含有蛋白酶和淀粉酶的儲(chǔ)存穩(wěn)定的液體餐具洗滌劑的制作方法
【專利摘要】需要改善含有蛋白酶和淀粉酶的液體餐具洗滌劑的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。通過(guò)使用蛋白酶實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，所述蛋白酶包含在其全長(zhǎng)上與SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列至少70％同一性的氨基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO.1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有至少兩個(gè)選自S3T、V4I、V193M和V199I的其他氨基酸取代。
【專利說(shuō)明】含有蛋白酶和淀粉酶的儲(chǔ)存穩(wěn)定的液體餐具洗滌劑
[0001] 本發(fā)明涉及液體餐具洗滌劑領(lǐng)域。本發(fā)明具體涉及包含酶的液體餐具洗滌劑，其 包含與淀粉酶組合的特定蛋白酶，并且還建議了使用這類組合物的方法。本發(fā)明進(jìn)一步涉 及特定的蛋白酶在包含淀粉酶的液體餐具洗滌劑中的用途。
[0002] 對(duì)于餐具洗滌劑來(lái)說(shuō)，優(yōu)選使用枯草桿菌蛋白酶類型的蛋白酶?，F(xiàn)有技術(shù)中 已知用于餐具洗滌劑的蛋白酶來(lái)源于微生物，例如來(lái)自芽孢桿菌屬（Bacillus)、鏈霉 菌屬（Streptomyces)、腐質(zhì)霉屬（Humicola)、嗜熱真菌屬（Thermomyce)或假單胞菌屬 (Pseudomonas)，和/或利用本身已知的生物技術(shù)方法通過(guò)合適的微生物制備，例如通過(guò)芽 孢桿菌屬或絲狀真菌的轉(zhuǎn)基因表達(dá)宿主制備。
[0003] 其他酶，特別是包括淀粉酶，尤其越來(lái)越多地存在于現(xiàn)代的餐具洗滌劑中。淀粉 酶是催化糖苷鍵水解的酶，尤其是在多糖例如淀粉中。在淀粉酶當(dāng)中，水解直鏈淀粉中的 α (1-4)-糖苷鍵的α-淀粉酶經(jīng)常被用于餐具洗滌劑中。在酶的EC分類，酶的數(shù)字分類系 統(tǒng)內(nèi)，α-淀粉酶具有EC編號(hào)（"酶學(xué)委員會(huì)編號(hào)"）3. 2. 1.1，并且因此屬于六個(gè)主要酶類 中的第三個(gè)，水解酶（E. C. 3. 還屬于糖基化類（E. C. 3. 2. 并且還屬于糖苷酶 類（E. C. 3. 2. 1. _)，即能水解0-和/或S-糖基化合物的酶。通過(guò)α -淀粉酶分解淀粉產(chǎn)生 糊精，然后從后者產(chǎn)生麥芽糖、葡萄糖和支化低聚糖。淀粉酶因此特別作用于洗滌中含淀粉 的污漬上并且催化其水解。
[0004] 國(guó)際專利申請(qǐng)W095/23221和W092/21760公開了適用于包括餐具洗滌劑在內(nèi)的洗 滌或清潔組合物中的來(lái)自遲緩芽孢桿菌（Bacillus lentus)DSM5483的堿性蛋白酶變體，以 及包含這樣的蛋白酶的洗滌和清潔組合物。另外，國(guó)際專利申請(qǐng)W02011/032988公開了同 樣包含來(lái)自遲緩芽孢桿菌（Bacillus lentus)DSM5483的堿性蛋白酶的變體的洗滌和清潔 組合物。除其他位置外，公開在這些文獻(xiàn)中的蛋白酶變體在按照來(lái)自遲緩芽抱桿菌DSM5483 的堿性蛋白酶的編號(hào)系統(tǒng)的位置3、4、193和199中可被修飾，并且例如在指定位置中具有 氨基酸3T、4I、193M和1991。此外還公開的是：該洗滌組合物可含有其他酶，也包括淀粉酶。 洗滌組合物可以是固態(tài)或液體的。但是，所述文獻(xiàn)并未直接并清楚地公開含有與蛋白酶組 合的淀粉酶的液體餐具洗滌劑，其中該蛋白酶具有上文描述的這些修飾的組合。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中含蛋白酶和淀粉酶的液體餐具洗滌劑的缺點(diǎn)是不能足夠穩(wěn)定地儲(chǔ)存， 并因此在很短的時(shí)間后喪失相當(dāng)程度的酶促活性，尤其是水解淀粉的活性和/或水解蛋白 質(zhì)的活性。蛋白酶的存在經(jīng)常導(dǎo)致淀粉水解活性的喪失，因?yàn)榈鞍酌糕g化淀粉酶。因而餐 具洗滌劑不能表現(xiàn)出最佳的清洗性能。
[0006] 本發(fā)明的目的是克服上述缺點(diǎn)，并提供含蛋白酶和淀粉酶的液體餐具洗滌劑，其 具有合適的或改善的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，尤其是對(duì)于它們的酶活性而言，并且優(yōu)選地對(duì)于它們的 淀粉水解活性和/或蛋白質(zhì)水解而言。
[0007] 因此本發(fā)明提供一種液體餐具洗滌劑，其包含
[0008] (a)蛋白酶，所述蛋白酶包含在全長(zhǎng)與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少70% 同一性的氨基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D并同時(shí)具有選 自S3T、V4I、V193M和V199I的至少兩個(gè)其它氨基酸取代，以及
[0009] (b)淀粉酶。
[0010] 令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，包含這樣的蛋白酶和淀粉酶的組合的液體餐具洗滌劑在儲(chǔ)存中 有利地穩(wěn)定。更特別地，在儲(chǔ)存后與特定組合物比較具有改善的清洗性能，尤其是改善的水 解淀粉的清洗性能和/或水解蛋白質(zhì)的清洗性能，所述特定組合物與本發(fā)明的組合物的差 別僅在于蛋白酶的不同，其中基于活性酶，在儲(chǔ)存開始時(shí)用于比較的組合物中所含的蛋白 酶具有相同的濃度。因此，在本發(fā)明的上下文中提供的蛋白酶減弱了淀粉酶的失活，并且其 自身的性能喪失也得以減少。但是，淀粉酶和/或蛋白酶因在本發(fā)明的上下文中提供的蛋 白酶而減弱的失活并不是因?yàn)榈鞍酌感阅芎?或活性的不足。在本發(fā)明優(yōu)選的餐具洗滌劑 研制中，描述的改善的儲(chǔ)存穩(wěn)定性在相對(duì)高的溫度下也是存在的，例如30°C、35°C和/或甚 至 40°C。
[0011] 本發(fā)明的組合物在這方面較好地表現(xiàn)出對(duì)于蛋白酶敏感的污漬仍然具有良好地、 特別是有利地清洗性能。因此，這樣的組合物能夠令人滿意地或改善地去除硬表面例如盤 子或者金屬表面如餐具上的至少一種，優(yōu)選超過(guò)一種的對(duì)于蛋白酶敏感的污漬。在本發(fā)明 選擇進(jìn)行的研制中，這樣的關(guān)于至少一種蛋白酶敏感類型的污漬的清洗性能特別地還發(fā)生 在相對(duì)高的溫度下，尤其是在40°C至70°C之間、40°C至60°C之間或45°C至55°C之間。
[0012] 關(guān)于在導(dǎo)言中提及的國(guó)際專利申請(qǐng)W095/23221、W092/21760和W02011/032988， 本發(fā)明因此涉及特別有利的選擇，這使得能夠得到具有良好性能且儲(chǔ)存穩(wěn)定的液體餐具洗 滌劑，特別是關(guān)于所述組合物在儲(chǔ)存后的水解蛋白質(zhì)和/或水解淀粉的清洗性能，和/或關(guān) 于所述組合物在儲(chǔ)存后的蛋白質(zhì)水解活性和/或淀粉水解活性。
[0013] 清洗性能描述了餐具洗滌劑尤其是洗碗機(jī)洗滌劑部分地或完全地去除存在于餐 具硬表面上的污漬的能力。餐具污漬的例子為牛奶、肉末、蛋黃、燕麥片和淀粉。在本發(fā)明的 上下文中，無(wú)論是包含蛋白酶和淀粉酶的餐具洗滌劑或通過(guò)這樣的組合物形成的清洗液， 還是該蛋白酶或淀粉酶自身均具有獨(dú)立的清洗性能。因此，酶的清洗性能有助于所述組合 物或由所述組合物形成的清洗液的清洗性能。水解淀粉的清洗性能是指對(duì)于淀粉酶敏感型 污漬的清洗性能。水解蛋白質(zhì)的清洗性能是指對(duì)于蛋白酶敏感型污漬的清洗性能。清洗性 能以本領(lǐng)域常規(guī)的方式測(cè)定，優(yōu)選地如下文所述。
[0014] "清洗液"理解為意指這樣的使用溶液，其包含餐具洗滌劑，且作用于硬表面上，從 而與存在于硬表面上的污垢接觸。典型地，當(dāng)清洗過(guò)程開始并且在例如洗碗機(jī)或另一合適 的容器中用水稀釋餐具洗滌劑時(shí)產(chǎn)生清洗液。
[0015] 當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的餐具洗滌劑在儲(chǔ)存之后與對(duì)照組合物比較而呈現(xiàn)更強(qiáng)的清洗性 能時(shí)，可具體地獲得在本發(fā)明上下文中所述的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，其中所述對(duì)照組合物與本發(fā)明 的餐具洗滌劑的差別僅在于蛋白酶。因此，在儲(chǔ)存開始時(shí)，待比較的兩種組合物表現(xiàn)出相同 的淀粉酶量或濃度和/或初始的淀粉水解活性。此外，在儲(chǔ)存開始時(shí)，以活性酶為準(zhǔn)，蛋白 酶以相同的濃度存在于兩種組合物中，并且以相同的方式處理兩種組合物，特別是關(guān)于儲(chǔ) 存條件和酶活性的測(cè)定。儲(chǔ)存優(yōu)選地以遞增方式持續(xù)至少24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、5天、1 星期、2星期、3星期或4星期。此外，儲(chǔ)存優(yōu)選地在至少35°C，更優(yōu)選40°C的溫度下進(jìn)行。
[0016] 在這方面，酶活性可根據(jù)具體的酶類型而以本領(lǐng)域常規(guī)的方式被測(cè)定。用于測(cè)定 活性的方法是所屬酶【技術(shù)領(lǐng)域】的專業(yè)人員所熟知，并且由這樣的專業(yè)人員按慣例使用。用 于測(cè)定蛋白酶活性的方法例如被公開在Tenside，第7卷（1970)，第125-132頁(yè)。蛋白質(zhì)水 解活性也可基于從底物suc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-對(duì)硝基苯胺（suc-AAPF-pNA)釋 放發(fā)色團(tuán)對(duì)硝基苯胺（PNA)而被測(cè)定。蛋白酶裂解該底物并釋放出pNA。pNA的釋放帶來(lái) 410nm處吸光度的增加，其隨時(shí)間的吸光度是酶活性的量度（參見Del Mar等人，1979)。測(cè) 量在25°C的溫度、pH8. 6和410nm的波長(zhǎng)下進(jìn)行。測(cè)量時(shí)間是5分鐘，測(cè)量間隔是20s至 60s。蛋白酶活性優(yōu)選以PE(蛋白酶單位）表示。
