專利名稱：4－[[(氰基亞氨基)[(1,2,2－三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的對(duì)映體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)-和(S)-對(duì)映體，含有它們的藥物組合物，以及使用這些對(duì)映體促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的方法。
背景技術(shù)：
鉀離子通道啟動(dòng)劑如米諾地爾(Upjohn)，吡那地爾(Lilly)和二氮嗪(Shiseido and Schering-Plough)以其毛發(fā)生長(zhǎng)刺激活性著稱。因此，美國(guó)專利4596812和4139619公開(kāi)了米諾地爾在治療男性禿頂、斑禿和女性脫發(fā)中的用途。美國(guó)專利4057636公開(kāi)了吡那地爾。DE3827467A公開(kāi)了米諾地爾和氫化可地松或類視色素的聯(lián)合形式。
Atwal等的美國(guó)專利5011837公開(kāi)了芳基氰基胍類，它們具有鉀離子通道激活活性，并用于高血壓和其它心血管疾病、多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腎臟和泌尿問(wèn)題治療以及促進(jìn)毛發(fā)的生長(zhǎng)，例如，用于治療男性禿頂(斑禿)。這些芳基氰基胍類具有如下結(jié)構(gòu)
及其互變異構(gòu)體
和
包括其藥用鹽，其中R1是烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或環(huán)烷基烷基；R2是
R3和R4彼此獨(dú)立地選自-R2、氫原子、烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、鹵素、烷氧基、-NH烷基、-N-(烷基)2、-S-烷基、-O-芳基-烷基、-S-芳基烷基或-S-芳基、-O-芳基、-NH芳基-烷基，或者R2和R3一起與它們連接的兩個(gè)碳原子形成環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)選自
其中m＝1或2，n＝3-5，p＝2-4，X是O、NR5、CH2；而R5是氫原子或R1。
美國(guó)專利5011837的實(shí)施例1公開(kāi)了4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]芐腈的制備
其為外消旋混合物的形式。
PCT申請(qǐng)WO 92/02225公開(kāi)了鉀離子通道啟動(dòng)機(jī)和5-α-還原酶抑制劑結(jié)合促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)。
PCT申請(qǐng)WO 92/09259A公開(kāi)了雄激素阻斷劑和鈣離子通道激活劑刺激毛發(fā)生長(zhǎng)的用途。
發(fā)明描述按照本發(fā)明，令人意外地發(fā)現(xiàn)4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈，包括其藥用鹽的(R)-對(duì)映體具有顯著的毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)活性，其活性優(yōu)于相應(yīng)的(S)-對(duì)映體及這些對(duì)映體的外消旋混合物。實(shí)際上，已發(fā)現(xiàn)(R)-對(duì)映體在刺激毛囊產(chǎn)生毛發(fā)生長(zhǎng)方面比相應(yīng)的(S)-對(duì)映體本質(zhì)上更快，令人驚奇地并出乎意料地更有效。
本發(fā)明的上述(R)-對(duì)映體具有I結(jié)構(gòu)
此(R)-對(duì)映體I是基本上純的形式，即至少含99％純(R)-對(duì)映體和最多含1％(S)-對(duì)映體。
此外，按照本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈，包括其藥用鹽的(S)-對(duì)映體具有優(yōu)異的毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)活性。
本發(fā)明的上述(S)-對(duì)映體具有結(jié)構(gòu)II
此(S)-對(duì)映體II是基本上純的形式，即至少含99％純(S)-對(duì)映體和最多含1％(R)-對(duì)映體。
