專(zhuān)利名稱(chēng)：一種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于納米載藥纖維的制備領(lǐng)域，特別涉及一種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著納米技術(shù)的興起和各種生物相容性高分子材料的優(yōu)越性逐漸凸顯，基于無(wú)機(jī)納米粒子及高分子材料的納米級(jí)藥物釋放體系引起了研究者們的廣泛青睞，開(kāi)發(fā)具有持續(xù)釋放效果的實(shí)用型藥物控釋體系逐步成為研究者們努力攻克的關(guān)鍵領(lǐng)域。靜電紡絲技術(shù)作為一種新型納米材料的加工方法，具有加工工藝參數(shù)可調(diào)、原料利用率高、纖維收集方式多樣化、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性高和易于產(chǎn)業(yè)化等優(yōu)點(diǎn)；制備的聚合物納米纖維具有尺寸可控、比表面積大、孔隙率高和三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)并可以很好的模擬天然細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)等特點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)使得靜電紡絲技術(shù)及其產(chǎn)品在很多領(lǐng)域內(nèi)得到了廣泛應(yīng)用。通過(guò)高分子的共聚、共混等方法及不同的收集方式，制備出性能和結(jié)構(gòu)多樣化的超細(xì)功能纖維并應(yīng)用于組織工程和藥物緩釋等方面，具有重要科學(xué)價(jià)值和巨大的應(yīng)用前景。2001年，Ignatious和Baldoni兩人最早用靜電紡技術(shù)設(shè)計(jì)出分別具有快速、即時(shí)、延時(shí)、緩慢、持續(xù)及階段性等不同釋藥特性的復(fù)合藥劑。隨后，研究者們用浸藥法、共混靜電紡、乳液靜電紡和同軸靜電紡等方法制備了不同的納米纖維載藥系統(tǒng)。由于溶劑的可選擇性及制備條件溫和，上述制備方法的載藥系統(tǒng)能夠有效控制藥物的釋放速度，改變藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)分布狀況，從而提高藥效并降低毒副作用。納米輕基磷灰石(Nanohydroxyapatite, n_HA, Caltl (PO4)6 (OH)2)是構(gòu)成人體硬組織如骨骼和牙齒的主要無(wú)機(jī)成分之一，具有良好的生物活性和生物相容性，被廣泛用于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，如硬組織修復(fù)材料，藥物載體等。棒狀n-HA具有較大的比表面積和很強(qiáng)的表面吸附能力，能吸附和傳遞多種藥物和生物活性分子，可以作為一種優(yōu)良的生物化學(xué)吸附載體；同時(shí)，棒狀n-HA的力學(xué)性能使其在復(fù)合材料增強(qiáng)體領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。因此，采用棒狀n-HA負(fù)載抗癌藥物，并將之填充于高分子聚合物基質(zhì)中，可望得到一種能夠長(zhǎng)期、緩慢地釋放抗癌藥物，并具有較好機(jī)械強(qiáng)度的纖維支架材料。研究表明，傳統(tǒng)的基于純靜電紡納米纖維或純無(wú)機(jī)納米材料的藥物載體均存在著藥物突釋現(xiàn)象；此外，聚合物納米纖維還存在機(jī)械強(qiáng)度低，無(wú)機(jī)納米材料也存在容易團(tuán)聚等現(xiàn)象。這些瓶頸嚴(yán)重限制了純靜電紡納米纖維或純無(wú)機(jī)納米材料在藥物載體領(lǐng)域的應(yīng)用。因此，利用靜電紡絲技術(shù)制備載藥率高，機(jī)械性能好，緩釋效果明顯的有機(jī)/無(wú)機(jī)復(fù)合納米纖維載藥體系是開(kāi)發(fā)新的藥物劑型的一條可行的途徑。