專利名稱：防止石洗中回染的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在染色纖維素織物表面形成局部顏色密度變化的方法，和用于該方法的組合物。
在用染色纖維素織物制衣的過(guò)程中，如用靛藍(lán)染色的斜紋粗綿布denim制牛仔服時(shí)，常常處理這種粗綿布使其具有“石洗”外觀(在棉布表面的局部顏色磨損)。這可以通過(guò)將denim在含機(jī)械磨損劑如浮石、磨損性纖維素酶或它們的混合物的水介質(zhì)中攪拌而獲得。這種處理優(yōu)選在近中性pH下進(jìn)行，因而優(yōu)選使用在此pH范圍內(nèi)具有高活性的纖維素酶。過(guò)去，一般通過(guò)培養(yǎng)天然微生物產(chǎn)生纖維素酶制劑，這種制劑都含有許多不同纖維素酶成分的混合物。使用這樣的混合纖維素酶制劑的一種方法公開(kāi)在US 4832864(Ecolab所有)中。
重組DNA技術(shù)的迅速發(fā)展使得可能得到高收率的單一成分酶，因而使用單一成分纖維素酶的方法已引起人們更大的興趣。例如，WO91/17243和WO95/09225(Novo Nordisk)描述了一種使用單一成分內(nèi)切聚糖酶的方法，所述酶稱為EG V，分子量為～43kD，來(lái)自腐質(zhì)霉Humicola insolens菌株DSM 1800，在近中性pH有最佳活性。WO94/21801(Genencor)描述了一種稱為EG III的單一成分纖維素酶在“石洗”中的應(yīng)用，該酶來(lái)自木霉T.longibrachiatum，據(jù)報(bào)道最佳pH范圍為5.5-6.0，在堿性pH下保持顯著的活性。WO 95/16782(Genencor International)提示來(lái)自木霉屬的其他單一成分纖維素酶在“石洗”中的應(yīng)用，但這些纖維素酶具酸性，在中性pH下基本上沒(méi)有活性。
在已知的“石洗”方法中一個(gè)普遍問(wèn)題是回染，即通過(guò)磨損已脫下的染料沉集在織物或衣服的一些部位造成所希望的顏色密度變化被淡化或使衣服的淺色部分被染色。
我們意外地發(fā)現(xiàn)，加入一定類型的纖維素酶(以下稱為第一成分)可減少回染。這種纖維素酶本身沒(méi)有顯著的磨損效果。
因此，本發(fā)明提供一種在染色纖維素織物表面形成局部顏色密度變化的方法，包括將織物在pH在6.5-9范圍內(nèi)并含有下列成分的水介質(zhì)中攪拌第一成分，它是(a)能夠水解纖維三糖和/或?qū)ο趸交?β-1，4-纖維二糖苷的第5族纖維素酶，或(b)第7族纖維素酶，和第二成分，它是(a)機(jī)械磨損劑或(b)具有磨損活性的纖維素酶，其中每種纖維素酶在pH7下顯示其最大活性的至少30％。
本發(fā)明的另一方面提供用于所述方法的組合物，其包括上述第一和第二成分。
在本說(shuō)明書和權(quán)利要求中，適用下列定義術(shù)語(yǔ)“纖維素酶”指對(duì)纖維素水解有貢獻(xiàn)的酶，如纖維二糖水解酶(酶的命名E.C.3.2.1.91)、內(nèi)切葡聚糖酶(以下簡(jiǎn)稱為“EG”，E.C.3.2.1.4)或β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)。
根據(jù)氨基酸序列的相似性和Henrissat.B等在《生物化學(xué)雜志》(Biochem.J.)(1991)，280，309-16頁(yè)和Henrissat，B等在《生物化學(xué)雜志》，293，781-788頁(yè)中描述的分類系統(tǒng)，將纖維素酶分為不同的族。
用于本發(fā)明的纖維素酶優(yōu)選是單一成分，即用于本發(fā)明的水介質(zhì)應(yīng)該除指出的酶外不含其他纖維素酶成分。單一成分的酶可用重組DNA技術(shù)廉價(jià)獲得，即克隆編碼該單一成分的DNA序列，然后用該DNA序列轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞并在該宿主中表達(dá)該成分。
因而，編碼有用纖維素酶的DNA序列可通過(guò)下述一般方法分離-從本說(shuō)明書以后提到的微生物之一在適當(dāng)?shù)妮d體中克隆一個(gè)DNA文庫(kù)，