[0017] 淀粉酶活性以本領(lǐng)域常規(guī)方式測(cè)定。優(yōu)選地按以下所示測(cè)定淀粉酶活性。淀粉酶 將淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖。在特定的反應(yīng)條件下（tris-馬來(lái)酸鹽緩沖液，pH6. 5,50°C，15min)， 用0. 67%的淀粉（可溶解，根據(jù)Zulowsky法進(jìn)行預(yù)處理（用甘油在190°C下處理））將待 測(cè)樣品溫育。通過(guò)添加二硝基水楊酸和加熱至l〇〇°C，在堿性條件下所述酸被葡萄糖及其他 還原糖還原形成橙-紅色染料，在反應(yīng)結(jié)束后采用光度計(jì)在540nm處測(cè)定該染料。對(duì)應(yīng)于 該顏色的釋放的糖的量為酶活性的量度（參見Sumner等人，J. Biol. Chem.，1921，47&1924， 62)。
[0018] 在本發(fā)明上下文中，酶存在的穩(wěn)定性，更優(yōu)選地如上所述，使用在4(TC的溫度 下儲(chǔ)存了四個(gè)星期的含有蛋白酶和淀粉酶的液體餐具洗滌劑來(lái)測(cè)定，其中通過(guò)從底物 suc-AAPF-pNA釋放的對(duì)硝基苯胺（pNA)發(fā)色團(tuán)測(cè)定蛋白質(zhì)水解活性，并且如上所述測(cè)定淀 粉水解活性。
[0019] 存在于本發(fā)明的餐具洗滌劑中的蛋白酶包含在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨 基酸序列至少70%同一性的氨基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代 L211D，并同時(shí)具有選自S3T、V4I、V193M和V199I的至少兩個(gè)其他氨基酸取代。
[0020] 在本發(fā)明進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中，該蛋白酶包含在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示 的氨基酸序列至少 71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、 83%,84%,85 %,86%,87 %,88 %,89%,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5%,92 %,92. 5 %,93%, 93. 5%、94%、94· 5%、95%、95· 5%、96%、96· 5%、97%、97· 5%、98%、98· 5%和 98. 8% 同 一性的氨基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有選自 S3T、V4I、V193M和V199I的至少兩個(gè)其他氨基酸取代。
[0021] SEQ ID NO. 1是來(lái)自遲緩芽孢桿菌DSM5483的成熟堿性蛋白酶的序列，其公開在國(guó) 際專利申請(qǐng)W092/21760中，以及其在此明確引入作為參考。
[0022] 本發(fā)明特別優(yōu)選的蛋白酶為：
[0023] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%和98.8%同一性的氨基酸序列，并 且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代S3T和V4I，特 別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代S3T、V4I和L211D的蛋白酶。
[0024] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%和98.8%同一性的氨基酸序列，并 且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代S3T和V193M， 特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代S3T、V193M和L211D的蛋白酶。
[0025] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%和98.8%同一性的氨基酸序列，并 且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代S3T和V199I， 特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代S3T、V199I和L211D的蛋白酶。
[0026] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%和98.8%同一性的氨基酸序列，并 且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代V4I和V193M， 特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代V4I、V193M和L211D的蛋白酶。
[0027] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%和98.8%同一性的氨基酸序列，并 且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代V4I和V199I， 特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代V4I、V199I和L211D的蛋白酶。
[0028] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%和98.8%同一性的氨基酸序列，并 且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代V193M和V199I， 特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代V193M、V199I和L211D的蛋白酶。
[0029] 在本發(fā)明進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中，蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示 的氨基酸序列至少 71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、 83%,84%,85 %,86%,87 %,88 %,89%,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5%,92 %,92. 5 %,93%, 93. 5%、94%、94· 5%、95%、95· 5%、96%、96· 5%、97%、97· 5%、98%和 98. 5% 同一性的氨 基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有選自S3T、V4I、 V193M和V199I的至少三個(gè)其他氨基酸取代。
[0030] 在這方面本發(fā)明特別優(yōu)選以下蛋白酶：
[0031] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%和98.5%同一性的氨基酸序列，并且根據(jù) SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代S3T、V4I和V193M，特 別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代S3T、V4I、V193M和L211D的蛋白酶。
[0032] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%和98.5%同一性的氨基酸序列，并且根據(jù) SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特 別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代S3T、V4I、V199I和L211D的蛋白酶。
[0033] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%和98.5%同一性的氨基酸序列，并且根據(jù) SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代V4I、V193M和V199I， 特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代V4I、V193M和V199I和L211D的蛋白酶。
[0034] 本發(fā)明進(jìn)一步特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，蛋白酶是值得注意的，因?yàn)槠渲兴?蛋白酶具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有四個(gè)其他氨基酸取代S3T、V4I、V193M和V199I。 更特別地，在這方面非常特別優(yōu)選以下蛋白酶：
[0035] 蛋白酶，該蛋白酶含有在全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少71%、 72 %,73 %,74 %,75 %,76 %,77 %,78 %,79 %,80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %, 87 %,88 %,89 %,90 %,90. 5 %,91 %,91. 5 %,92 %,92. 5 %,93 %,93. 5 %,94 %,94. 5%, 95%、95· 5%、96%、96· 5%、97%、97· 5%、98%和 98. 1% 同一性的氨基酸序列，并且根據(jù) SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代S3T、V4I、V193M和 V199I，特別是根據(jù)SEQ ID NO. 1具有氨基酸取代S3T、V4I、V193M、V199I和L211D的蛋白 酶。這一類蛋白酶以SEQ ID NO. 2詳細(xì)說(shuō)明并且是特別優(yōu)選的。
