205]實(shí)施例
[0206]實(shí)施例1
[0207]根據(jù)圖9示意性示出的系統(tǒng)，利用真實(shí)移動(dòng)床色譜系統(tǒng)對(duì)魚(yú)油衍生的原料(55wt%EPA EE,5wt%DHA EE)進(jìn)行分餾，其中該真實(shí)移動(dòng)床色譜系統(tǒng)以C18鍵合硅膠(粒徑5 μ m)作為固定相，以及以含水甲醇作為洗脫劑。如圖9中所示，8個(gè)柱(直徑:4.6mm,長(zhǎng)度:250mm)以串聯(lián)形式連接。
[0208]使進(jìn)料混合物穿過(guò)在第一分離步驟中的SMB裝置。在第一分離步驟中，對(duì)工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)以從DHA和其他流動(dòng)緩慢的雜質(zhì)中純化EPA。在作為中間產(chǎn)物的提余物流中收集EPA和其他流動(dòng)快速的雜質(zhì)。舍棄含有DHA和其他流動(dòng)緩慢的雜質(zhì)的提取物流。
[0209]隨后為第二分離步驟調(diào)節(jié)SMB裝置的工藝條件。在第二分離步驟中，調(diào)節(jié)工藝條件以從較快流動(dòng)的雜質(zhì)中純化EPA。與在第一分離步驟中使用的含水甲醇洗脫劑相比，在第二分離步驟中使用的含水甲醇洗脫劑具有較高的水與有機(jī)溶劑的比例。在第二分離步驟中將中間產(chǎn)物作為進(jìn)料混合物引入至SMB裝置。高純度的EPA作為提取物流而被收集。摒棄含有較快流動(dòng)的雜質(zhì)的提余物流。
[0210]生產(chǎn)出最終純度為?95%的EPA，并且回收率為?95%。
[0211]圖11示出了原料的HPLC分析。
[0212]圖12示出了來(lái)自第一分離步驟的提余物流(R)和提取物流(E)的HPLC分析。
[0213]圖13示出了來(lái)自第二分離步驟的提余物流(R)和提取物流(E)的HPLC分析。圖14示出了來(lái)自第二分離步驟的提取物流的詳細(xì)的HPLC分析。
[0214]圖12和圖13還示出了用于第一分離步驟和第二分離步驟的工藝條件。
[0215]對(duì)照例I
[0216]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以比較通過(guò)SMB而生產(chǎn)的兩種PUFA產(chǎn)物中存在的環(huán)境污染物的量與通過(guò)蒸餾而制備的類(lèi)似的油中存在的環(huán)境污染物的量。下表1中示出了這些油的污染物組成分布。
[0217]表1
[0218]
【權(quán)利要求】
1.一種用于從進(jìn)料混合物中回收多元不飽和脂肪酸(PUFA)產(chǎn)物的色譜分離方法，所述方法包括以下步驟: (i)在第一分離步驟中，在模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置中對(duì)所述進(jìn)料混合物進(jìn)行純化以得到中間產(chǎn)物，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱；以及 (ii)在第二分離步驟中，使用模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置對(duì)在(i)中得到的所述中間產(chǎn)物進(jìn)行純化以得到所述PUFA產(chǎn)物，所述模擬移動(dòng)床色譜裝置或真實(shí)移動(dòng)床色譜裝置具有含有作為洗脫劑的含水有機(jī)溶劑的多個(gè)連接的色譜柱；其中 (a)所述第一分離步驟和所述第二分離步驟在同一色譜裝置上按順序進(jìn)行，在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間將所述中間產(chǎn)物回收，并且在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟之間對(duì)所述色譜裝置內(nèi)的工藝條件進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而在每個(gè)分離步驟中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離；或 (b)所述第一分離步驟和所述第二分離步驟分別在獨(dú)立的第一色譜裝置和第二色譜裝置上進(jìn)行，將從所述第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物引入至所述第二色譜裝置中，并且在每個(gè)分離步驟中將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離。
2.根據(jù)權(quán) 利要求1所述的方法，其中，每個(gè)裝置具有來(lái)自所述多個(gè)連接的色譜柱的提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能夠收集液體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，與所述進(jìn)料混合物相比，在所述第一分離步驟中得到的中間產(chǎn)物富集所述PUFA產(chǎn)物。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中， (a)在所述第一分離步驟中，所述中間產(chǎn)物作為提余物流而被收集，而在所述第二分離步驟中，所述PUFA產(chǎn)物作為提取物流而被收集；或 (b)在所述第一分離步驟中，所述中間產(chǎn)物作為提取物流而被收集，而在所述第二分離步驟中，所述PUFA產(chǎn)物作為提余物流而被收集。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在所述第一分離步驟中，將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的極性較小的組分分離，而在所述第二分離步驟中，將所述PUFA產(chǎn)物與所述進(jìn)料混合物的極性較大的組分分離。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述PUFA產(chǎn)物含有至少一種co-3PUFA。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述PUFA產(chǎn)物含有EPA和/或DHA。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述洗脫劑是水與醇、醚、酯、酮或腈的混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述洗脫劑是水和甲醇的混合物。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述進(jìn)料混合物是魚(yú)油或魚(yú)油衍生的原料，所述PUFA產(chǎn)物是EPA或EPA乙酯，以及所述PUFA產(chǎn)物以大于90%的純度，優(yōu)選以大于95%的純度，并且更優(yōu)選以大于97%的純度生產(chǎn)。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中， (a)將來(lái)自在所述第一分離步驟中使用的裝置的提取物流的一部分循環(huán)回在所述第一分離步驟中使用的裝置中；和/或(b)將來(lái)自在所述第一分離步驟中使用的裝置的提余物流的一部分循環(huán)回在所述第一分離步驟中使用的裝置中；和/或 (c)將來(lái)自在所述第二分離步驟中使用的裝置的提取物流的一部分循環(huán)回在所述第二分離步驟中使用的裝置中；和/或 (d)將來(lái)自在所述第二分離步驟中使用的裝置的提余物流的一部分循環(huán)回在所述第二分離步驟中使用的裝置中。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在每個(gè)分離步驟中使用的含水有機(jī)溶劑洗脫劑具有不同的水與有機(jī)溶劑的比例。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，對(duì)在每個(gè)分離步驟中使用的水與有機(jī)溶劑的比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而在每個(gè)分離步驟中使所述PUFA產(chǎn)物能夠與所述進(jìn)料混合物的不同組分分離。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在所述第一分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例低于在所述第二分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在所述第一分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例為0.5:99.5至1.5:98.5體積份，以及在所述第二分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例為4.5:95:5至5.5:94.5體積份。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中，通過(guò)將水和/或有機(jī)溶劑引入至在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟中使用的裝置中的一個(gè)或多個(gè)柱中來(lái)控制在所述第一分離步驟和所述第二分離步驟中的洗脫劑的水與有機(jī)溶劑的比例。
17.一種用于控制如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所限定的色譜裝置的計(jì)算機(jī)程序，所述計(jì)算機(jī)程序包括代碼模塊，當(dāng)所述計(jì)算機(jī)程序運(yùn)行時(shí)，所述代碼模塊指示所述裝置執(zhí)行根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法。
【文檔編號(hào)】C11C1/00GK103796724SQ201280033630
【公開(kāi)日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2012年7月6日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月6日
【發(fā)明者】A·凱利赫, A·莫里森, 阿尼爾·奧斯卡爾, 拉凱什·威拉曼·奈爾雷瑪, 阿伯希萊什·阿加瓦爾 申請(qǐng)人:巴斯夫制藥（卡蘭尼什）公司