-用所述載體轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)慕湍杆拗骷?xì)胞，-在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞以表達(dá)由該DNA文庫(kù)中某克隆編碼的目的酶，-通過(guò)確定由這種克隆產(chǎn)生的酶的纖維素酶活性來(lái)篩選陽(yáng)性克隆，及-從這種克隆中分離酶的編碼DNA。
WO94/14953(Novo Nordisk)進(jìn)一步公開(kāi)了該通用方法，其內(nèi)容引入本文作為參考。
編碼有用纖維素酶的DNA序列例如可通過(guò)篩選微生物的cDNA文庫(kù)并挑選表達(dá)適當(dāng)活性(即纖維素酶活性)的克隆而分離得到。
編碼同類酶的DNA序列(即類似DNA序列)可從其他微生物獲得。例如，這種DNA序列可通過(guò)相似方法篩選另一真菌的cDNA文庫(kù)而獲得，例如曲霉屬的菌株，特別是棘孢曲霉或黑曲霉的菌株，木霉屬的菌株，特別是T.resei、綠色木霉、T.longibrachiatum、T.harzianum或康寧木霉的菌株，或Neocallimatix屬、Piromyces屬、青霉屬、蘑菇屬或Phanerochaete屬的菌株。
或者，編碼有用纖維素酶的DNA也可以按熟知的程序、利用在已知DNA序列上制備的合成寡核苷酸探針，方便地從適當(dāng)?shù)腄NA來(lái)源分離得到，如從上述任何生物體分離。
然后可將DNA序列插入重組表達(dá)載體中。這可以是可方便地進(jìn)行重組DNA操作用的任何載體，載體的選擇常取決于其所要轉(zhuǎn)入的宿主細(xì)胞。例如，載體可以是自主復(fù)制的載體，即作為染色體外單位存在的載體，其復(fù)制不依賴于染色體的復(fù)制，例如為質(zhì)粒。或者，載體可以是當(dāng)引入宿主細(xì)胞時(shí)被整合在宿主細(xì)胞基因組中并隨著所整合的染色體一起復(fù)制的載體。
編碼纖維素酶的DNA序列在載體中應(yīng)與適當(dāng)?shù)膯?dòng)子和終止序列有效地連接。啟動(dòng)子可以是在所選的宿主細(xì)胞中顯示轉(zhuǎn)錄活性的任何DNA序列，可來(lái)自與宿主細(xì)胞同源或異源的蛋白編碼基因。用于將纖維素酶編碼DNA序列與啟動(dòng)子和終目子分別連接的方法，和用于將它們插入適當(dāng)載體的方法都是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的(參見(jiàn)例如，Sambrook等，分子克隆實(shí)驗(yàn)室指南(MolecularCloning.A Laboratory Manual，紐約冷泉港，1989)。
用該DNA序列轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞優(yōu)選是真核細(xì)胞，特別是真菌細(xì)胞如酵母或絲狀真菌細(xì)胞。特別是，屬于曲霉屬或木霉屬種類的細(xì)胞，最優(yōu)選米曲霉或黑曲霉細(xì)胞。轉(zhuǎn)化真菌細(xì)胞的方法涉及，按本身已知的方法進(jìn)行原生質(zhì)體形成和原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，然后再生細(xì)胞壁。使用曲霉作為宿主微生物在EP 238023(Novo Nordisk A/S)中有描述，其內(nèi)容引入這里作為參考。宿主細(xì)胞還可以是醇母細(xì)胞，如酵母屬菌株，特別是釀酒酵母、克魯弗酵母或葡萄汁酵母，裂殖酵母屬菌株，如粟酒裂殖酵母，漢遜酵母屬菌株，畢赤酵母屬菌株、Yarrowia屬菌株如Yarrowia lipolytica或克魯維酵母屬菌株如乳酸克魯維酵母。
在本說(shuō)明書中，術(shù)語(yǔ)“同源”或“同源序列”以一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基而分別區(qū)別于下文序列表中每一序列的氨基酸序列。同源序列可以是通過(guò)改變序列表中所示序列而造成的序列，序列改變例如為在氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)不同位點(diǎn)取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，在酶的任一個(gè)或兩個(gè)末端或在氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，或在氨基酸序列中一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。