[0036] 進(jìn)一步特別優(yōu)選的蛋白酶為如上所述的蛋白酶，所述蛋白酶還具有在根據(jù)SEQ ID NO. 1編號(hào)中的位置99處的氨基酸精氨酸（R)和/或根據(jù)SEQ ID NO. 1編號(hào)中的位置188 位處的氨基酸丙胺酸（A)。
[0037] 通過(guò)比對(duì)所用的蛋白酶的氨基酸序列與如SEQ ID NO. 1所示的來(lái)自遲緩芽孢桿菌 的蛋白酶的氨基酸序列來(lái)定義本發(fā)明上下文中的氨基酸位置。因?yàn)楝F(xiàn)有技術(shù)中來(lái)自遲緩芽 孢桿菌的蛋白酶是構(gòu)成用于描述蛋白酶和氨基酸修飾的重要參考分子，在氨基酸位置的分 配方面參考來(lái)自遲緩芽孢桿菌的蛋白酶的編號(hào)（SEQ ID NO. 1)是有利的。而且，該編號(hào)基 于成熟蛋白。如果所用的蛋白酶的氨基酸序列包含比根據(jù)SEQ ID NO. 1的來(lái)自遲緩芽孢桿 菌的蛋白酶更大數(shù)量的氨基酸殘基，這種分配也特別應(yīng)當(dāng)使用?；趤?lái)自遲緩芽孢桿菌的 蛋白酶的氨基酸序列中的指定位置，根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白酶中的氨基酸位置是在比對(duì)中 精確分配至這些位置的氨基酸位置。
[0038] 除第211位之外，特別有利的位置相應(yīng)為在與SEQ ID NO. 1的比對(duì)中分配，并因此 在根據(jù)SEQ ID NO. 1編號(hào)中的位置3、4、193和199。所述的位置由來(lái)自遲緩芽孢桿菌的蛋 白酶的野生型分子中的下列氨基酸殘基占據(jù)：S3、V4、V193、V199和L211。根據(jù)存在的來(lái) 自SEQ ID NO. 1的序列偏差的數(shù)目，因此根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白酶相對(duì)于SEQ ID NO. 1可 以表現(xiàn)出不同最大同一性值，甚至所有其它氨基酸應(yīng)當(dāng)匹配SEQ ID NO. 1。在每種單獨(dú)情 況下，對(duì)于所建議的序列修飾的每種可能的組合應(yīng)該考慮這個(gè)因素，而且還取決于蛋白酶 的氨基酸序列的長(zhǎng)度。例如，具有3、4、5、6、7、8或9個(gè)序列修飾，對(duì)于長(zhǎng)度為269個(gè)氨基酸 的氨基酸序列，最大同一性分別為 98. 88%、98· 51 %、98· 14%、97· 77%、97· 40%、97· 03% 和96. 65%，或者對(duì)于長(zhǎng)度為275個(gè)氨基酸的氨基酸序列而言，分別為98. 91 %、98. 55%、 98. 18%、97· 82%、97· 45%、97· 09%和 96. 73%。
[0039] 依據(jù)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，通過(guò)向包含淀粉酶的液體餐具洗滌劑中添加這類蛋白酶，獲得 了儲(chǔ)存特別穩(wěn)定的液體餐具洗滌劑，尤其是對(duì)于儲(chǔ)存后的剩余清洗性能，尤其是在如下遞 增的優(yōu)選的儲(chǔ)存期之后：24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、5天、1星期、2星期、3星期或4星期。
[0040] 根據(jù)本發(fā)明的餐具洗滌劑中含有的蛋白酶表現(xiàn)出蛋白質(zhì)水解活性，即其能夠水解 多肽或蛋白質(zhì)的肽鍵。因此其是催化肽鍵水解并且因此能夠裂解肽或蛋白的酶。特別是枯 草桿菌酶（subtilase)，并且優(yōu)選枯草桿菌蛋白酶（subtilisin)。
[0041] 淀粉酶是導(dǎo)言中描述的酶。對(duì)于淀粉酶來(lái)說(shuō)，通過(guò)使用同義詞可以被稱為例如1， 4-a-D-葡聚糖-葡聚糖水解酶或糖原酶。能夠根據(jù)本發(fā)明配制的淀粉酶優(yōu)選是α-淀粉 酶。酶是否為用于本發(fā)明上下文中的α-淀粉酶是通過(guò)它對(duì)淀粉的直鏈淀粉中α (1-4)-糖 苷鍵的水解能力來(lái)判定的。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明能夠配制的淀粉酶的實(shí)例為來(lái)自地衣芽胞桿菌（Bacillus licheniformis)、來(lái)自解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)或來(lái)自嗜熱脂肪 芽胞桿菌（Bacillus stearothermophilus)的α-淀粉酶，以及更具體地，還包括改進(jìn)它 們以用于洗滌或清潔組合物和餐具洗滌劑的進(jìn)一步開發(fā)產(chǎn)品。來(lái)自地衣芽孢桿菌的酶可 以從 Novozymes 以名稱Teimaniyl?和從 Danisco/Genencor 以名稱Purastar?: ST 下獲得。 此類α-淀粉酶的進(jìn)一步開發(fā)產(chǎn)品可以從Novozyme以商品名Dummyl?:和Termamyl?i ultra，從 Danisco/Genencor 以名稱Purastar?丨 OxAm，以及從 Daiwa Seiko Inc. , Tokyo， Japan以Keistase?下獲得。來(lái)自解淀粉芽胞桿菌的α -淀粉酶是由Novozymes銷售，名為 BAN?，來(lái)自嗜熱脂肪芽胞桿菌的α -淀粉酶的變體同樣由Novozymes銷售，名為BSG?. 和Novamyl?。另外，為了此目的，還應(yīng)進(jìn)一步特別注意來(lái)自芽孢桿菌A7-7(DSM12368)的 α-淀粉酶和來(lái)自粘瓊脂芽孢桿菌（Bacillus agaradherens)(DSM 9948)的環(huán)糊精葡聚糖 基轉(zhuǎn)移酶（CGTase)。同樣可以使用所有指定分子的融合產(chǎn)物。此外，可得自于Novozymes在 商品名Fungamyl?下的來(lái)自黑曲霉（Aspergillus niger)和米曲霉（A.oryzae)的α-淀 粉酶的進(jìn)一步開發(fā)品也是適合的?？梢杂欣厥褂玫钠渌虡I(yè)產(chǎn)品為，例如Amylase-LT? 和Stamzyme?或 Stainzyme ultra?或 Stainzyme plus?，后者同樣來(lái)自 Novozymes。根據(jù)本 發(fā)明，也可以使用通過(guò)點(diǎn)突變獲得的這些酶的變體。特別優(yōu)選的淀粉酶公開在國(guó)際公開的 專利申請(qǐng) W000/60060、W003/002711、W003/054177 和 W007/079938 中，因此明確參考這些公 開內(nèi)容，或者因此明確地將這些公開內(nèi)容包括在本專利申請(qǐng)中。
[0043] 特別適用于本發(fā)明組合物的是根據(jù)SEQ ID NO. 3的α -淀粉酶AA560的α -淀粉 酶變體。下面的變體是特別有利的：
[0044] (a) α -淀粉酶變體，相對(duì)于根據(jù)SEQ ID NO. 3的α -淀粉酶ΑΑ560,其在α -淀粉 酶ΑΑ560的編號(hào)中具有1、2、3、4、5或6個(gè)以下的序列修飾：R118K、D183* (缺失）、G184* (缺失）、N195F、R320K、R458K。更優(yōu)選地，該α -淀粉酶變體具有所有6個(gè)指定的序列修 飾。
[0045] (b) α -淀粉酶變體，相對(duì)于根據(jù)SEQ ID NO. 3的α -淀粉酶ΑΑ560,其具有下面的 序列修飾（在α -淀粉酶AA560的編號(hào)中）：
[0046] (I) M9L/M202I,
[0047] (2) M9L/M202I/M323T,
[0048] (3) M9L/M202I/M323T/M382Y,
[0049] (4) M9L/M202I/Y295F/A339S,
[0050] (5) M9L/M202I/Y295F,
[0051] (6) M9L/M202I/A339S,
[0052] (7) M9L/M202I/Y295F/A339S,
[0053] (8) M9L/M202I/Y295F/A339S/E345R,
[0054] (9) M9L/G149A/M202I/Y295F/A339S/E345R,
[0055] (10) M9L/M202L,
[0056] (11) M9L/M202L/M323T,
[0057] (12) M9L/M202L/M323T/M382Y,
[0058] (13) M9L/M202L/Y295F/A339S,
[0059] (14) M9L/M202L/Y295F,
[0060] (15) M9L/M202L/A339S,
[0061] (16) M9L/M202L/Y295F/A339S,
[0062] (17) M9L/M202L/Y295F/A339S, E345R,
[0063] (18) M9L/G149A/M202L/Y295F/A339S/E345R,
[0064] (19) M9L/M202T,
[0065] (20) M9L/M202T/M323T,
[0066] (21) M9L/M202T/M323T/M382Y,
[0067] (22) M9L/M202T/Y295F/A339S,
[0068] (23) M9L/M202T/Y295F,
[0069] (24) M9L/M202T/A339S,
[0070] (25) M9L/M202T/Y295F/A339S,
[0071] (26) M9L/M202T/Y295F/A339S/E345R,
[0072] (27) M9L/G149A/M202T/Y295F/A339S/E345R,
[0073] (28) M9L/G149A/M202I/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
[0074] (29) M9L/G149A/M202L/V214I/Y295F/M323T/A339S/E345R/M382Y,
[0075] (30) M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/V214I/Y295F/N299Y/M323T/A339S,
[0076] (31) M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S /E345R.