在前期的研究中，首次提出了將埃洛石納米管(halloysite nanotubes, HNTs)載藥與靜電紡絲技術(shù)相結(jié)合，制備靜電紡納米管/高聚物雙載體納米纖維藥物緩釋系統(tǒng)的研究思路。我們將抗生素類(lèi)藥物(TCH，鹽酸四環(huán)素)首先負(fù)載于HNTs內(nèi)，得到HNTs/TCH載藥納米管，然后將HNTs/TCH分散于PLGA紡絲液中，制得了 PLGA/HNTs/TCH復(fù)合載藥納米纖維。摻雜的HNTs可以顯著提高PLGA納米纖維的機(jī)械性能，且此雙重載藥納米纖維可以有效的控制 TCH 的釋放(Qi et al. J. Mater. Chem. 2010，20 (47) : 10622-10629)。截止目前，尚沒(méi)有文獻(xiàn)或?qū)＠麍?bào)道以靜電紡絲技術(shù)制備PLGA/n-HA/DOX復(fù)合納米纖維載藥體系的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，該方法簡(jiǎn)單，易于操作，所用的PLGA及n-HA具有很好的生物相容性，適合于大批量生產(chǎn)；制備的n-HA/PLGA的雙載體載藥系統(tǒng)具有很好的藥物持續(xù)釋放效果。本發(fā)明的一種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，包括( I)繪制鹽酸阿霉素DOX水溶液的濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)將n-HA分散在去離子水中得到n_HA懸濁液并超聲分散均勻；(3)向上述n-HA懸濁液中加入D0X，避光條件下磁力攪拌，通過(guò)表面物理吸附的方法使DOX藥物分子負(fù)載在n-HA表面；(4)離心分離上述負(fù)載有DOX的懸濁液，并用去離子水洗滌沉淀，收集上清液并與洗滌液混合，測(cè)量混合液在490nm處的吸光值，根據(jù)步驟(I)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算載藥量；(5)冷凍干燥步驟(4)中負(fù)載有DOX的n-HA，得到D0X/n_HA粉末，研磨均勻，并用篩網(wǎng)過(guò)濾；(6 )將上述DOX/n-HA超聲分散在THF與DMF的混合溶劑中，再加入PLGA配成DOX/n-HA/PLGA靜電紡絲溶液，紡絲溶液中PLGA與混合溶劑的質(zhì)量體積比為lg:r5mL，DOX與PLGA的質(zhì)量比為1:100，采用靜電紡絲即得有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維。所述步驟(I)中的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的具體步驟為將DOX溶于水中，制備n組不同濃度的DOX水溶液，其中n ^ 5 ;然后測(cè)量n組不同濃度的DOX水溶液的吸光值，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。所述步驟(2)中的n-HA的終濃度為0. 5mg/mL。所述步驟(2)中的超聲分散時(shí)間為3(T50min。所述步驟(3)中的DOX的終濃度為0. 5mg/mL。所述步驟(3)中的磁力攪拌時(shí)間為18 24h，轉(zhuǎn)速使懸濁液不沉淀即可。所述步驟(4)中離心的速度為4000 6000rpm,離心的時(shí)間為3 5min,沉淀的洗漆次數(shù)為2 3次。 所述步驟(5 )中的篩網(wǎng)為325目篩。所述步驟(6)中的混合溶劑中THF與DMF的體積比為3 :1，超聲分散時(shí)間為 3 5min。所述步驟(6)中的靜電紡絲的工藝條件為接收距離為l(T20cm，電壓為15kV-25kV，流速為 0. 8 lmL/h。本發(fā)明使用掃描電鏡(SEM)、透射電鏡(TEM)、激光共聚焦顯微鏡(CLSM)、傅里葉變換紅外光譜(FTIR)、X射線衍射(XRD)和機(jī)械性能測(cè)試等表征了制備的雜化納米纖維及其載藥性能，并對(duì)藥物控釋體系的緩釋動(dòng)力學(xué)和體外抗癌活性等進(jìn)行了評(píng)價(jià)。