專利名稱：：具有酰基和亞烷基二醇部分的胰島素類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新?；葝u素類似物及其相關(guān)方面。
背景技術(shù)：
：胰島素是由胰的13細(xì)胞分泌的多肽激素。胰島素由命名為A和B鏈的2條多肽鏈組成，所述A和B鏈通過2個鏈間二硫鍵連接在一起。在人、豬和牛胰島素中，A和B鏈分別包含21和30個氨基酸殘基。然而，從物種到物種，在2條鏈中的不同位置中存在的氨基酸殘基中存在變異?；蚬こ痰膹V泛使用已使得可能通過交換一個或多個氨基酸殘基來制備天然存在的胰島素的類似物。胰島素用于治療糖尿病和與之關(guān)聯(lián)或起因于其的疾病。胰島素在維持正常代謝調(diào)節(jié)中是必需的。通常，胰島素通過注射施用。不幸的是，由于與維持葡萄糖水平的緊密控制所需的許多注射相關(guān)的不適，許多糖尿病患者不愿意采取強化治療。在口部施用后，胰島素在胃腸道中快速降解，并且不吸收到血流內(nèi)。因此，已研究了用于施用胰島素的可替代途徑，例如口部、直腸、經(jīng)皮和鼻途徑。然而，迄今這些施用途徑仍未導(dǎo)致足夠有效的胰島素吸收。數(shù)十年來，長效胰島素制劑和速效胰島素制劑都是可獲得的，并且許多患者每天采取2-4次注射。在過去數(shù)十年中，已證明維持血糖水平的緊密控制對于糖尿病患者是極其重要的。于2007年8月30日公開且具有公開號W02007/096431的國際專利申請?zhí)?NovoNordiskA/S)描述了具有不含亞烷基二醇部分的復(fù)合側(cè)鏈的胰島素。具有公開號W02006/082205的國際專利申請(NovoNordiskA/S)描述了具有與B鏈中的氨基酸連接的復(fù)合側(cè)鏈的胰島素。根據(jù)權(quán)利要求1，US6，444，641B1涉及包含脂肪酰鏈通過酰胺鍵與之連接的胰島素類似物的脂肪酸?；葝u素類似物，其中所述脂肪胰島素類似物具有比胰島素的等電點高的等電點。根據(jù)權(quán)利要求1，W02006/082205(NovoNordiskA/S)涉及胰島素衍生物，其具有與親本胰島素分子的B鏈的N末端氨基酸殘基的a-氨基或B鏈中存在的Lys殘基的e-氨基附著的側(cè)鏈。Pharm.Res.^1(2004)，1498-1504涉及地特胰島素(insulindetemir)的延長機制。定義此處，術(shù)語胰島素包含天然存在的胰島素，例如人胰島素，以及胰島素類似物。此處，術(shù)語氨基酸殘基包含從其中氫原子已從氨基中去除和/或羥基已從羧基中去除和/或氫原子已從巰基中去除的氨基酸。不精確地，氨基酸殘基可以叫做氨基酸。此處，術(shù)語肽殘基包含從其中氫原子已從氨基中去除和/或羥基已從羧基中去除和/或氫原子已從巰基中去除的肽。不精確地，肽殘基可以叫做肽。此處，術(shù)語胰島素類似物包含這樣的多肽，其具有在形式上可以通過缺失和/或置換(替換)在天然胰島素中存在的一個或多個氨基酸殘基，并且通過給A21氨基酸殘基添加一個或多個氨基酸殘基，而得自天然存在的胰島素例如人胰島素的結(jié)構(gòu)的分子結(jié)構(gòu)。優(yōu)選地，添加和/或置換的氨基酸殘基是可編碼氨基酸殘基。例如，A鏈可以在其C末端處6延伸例如1、2、3或4個氨基酸殘基(與人胰島素相比較)，其位置分別表示為A22、A23、A24和A25。即使胰島素類似物具有在A21/A22位置處的延伸，在所述胰島素類似物中的其他位置處也可能存在缺失。類似于在人胰島素中，在本發(fā)明的胰島素類似物中，A21氨基酸殘基與在20位置的Cys殘基連接，所述Cys殘基參與鏈間二硫鍵的形成。此處，術(shù)語親本胰島素或親本胰島素類似物也用于胰島素類似物。