本發(fā)明的對(duì)映體與多種無(wú)機(jī)或有機(jī)酸形成鹽。雖然其它鹽也可以用于分離和純化產(chǎn)物，但是優(yōu)選無(wú)毒的藥用鹽。這些藥用鹽包括與鹽酸、甲磺酸、硫酸、乙酸、馬來(lái)酸等形成的鹽。這些鹽通過(guò)此產(chǎn)物與等當(dāng)量的酸在這些鹽能形成沉淀的介質(zhì)中反應(yīng)獲得。
本發(fā)明還包括含4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈或其藥用鹽的(R)-對(duì)映體以及藥用載體的藥物組合物。
此外，本發(fā)明也包括含4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈或其藥用鹽的(S)-對(duì)映體以及藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明的(R)-對(duì)映體，即(R)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈可以按照下列反應(yīng)順序制備
本發(fā)明的4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(S)-對(duì)映體可以按照上述制備(R)-對(duì)映體的反應(yīng)順序制備，不同的是用(S)-α-甲基芐胺代替(R)-α-甲基芐胺，最終形成
其與4-氰基-N′-(4-氰基苯基)硫脲單鈉鹽反應(yīng)形成(S)-對(duì)映體(II)。
本發(fā)明的(R)-對(duì)映體I或本發(fā)明的(S)-對(duì)映體II可以與其它毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)化合物一起配制。這些化合物如鉀離子通道啟動(dòng)劑米諾地爾(Upjohn)和/或二氮嗪(Shiseido and Schering-Plough)，以及色滿卡林和吡那地爾；5-α-還原酶抑制劑如非那胸胺(Merck′s Proscar)，特拉唑嗪鹽酸鹽(Abbott′s Hytrin)或多沙唑嗪甲磺酸鹽(Pfizer′sCardura)；和/或雄激素阻斷劑如公開(kāi)于PCT申請(qǐng)WO 92/09259A中的4-(5-甲氧基庚基)-六氫-2(1H)-戊搭烯酮(pentalenone)，血管收縮藥如倍他米松二丙酸鹽，皮質(zhì)類固醇如氫化可地松和東茛菪鹼及環(huán)丙孕酮乙酸鹽。
本發(fā)明的對(duì)映體可以通過(guò)局部、口服、非腸道或直腸途徑給藥，如美國(guó)專利5011837所述(引入于此作為參考)，優(yōu)選局部給藥。因此，本發(fā)明的對(duì)映體以適宜的局部制劑形式施用于需要毛發(fā)生長(zhǎng)的皮膚區(qū)域。
此處使用的典型的局部制劑將包括含水或不含水制劑形式的常規(guī)軟膏、霜?jiǎng)⑾磩?、蠟、凝膠、糊劑、膠凍、噴霧劑、氣霧劑等。適宜的局部制劑的實(shí)例公開(kāi)于美國(guó)專利4139619和4596812中，將它們引入此文作為參考。
本發(fā)明的對(duì)映體將以有效量使用，即足以促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)或治療毛發(fā)生長(zhǎng)疾病以便使毛發(fā)生長(zhǎng)增加或產(chǎn)生毛發(fā)的量。典型的局部用組合物包括占該組合物重量約0.01至約15％，優(yōu)選約0.1至約10％的這些對(duì)映體。
含有本發(fā)明的對(duì)映體的該局部制劑可以施用于接受治療的區(qū)域，如人的頭皮，通過(guò)噴霧、輕擦或擦洗將此對(duì)映體施用于毛囊的區(qū)域。這些制劑可以以常規(guī)方式在毛發(fā)生長(zhǎng)前、期間或隨后施用于治療區(qū)域，至少每天一次，并優(yōu)選每天兩次或多次。
附圖
顯示了本文中描述的(R)-和(S)-對(duì)映體各自每天施用一次對(duì)雄性C3H小鼠的毛發(fā)生長(zhǎng)作用。
下列實(shí)施例代表了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。
實(shí)施例1(R)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈
A.(R)-1，2，2-三甲基丙基胺