[0077] (32) M9L/G149A/M202L/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
[0078] (33) M9L/G149A/M202I/V214I/Y295F/M323T/A339S/E345R/M382Y,
[0079] (34) M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/V214I/Y295F/N299Y/M323T/A339S,
[0080] (35) M9L/G149A/G1 82T/G186A/M202I/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/ E345R,
[0081] (36) M9L/G149A/M202I/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R/N471E,
[0082] (37) M9L/G149A/M202L/V214I/Y295F/M323T/A339S/E345R/M382Y/N471E,
[0083] (38) M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/V214I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/ N471E,
[0084] (39) M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S /E345R/N471E,
[0085] (40) M202L/M105F/M208F,
[0086] (41) G133E/M202L/Q361E,
[0087] (42) G133E/M202L/R444E,
[0088] (43) M202L/Y295F,
[0089] (44) M202L/A339S,
[0090] (45) M202L/M323T,
[0091] (46) M202L/M323T/M309L,
[0092] (47) M202L/M323T/M430I,
[0093] (48) M202L/V214T/R444Y,
[0094] (49) M202L/N283D/Q361E,
[0095] (50) M202L/M382Y/K383R,
[0096] (51) M202L/K446R/N484Q,
[0097] (52) M202I/Y295F,
[0098] (53) M202I/A339S,
[0099] (54) M202I/M105F/M208F,
[0100] (55) G133E/M202I/Q361E,
[0101] (56) Gl 33E/M202I/R444E,
[0102] (57) M202I/M323T,
[0103] (58) M202I/M323T/M309L,
[0104] (59) M202I/M323T/M430I,
[0105] (60) M202I/V214T/R444Y,
[0106] (61) M202I/N283D/Q361E,
[0107] (62) M202I/M382Y/K383R,
[0108] (63) M202I/K446R/N484Q,
[0109] (64) M202V/M105F/M208F,
[0110] (65) G133E/M202V/Q361E,
[0111] (66) G133E/M202V/R444E,
[0112] (67) M202V/M323T,
[0113] (68) M202V/M323T/M309L,
[0114] (69) M202V/M323T/M430I,
[0115] (70) M202V/M323T/M9L,
[0116] (71) M202V/V214T/R444Y,
[0117] (72) M202V/N283D/Q361E,
[0118] (73) M202V/M382Y/K383R,
[0119] (74) M202V/K446R/N484Q,
[0120] (75) M202T/M105F/M208F,
[0121] (76) G133E/M202T/Q361E,
[0122] (77) G133E/M202T/R444E,
[0123] (78) M202T/Y295F,
[0124] (79) M202T/A339S,
[0125] (80) M202T/M323T,
[0126] (81) M202T/M323T/M309L,
[0127] (82) M202T/M323T/M430I,
[0128] (83) M202T/M323T/M9L,
[0129] (84) M202T/V214T/R444Y,
[0130] (85) M202T/N283D/Q361E,
[0131] (86) M202T/A339S,
[0132] (87) M202T/Y295F
[0133] (88) M202T/N299F, Y,
[0134] (89) M202T/M382Y/K383R oder
[0135] (90) M202T/K446R/N484Q
[0136] 在這些當(dāng)中，非常特別優(yōu)選的是下面給出的α-淀粉酶變體：
[0137] (10) M9L/M202L,
[0138] (28) M9L/G149A/M202I/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
[0139] (31) M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S /E345R,
[0140] (35) M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/T257I/Y295F/N299Y/M323T/
[0141] (38) M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/V214I/Y295F/N299Y/M323T/
[0142] (39) M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S /E345R/N471E,
[0143] (45) M202L/M323T,
[0144] (46) M202L/M323T/M309L,
[0145] (62) M202I/M382Y/K383R,
[0146] (68) M202V/M323T/M309L,
[0147] (73) M202V/M382Y/K383R
[0148] (82) Μ202Τ/Μ323Τ/Μ430Ι oder
[0149] (84) M202T/V214T/R444Y
[0150] (c)依據(jù)（b)的α -淀粉酶變體，其另外還具有所有6個(gè)（a)中指定的序列修飾， 最優(yōu)選具有（a)中指定的6個(gè)序列修飾的變體31。
[0151] 依據(jù)本發(fā)明，（a)中指定的α-淀粉酶變體以及具有6個(gè)（a)中指定的序列修飾 的（c)中指定的α-淀粉酶變體31是特別優(yōu)選的。
[0152] 通過(guò)序列比對(duì)確定核酸或氨基酸序列的同一性。這樣的比對(duì)是通過(guò)在核苷酸序 列或氨基酸序列中互相分配相似的序列來(lái)進(jìn)行的。這種序列比對(duì)優(yōu)選地在現(xiàn)有技術(shù)建立 的常規(guī)使用的BLAST算法的基礎(chǔ)上進(jìn)行（參見例如Altschul，S. F.，Gish，W.，Miller， ff. , Myers, E. ff. &Lipman, D. J. (1990) iiBasic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 215 :403-410 和 Altschul,Stephan F. , Thomas L. Madden,Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller,和 David J.Lipman(1997) :"Gapped BLAST and PSI-BLAST :a new generation ofprotein database search programs" ；Nucleic Acids Res.，25,第3389-3402頁(yè)），并且原則上是通過(guò)互相分配核酸或氨基酸序列中的核 苷酸或氨基酸的相似的序列來(lái)進(jìn)行。所討論的位置的表格分配稱為比對(duì)。現(xiàn)有技術(shù)中可 獲得的另一種算法是FASTA算法。利用計(jì)算機(jī)軟件常規(guī)創(chuàng)建序列比對(duì)，特別是多個(gè)序列 的比對(duì)。例如經(jīng)常使用的計(jì)算機(jī)程序是Clustal系列（參見例如Chenna等人（2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series ofprograms. Nucleic Acid Research31，3497-3500)，T_CofTee (參見例如 Notredame 等人（2000) :T_CofTee:A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217)或基于這些程 序或算法的程序。在本發(fā)明的上下文中，序列比對(duì)優(yōu)選地使用計(jì)算機(jī)程序Vector Ν-- SuitelO.3 (Invitrogen Corporation,1600Faraday Avenue, Carlsbad, California, USA) 利用預(yù)設(shè)的缺省參數(shù)進(jìn)行。