具體測(cè)試結(jié)果如下(I) n-HA負(fù)載藥物DOX條件優(yōu)化結(jié)果由圖I可以看出，當(dāng)n-HA濃度為lmg/mL或2mg/mL時(shí)，藥物負(fù)載效率隨著藥物濃度升高而變大，隨載體濃度升高而降低，可能是因?yàn)楫?dāng)n-HA濃度為lmg/mL或2mg/mL時(shí)，n_HA粒子分散不好而導(dǎo)致相對(duì)接觸面積變小的原因；當(dāng)n-HA濃度為0. 5mg/mL時(shí)，藥物負(fù)載效率先增加后減?。划?dāng)DOX和n-HA的濃度均為0. 5mg/mL時(shí)，載藥率達(dá)到最大，為14. 05%。(2)傅里葉變換紅外光譜(FTIR)的測(cè)試結(jié)果由圖2可以看出，DOX的特征峰在1434CHT1和162IcnT1處。載藥后，n_HA在1429CHT1處的羰基峰和1385CHT1處的羥基的彎曲振動(dòng)峰消失，而在1464CHT1和1412CHT1處出現(xiàn)兩個(gè)新的吸收峰。我們認(rèn)為是DOX藥物分子已經(jīng)成功負(fù)載到n-HA表面，從而引起了峰型的變化。(3) X射線衍射(XRD)的測(cè)試結(jié)果圖3所示為DOX和負(fù)載DOX前后n-HA的X射線衍射峰。從附圖3可以看出，DOX/n-HA的譜圖和n-HA的圖譜(JCPD 09-0432)—致，各晶面位置吻合，表明本發(fā)明報(bào)道的負(fù)載DOX的方法不會(huì)改變n-HA的晶體結(jié)構(gòu)。(4)透射電子顯微鏡(TEM)及激光共焦顯微鏡(CLSM)表征結(jié)果·由圖4可以看出，DOX/n-HA仍為棒狀結(jié)構(gòu)(附圖4a)，通過(guò)對(duì)比純PLGA納米纖維(附圖4c)可以看出，DOX/n-HA被均勻地包裹于靜電紡PLGA納米纖維中(附圖4b)。納米纖維的CLSM表征結(jié)果顯示本發(fā)明制備的D0X/PLGA (如附圖4d)的紅色熒光均勻分布在纖維內(nèi)部，而DOX/n-HA/PLGA (如附圖4e)在纖維內(nèi)部有多處熒光增強(qiáng)點(diǎn)，即很好的說(shuō)明DOX/PLGA分布在纖維內(nèi)部。(5)掃描電子顯微鏡(SEM)的測(cè)試結(jié)果圖5 (a), (b)，(c)和(d)為本發(fā)明制備的 PLGA、n-HA/PLGA, D0X/PLGA 和 DOX/n-HA/PLGA的復(fù)合納米纖維的SEM圖?？梢钥闯觯鹘M纖維表面形貌光滑均勻，纖維之間無(wú)明顯粘連，并且均具有較大的孔隙結(jié)構(gòu)。各組納米纖維的平均直徑分別為656±161nm、634±152nm、338±70nm 和 577± 133nm，孔隙率分別為 71. 5%、71. 4%,69. 1% 和 72. 5%。很明顯，當(dāng)摻雜少量n-HA后，纖維氈的孔隙率變化不大，直徑輕微變小。主要原因是由于n-HA表面羥基存在，高壓靜電場(chǎng)作用下帶電射流的表面電荷密度增加，纖維受到的拉伸作用增強(qiáng)，纖維的直徑變小。而D0X/PLGA納米纖維的直徑明顯降低，主要是因?yàn)镈OX的加入引起PLGA紡絲液性質(zhì)(如電導(dǎo)率、粘度等)變化所致。(6)靜電紡DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維載藥體系的應(yīng)力-應(yīng)變曲線圖6所示為PLGA、n-HA/PLGA和DOX/n-HA/PLGA納米纖維氈的應(yīng)力-應(yīng)變曲線。從應(yīng)力-應(yīng)變曲線可以看出，n-HA/PLGA和DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維氈的斷裂強(qiáng)度因n-HA的加入而提高，楊氏模量也顯著提高，這充分說(shuō)明n-HA可作為纖維增強(qiáng)體，顯著提高復(fù)合材料載體的機(jī)械性能。(7)靜電紡DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維載藥體系的藥物釋放動(dòng)力學(xué)圖7所示為在pH分別為7. 