專利名稱：一種生物芯片醛基化載玻片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物芯片載體玻片，特別涉及到采用醛基化方法制備的一種生物芯片 載玻片。載玻片表面醛基化修飾，便于氨基修飾的核酸探針和蛋白質(zhì)性質(zhì)的抗原抗體以及其 它物質(zhì)的化學(xué)結(jié)合。本發(fā)明適合于核酸類、蛋白質(zhì)類和其它種類的探針、模板片段點(diǎn)制微陣 列芯片，具有牢固的特異的化學(xué)鍵結(jié)合特點(diǎn)，為生物芯片的制備提供可靠的載體。
背景技術(shù)：
生物芯片以其高通量、多靶位的檢測(cè)模式正在被越來(lái)越多地應(yīng)用于生物科學(xué)領(lǐng)域。以載 玻片為載體的微陣列芯片，更以其高效、高通量、低價(jià)位等特點(diǎn)，已經(jīng)廣泛用于基礎(chǔ)研究和 臨床篩査、輔助診斷。
微陣列芯片包括寡核苷酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗體芯片等，以特殊化學(xué)方法 處理后的載玻片為載體，將各種探針或靶標(biāo)片段以化學(xué)鍵結(jié)合的方式固定在玻片表面，形成 可用于雜交反應(yīng)或抗原抗體反應(yīng)的微陣列芯片。
作為微陣列芯片載體的載玻片，表面化學(xué)修飾方法很多，包括氨基化、醛基化、巰基化、 環(huán)氧乙基化等，都可以達(dá)到目標(biāo)片段與玻片表面化學(xué)結(jié)合的目的。但是，對(duì)于以上任何一種 表面化學(xué)修飾方法，每家的制備技術(shù)和工藝都有差別，并且總體的技術(shù)方法都還不成熟，制 備的載玻片存在本底過(guò)高、表面均一度不夠、結(jié)合力不夠、雜交分別率不好、點(diǎn)樣點(diǎn)不規(guī)整 等問(wèn)題，影響了微陣列芯片的后續(xù)制備和總體質(zhì)量，阻礙了微陣列芯片技術(shù)的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用特殊技術(shù)和工藝制備的醛基化載玻片，該載玻片本底低、表 面均一、結(jié)合力強(qiáng)、雜交分別率高、點(diǎn)樣點(diǎn)大小和形狀規(guī)整。可以廣泛用于高質(zhì)量的寡核苷 酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗體芯片等的制備，從而很好地解決了上述問(wèn)題。
本發(fā)明提供的微陣列芯片用醛基化載玻片，制備程序如下-
1、 空白玻片處理工藝濃硫酸-重鉻酸鉀溶液浸泡8小時(shí)，水洗5次；氨水洗液(氨水過(guò) 氧化氫水=1: 1: 5)浸泡8小時(shí)，水洗5次；放入蒸餾水中，超聲洗滌5分鐘；IO(TC烘烤 45分鐘。
2、 氨基化處理工藝空白片放入氨基硅垸反應(yīng)液(95。/。乙醇600ml，冰醋酸600ul，氨基硅 垸12ml) 25分鐘，95%乙醇超聲洗滌5分鐘，蒸餾水超聲洗滌5分鐘，100'C45分鐘烘干。
33、醛基片制備工藝氨基片放入醛基化反應(yīng)液(25。/。戊二醛260ml+雙蒸水390ml)超聲5分 鐘，再非超聲反應(yīng)40分鐘，雙蒸水超聲洗滌3次，5分鐘/每次，取出室溫干燥。
通過(guò)以上特殊制備工藝，制成本發(fā)明醛基化載玻片，放置一周后，可以用于點(diǎn)樣制備微 陣列芯片。


圖1點(diǎn)樣制備成的微陣列芯片示意圖
1醛基化載玻片
2點(diǎn)樣制備的微陣列 圖2雜交后顯示陽(yáng)性探針點(diǎn)
1陽(yáng)性探針點(diǎn)
2陰性探針點(diǎn)
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明用下列實(shí)施例進(jìn)行解釋，目的只是為了解釋而不是以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例l:醛基化載玻片點(diǎn)樣制備微陣列芯片
如圖1所示，取本發(fā)明醛基化載玻片一張，貼上分隔圍欄作為雜交區(qū)，配以HLA-DR4 基因分型寡核苷酸探針(17條)，以及點(diǎn)樣液成分，通過(guò)點(diǎn)樣儀將探針點(diǎn)制在玻片上。探針 矩陣為，每個(gè)探針橫向重復(fù)3點(diǎn)，9個(gè)點(diǎn)一行，共6行。本發(fā)明醛基化玻片點(diǎn)制的探針點(diǎn)大 小均勻，形狀規(guī)整。