[0153] 該類型的比對(duì)允許對(duì)比較序列相互之間的相似性進(jìn)行說(shuō)明。在比對(duì)中通常以百分 比同一性進(jìn)行說(shuō)明，即在相同位置或者相互對(duì)應(yīng)的位置上的相同的核苷酸或氨基酸殘基的 比例來(lái)說(shuō)明。廣義術(shù)語(yǔ)"同源性"還包括考慮氨基酸序列中保守的氨基酸取代，即具有相似 的特性的氨基酸，因?yàn)樗鼈円话阍诘鞍踪|(zhì)內(nèi)具有相似的活性或功能。因此，比較序列的相似 性也可以以百分比同源性或百分比相似性來(lái)說(shuō)明?？梢詫?duì)整個(gè)多肽或基因、或僅對(duì)單個(gè)區(qū) 域做出關(guān)于同一性和/或同源性的說(shuō)明。因此，各種核酸或氨基酸序列的同源或相同的區(qū) 域通過(guò)序列中的匹配來(lái)定義。它們經(jīng)常具有相同或相似的功能。它們可以很小，并且僅包 含幾個(gè)核苷酸或氨基酸。這類小的結(jié)構(gòu)域經(jīng)常發(fā)揮對(duì)于蛋白質(zhì)的總活性來(lái)說(shuō)必不可少的功 能。因此，序列匹配僅涉及單個(gè)、可能的小的結(jié)構(gòu)域是可取的。然而，如果沒(méi)有另外說(shuō)明，在 本申請(qǐng)中關(guān)于同一性或同源性的說(shuō)明在每種情況下都涉及所示核酸或氨基酸序列的整個(gè) 長(zhǎng)度。
[0154] 在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的餐具洗滌劑的進(jìn)一步特征在于：其 清洗性能至少對(duì)應(yīng)于含有蛋白酶的液體餐具洗滌劑的清洗性能，所述蛋白酶對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO. 2。清洗性能在包含劑量為4. 0-11. 0克/升的清潔液的含淀粉酶的液體餐具洗滌劑以 及蛋白酶的洗滌系統(tǒng)中測(cè)定，其中待比較的蛋白酶在相同濃度（基于活性蛋白質(zhì)）下使用， 并且通過(guò)測(cè)定洗滌過(guò)程后的相應(yīng)的污漬的殘留來(lái)測(cè)定對(duì)于餐具上的肉末和/或蛋黃污漬 的清洗性能，該洗滌過(guò)程進(jìn)行至少30分鐘，優(yōu)選60分鐘，在50°C的溫度下并且水的水硬度 在20至22° dH(德國(guó)的硬度標(biāo)度）之間，優(yōu)選2Γ dH。
[0155] 用于洗滌系統(tǒng)的餐具洗滌劑優(yōu)選為兩相的液體洗碗機(jī)洗滌劑，其具有下面的組成 (所有數(shù)值均以重量百分比表示）：
[0156] (a)酶相：
[0157] 助洗劑 15.0-20.0 糖醇 8.0-12.0 非離子表面活性劑（具有22EO的 C8-C10脂肪醇乙氧基化物） 3.0-5.0 堿金屬化合物（堿） 3·0·4.0 硼酸 2.5-3.5 膦Kfe/酯（HEDP) 1.5-2.5 淀粉酶 1.0-2.0 蛋白酶 見文中 Ca 鹽 0.8-1.2 Zn 鹽 0.15-0.25 增稠劑 0.8-1.2 染料、香料、防腐劑 0.25-0.5 水 加至100
[0158] 淀粉酶優(yōu)選地是α -淀粉酶變體的制備物，相對(duì)于根據(jù)SEQ ID NO. 3的α -淀粉 酶ΑΑ560,該α-淀粉酶變體具有根據(jù)α-淀粉酶ΑΑ560的編號(hào)的以下的序列修飾：R118K、 Dl83* (缺失）、G184* (缺失）、Nl%F、R32〇K、R458K (來(lái)自 Novozymes)。
[0159] (b)硼相：
[0160] 助洗劑 7.5-12.5
[0161] 碳酸鈉 7.5-12.5 石黃基聚合物 5.0-8.0 堿金屬化合物（堿） 3.0-5.0 單乙醇胺 2.0-4.0 膦旨（HEDP) 2.0-5.0 增稠劑 0.8-1.2 染料、香料、防腐劑 0.25-0.5 水 加至100
[0162] 基于活性蛋白質(zhì)，蛋白酶在組合物中存在的濃度為0.01-1重量％，優(yōu)選0. 1%至 0.5重量％。對(duì)于洗碗機(jī)的洗滌周期，該兩相以相同比例分配（每相20g)。在標(biāo)準(zhǔn)洗碗機(jī) 中，洗滌在PH9至pHIO之間是有效的，例如Miele G698SC洗碗機(jī)。在洗滌開始時(shí)，洗滌液 中的蛋白酶活性和淀粉酶活性均不為零。
[0163] 利用標(biāo)度1-10的標(biāo)準(zhǔn)IKW法目視地評(píng)價(jià)清洗性能，其中值10為最好的等級(jí)（無(wú) 可見殘?jiān)?br> [0164] 特別優(yōu)選地，在洗碗機(jī)中，利用如上所述的兩相液體洗碗機(jī)洗碗劑測(cè)定相對(duì)于餐 具上的肉末和蛋黃污漬的清洗性能。
[0165] 在本發(fā)明進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明洗碗機(jī)洗滌劑的進(jìn)一步特征是：其儲(chǔ) 存穩(wěn)定性至少對(duì)應(yīng)于含有根據(jù)SEQ ID NO. 2的蛋白酶的洗碗機(jī)洗滌劑的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。在 40°C下儲(chǔ)存4星期之后，與對(duì)比用的餐具洗滌劑比較，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的餐具洗滌劑具有相 同的或更強(qiáng)的清洗性能時(shí)，則這樣的儲(chǔ)存穩(wěn)定性是存在的；其中本發(fā)明的組合物與對(duì)比用 的餐具洗滌劑的不同之處僅在于包含在其中的蛋白酶。
[0166] 更優(yōu)選的，用于比較的組合物是上述列舉的兩相液體洗碗機(jī)洗滌劑，也按上述列 舉的方法測(cè)定清洗性能。
[0167] 在儲(chǔ)存開始時(shí)，基于活性酶，待比較的兩種組合物都具有相同的初始淀粉水解活 性，且含有相同濃度的蛋白酶，并且以同樣方式處理兩種組合物。組合物中的蛋白質(zhì)水解活 性在各種情況下通過(guò)來(lái)自底物suc-AAPF-pNA的發(fā)色團(tuán)對(duì)硝基苯胺（pNA)的釋放來(lái)測(cè)定，并 且其淀粉水解活性在各種情況下也如上述被測(cè)定。各自組合物中的蛋白酶和淀粉酶的初始 活性不等于0。
[0168] 基于活性蛋白質(zhì)，通過(guò)利用在所有情況下具有相同活性的淀粉酶和相同濃度的蛋 白酶來(lái)確保即使在活性物質(zhì)與總蛋白質(zhì)的比例（比活性的值）存在任何偏差的情況下，仍 然比較的是實(shí)際存在的酶的特性。
[0169] 除非另外說(shuō)明，在本發(fā)明的上下文中，參照都是針對(duì)液體洗滌劑的重量，S卩，數(shù)據(jù) 是基于其重量的。
[0170] 多種蛋白酶，尤其是枯草桿菌蛋白酶都以所謂的前蛋白質(zhì)的形式形成，即伴隨著 前肽和信號(hào)肽一起形成，其中，所述信號(hào)肽的功能通常在于確保蛋白酶從產(chǎn)生其的細(xì)胞輸 出至細(xì)胞周質(zhì)或細(xì)胞周圍的培養(yǎng)基中，并且所述前肽對(duì)于蛋白酶的正確折疊通常是必需 的。信號(hào)肽和前肽通常是前蛋白的N端部分。信號(hào)肽在天然條件下通過(guò)信號(hào)肽酶從蛋白酶 的剩余部分被切割下來(lái)。然后發(fā)生正確、最終、前肽輔助的蛋白質(zhì)酶折疊。然后蛋白酶處于 其自身的活性形式，并且自身切除前肽。一旦將前肽切除，則沒(méi)有最初存在的N端氨基酸， 成熟蛋白酶，特別是枯草桿菌蛋白酶，發(fā)揮其催化活性。一般為了工業(yè)應(yīng)用并且特別是在本 發(fā)明的上下文中，成熟蛋白酶即其產(chǎn)生之后得到加工的酶，比前蛋白更優(yōu)選。在產(chǎn)生多肽鏈 之后，蛋白酶可以被產(chǎn)生它們的細(xì)胞進(jìn)一步修飾，例如通過(guò)連接糖分子、甲酰化、胺化等。這 類修飾為翻譯后修飾，并且可以但不必需對(duì)蛋白酶的功能施加影響。