但如對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯見(jiàn)的那樣，氨基酸的改變優(yōu)選是輕微的，即不顯著影響蛋白折疊或活性的保守性氨基酸取代，小的缺失，常為1至約30個(gè)氨基酸；小的氨基或羧基端延伸，如氨基端的甲硫氨酸殘基，最長(zhǎng)約20-25個(gè)殘基的小接頭肽，或用于純化的小延伸，如多組氨酸尾，抗原性表位或結(jié)合域。一般性描述見(jiàn)Ford等，蛋白表達(dá)和純化(Protein Expression and Purification)295-107，1991。保守性取代的例子有堿性氨基酸內(nèi)(如精氨酸、賴氨酸、組氨酸)、酸性氨基酸內(nèi)(如谷氨酸和天冬氨酸)、極性氨基酸內(nèi)(如谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸內(nèi)(如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸)、芳香氨基酸內(nèi)(如苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸)和小氨基酸內(nèi)(如甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸)。
這種取代可以在分子功能關(guān)鍵區(qū)之外進(jìn)行并仍產(chǎn)生活性多肽，這也是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯見(jiàn)的。對(duì)本發(fā)明DNA構(gòu)建物編碼的多肽活性關(guān)鍵的(從而優(yōu)選不進(jìn)行取代的)氨基酸，可用本領(lǐng)域已知的方法確定，如定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變(Cunningham和Wells，科學(xué)(Science)244，1081-1085，1989)。在后一技術(shù)中，在每分子中的每一個(gè)殘基上引入突變，然后測(cè)檢這些突變分子的生物活性(即纖維素酶活性)，以確定對(duì)分子活性至關(guān)重要的氨基酸殘基。底物-酶作用位點(diǎn)也可通過(guò)晶體結(jié)構(gòu)分析確定，晶體結(jié)構(gòu)是用諸如核磁共振、晶體學(xué)或光親和標(biāo)記技術(shù)測(cè)定的。例如見(jiàn)de Vos等，科學(xué)，255306-312，1992；Smith等，分子生物學(xué)雜志(J.Mol.Biol.)224899-904，1992；Wlodaver等，F(xiàn)EBS Lett 30959-64，1992。
氨基酸序列的改變可適當(dāng)?shù)赝ㄟ^(guò)改變酶的編碼DNA來(lái)進(jìn)行，如按已熟知的操作進(jìn)行定點(diǎn)誘變或隨機(jī)誘變或這些技術(shù)的組合?；蛘?，同源序列可以是來(lái)自與下文序列表中每一氨基酸序列相應(yīng)的纖維素酶不同來(lái)源的酶序列。因此，“同源”可以指例如在一定條件下(如在5×SSC中預(yù)浸，在20％甲酰胺、5×Denhardt溶液、pH6.8的50mM磷酸鈉、和50mg超聲變性牛胸腺DNA溶液中～40℃預(yù)雜變l小時(shí)，然后在補(bǔ)有100mM ATP的相同溶液～40℃雜變18小時(shí))與具有原氨基酸序列的纖維素酶的編碼DNA所雜交的相同探針雜交的DNA編碼的多肽。這種同源序列一般與下文序列表中所示的每種氨基酸序列分別具有至少50％的同源程度(按一致性計(jì))，例如至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或甚至95％。
上述同源性是按兩個(gè)序列間一致性程度確定的，顯示一種序列衍生于另一序列。這種同源性可適當(dāng)?shù)亟柚诒绢I(lǐng)域已知的計(jì)算機(jī)程序測(cè)定，如GCG程序包中提供的GAP(Needleman，S.B.和Wunsch，C.D.，分子生物學(xué)雜志，48443-453，1970)。染色的纖維素織物本發(fā)明方法可應(yīng)用于欲在其表面形成局部顏色密度變化的任何類型的染色纖維素織物。具有特別商業(yè)意義的例子是斜紋粗棉布denim，特別是用于制藍(lán)牛仔服等的靛藍(lán)染色的denim。