按照Manley和Quast(J.Med.Chem.1992，35，2327-2340)所述方法，稍加改善，制備此標(biāo)題化合物。將頻那酮(29g，290mmol)、(R)-α-甲基芐基胺(17.6g，145mmol)和對(duì)甲苯磺酸一水合物(300mg)在甲苯(150ml)中的混合物，用Dean-Stark分離器回流3天(以從此反應(yīng)混合物中除去水)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物在約120-2℃(9mm)蒸餾得到21g(71％收率)的
為無(wú)色油狀物。將此物質(zhì)溶解于無(wú)水THF(210ml)中并在0-2℃用硼烷-THF復(fù)合物(1M，206ml，206mmol)處理。讓此混合物的溫度回到室溫，攪拌5小時(shí)并真空濃縮。向所得油狀殘余物中小心加入乙醇(300ml)，并將此混合物回流1小時(shí)并再次真空濃縮。將此殘余物在堿性氧化鋁(活性級(jí)1/己烷)上進(jìn)行色譜純化得到無(wú)色油狀物。質(zhì)子NMR和HPLC(YMC C18S3 4.6X50mm柱/水-甲醇-磷酸90∶10∶0.2至10∶90∶0.2梯度)表明此物質(zhì)被約10％的(S，R)-非對(duì)映異構(gòu)體污染。因此，將此混合物再進(jìn)行閃式色譜(硅膠/己烷-乙酸乙酯-三乙胺95∶5∶0.1)得到
(11.45g，55.8mmol，收率54％)。上述化合物(11.45g)和10％鈀碳(1.5g)加入乙醇(230ml)中，并在氫氣中攪拌12小時(shí)。將此混合物過(guò)濾并將含標(biāo)題化合物的濾液(約230ml)用于下步反應(yīng)，該濾液為約0.24M的乙醇溶液(假設(shè)收率100％)。
B.N-氰基-N′-(4-氰基芐基)硫脲單鈉鹽
按照美國(guó)專利5011837的實(shí)施例1部分A制備此標(biāo)題化合物。
C.(R)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈
向部分B化合物(6.0g，26.8mmol)的DMF(150ml)溶液中，依次加入部分A化合物的溶液(約0.24M的乙醇溶液，112ml，26.8mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(WSC)(6.0g，31.3mmol)。將此混合物室溫下攪拌3小時(shí)，用乙酸乙酯稀釋，并用1N鹽酸、水和鹽水依次洗滌。將有機(jī)層用硫酸鎂干燥，濃縮并將此粗品通過(guò)閃式色譜在硅膠上(己烷-乙酸乙酯-三乙胺75∶25∶0.2)純化得到無(wú)色泡沫。將此物質(zhì)用異丙醇重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物，為白色固體(4.15g，57.6％)，mp159-160℃；[α]D-180℃＝1，MeOH；通過(guò)手性HPLC測(cè)定的對(duì)映體純＝99％(ChiralPak AD柱/己烷-異丙醇-三乙胺80∶20∶0.2)；MS270(M+H)+；1H NMR(CDCl3)δ 8.65(br s，1H)，7.69(d，2H，J＝8.79 Hz)，7.37(d，2H，J＝8.79 Hz)，4.93(br d，1H)，3.83(m，1H)，1.10(d，1H，J＝6.45 Hz)，0.90(s，9H).
元素分析C15H19N5理論值C，66.89H，7.11N，26.00實(shí)測(cè)值C，66.71H，7.14N，25.98實(shí)施例2(S)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈
此標(biāo)題化合物由實(shí)施例1部分B的化合物和(S)-1，2，2-三甲基丙基胺(按照Manley和Quast，J.Med.Chem.1992，35，2327-2340制備)通過(guò)與實(shí)施例1部分C描述的相同方法制備。獲得的產(chǎn)物為無(wú)色固體，mp 158-159℃；[α]D+189℃＝1，MeOH；通過(guò)手性HPLC測(cè)定的對(duì)映體純＝99.4％(ChiralPak AD柱/已烷-異丙醇-三乙胺80∶20∶0.2)；MS270(M+H)+；1H NMR(CDCl3)δ 8.43(br s，1H)，7.69(d，2H，J＝8.79 Hz)，7.37(d，2H，J＝8.79 Hz)，4.93(br d，1H)，3.83(m，1H)，1.10(d，1H，J＝6.45Hz)，0.90(s，9H).