[0171] 此外，成熟蛋白酶還可以在其N端和/或C端截短，從而蛋白酶相對(duì)于SEQ ID NO. 1 或SEQ ID N0.2截短，即片段存在于根據(jù)本發(fā)明的餐具洗滌劑中。在這種情況下，同一性的 所有數(shù)據(jù)均涉及區(qū)域，其中在比對(duì)SEQ ID NO. 1中分配各個(gè)片段。然而，在任何情況下各個(gè) 片段總是含有根據(jù)本發(fā)明待修飾的位置，即在與SEQ ID NO. 1比對(duì)中分配至第3、4、193、199 和/或211的位置，并且在此包含與根據(jù)本發(fā)明所提供的那些相對(duì)應(yīng)的修飾。此外，這樣 的片段具有蛋白質(zhì)水解活性。在這方面進(jìn)一步優(yōu)選的片段包含氨基酸序列，該氨基酸序列 在至少 100 或至少 110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、 260、265或266個(gè)連續(xù)氨基酸位置的長(zhǎng)度上匹配SEQ ID NO. 1或SEQ ID NO. 2,考慮上文所 述的位置211的氨基酸，并且還考慮上文所述的位置3和/或4和/或193和/或199,以 及任選位置99和/或188的氨基酸。如上文所述在各種情況下測(cè)定的，包含這樣的片段的 本發(fā)明的液體餐具洗滌劑的清洗性能和/或儲(chǔ)存穩(wěn)定性更優(yōu)選地至少對(duì)應(yīng)于含有如下蛋 白酶的液體餐具洗滌劑的清洗性能和/或儲(chǔ)存穩(wěn)定性，所述蛋白酶包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO. 2 中所示的氨基酸序列的氨基酸序列。
[0172] 本發(fā)明的組合物含有蛋白酶的量基于活性蛋白質(zhì)漸增地優(yōu)選為IxKT8至5重 量％、0. 0001至3重量％、0. 0005至1重量％、0. 001至0. 75重量％和特別優(yōu)選的0. 005 至0. 5重量％。本發(fā)明的組合物含有淀粉酶的量基于活性蛋白質(zhì)漸增地優(yōu)選為IxKT8至5 重量％、0. 0001至3重量％、0. 0005至1重量％、0. 001至0. 75重量％和特別優(yōu)選的0. 005 至0.5重量％?？梢栽谝阎椒ǖ妮o助下測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，例如BCA法（二喹啉甲酸；2， 2' -聯(lián)喹啉-4,4'-二羧酸）或縮二脈法（A.G. Gomall，C.S. Bardawill 和 M.M. David， J. Biol. Chem.，177 (1948)，第751-766頁(yè)）。活性蛋白質(zhì)濃度在此是通過(guò)利用適合的不可逆 抑制劑（用于蛋白酶，例如苯甲基磺酰氟（PMSF))進(jìn)行活性中心的滴定并且測(cè)定殘余活性 (參見 M. Bender 等人，J. Am. Chem. Soc.洲，24 (I%6)，第 589〇_5913 頁(yè)）來(lái)進(jìn)行的。
[0173] 蛋白酶和/或淀粉酶可以吸附在載體物質(zhì)上和/或包埋在封裝物質(zhì)中，以便保護(hù) 它們免于過(guò)早失活。在洗滌液中，即在使用條件下，然后酶被釋放并能夠發(fā)揮其催化作用。
[0174] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，餐具洗滌劑的特征在于其進(jìn)一步包含選自以下的 組分；
[0175] i.陰離子型和/或多聚陰離子型物質(zhì)，和/或
[0176] ii.陽(yáng)離子型和/或多聚陽(yáng)離子型物質(zhì)，和/或
[0177] iii.具有羥基和/或多羥基的物質(zhì)。
[0178] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，添加這類物質(zhì)進(jìn)一步改善了餐具洗滌劑的清洗性能，特別是改善了包 含蛋白酶和淀粉酶的液體餐具洗滌劑的清洗性能，尤其是上文所述的那些。特別是當(dāng)與本 發(fā)明所用的蛋白酶結(jié)合時(shí)，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，特別是在去除至少一種蛋白酶-敏感型污漬方 面，尤其是如上文列舉的那些類型。
[0179] 在上文i中列出的物質(zhì)是陰離子型或多聚陰離子型物質(zhì)，即這些物質(zhì)攜帶至少一 個(gè)并且優(yōu)選多個(gè)負(fù)電荷。優(yōu)選含有至少一個(gè)帶負(fù)電荷的單體的聚合物，優(yōu)選具有多個(gè)帶負(fù) 電荷的單體。因此根據(jù)本發(fā)明，這種聚合物優(yōu)選地是帶負(fù)電荷的聚合物。例如，優(yōu)選有機(jī)酸 或其鹽的聚合物，尤其是聚丙烯酸酯類和/或多糖酸和/或聚丙烯酸酯共聚物和/或多糖 共聚物。在這方面，進(jìn)一步優(yōu)選的化合物是聚丙烯酸磺酸酯或聚羧酸酯及其鹽、共聚物或共 聚物的鹽。
[0180] 更優(yōu)選地要用到的物質(zhì)的實(shí)例是Acusol 587D (聚丙烯酸磺酸酯；來(lái)自 Rohm&Haas/DowChemical)、Acusol 445N(聚竣酸納鹽；來(lái)自 Rohm&Haas/Dow Chemical)、 Acusol 590(聚丙烯酸酯共聚物；來(lái)自 Rohm&Haas/Dow Chemical)、Acusol 916(聚丙烯酸 鈉鹽；來(lái)自 Rohm&Haas/Dow Chemical)、Sokalan CP42(修飾的聚羧酸鈉鹽；來(lái)自 BASF)、 Sokalan PA 30CL(聚竣酸納鹽；來(lái)自 BASF)、Dequest P 9000(聚馬來(lái)酸；來(lái)自 Thermphos)、 海藻酸、聚-2-丙烯酰氨基-2-甲基-1-丙磺酸、聚-4-苯乙烯磺酸共-馬來(lái)酸鈉鹽、聚丙 烯酰氨基-共-丙烯酸鈉鹽、聚甲基丙烯酸鈉鹽、聚甲基乙烯基醚-交替共聚-馬來(lái)酸或聚 乙烯磺酸鈉鹽。
[0181] 上文ii中列出的物質(zhì)涉及陽(yáng)離子型或多聚陽(yáng)離子型物質(zhì)，即這些物質(zhì)攜帶至少 一個(gè)并且優(yōu)選多個(gè)正電荷。優(yōu)選含有至少一個(gè)帶正電荷的單體的聚合物，優(yōu)選具有多個(gè)帶 正電荷的單體。因此根據(jù)本發(fā)明，這種聚合物優(yōu)選地是帶正電荷的聚合物。在這方面，優(yōu)選 的化合物的實(shí)例是聚胺的鹽、聚乙烯亞胺或其共聚物的鹽、聚烯丙胺的鹽、聚二烯丙基二甲 基銨化合物的鹽或聚（丙烯酰胺-共-二烯丙基二甲基銨）化合物的鹽。
[0182] iii中列出的物質(zhì)是包含至少一個(gè)羥基和/或多羥基并且優(yōu)選多個(gè)羥基和/或 多輕基的物質(zhì)。在這方面，優(yōu)選例如聚乙烯醇，例如在商品名Mowiol (Kremer Pigmente GmbH&Co. KG)下可獲得的聚乙烯醇。
[0183] 在這一點(diǎn)上，明確指出具體物質(zhì)可以屬于上文所述組i-iii中的一個(gè)或多個(gè)。例 如，其可以是包含一個(gè)或多個(gè)羥基和/或多羥基的陰離子聚合物。則這樣的物質(zhì)屬于組i 和iii。包含一個(gè)或多個(gè)羥基和/或多羥基的陽(yáng)離子聚合物同樣屬于組ii和iii。
[0184] 在本發(fā)明的上下文中，同樣也可以使用屬于上文所述的i、ii或iii的物質(zhì)的衍生 物。在本申請(qǐng)的上下文中，衍生物理解為在上文所述物質(zhì)中的一種的基礎(chǔ)上化學(xué)修飾的物 質(zhì)，例如通過(guò)側(cè)鏈的轉(zhuǎn)換或通過(guò)將另一化合物共價(jià)鍵合至所述物質(zhì)。例如這樣的化合物可 以為低分子量化合物，如脂類或單糖、寡糖或多糖、或胺類或胺化合物。此外，所述物質(zhì)可以 被糖基化、水解、氧化、N-甲基化、N-甲?；?、N-乙酰化，或含有甲基、甲?；⒁一?、乙?；?、 叔丁基、茴香基、苯甲基、三氟乙?；-羥基琥珀酰亞胺、叔丁氧基羰基、苯甲酰基、4-甲 基苯甲基、硫代茴香基（thioanisyl)、硫甲苯基（thiocresyl)、苯甲基氧基甲基、4-硝基苯 基、苯甲基氧基羰基、2-硝基苯甲酰基、2-硝基苯基亞磺?；?-nitrophenylsulfenyl)、 4-甲苯磺?；⑽宸交?、二苯基甲基、2-氯苯甲基氧基羰基、2,4,5_三氯苯基、2-溴苯甲 基氧基羰基、9-芴甲氧基羰基、三苯基甲基、2, 2, 5, 7,8-五甲基苯并二氫吡喃基6-磺?；?。 衍生物同樣理解為表示將所述物質(zhì)共價(jià)或非共價(jià)鍵合至大分子載體，或者還等同地表示非 共價(jià)包含在合適的大分子籠形結(jié)構(gòu)中。還可以進(jìn)行與其它大分子化合物例如聚乙二醇的偶 聯(lián)反應(yīng)。進(jìn)一步優(yōu)選的化學(xué)修飾為化學(xué)基團(tuán)-C00H、-0H、= NH、-NH2-SH至-C00R、-0R、-NHR 、-順2、-順1?、-順、-51?中的一種或多種的修飾；其中：1?是-〇1 = 〇1-1?2、-(：三(：-1?2、-(：0?2) =CH2、-C(R2) = C(R3)、-CH = NR2、-C(R2) = N-R3、有或無(wú)取代的 4-7 元碳環(huán)體系、有或 無(wú)取代的4-7元氮雜環(huán)，或具有選自Rl、R2或R3的取代的含1至5個(gè)雙鍵或三鍵的(：2至 C8碳鏈，其中