4和5. 4條件下，DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維載藥體系對(duì)DOX的釋放動(dòng)力學(xué)結(jié)果。通過(guò)與D0X/n-HA載藥粉末和D0X/PLGA載藥納米纖維對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在不同PH條件下，DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維載體載藥體系均沒(méi)有明顯的“突釋”現(xiàn)象，且藥物能夠持續(xù)地釋放。(8)靜電紡DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維載藥體系的體外抗癌活性圖8所示為不同DOX濃度時(shí)，DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維載藥體系的抗癌活性測(cè)試結(jié)果，并與相同DOX濃度時(shí)D0X/PLGA納米纖維、D0X/n-HA納米粉末進(jìn)行了對(duì)比。相對(duì)于對(duì)照組(TCP)，在DOX濃度為IOOii g/mL時(shí)，所有材料均表現(xiàn)出了抗癌活性；而當(dāng)DOX的濃度低于IOOii g/mL時(shí)，DOX/n-HA/PLGA納米纖維的顯示了較弱的抗癌活性，主要是因?yàn)榇藭r(shí)DOX從DOX/n-HA/PLGA納米纖維中的釋放速度較慢的緣故。有益.效果(I)本發(fā)明的制備方法簡(jiǎn)單，易于操作，所用的PLGA及n-HA具有很好的生物相容性，適合于大批量生產(chǎn)；(2)本發(fā)明制備的含n-HA的纖維氈，其機(jī)械強(qiáng)力得到了明顯的提高；(3)本發(fā)明制備的n-HA/PLGA的雙載體載藥系統(tǒng)具有很好的藥物持 續(xù)釋放效果。


圖I為本發(fā)明中的n-HA對(duì)DOX的負(fù)載率隨n_HA和DOX濃度變化曲線；圖2為本發(fā)明中的(a) DOX粉末、(b) n-HA粉末和(c) DOX/n-HA載藥粉末的FTIR圖譜；圖3為本發(fā)明中的(a)n-HA粉末、(b)D0X/n-HA載藥粉末和(c)DOX粉末的X射線衍射圖譜；圖4為本發(fā)明中的(a) DOX/n-HA載藥粉末、(b) DOX/n-HA/PLGA和(c) PLGA納米纖維的TEM圖及(d) D0X/PLGA和(e) DOX/n-HA/PLGA納米纖維的CLSM圖；圖5 為本發(fā)明中的(a) PLGA、(b) n-HA/PLGA、(c) D0X/PLGA 和(d) DOX/n-HA/PLGA納米纖維的SEM及其直徑分布圖；圖6 為本發(fā)明中的(a) PLGA、(b) n-HA/PLGA 和(c) DOX/n-HA/PLGA 納米纖維的應(yīng)力-應(yīng)變曲線； 圖7為本發(fā)明中的D0X/n-HA納米粉末、D0X/PLGA和DOX/n-HA/PLGA納米纖維分別在pH為5. 4和7. 4的藥物釋放動(dòng)力學(xué)曲線；圖8為本發(fā)明中的DOX/n-HA/PLGA納米纖維的體外抗癌活性評(píng)價(jià)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。實(shí)施例I取n-HA分散在去離子水中，并將n_HA懸池液超聲分散30min ；取DOX溶解在n-HA懸濁液中，并在避光條件下持續(xù)攪拌18h，轉(zhuǎn)速使懸濁液不沉淀即可；將所得混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，在3000rpm的條件下離心3min，取出上清液；用去離子水清洗載有DOX的n-HA沉淀3次，上清液與洗滌液混合待用；將D0X/n-HA沉淀避光低溫干燥18h，干燥后的粉末用瑪瑙研缽研磨待用。