實(shí)施例3實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體和實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體在動(dòng)物模型中對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)作用的比較如下實(shí)驗(yàn)的目的是比較和評(píng)價(jià)實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體和實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體在動(dòng)物模型中對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的體內(nèi)作用。在C3H小鼠中比較這兩種對(duì)映體對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的局部作用。
動(dòng)物模型C3H小鼠是研究毛發(fā)生長(zhǎng)的有用的模型。其此用途是基于以下事實(shí)此動(dòng)物的皮膚色素沉著是由毛囊的黑素細(xì)胞提供的，而不是表皮提供的。在毛發(fā)生長(zhǎng)終期或毛囊的休止期，皮膚是粉紅色的。在毛發(fā)生長(zhǎng)初期或生長(zhǎng)期的早期，皮膚突然變?yōu)榛疑?，且?dāng)毛發(fā)生長(zhǎng)初期期進(jìn)一步發(fā)展時(shí)，皮膚的顏色變暗。在此研究中，用目測(cè)作為毛發(fā)生長(zhǎng)初期誘導(dǎo)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。此外，隨著毛發(fā)生長(zhǎng)初期進(jìn)展，皮膚的厚度增加，由薄毛發(fā)生長(zhǎng)終期皮膚變?yōu)榭蓹z測(cè)的厚毛發(fā)生長(zhǎng)初期皮膚。因此，根據(jù)皮膚顏色和皮膚的顯微厚度，由這些小鼠提供了靈敏的、可等量的和方便的毛發(fā)生長(zhǎng)期的評(píng)價(jià)方法。
使用20只一組，六至七周齡的雄性C3H小鼠，其毛囊處于毛發(fā)生長(zhǎng)的休止起。在其生命的此階段，毛囊保持在毛發(fā)生長(zhǎng)終期期多達(dá)30天或更長(zhǎng)。這為篩選藥物提供了適當(dāng)?shù)目梢晻r(shí)間。改善毛發(fā)生長(zhǎng)的化合物刺激毛囊從毛發(fā)生長(zhǎng)終期到毛發(fā)生長(zhǎng)初期期。此刺激通過(guò)毛囊周期的毛發(fā)生長(zhǎng)終期期縮短證明。
用氯胺酮/甲苯噻嗪(100mg/kg和12mg/kg)腹膜內(nèi)給藥麻醉動(dòng)物，而其限定的背側(cè)區(qū)域的毛發(fā)被齊根剪掉。
將50微升的2％的實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體和2％的實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體以及載體本身施用于背側(cè)區(qū)域，給粉紅色皮膚的動(dòng)物進(jìn)行局部治療，每天1次，每周5天。使用的載體是乙醇/丙二醇/水，60/30/10。治療持續(xù)至少4-5周。
每天觀察對(duì)動(dòng)物的副作用及被測(cè)位置的變化。記錄所有的觀察結(jié)果。每周評(píng)價(jià)被測(cè)位置皮膚顏色及毛發(fā)生長(zhǎng)的變化。在此以及中，用目測(cè)的皮膚從粉紅色變?yōu)榛疑八鶎?dǎo)致的毛發(fā)生長(zhǎng)來(lái)評(píng)價(jià)藥物作用。
結(jié)果在治療期間，誘發(fā)了毛囊刺激的動(dòng)物的百分率在附圖中給出。在這兩種對(duì)映體之間觀察到的最顯著的現(xiàn)象是發(fā)生毛囊刺激的時(shí)間不同。實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體的開(kāi)起作用時(shí)間為第7天，而實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體是第11天。載體對(duì)照開(kāi)始作用的時(shí)間時(shí)間第28天。用實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體治療的第11天，在40％的被測(cè)小鼠中引起的毛囊刺激，而實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體只是5％。第14天，用實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體治療的50％的動(dòng)物表現(xiàn)出毛囊刺激，而實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體是25％。第28天，用實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體治療的85％的動(dòng)物表現(xiàn)出毛囊刺激，而實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體是65％。因此，在整個(gè)治療期間，實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體治療組比實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體治療組顯示了更高的毛囊刺激機(jī)率。
附圖顯示了每天局部使用1次實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體和實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體的作用。