[0185] -Rl 是 H、-R、-N02、-CN、鹵素取代基、-N3、-C1-8 烷基、-(CH2)nC02R2、-C2-8 烯 基-C02R2、-O(CH2)nC02R2、-C(O)NR2R3、-P(O) (0R2)2、烷基取代的四唑-5-基、-(CH2) n0 (CH2)n芳基、-NR2R3、-(CH2) n0R2、-(CH2) nSR2、-N (R2) C(O) R3、-S (O2) NR2R3、-N (R2) S (O2) R3、- (CHR2) nNR2R3、-C (0) R3、（CH2) nN (R3) C (0) R3、-N (R2) CR2R3、取代或未取代的（CH2) n-環(huán) 烷基、取代或未取代的（CH2)n-苯基或-環(huán)；其中η是大于1的數(shù)；
[0186] _R2 是 H、1? 素取代基、-燒基、-1? 代燒基、-(CH2) η-苯基、-(CH2) 1-3- _苯 基、- (CH2) 1-4-苯基-N(S02-Cl-2-烷基）2、-CO(CHRl)n-ORU - (CHRl)n-雜環(huán)、- (CHRl) n-NH-C〇-Rl、- (CHRl)n-NH-SO2RU - (CHRl)n-苯基-N(S02-Cl-2-烷基）2、- (CHRl)n-C(O) (CHRl)-NHRl、-(CHRl)n-C(S) (CHRl)-NHRl、-(CH2)n0(CH2)nCH3、-CF 3、-C2-C5?；?、-(CHRl) n0H、-(CHRl)nCO2RU -(CHRl)n-O-烷基、-(CHRl)n-O-(CH2) n-〇-烷基、-(CHRl)n-S-烷 基、-(CHRl)n-S(O)-烷基、-(CHRl)n-S(O2)-烷基、-(CHRl) n-S (O2)-NHR3、-(CHR3) n-N3、-(CHR3)nNHR4、具有1至5個(gè)雙鍵的(：2至(： 8鏈烯烴鏈、具有1至5個(gè)三鍵的(：2至(：8鏈 炔烴鏈、取代或未取代的_(CHR3) n雜環(huán)、取代或未取代的飽和或不飽和-(CHR3) "環(huán)烷基；其 中η是大于1的數(shù)，并且Rl和R3可以相同或不同；
[0187] -R3是H、-〇H、_CN、取代的烷基、_(：2至(：8烯基、取代或未取代的環(huán)烷基、_N(R1)R2、 飽和或不飽和的(： 5至C 7雜環(huán)或4至7個(gè)碳原子的雜二環(huán)、-NR1、-NR2、由4至7個(gè)碳原子 的飽和或不飽和的雜環(huán)或雜二環(huán)組成的-NR1R2 ;
[0188] -R4 是 H、- (CH2) n0H、-C (0) 0R5、-C (0) SR5、- (CH2) nC (0) NR6R7、-O-C (0) -0-R6、氨基 酸或肽；其中η是0至4之間的數(shù)；
[0189] -R5 是 Η，
[0190] -R6 是-C (R7)_ (CH2) n-0-C(0)-R8、-(CH2) n-C(R7)-O-C(O) R8、-(CH2) n-C (R7) -O-C (0) -0-R8、或-C (R7) - (CH2)n-0-C (0) -0-R8 ;其中 η 是 0 至 4 之間的數(shù)；和
[0191] -R7和R8在每種情況下是Η、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、烯基、取代的烯 基、塊基、取代的塊基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、燒基芳基、取代的燒基芳基、環(huán)燒基、取代的環(huán)燒 基或CH 2CO2烷基，其中R7和R8可以相同或不同。
[0192] 根據(jù)本發(fā)明還可以使用上文所述屬于i、ii或iii的物質(zhì)和/或其衍生物的所有 可能的組合。
[0193] 根據(jù)本發(fā)明的液體餐具洗滌劑可以直接使用或用水稀釋后使用，用于清潔硬表 面。這樣的稀釋溶液可以容易地通過(guò)以所述組合物：水的具體重量比將一部分組合物稀釋 于額外量的水中來(lái)產(chǎn)生，并且任選將這種稀釋液振搖以確保所述組合物在水中均勻分布。 所述稀釋液可能的重量或體積比為1 : 〇組合物：水至1 : 10000或1 : 20000組合物： 水，優(yōu)選1 : 10至1 : 2000的組合物：水。
[0194] 所有的液體或自由流動(dòng)的使用形式在這里都可用作液體餐具洗滌劑。在本申請(qǐng)的 上下文中，"自由流動(dòng)"理解為意指可傾倒并可具有高達(dá)幾萬(wàn)HiPas的粘度的組合物?？梢?使用常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量粘度（例如在20rpm和20°C下使用Brookfield LVT-II粘度計(jì)， 轉(zhuǎn)子3)，優(yōu)選在5至30000mPas的范圍內(nèi)。優(yōu)選的組合物具有10至15000mPas，特別優(yōu)選 120至SOOOmPas的粘度。在本發(fā)明的上下文中，液體餐具洗滌劑因此也可以是凝膠形式或 糊狀形式，可以是均質(zhì)溶液或懸浮液或其他常規(guī)使用的形式。
[0195] 在本發(fā)明進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的液體餐具洗滌劑進(jìn)一步包含至少一 種其他成分，其特別選自助洗劑、表面活性劑、陰離子聚合物及其組合。在本發(fā)明進(jìn)一步的 實(shí)施方案中，本發(fā)明的餐具洗滌劑是無(wú)磷酸鹽的。從環(huán)境角度來(lái)說(shuō)，本發(fā)明不含磷酸鹽的餐 具洗滌劑是特別有利的。
[0196] 優(yōu)選的，組合物的組分彼此之間是匹配的。優(yōu)選的，就清洗性能和/或漂洗輔助性 能和/或水垢抑制方面具有協(xié)同作用。特別優(yōu)選的是，在溫度為KTC至60°C之間，尤其是 溫度在20°C至55°C之間、在25°C至50°C以及在30°C至50°C之間帶來(lái)協(xié)同作用。
[0197] 優(yōu)選助洗劑的組尤其包括檸檬酸鹽和碳酸鹽，以及有機(jī)共助洗劑。術(shù)語(yǔ)"檸檬酸 鹽"同樣包含檸檬酸及其鹽，尤其是其堿金屬鹽。特別優(yōu)選的本發(fā)明的餐具洗滌劑，尤其是 洗碗機(jī)洗漆劑，包含朽 1檬酸和朽1檬酸鹽，優(yōu)選朽1檬酸鈉，用量為5 %至60重量％，優(yōu)選10% 至50重量％以及尤其是15%至40重量％。
[0198] 特別優(yōu)選使用的是碳酸鹽和/或碳酸氫鹽，優(yōu)選堿金屬碳酸鹽，更優(yōu)選碳酸鈉，其 用量為5 %至50重量％，優(yōu)選10 %至40重量％以及尤其是15 %至30重量％，在每種情況 下，基于餐具洗滌劑的重量。
[0199] 有機(jī)共助洗劑尤其包括聚羧酸鹽/聚羧酸以及膦酸鹽。這些物質(zhì)的分類在下面敘 述。
[0200] 可用的有機(jī)助洗劑物質(zhì)為，例如，以游離酸和/或其鈉鹽形式使用的聚羧酸，聚羧 酸的意思理解為具有超過(guò)一個(gè)酸官能團(tuán)的那些羧酸。這樣的例子為己二酸、琥珀酸、戊二 酸、蘋果酸、酒石酸、馬來(lái)酸、富馬酸、糖酸、氨基羧酸、氨三乙酸（NTA)及其混合物。除了它 們的助洗作用，游離酸也通常具有酸化組分的屬性，因此，還用來(lái)建立本發(fā)明組合物的較低 和較溫和的PH值。在這一點(diǎn)上，特別應(yīng)當(dāng)提及的是琥珀酸、戊二酸、己二酸、葡糖酸以及所 需的這些物質(zhì)的混合物。
[0201] 復(fù)雜形式的磷酸鹽，除了 1-羥基乙烷-1，1-二膦酸之外，還包括一系列不同的化 合物，例如二乙烯三胺五（甲叉膦酸）（DTPMP)。在本申請(qǐng)中，特別優(yōu)選的是羥基烷基-或氨 基烷基-膦酸鹽。在羥基烷基膦酸鹽中，1-羥基乙烷-1，1-二膦酸鹽（HEDP)是特別優(yōu)選的 共助洗劑。其優(yōu)選以鈉鹽形式使用，二鈉鹽是中性的并且四鈉鹽是堿性（PH9)。使用的氨基 烷基-膦酸鹽優(yōu)選包括乙烯二胺四甲叉膦酸鹽（EDTMP)、二乙烯三胺五甲叉膦酸鹽（DTPMP) 及其高分子同系物。其優(yōu)選以中性鈉鹽形式使用，例如EDTMP的六鈉鹽或DTPMP的七和八 鈉鹽。來(lái)自膦酸鹽類的助洗劑優(yōu)選為HEDP。氨基烷基膦酸鹽另外具有顯著的重金屬的結(jié)合 能力。因此，尤其當(dāng)組合物還包含漂白劑時(shí)，其優(yōu)選使用氨基烷基膦酸鹽，尤其是DTPMP或 上述膦酸鹽的混合物。
[0202] 餐具洗滌劑，尤其是洗碗機(jī)洗滌劑，在本申請(qǐng)的上下文中優(yōu)選包含一種或多種膦 酸鹽，其選自下組
[0203] a)氨基三甲叉膦酸（ATMP)和/或其鹽；
[0204] b)乙烯二胺四（甲叉膦酸）（EDTMP)和/或其鹽；
[0205] c)二乙烯三胺五（甲叉膦酸）（DTPMP)和/或其鹽；
[0206] d) 1-羥基乙烷-1，1-二膦酸（HEDP)和/或其鹽；
[0207] e) 2-膦酸基丁烷-1，2,4-三羧酸（PBTC)和/或其鹽；
[0208] f)己二胺四（甲叉膦酸）（HDTMP)和/或其鹽；