可以以未縫制的織物或從這種織物制得的縫好的衣物形式處理織物。用本發(fā)明方法處理新的潔凈織物或衣物特別重要。成分1第一成分是一種在pH7顯示其至少30％最佳活性的第5或7族纖維素酶。其存在量為防止回染的有效量，一般為0.05～5mg/l(按純酶蛋白計(jì))，特別是0.l-0.5/l；一般相當(dāng)于10-1000ECU/I的活性，特別是100-1000ECU/l的活性；或者0.5-100ECU/g織物的活性。第5族纖維素酶用于本發(fā)明的第5族纖維素酶能夠水解纖維三糖和/或?qū)ο趸交?β-1，4-纖維二糖苷(PNP-Cel)；該纖維素酶可對(duì)纖維三直接作用，將其水解成纖維二糖而無(wú)葡萄糖形成。纖維素酶水解PNP-Cel的能力可用下述測(cè)定方法測(cè)定，如果該測(cè)定方法給出大于0.1μmol PNP/分鐘/ECU的結(jié)果，則認(rèn)為該纖維素酶符合該條件。
第5族纖維素酶優(yōu)選不含有任何纖維素結(jié)合域。它可以是來(lái)自細(xì)菌菌株如芽孢桿菌屬或梭菌屬的堿性纖維素酶(如內(nèi)切葡聚糖酶)。
一種這樣的第5族纖維素酶是來(lái)自芽孢桿菌株KSM-64(FERM BP-2886)的內(nèi)切葡聚糖酶。在JP-A4-190793(Kao)和Sumitomo等，生物科學(xué)生物技術(shù)生物化學(xué)(Biosci.Biotech.Biochem.)，56(6)，872-877(1992)中描述了這種纖維素酶和其氨基酸序列。
另一種第5族纖維素酶是來(lái)自KSM-635株(FERM BP-1485)的內(nèi)切葡聚糖酶。在JP-A1-281090(Kao)、US4945 053和Y.Ozaki等，普通微生物學(xué)雜志(Journal of GeneralMicrobiology)，1990，136卷，1973-7979頁(yè)中描述了這種纖維素酶和其氨基酸序列。在上述測(cè)定方法中其對(duì)PNP-Cel的活性為0.18μmol PNP/分鐘/ECU。
第三個(gè)第5族纖維素酶是來(lái)自1139株的內(nèi)切葡聚糖酶。在Fukumori F.等，普通微生物學(xué)雜志，1322329-2335(1986)和JP-A 62-232386(Riken)中描述了該纖維素酶和其氨基酸序列。
第四種第5族纖維素酶是來(lái)自遲緩芽孢桿菌NCIMB 40250的內(nèi)切葡聚糖酶Endo 3A，描述在WO 91/107324(Novo Nordisk)。后來(lái)發(fā)現(xiàn)其中描述的氨基酸序列不正確，改正的序列示于SEQ IDNo1中。該纖維素酶對(duì)PNP-Cel的活性為0.44μmol PNP/分鐘/ECU。
第五種第5族纖維素酶是來(lái)自芽孢桿菌株NCIMB 40482的纖維素酶，其表觀分子量為約45kD，描述在WO 94/01532(NovoNordisk)中。其對(duì)PNP-Cel的活性為0.22μmol PNP/分鐘/ECU。
第六種第5族纖維素酶是來(lái)自解纖維梭菌的內(nèi)切葡聚糖酶A，描述在E.Faure等，基因(Gene)，84(1)，39-46(1989)和Fierobe H-P等，細(xì)菌學(xué)雜志(J.Bacteriol.)173(24)，7956-7962(1991)。第7族纖維素酶用于本發(fā)明的第7族纖維素酶可來(lái)自真菌菌株，如在下述測(cè)定方法中測(cè)定的那樣，一般能夠直接水解纖維三糖成為纖維二糖和葡萄糖，還能夠水解PNP-Cel。
這種第7族纖維素酶可衍生自腐質(zhì)霉菌株，優(yōu)選H.insolens。一個(gè)例子是來(lái)自H.insolens菌株DSM 1800的內(nèi)切葡聚糖酶EGI，描述在WO 91/17244(Novo Nordisk)中。成熟的該纖維素酶具有該文

圖14中21-435位所示的415個(gè)氨基酸的序列，比活性為200 ECU/mg(基于純酶蛋白)。該纖維素酶還可在C-末端截去多達(dá)18個(gè)氨基酸，含有至少397個(gè)氨基酸。例如，可將其截至402、406、408或412個(gè)氨基酸。另一例子是稱為內(nèi)切葡聚糖酶EG I*的其變體，描述在WO 95/24471(Novo Nordisk)中，具有其中圖3所示的402個(gè)氨基酸的序列。