實(shí)施例2:通過(guò)雜交反應(yīng)檢驗(yàn)微陣列芯片的信號(hào)特性
將上述點(diǎn)制好的芯片放置過(guò)夜，用2XSSC和蒸餾水各洗滌1分鐘，晾干。取HLA-DR4 基因分型試劑的其它成分，擴(kuò)增1份己知基因型別的DNA樣本得到雜交模板。取PCR產(chǎn)物 2ul加到芯片雜交區(qū)，再加入雜交液(5xSSC) 8ul,芯片放到自動(dòng)雜交洗滌儀的槽內(nèi)，設(shè)定雜 交溫度52'C，雜交時(shí)間40分鐘。雜交后自動(dòng)洗滌和風(fēng)干。
采用GnenPix4100A掃描儀，掃描雜交信號(hào)，得到雜交結(jié)果掃描圖(如圖2所示)，并將 圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)，采用分析軟件，將以上數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成基因型別。結(jié)果分析得到的陽(yáng)性雜交點(diǎn) 和陰性雜交點(diǎn)與樣本基因序列和基因型別符合，從圖中可見(jiàn)，陽(yáng)性探針點(diǎn)信號(hào)強(qiáng)，陰性點(diǎn)本 底低，結(jié)合力和分辨力都很好，能夠滿足微陣列芯片的制備和雜交反應(yīng)要求。
權(quán)利要求
1、一種生物芯片醛基化載玻片，其特征在于醛基化載玻片是通過(guò)空白玻片處理工藝、氨基化處理工藝及醛基片制備工藝制備而成。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生物芯片醛基化載玻片，其特征還在于空白玻片處理工藝為濃硫酸-重鉻酸鉀溶液浸泡8小時(shí)，水洗5次；氨水洗液(氨水過(guò)氧化氫水=1: 1: 5)浸泡8小時(shí)，水洗5次；放入蒸餾水中，超聲洗滌5分鐘；100'C烘烤45分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生物芯片醛基化載玻片，其特征還在于氨基化處理工藝為空白片放入氨基硅垸反應(yīng)液(95%乙醇600ml，冰醋酸600ul，氨基硅烷12ml) 25 分鐘，95%乙醇超聲洗滌5分鐘，蒸餾水超聲洗滌5分鐘，100'C45分鐘烘干。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生物芯片醛基化載玻片，其特征還在于醛基片制備工藝為氨基片放入醛基化反應(yīng)液(25%戊二醛260ml+雙蒸水390ml)超聲5分鐘，再非超 聲反應(yīng)40分鐘，雙蒸水超聲洗滌3次，5分鐘/每次，取出室溫干燥。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物芯片醛基化載玻片，其特征還在于醛基化載玻片可以和寡核 苷酸、cDNA、抗原、抗體等探針和靶標(biāo)以化學(xué)鍵共價(jià)牢固結(jié)合。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物芯片醛基化載玻片，其特征在于醛基化載玻片可以廣泛用于 高質(zhì)量的寡核苷酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗體芯片等的制備。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物芯片載體玻片，特別涉及到采用醛基化方法制備的一種生物芯片載玻片。載玻片表面醛基化修飾，便于氨基修飾的核酸探針和蛋白質(zhì)性質(zhì)的抗原抗體以及其它物質(zhì)的化學(xué)結(jié)合。本發(fā)明適合于核酸類、蛋白質(zhì)類和其它種類的探針、模板片段點(diǎn)制微陣列芯片，具有牢固的特異的化學(xué)鍵結(jié)合特點(diǎn)，為生物芯片的制備提供可靠的載體。
文檔編號(hào)C03C17/00GK101486532SQ20081002586
公開(kāi)日2009年7月22日 申請(qǐng)日期2008年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月18日
發(fā)明者何蘊(yùn)韶, 帆 張, 明 李, 鋼 程, 胡守旺 申請(qǐng)人:中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司;廣州達(dá)泰生物工程技術(shù)有限公司