[0209] g)次氮基三（甲叉膦酸）（NTMP)和/或其鹽。
[0210] 在洗碗機(jī)洗滌劑中，作為膦酸鹽，特別優(yōu)選包含1-羥基乙烷-1，1-二膦酸（HEDP) 或二乙烯三胺五（甲叉膦酸）（DTPMP)。
[0211] 另外，本發(fā)明的餐具洗滌劑，尤其是洗碗機(jī)洗滌劑，可包含兩種或多種不同的膦酸 鹽。
[0212] 在本發(fā)明的餐具洗滌劑，尤其是洗碗機(jī)洗滌劑的全部重量中，膦酸鹽的重量比例 優(yōu)選是1 %至8重量％，更優(yōu)選1. 2%至6重量％以及特別是1. 5%至4重量％。
[0213] 本發(fā)明的餐具洗滌劑，尤其是洗碗機(jī)洗滌劑，可包含一種表面活性劑或多種表面 活性劑，在每種情況下，具體使用的是陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑及其混合物。
[0214] 在陰離子表面活性劑中，優(yōu)選使用具有至少一個(gè)硫酸鹽或磺酸鹽基團(tuán)的陰離子 表面活性劑。具有至少一個(gè)硫酸鹽或磺酸鹽基團(tuán)的陰離子表面活性劑優(yōu)選選自脂肪醇 硫酸鹽、烷基磺酸鹽和烷基苯磺酸鹽。這里優(yōu)選給出的是C12-C18脂肪醇硫酸鹽（FAS)，例 如 Sulfopon K 35 (Cognis，Germany)、仲 C13-C17-燒基橫酸鹽（SAS)，例如 Hostapur SAS 93 (Clariant，Germany)和直鏈C8-C18-烷基苯磺酸鹽，尤其是十二烷基苯磺酸鹽（LAS)。
[0215] 依據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)"硫酸鹽"和"磺酸鹽"不僅包括以鹽形式存在的陰離子化合物， 還包括游離酸，也就是相應(yīng)的烷基硫酸或烷基磺酸。
[0216] 優(yōu)選的，具有至少一個(gè)硫酸鹽或磺酸鹽基團(tuán)的陰離子表面活性劑在本發(fā)明的餐具 洗滌劑中的存在量為〇. 1%至20重量％，更優(yōu)選0.5%至15重量％，尤其是2. 5%至10重 量％。
[0217] 可使用的非離子表面活性劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的任何非離子表面活性劑。適 宜的非離子表面活性劑為，例如，具有通式RO(G) x的烷基糖苷，其中R為具有8至22個(gè)碳 原子以及優(yōu)選具有12至18個(gè)碳原子的主要是直鏈或甲基-支鏈，尤其是2-甲基-支鏈的 脂肪族基團(tuán)，以及G符號(hào)代表具有5或6個(gè)碳原子的葡萄糖單元，優(yōu)選葡萄糖。定義單葡糖 苷和低聚葡糖苷分布的低聚度X為1至10,優(yōu)選1. 2至1. 4之間的任何數(shù)字。
[0218] 另一類優(yōu)選使用的非離子表面活性劑可以是單獨(dú)的非離子表面活性劑或與其它 非離子表面活性劑組合的非離子表面活性劑，這類非離子表面活性劑是烷氧基化的，優(yōu)選 乙氧基化或乙氧基化和丙氧基化的脂肪酸燒基醋，優(yōu)選在燒基鏈上具有1至4個(gè)碳原子。
[0219] 其它適宜的非離子表面活性劑可以是胺氧化物類型的那些物質(zhì)，例如N-椰油烷 基-N，N-二甲基胺氧化物和N-牛油烷基-N，N-二羥基乙基氧化胺，以及脂肪酸的鏈烷醇胺 類型的那些物質(zhì)。這些非離子表面活性劑的用量?jī)?yōu)選不超過(guò)乙氧基化脂肪醇的用量，尤其 是不超過(guò)它們的一半。
[0220] 進(jìn)一步適宜的表面活性劑為多羥基脂肪酸胺，通式為
[0221]
【權(quán)利要求】
1. 一種液體餐具洗涂劑，其包含 (a)蛋白酶，所述蛋白酶包含在其全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少70% 同一性的氨基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有至 少兩個(gè)選自S3T、V4I、V193M和V199I的其他氨基酸取代，W及 化）淀粉酶。
2. 依據(jù)權(quán)利要求1的餐具洗涂劑，其中蛋白酶包含在其全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示 的氨基酸序列至少 71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、 83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90. 5%、91%、91. 5%、92%、92. 5%、93%、 93. 5%、94%、94. 5%、95%、95. 5%、96%、96. 5%、97%、97. 5%、98%和 98. 5% 同一性的氨 基酸序列，并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有氨基酸取代 S3T、V4I、V193M 和 V199I。
3. 依據(jù)權(quán)利要求1或2的餐具洗涂劑，其中蛋白酶在位置99處具有氨基酸精氨酸（時(shí)， 和/或蛋白酶在位置188處具有氨基酸丙胺酸（A)，和/或蛋白酶具有根據(jù)SEQ ID NO. 2的 氨基酸序列。
4. 依據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑，其中淀粉酶為根據(jù)SEQ ID N0.3的 a -淀粉酶AA560的a -淀粉酶變體，其在根據(jù)a -淀粉酶AA560的編號(hào)中具有1、2、3、4、5 或 6 個(gè) W下的序列修飾：R118K、D183* (缺失）、G184* (缺失）、N195F、R320K、R458K。
5. 依據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑，其中基于活性蛋白質(zhì)，淀粉酶的存在量 為1x1(T8至5重量％，和/或基于活性蛋白質(zhì)，蛋白酶的存在量為1x10 i至5重量％。
6. 依據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑，其進(jìn)一步包含選自W下的組分： i. 陰離子型和/或多聚陰離子型物質(zhì)，和/或 ii. 陽(yáng)離子型和/或多聚陽(yáng)離子型物質(zhì)，和/或 iii. 具有輕基和/或多輕基的物質(zhì)。
7. 依據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑，其包含至少一種另外的成分，其選自助 洗劑、表面活性劑、陰離子聚合物W及上述物質(zhì)的組合。
8. 依據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑，其包含至少一種另外的酶，尤其是蛋 白酶、淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、甘露聚糖酶、稼酸酶、木聚糖酶、黃原膠酶、木葡聚糖 酶（xyloglucanase)、目-葡萄糖巧酶、果膠酶、卡拉膠酶、過(guò)水解酶、氧化酶、氧化還原酶或 脂肪酶及其混合物。
9. 依據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑，其為洗碗機(jī)洗涂劑。
10. 依據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的餐具洗涂劑用于去除硬表面上的蛋白酶敏感型污 潰的用途。
11. 清潔硬表面的方法，其包含在至少一種方法步驟中使用根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng) 的餐具洗涂劑。
12. 依據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中淀粉酶在清潔液中存在的濃度為1x1(TW至0. 2重 量％，和/或蛋白酶在清潔液中存在的濃度為1x10^°至0. 2重量％。
13. 依據(jù)權(quán)利要求11或12的方法，其在溫度為1(TC至7(TC之間，優(yōu)選2(TC至6(TC之 間W及更優(yōu)選3(TC至5(TC之間實(shí)施。
14. 蛋白酶在包含淀粉酶的液體餐具洗涂劑中用于提供蛋白質(zhì)水解活性的用途，所述 蛋白酶包含在其全長(zhǎng)上與SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列至少70%同一性的氨基酸序列， 并且根據(jù)SEQ ID NO. 1的編號(hào)具有氨基酸取代L211D，并同時(shí)具有至少兩個(gè)選自S3T、V4I、 V193M和V199I的其他氨基酸取代。
【文檔編號(hào)】C11D3/386GK104471047SQ201380006882
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月2日
【發(fā)明者】N·穆斯曼, T·埃廷, T·巴斯蒂格凱特, K·本達(dá), H·H·揚(yáng)克 申請(qǐng)人:巴斯夫歐洲公司