或者，第7族纖維素酶可來(lái)自毀絲霉屬的菌株，優(yōu)選M.thermophila，最優(yōu)選菌株CBS 117.65。一個(gè)實(shí)例是WO 95/24471中描述的內(nèi)切葡聚糖酶，其含有其中圖6中所示序列的21-420位氨基酸和任選的1-20位和/或421-456位氨基酸。
另一情況是，第7族纖維素酶來(lái)自鐮孢屬菌株，優(yōu)選尖鐮孢。一個(gè)實(shí)例是WO 91/17244(Novo Nordisk)和Sheppard，P.O.等，基因150163-167，1994中描述的來(lái)自尖鐮孢的內(nèi)切葡聚糖酶。在后來(lái)的文獻(xiàn)中給出了正確的氨基酸序列。該纖維素酶的比活性為350 ECU/mg。成分2第二成分是機(jī)械磨損劑和/或磨損性纖維素酶。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中聯(lián)合使用機(jī)械磨損劑和磨損性纖維素酶作為第二成分。
機(jī)械磨損劑的例子有浮右、熱擴(kuò)張的珍珠巖和磨損元件(如磨球)。
磨損性纖維素酶是起磨損或顏色消除作用的纖維素酶，如EP220013(Novo Nordisk A/S)所述，其在pH7顯示其最佳活性的至少30％。它可以是有纖維素結(jié)合域的第12或45族纖維素酶。
用于本發(fā)明的第45族纖維素酶可來(lái)自腐質(zhì)霉屬菌株，優(yōu)選H.insolens。一個(gè)實(shí)例為稱為EGV的內(nèi)切葡聚糖酶，其來(lái)自H.insolens菌株DSM 1800，分子量為～43kD。WO 91/17243(NovoNordisk)中描述了該纖維素酶和其氨基酸序列。其比活性為430ECU/mg。
用于本發(fā)明的第12族纖維素酶可來(lái)自木霉屬菌株，優(yōu)選T.longibrachiatum。一個(gè)實(shí)例是WO 94/21801(Genencor)中描述的內(nèi)切葡聚糖酶EG III，其中顯示了其氨基酸序列。
第二成分優(yōu)選以形成局部顏色密度變化的磨損有效量存在。如果第二成分是一種磨損性纖維素酶，其一般存在量為0.05-5mg/l(按純酶蛋白計(jì))，特別是0.1-0.5mg/l；一般相當(dāng)于10-1000ECU/l的活性，特別是100-1000 ECU/I；或0.1-100ECU/g織物，特別是0.5-10 ECU/g的活性。操作條件本發(fā)明方法可以在常用于石洗的洗衣機(jī)(如washer-extractor)中在常規(guī)條件下進(jìn)行。典型的條件是溫度40-60℃，織物液體比1∶3到1∶20，15分鐘到2小時(shí)。也可以使用常規(guī)添加劑，如緩沖劑、表面活性劑(陰離子性和/或非離子性)和/或聚合物(如PVP、聚丙烯酸酯和聚丙烯酰胺)。纖維素酶活性物的測(cè)定方法纖維素酶內(nèi)切活性通過(guò)在一振動(dòng)粘度計(jì)中測(cè)定CMC(羧甲基纖維素)粘度的下降來(lái)測(cè)定。1 ECU(內(nèi)切纖維素酶單位)是40℃下在0.1M磷酸緩沖液(pH7.5)中與1ml 3.40g/L CMC溶液(商品名Aqualon 7LFD)一起保溫時(shí)，引起粘度降低10倍的酶量。對(duì)PNP-Cel水解的測(cè)定方法纖維素酶水解對(duì)硝基苯基-β-1，4-纖維二糖苷(PNP-Cel)的能力通過(guò)穩(wěn)態(tài)動(dòng)力學(xué)測(cè)定，即在405nm直接測(cè)定產(chǎn)物對(duì)硝基苯酚(PNP)的黃色。測(cè)定條件為37℃，pH7.5(0.1M磷酸緩沖液)。水解速率(每分鐘的PNP微摩爾數(shù))與纖維素酶活性(ECU)比照，結(jié)果用μmol PNP/分鐘/ECU表示。
實(shí)施例1按如下用各種纖維素酶組合處理靛藍(lán)染色的denim和白棉布片pH 7(自來(lái)水配制的磷酸緩沖液)溫度 55℃設(shè)備 Launderometer(多個(gè)150ml的容器)成分1來(lái)自H.insolens DSM 1800的EG I 0-2.3ECU/l，如下所示成分2 來(lái)自H.insolens DSM 1800的EG V 0或0.27 ECU/lDenim 5g/容器白棉布2片/容器時(shí)間 2小時(shí)處理后，收集棉絨并測(cè)定，作為纖維素酶磨損作用的表達(dá)形式。處理后測(cè)定白布片的反射(680mm處的DR，相對(duì)于無(wú)纖維素酶的實(shí)驗(yàn))，作為回染的表達(dá)。結(jié)果