實(shí)施例2將實(shí)施例I中離心得到的上清液和洗滌液稀釋20倍，利用Lambda 25紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó)珀金埃爾默儀器公司)測(cè)試DOX溶液在490nm處的吸光度，根據(jù)事先用DOX溶液標(biāo)定的濃度-吸光度關(guān)系曲線，即可算出n-HA載藥后溶液中剩余DOX的量，算出平均載藥率(載藥率(％) =n-HA負(fù)載DOX的質(zhì)量/ (n-HA的質(zhì)量+n_HA負(fù)載DOX的質(zhì)量))。根據(jù)附圖I結(jié)果,選取DOX的濃度為0. 5mg/mL, n-HA的濃度為0. 5mg/mL,制備了載藥率為14. 05%的DOX/n-HA納米粉體。DOX在HA上的負(fù)載進(jìn)一步通過(guò)FTIR (附圖2)和XRD (附圖3)得到表征和證明。實(shí)施例3將35. 58mg的實(shí)施例I得到的載藥率為14. 05%的n_HA粉末加入到2mL的THF/DMF (體積比3 :1)溶劑中，超聲分散3 5min，攪拌3(T50min，將0. 5g的PLGA溶解在上述混合液中，攪拌8h，配制成質(zhì)量百分比濃度為1% (D0X相對(duì)PLGA為lwt%)的均一靜電紡絲液。然后按照常規(guī)靜電紡絲的方法制備納米纖維氈；其中，接收距離為15cm，電壓為20kV， 流速為0. 8mL/h,制備的復(fù)合納米纖維氈在真空干燥箱內(nèi)避光干燥48h以除去殘留的溶劑，待用。TEM表征結(jié)果顯示DOX/n-HA仍為棒狀晶體結(jié)構(gòu)(如附圖4a所示)，DOX/n-HA被很好地包裹于靜電紡PLGA納米纖維中(如附圖4b所示)。CLSM表征結(jié)果也說(shuō)明DOX/n-HA分布在纖維內(nèi)部(如附圖4e所示)。SEM圖片顯示(如附圖5所示)，DOX/n-HA/PLGA納米纖維表面形貌光滑均勻，纖維之間無(wú)明顯粘連，并且均具有較大的孔隙結(jié)構(gòu)，纖維的平均直徑為577± 133nm，孔隙率為 72. 5%。實(shí)施例4將對(duì)比例I制備的靜電紡PLGA (25%，w/v )、對(duì)比例2制備的靜電紡n-HA/PLGA及實(shí)施例3制備的DOX/n-HA/PLGA納米纖維氈剪成10 X 50的長(zhǎng)條，每個(gè)樣品有5個(gè)平行樣，并用千分尺測(cè)量每條纖維氈的五個(gè)不同的位置的厚度，求其平均值。用萬(wàn)能材料測(cè)試機(jī)測(cè)試?yán)w維氈的機(jī)械性能，得出應(yīng)力-應(yīng)變曲線、斷裂強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)。從附圖6可以看出，n-HA/PLGA和DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維氈的斷裂強(qiáng)度因n_HA的加入而提高，楊氏模量也顯著提高，這充分說(shuō)明n-HA可作為纖維增強(qiáng)體，顯著提高復(fù)合材料載體的機(jī)械性能。實(shí)施例5分別取IOOmg的實(shí)施例3中得到的靜電紡DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維氈，置于裝有IOmL的pH=7. 4的PBS緩沖液和pH=5. 4的醋酸-醋酸鈉緩沖液的試劑瓶中，用于做緩釋實(shí)驗(yàn)。同樣方法取對(duì)比例3中制備的IOOmg D0X/PLGA復(fù)合納米纖維氈和實(shí)施例2中制備的7. 12mg D0X/n-HA納米粉末作為對(duì)照。將試劑瓶置于37°C的搖床中震蕩，在不同的時(shí)間點(diǎn)，從試劑瓶中取出I. 5mL溶液，再分別用I. 5mL的pH=7. 4的PBS緩沖液和pH=5. 4的醋酸-醋酸鈉緩沖液補(bǔ)充。取出的緩釋液用紫外分光光度計(jì)測(cè)試濃度，借助DOX在pH=7. 4的PBS緩沖液和pH=5. 4的醋酸-醋酸鈉緩沖液中的濃度-吸光度標(biāo)定曲線，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的緩釋百分率，分析n-HA/PLGA雙載體載藥系統(tǒng)的藥物釋放動(dòng)力學(xué)特征。