主要地，當(dāng)與攜帶側(cè)鏈的胰島素類似物區(qū)分時，使用術(shù)語親本，所述側(cè)鏈例如可以通過?；瘜W(xué)引入。此處，術(shù)語如A1、A2、A3等分別指示在胰島素A鏈中的位置1、2和3(從N末端計數(shù))。類似地，術(shù)語如Bl、B2、B3等分別指示在胰島素B鏈中的位置1、2和3(從N末端計數(shù))。使用關(guān)于氨基酸的單字母密碼，術(shù)語如A21A、A21G和A21Q指定A21位置中的氨基酸分別是A、G和Q。使用關(guān)于氨基酸的三字母密碼，相應(yīng)表達(dá)分別是AlaA21、GlyA21和GlnA21。此處，術(shù)語如desB29和desB30分別指示缺乏B29或B30氨基酸殘基的胰島素類似物。胰島素類似物以及A和B鏈中的位置編號如此完成，從而使得親本化合物是具有用于其的編號的人胰島素。此處，表達(dá)"可編碼的"與術(shù)語如氨基酸、氨基酸殘基、肽或肽殘基結(jié)合用于指示可以由核苷酸三聯(lián)體("密碼子")編碼的氨基酸、氨基酸殘基、肽或肽殘基，參見基因工程。此處，術(shù)語突變包含氨基酸序列中的任何改變(用可編碼氨基酸的置換和插入以及缺失)。關(guān)于速效胰島素或推注(bolus)胰島素意指具有與正常人胰島素類似或更快的作用快速發(fā)作和/或與正常人胰島素的那種相似或僅略微更長的作用持續(xù)時間的胰島素。關(guān)于延效胰島素或基礎(chǔ)胰島素意指具有比常態(tài)或正常人胰島素更長的作用持續(xù)時間的胰島素。高物理穩(wěn)定性意指小于人胰島素那種的50%的原纖維形成趨勢。原纖維形成可以通過在給定條件下起始的原纖維形成前的滯后時間描述。具有胰島素受體和IGF-1受體親和力的多肽是在合適的結(jié)合測定中能夠與胰島素受體和人IGF-1受體相互作用的多肽。此種受體測定是本領(lǐng)域眾所周知的，并且在實施例中進(jìn)一步描述。本發(fā)明的?；葝u素類似物將不與IGF-1受體結(jié)合或?qū)⑴c所述受體具有相當(dāng)?shù)陀H和力。更確切地，本發(fā)明的?；葝u素類似物將具有與人胰島素的那種基本上相同量級或更少的針對IGF-1受體的親和力。為了方便起見，此處在氨基酸名稱后在括號中為常見三字母密碼和單字母密碼甘氨酸(Gly&G)、脯氨酸(Pro&P)、丙氨酸(Ala&A)、纈氨酸(Val&V)、亮氨酸(Leu&L)、異亮氨酸(Ile&I)、甲硫氨酸(Met&M)、半胱氨酸(Cys&C)、苯丙氨酸(Phe&F)、酪氨酸(Tyr&Y)、色氨酸(Trp&W)、組氨酸(His&H)、賴氨酸(Lys&K)、精氨酸(Arg&R)、谷氨酰胺(Gln&Q)、天冬酰胺(Asn緒)、谷氨酸(Glu&E)、天冬氨酸(Asp&D)、絲氨酸(Ser&S)和蘇氨酸(Thr&T)。如果由于分型錯誤，存在與常用密碼的偏離，那么應(yīng)用常用密碼。在本發(fā)明的胰島素中存在的氨基酸優(yōu)選是可以由核酸編碼的氨基酸。氨基酸如Glu和Asp可以為a、Y、L或D形式。在說明書和實施例中已使用下述縮寫Da是道爾頓(分子量)，kDa是千道爾頓(=1000Da)，Mw是分子量，0Su是1-琥珀酰亞胺氧基=2，5-二氧吡咯烷_1_基氧，RT是室溫，SA是芥子酸和Su是l-琥珀酰亞胺基二2，5-二氧吡咯烷-1-基，DCM是二氯甲烷，7DIEA(和DIPEA)是N，N_二異丙基乙胺，TSTU是N，N，N，，N，_四甲基-O-(N-琥珀酰亞胺基)脲陽離子四氟硼酸鹽，Tris是三(羥甲基)氨基甲烷，CV是柱體積，NMP是N-甲基吡咯烷_2-酮，OTBU是叔丁氧基，OEG是氨基酸8-氨基-3，6-二氧雜辛酸，HSA是人血清清蛋白，TNBS是2，4，6-