用成分2纖維素酶得到了良好的磨損。加入成分1纖維素酶顯著降低了回染。實(shí)施例2在與實(shí)施例1中相同的條件下測(cè)試了下列纖維素酶成分1來(lái)自H.insolens DSM 1800的EG I或EG I*0、0.67或1.33ECU/ml。
成分2來(lái)自H.insolens DSM l800的EG V 0.7 ECU/ml通過(guò)測(cè)定每次處理后的棉絨量評(píng)價(jià)磨損效果。每個(gè)實(shí)驗(yàn)中都觀察到了良好的磨損效果，加入EG I或EG I*略有提高。
從680nm處濾液吸光度的提高和白色織物在420mm處反射的提高確定回染的抑制。結(jié)果表明，用EG I和EG I*得到了基本相同的回染抑制。實(shí)施例3第一步，12片(5×5cm)藍(lán)色denim與80ml磷酸緩沖液(pH7.0)和0.8ml非離子性表面活性劑于50℃攪拌30分鐘，然后過(guò)濾，得到藍(lán)色液體。
第二步，5片白綿布與200ml藍(lán)液在50℃下0-100 ECU/l纖維素酶存在下保溫30分鐘。試驗(yàn)纖維素酶是截短至406、408和412氨基酸的來(lái)自H.insolens DSM 1800的EG I的混合物。
漂洗和干燥后，從由Dr.Lange Micro Color Data Station測(cè)定的白布片f亮度(L*)的提高確定回染的抑制。結(jié)果(5片的平均值)
結(jié)果顯示EG I對(duì)降低藍(lán)denim到白棉布的回染是有效的。實(shí)施例4按與實(shí)施3中相同的方式測(cè)定了本發(fā)明的堿性芽孢桿菌第5族纖維素酶。結(jié)果如下
結(jié)果證明該纖維素酶對(duì)降低回染也有效。實(shí)施例5
將4片(5×5cm)脫漿藍(lán)denim和8片(5×5cm)白色絲光棉布在含有本發(fā)明的第5或7族纖維素酶及第45族纖維素酶(每種纖維素酶200 ECU/L)的400ml 50mM磷酸緩沖液(pH7.0)中攪拌。30分鐘后，在流動(dòng)自來(lái)水中漂洗織物并風(fēng)干。
第5族纖維素酶是堿性芽孢桿菌纖維素酶。第7族纖維素酶是來(lái)自H.insolens截短至408氨基酸的EG I。第45族纖維素酶是來(lái)自H.insolens DSM 1800的EG V。
測(cè)定兩種織物的亮度(L*)和上清液在680nm的吸光值。結(jié)果<
>脫漿棉布的結(jié)果顯示亮度增加，即通過(guò)加入本發(fā)明的第二成分纖維素酶降低了回染。
結(jié)果還表明藍(lán)色denim的亮度增加，即回染降低。肉眼檢查表明用本發(fā)明方法處理的denim具有更顯著的局部顏色密度變化。
上清液的吸光度數(shù)據(jù)表明處理后有更多的顏料留在液體中。
序列表(1)一般信息(i)申請(qǐng)人(A)名稱Novo Nordisk A/S(B)街道Novo Alle(C)城市Bagsvaerd(E)國(guó)家丹麥(F)郵編DK-2880(G)電話+45-4444-8888(H)傳真+45-4449-3256(ii)發(fā)明名稱防止石洗中回染的方法(iii)序列數(shù)1(iv)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)媒介類型軟盤(B)計(jì)算機(jī)IBM PC兼容(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，#1.30版(EPO)(2)SEQ ID No1的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度551個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(E)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)原始來(lái)源(A)生物體遲緩芽孢桿菌(B)菌株NCIMB 40250(xi)序列描述SEQ ID NO1Ala Pro Ala Val Pro Phe Gly Gln Leu Lys Val Gln Gly Asn Gln Leu1 5 10 15Val Gly Gln Ser Gly Gln Ala Val Gln Leu Val Gly Met Ser Ser His20 25 30Gly Leu Gln Trp Tyr Gly Asn Phe Val Asn