從附圖7可以看出，與D0X/n-HA粉末和D0X/PLGA混紡的納米纖維載藥系統(tǒng)相比,在兩種不同的pH的緩釋液中靜電紡DOX/n-HA/PLGA納米纖維載藥系統(tǒng)沒(méi)有明顯的“突釋”現(xiàn)象，并且藥物能夠持續(xù)地釋放。實(shí)施例6分別取80mg實(shí)施例3中得到的靜電紡DOX/n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維氈，5. 70mg實(shí)施例2制備的AMX/n-HA納米粉體，80mg對(duì)比例3中得到的靜電紡D0X/PLGA復(fù)合納米纖維氈和0. 8mg的純DOX藥物置于裝有4mL的新鮮DMEM高糖培養(yǎng)基的六孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中緩釋24h后用于細(xì)胞培養(yǎng)。取96孔培養(yǎng)板，KB細(xì)胞的種植密度為2X IO4個(gè)/孔，并分別加入10 uL.20uL.50uL和100 u L不同的藥物緩釋培養(yǎng)液，再將培養(yǎng)基補(bǔ)充為200ii L，放置在培養(yǎng)箱中，37°C、5%C02條件下培養(yǎng)24h，通過(guò)MTT比色法分析不同藥物緩釋液對(duì)癌細(xì)胞的殺傷能力。從附圖8可以看出，相對(duì)于對(duì)照組(TCP)，在DOX濃度為100 u g/mL時(shí)，所有材料均表現(xiàn)出了抗癌活性；而當(dāng)DOX的濃度低于100 u g/mL時(shí)，DOX/n-HA/PLGA納米纖維的僅顯示了較弱的抗癌活性，主要是因?yàn)镈OX從DOX/n-HA/PLGA納米纖維中的釋放速度較慢的緣故。 對(duì)比例I 將0. 5g的PLGA溶解在2mL的THF/DMF (3 :1)溶劑中，配制成質(zhì)量百分比濃度為25%的溶液，靜置過(guò)夜，制備成均一透明靜電紡絲溶液，然后按照常規(guī)靜電紡絲的方法制備納米纖維氈，其中紡絲條件與實(shí)施例3中保持一致，制備的PLGA納米纖維氈在真空干燥箱內(nèi)干燥48h以除去殘留的溶劑，待用。從附圖5a可以看出，本發(fā)明制備的PLGA納米纖維形貌規(guī)則、表面規(guī)整，具有較大的孔隙結(jié)構(gòu)，孔隙率為71. 5%,纖維直徑為656±161nm。對(duì)比例2將25mg n-HA納米粉末加入到2mL的THF/DMF(3 :1)溶劑中，超聲分散3(T60min，將0. 5g的PLGA溶解在上述混合液中，攪拌8h，配制成質(zhì)量百分比濃度為5%(n-HA相對(duì)PLGA為5wt%)的均一靜電紡絲液，然后按照常規(guī)靜電紡絲的方法制備納米纖維氈，其中紡絲條件與實(shí)施例3中保持一致。制備的n-HA/PLGA復(fù)合納米纖維氈在真空干燥箱內(nèi)干燥48h以除去殘留的溶劑，待用。從附圖5b可以看出，本發(fā)明制備的n-HA/PLGA納米纖維形貌規(guī)則、表面規(guī)整，具有較大的孔隙結(jié)構(gòu)，孔隙率為71. 4%，纖維直徑為634±152nm。對(duì)比例3將5mg DOX溶解在2mL的THF/DMF (3:1)溶劑中，將0. 5g的PLGA溶解在上述溶液中，攪拌8h，配制成質(zhì)量百分比濃度為1% (D0X相對(duì)PLGA為lwt%)的均一靜電紡絲液，然后按照常規(guī)靜電紡絲的方法制備納米纖維氈，其中紡絲條件與實(shí)施例3中保持一致，制備的AMX/PLGA復(fù)合納米纖維氈在真空干燥箱內(nèi)避光干燥48h以除去殘留的溶劑，待用。從附圖5c可以看出，本發(fā)明制備的D0X/PLGA納米纖維直徑明顯變小，但不影響其孔隙結(jié)構(gòu)和纖維形貌，孔隙率為69. 1%，纖維直徑為338±70nm。
權(quán)利要求