三硝基苯磺酸，HOBT(或HOBt)是l-羥基苯并三唑，HOAt是1-羥基_7-氮雜苯并三唑，NaOH是氫氧化鈉，DMF是N，N_二甲基甲酰胺，THF是四氫呋喃，TFA是三氟乙酸，mmol是毫摩爾，F(xiàn)moc是芴_9_基甲氧羰基，OEG是8-氨基_3，6_二氧雜辛酸(8_amino_3，6_dioxaoctanoicacid)(或其殘基)，gGlu(此處也口頓YGlu)是Y_谷氨酸，并且在實施例48中，為了簡便，下述注釋用于指定本發(fā)明和現(xiàn)有技術(shù)的胰島素的?；糠中蛄蠧18是十八烷二酰(octadecanedioyl)，C20是二十烷二酰(eicosanedioyl)，gGlu是Y-谷氨酸，PEG3是3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸，PEG5是3-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸和PEG7是3-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]丙酸(完整結(jié)構(gòu)/序列可以在實施例中找到)。發(fā)明目的本發(fā)明的目的是克服或改善現(xiàn)有技術(shù)的至少一個缺點，或提供有用的替代物。本發(fā)明的一個目的是提供具有良好生物利用率的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個目的是提供作為速效胰島素有用的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個目的是提供可以肺施用的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個目的是提供具有延長的作用概況的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個目的是提供作為基礎(chǔ)胰島素有用的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個目的是提供具有高胰島素受體結(jié)合親和力的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個方面是改善胰島素的體內(nèi)半衰期。本發(fā)明的另一個目的是提供具有比人胰島素引起低血糖(hypoglycaemic)狀況的更低(lover)趨勢的胰島素衍生物。本發(fā)明的另一個方面是發(fā)現(xiàn)特別是在貯存2年后具有令人滿意的物理穩(wěn)定性的本發(fā)明的另一個方面是發(fā)現(xiàn)特別是在貯存2年后具有令人滿意的化學(xué)穩(wěn)定性的本發(fā)明的另一個方面是發(fā)現(xiàn)特別是在貯存2年后具有令人滿意的蛋白水解穩(wěn)定性的胰島素。本發(fā)明的另一個方面是發(fā)現(xiàn)具有令人滿意的溶解度的胰島素。發(fā)明概述簡言之，本發(fā)明涉及酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物包括與A21氨基酸殘基的C末端連接的氨基酸殘基、或與A21氨基酸殘基的C末端連接的最高達(dá)4個氨基酸殘基的肽殘基，特征在于包括亞烷基二醇部分的?；糠峙cA22位置中的賴氨酸殘基附著、或與A21氨基酸殘基的C末端附著的肽殘基中存在的賴氨酸殘基附著。因此，胰島素類似物包括A22位置中的氨基酸。已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在高HSA(人血清清蛋白)濃度例如4.5%HSA的存在下進(jìn)行的胰島素受體結(jié)合測定中測量時，本發(fā)明的胰島素(包含一個或多個亞烷基二醇部分的?