總之，在C3H小鼠中得到的這些結(jié)果表明，就其對(duì)毛囊刺激的作用而言，在實(shí)施例1的(R)-對(duì)映體和實(shí)施例2的(S)-對(duì)映體之間，存在顯著的差別；具體地講，(R)-對(duì)映體比相應(yīng)的(S)-對(duì)映體起作用更快。
特別是考慮到這些對(duì)映體各自的相關(guān)舒張能力，其一般被看作毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)性質(zhì)的指示(《血管舒張藥治療的副作用》(Side Effects ofVasodilator Therapy)，W.A.Pettinger等，Hypertension，1988，Vol.11，II-34至II-36，及《米諾地爾刺激人脫發(fā)頭皮的皮膚血流通過(guò)激光多普勒速度測(cè)量法和照相脈沖體積描記法》，R.C.Wester等，J.Invest.Dermatol.，184，Vol.82，515-517)，這些結(jié)果確實(shí)令人驚奇和出乎意料。
因此，雖然表示(R)-對(duì)映體的血管舒張能力的IC50為47±17 nM，而(S)-對(duì)映體的為157±35 nM，如上所述，(R)-對(duì)映體在治療11天內(nèi)產(chǎn)生了毛發(fā)生長(zhǎng)，其對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的促進(jìn)能力比相應(yīng)的(S)-對(duì)映體大8倍。
權(quán)利要求
1.4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)-對(duì)映體或其藥用鹽。
2.權(quán)利要求1的(R)-對(duì)映體，基本上與其相應(yīng)的S-對(duì)映體分離。
3.權(quán)利要求1的(R)-對(duì)映體具有如下結(jié)構(gòu)
其為基本上純的形式。
4.權(quán)利要求1的(R)-對(duì)映體，其對(duì)映體純度至少為99％。
5.含有權(quán)利要求1所述(R)-對(duì)映體和藥用載體的藥物組合物。
6.一種藥物的聯(lián)合形式，其中包括權(quán)利要求1所述的R-對(duì)映體，及與其聯(lián)合的另一種毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
7.促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的方法，該方法包括給需要此治療的患者使用治療有效量的4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)-對(duì)映體，或其藥用鹽。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中(R)-對(duì)映體經(jīng)系統(tǒng)或局部給藥。
9.權(quán)利要求7所述的方法，其中(R)-對(duì)映體經(jīng)局部給藥。
10.權(quán)利要求7所述的方法，其中(R)-對(duì)映體以霜?jiǎng)?、洗劑、液體制劑或軟膏制劑的形式給藥。
11.治療男性禿頂?shù)姆椒ǎńo需要治療的患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的R-對(duì)映體。
12.4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(S)-對(duì)映體或其藥用鹽。
13.權(quán)利要求12的(S)-對(duì)映體，基本上與其相應(yīng)的(R)-對(duì)映體分離。
14.權(quán)利要求12的(S)-對(duì)映體具有如下結(jié)構(gòu)
其為基本上純的形式。
15.權(quán)利要求12的(S)-對(duì)映體，其對(duì)映體純度至少為99％。
16.含有權(quán)利要求12所述(S)-對(duì)映體和藥用載體的藥物組合物。
17.一種藥物的聯(lián)合形式，其中包括權(quán)利要求12所述的S-對(duì)映體，及與其聯(lián)合的另一種毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
18.促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的方法，該方法包括給需要此治療的患者使用治療有效量的4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(S)-對(duì)映體，或其藥用鹽。
19.權(quán)利要求18所述的方法，其中(S)-對(duì)映體經(jīng)系統(tǒng)或局部給藥。
20.權(quán)利要求18所述的方法，其中(S)-對(duì)映體經(jīng)局部給藥。
21.權(quán)利要求18所述的方法，其中(S)-對(duì)映體以霜?jiǎng)?、洗劑、液體制劑或軟膏制劑的形式給藥。
22.治療男性禿頂?shù)姆椒?，包括給需要治療的患者使用治療有效量的權(quán)利要求12所述的S-對(duì)映體。
全文摘要
4－[[(氰基亞氨基)[(1,2,2－三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)－對(duì)映體以及相應(yīng)的(S)－對(duì)映體用于促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng),如對(duì)于男性禿頂。
文檔編號(hào)A61Q7/00GK1265589SQ98807919
公開(kāi)日2000年9月6日 申請(qǐng)日期1998年8月3日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月13日
發(fā)明者K·S·阿特瓦爾 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司