1.一種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，包括 (O繪制鹽酸阿霉素DOX水溶液的濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2)將n-HA分散在去離子水中得到n-HA懸濁液并超聲分散均勻； (3)向上述n-HA懸濁液中加入D0X，避光條件下磁力攪拌，通過(guò)表面物理吸附的方法使DOX藥物分子負(fù)載在n-HA表面； (4)離心分離上述負(fù)載有DOX的懸濁液，并用去離子水洗滌沉淀，收集上清液并與洗滌液混合，測(cè)量混合液在490nm處的吸光值，根據(jù)步驟(I)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算載藥量； (5 )冷凍干燥步驟(4)中負(fù)載有DOX的n-HA，得到DOX/n-HA粉末，研磨均勻，并用篩網(wǎng)過(guò)濾； (6 )將上述DOX/n-HA超聲分散在THF與DMF的混合溶劑中，再加入PLGA配成DOX/n-HA/PLGA靜電紡絲溶液，紡絲溶液中PLGA與混合溶劑的質(zhì)量體積比為Ig: 4 5ιΛ，DOX與PLGA的質(zhì)量比為I :100，采用靜電紡絲即得有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在干所述步驟(I)中的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的具體步驟為將DOX溶于水中，制備η組不同濃度的DOX水溶液，其中η > 5 ;然后測(cè)量η組不同濃度的DOX水溶液的吸光值，繪制濃度_吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的n-HA的終濃度為O. 5mg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的超聲分散時(shí)間為3(T50min。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中的DOX的終濃度為O. 5mg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中的磁力攪拌時(shí)間為18 24h。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(4)中離心的速度為400(T6000rpm,離心的時(shí)間為3 5min,沉淀的洗漆次數(shù)為2 3次。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(5)中的篩網(wǎng)為325目篩。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(6)中的混合溶劑中THF與DMF的體積比為3 :1，超聲分散時(shí)間為3 5min。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，其特征在于所述步驟(6)中的靜電紡絲的エ藝條件為接收距離為l(T20cm，電壓為15kV-25kV，流速為 O. 8 lmL/h。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種有機(jī)無(wú)機(jī)雜化靜電紡納米載藥纖維的制備方法，包括(1)將模型DOX加入超聲分散均勻的n-HA懸濁液中，通過(guò)表面物理吸附的方法，使DOX藥物分子負(fù)載在n-HA表面；(2)將DOX/n-HA粉末均勻分散在THF和DMF的混合溶劑中，超聲分散均勻；(3)向上述DOX/n-HA的THF/DMF分散溶液中，加入PLGA，攪拌使其溶解均勻，制備成靜電紡絲溶液；(4)通過(guò)靜電紡絲的方法制備n-HA和PLGA雙載體的藥物控釋體系。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，載藥纖維具有藥物持續(xù)緩釋、生物相容性好、抗癌活性明顯等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)D01F8/18GK102677226SQ201210181568
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月5日
發(fā)明者史向陽(yáng), 沈明武, 王世革, 鄭付印 申請(qǐng)人:東華大學(xué)