Lys Ser Ser Leu Gln Trp35 40 45Met Arg Asp Asn Trp Gly Ile Asn Val Phe Arg Ala Ala Met Tyr Thr50 55 60Ala Glu Asp Gly Tyr Ile Thr Asp Pro Ser Val Lys Asn Lys Val Lys65 70 75 80Glu Ala Val Gln Ala Ser Ile Asp Leu Gly Leu Tyr Val Ile Ile Asp85 90 95Trp His Ile Leu Ser Asp Gly Asn Pro Asn Thr Tyr Lys Ala Gln Ser100 105 110Lys Ala Phe Phe Gln Glu Met Ala Thr Leu Tyr Gly Asn Thr Pro Asn115 120 125Val Ile Tyr Glu Ile Ala Asn Glu Pro Asn Gly Asn Val Ser Trp Ala130 135 140Asp Val Lys Ser Tyr Ala Glu Glu Val Ile Thr Ala Ile Arg Ala Ile145 150 155 160Asp Pro Asp Gly Val Val Ile Val Gly Ser Pro Thr Trp Ser Gln Asp165 170 175Ile His Leu Ala Ala Asp Asn Pro Val Ser His Ser Asn Val Met Tyr180 185 190Ala Leu His Phe Tyr Ser Gly Thr His Gly Gln Phe Leu Arg Asp Arg195 200 205Ile Thr Tyr Ala Met Asn Lys Gly Ala Ala Ile Phe Val Thr Glu Trp210 215 220Gly Thr Ser Asp Ala Ser Gly Asn Gly Gly Pro Tyr Phe Pro Gln Ser225 230 235 240Lys Glu Trp Ile Asp Phe Leu Asn Ala Arg Lys Ile Ser Trp Val Asn245 250 255Trp Ser Leu Ala Asp Lys Val Glu Thr Ser Ala Ala Leu Met Pro Gly260 265 270Ala Ser Pro Thr Gly Gly Trp Thr Asp Ala Gln Leu Ser Glu Ser Gly275 280 285Lys Trp Val Arg Asp Gln Ile Arg Gln Ala Thr Gly Gly Gly Ser Gly290 295 300Asn Pro Thr Ala Pro Ala Ala Pro Thr Asn Leu Ser Ala Thr Ala Gly305 310 315 320Asn Ala Gln Val Ser Leu Thr Trp Asn Ala Val Ser Gly Ala Thr Ser325 330 335Tyr Thr Val Lys Arg Ala Thr Thr Ser Gly Gly Pro Tyr Thr Asn Val340 345 350Ala Thr Gly Val Thr Ala Thr Ser Tyr Thr Asn Thr Gly Leu Thr Asn355 360 365Gly Thr Thr Tyr Tyr Tyr Val Val Ser Ala Ser Asn Ser Ala Gly Ser370 375 380Ser Ala Asn Ser Ala Gln Ala Ser Ala Thr Pro Ala Ser Gly Gly Ala385 390 395 400Ser Thr Gly Asn Leu Val Val Gln Tyr Lys Val Gly Asp Thr Ser Ala405 410 415Thr Asp Asn Gln Met Lys Pro Ser Phe Asn Ile Lys Asn Asn Gly Thr420 425 430Thr Pro Val Asn Leu Ser Gly Leu Lys Leu Arg Tyr Tyr Phe Thr Lys435 440 445Asp Gly Thr Ala Asp Met Ser Ala Ser Phe Asp Trp Ala Gln Ile Gly450 455 460Ala Ser Asn Val Ser Ala Ala Phe Ala Asn Phe Thr Gly Ser Asn Thr465 470 475 480Asp Thr Tyr Val Glu Leu Ser Phe Ser Ala Gly Ser Gly Ser Ile Pro485 490 495Ala Gly Gly Gln Thr Gly Asp Ile Gln Leu Arg Met Tyr Lys Thr Asp500 505 510Trp Ser Asn Phe Asn Glu Ala Asn Asp Tyr Ser Tyr Asp Gly Ala Lys515 520 525Thr Ala Tyr Ala Asp Trp Asn Arg Val Thr Leu His Gln Asn Gly Thr530 535 540Leu Val Trp Gly Thr Thr Pro545 550
權(quán)利要求
1.一種在染色纖維素織物表面形成局部顏色密度變化的方法，包括將織物在pH在6.5-9范圍內(nèi)并含有下列成分的水介質(zhì)中攪拌第一成分，它是(a)能夠水解纖維三糖和/或?qū)ο趸交?β-1，4-纖維二糖苷的第5族纖維素酶，或(b)第7族纖維素酶，和第二成分，它是(a)機(jī)械磨損劑或(b)具有磨損活性的纖維素酶；其中每種纖維素酶在pH7下顯示其最大活性的至少30％。
2.權(quán)利要求1的方法，其中織物是靛藍(lán)染色的denim。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中第一成分是來(lái)自細(xì)菌菌株、優(yōu)選芽孢桿菌屬菌株的無(wú)纖維素結(jié)合域的第5族纖維素酶。
4.權(quán)利要求3的方法，其中第5族纖維素酶來(lái)自選自芽孢桿菌KSM-64、1139、KSM-635、NCIMB 40482和遲緩芽孢桿菌NCIMB40250的芽孢桿菌菌株，或者與這種纖維素酶具有至少60％同源性的纖維素酶。
5.權(quán)利要求1或2的方法，其中第一成分是來(lái)自真菌菌株、優(yōu)選腐質(zhì)霉、最優(yōu)選H.insolens的第7族纖維素酶。
6.權(quán)利要求5的方法，其中第7族纖維素酶是來(lái)自H.insolens菌株DSM 1800的內(nèi)切葡聚糖酶EG I，或與所述EG I具有至少60％同源性的纖維素酶。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的方法，其中第一成分的存在量為0.1-0.5mg/l，或濃度為100-1000ECU/l。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法，其中第二成分包括機(jī)械磨損劑和磨損性纖維素酶。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中第二成分是來(lái)自真菌菌株、優(yōu)選腐質(zhì)霉菌株、最優(yōu)選H.insolens的帶有纖維素結(jié)合域的第45族纖維素酶。
10.權(quán)利要求9的方法，其中第45族纖維素酶是來(lái)自H.insolens菌株DSM 1800的內(nèi)切葡聚糖酶EG V，或?yàn)榕c所述EG V有至少60％同源性的纖維素酶。
11.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的方法，其中除指明的第一和第二成分外基本沒(méi)其他纖維素酶存在。
12.一種纖維素酶組合物，其包括第一成分，它是(a)能夠水解纖維三糖和/或?qū)ο趸交?β-1，4-纖維二糖苷的第5族纖維素酶，或(b)第7族纖維素酶，和第二成分，它是(a)機(jī)械磨損劑或(b)具有磨損活性的纖維素酶；其中每種纖維素酶在pH7下顯示其最大活性的至少30％。
13.權(quán)利要求15的纖維素酶組合物，其進(jìn)一步表征如權(quán)利要求2-11任一項(xiàng)中所述。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種在染色纖維素織物表面形成局部顏色密度變化的方法,和用于該方法的組合物。
文檔編號(hào)D06P5/00GK1242040SQ96197599
公開(kāi)日2000年1月19日 申請(qǐng)日期1996年9月3日 優(yōu)先權(quán)日1995年9月8日
發(fā)明者大西真博, M·費(fèi)奇, A·H·托福特, M·舒萊恩 申請(qǐng)人:諾沃挪第克公司