；葝u素類似物)具有比不含亞烷基二醇部分的相似?；葝u素類似物更高的胰島素受體結(jié)合親和力。優(yōu)選實施方案描述令人驚訝的是，本發(fā)明的酰化胰島素類似物在高HSA濃度的存在下顯示良好生物利用率和高胰島素受體結(jié)合親和力。在根據(jù)本發(fā)明的酰化胰島素類似物中存在的胰島素類似物可以在形式上舉例說明為具有連接于位置A21中的氨基酸殘基C末端的一個氨基酸殘基的人胰島素、或具有連接于位置A21中的氨基酸殘基C末端的最高達(dá)4個氨基酸殘基的肽殘基的人胰島素，和任選地，其中位置A1-A21和B1-B30中的一個或多個氨基酸殘基已缺失或由另一個氨基酸殘基置換。關(guān)于命名，與位置A21中的氨基酸殘基連接的氨基酸殘基在A22位置中。類似地，與位置A21中的氨基酸殘基連接的肽殘基中存在的氨基酸殘基在位置A22、A23、A24或A25中。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以在形式上由胰島素類似物和具有集體公式(I)的含亞烷基二醇的酰基部分構(gòu)建Acy-AAln-AA2m-AA3p-，其中Acy、AAl、AA2、AA3、n、m和p如本文定義，例如，通過形式上去除來自胰島素類似物中的氨基的氫原子且使其與式(I)的側(cè)鏈附著。在本發(fā)明的?；葝u素類似物中，式(I)的包含亞烷基二醇的?；糠峙c在A21氨基酸殘基的C末端側(cè)面或末端上的位置中的賴氨酸殘基連接。例如，式(I)的包含亞烷基二醇的?；糠挚梢耘c位置A22中的賴氨酸殘基連接。如果式(I)的包含亞烷基二醇的?；糠峙c和位置A21中的氨基酸殘基連接的肽殘基連接，那么式(I)的包含亞烷基二醇的?；糠峙c位置A22、A23、A24或A25的任何一個中的賴氨酸殘基連接。如本文提及的，式Acy-AAln-AA2m-AA3p-中存在的酰基源于脂肪酸或脂肪二酸。此處，術(shù)語"脂肪酸"包含具有至少2個碳原子且飽和或不飽和的線性或分支、脂族羧酸。脂肪酸的非限制性例子是肉豆蔻酸、棕櫚酸和硬脂酸。此處，術(shù)語"脂肪二酸"包含具有至少2個碳原子且飽和或不飽和的線性或分支、脂族二羧酸。脂肪二酸的非限制性例子是琥珀酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、十二烷二酸、十四烷二酸、十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸和二十烷二酸。指定為AA1的中性環(huán)狀氨基酸殘基是包含飽和6-元碳環(huán)、任選包含氮雜原子的氨基酸，并且優(yōu)選地環(huán)是環(huán)己烷環(huán)或哌啶環(huán)。優(yōu)選地，這種中性環(huán)狀氨基酸的分子量在約100至約200Da的范圍中。指定為AA2的酸性氨基酸殘基是包含2個羧酸基團(tuán)和1個伯或仲氨基、具有最高達(dá)約200Da的分子量的氨基酸。指定為AA3的中性、包含亞烷基二醇的氨基酸殘基是在一個末端處包含羧酸官能團(tuán)和在另一個末端處包含氨基官能團(tuán)的亞烷基二醇部分，任選寡或聚亞烷基二醇部分。此處，術(shù)語亞烷基二醇包含寡和聚亞烷基二醇部分以及單亞烷基二醇部分。聚亞烷基二醇包括基于聚乙二醇、基于聚丙二醇和基于聚亞丁基二醇的鏈，即基于重復(fù)單位-CH2CH20-、-CH2CH2CH20-或_CH2CH2CH2CH20_的鏈。亞烷基二醇部分可以是單分散(具有定義明確的長度/分子量)以及多分散(具有定義較不明確的長度/平均分子量)。單亞烷基二醇部分包括在每個末端處包含不同基團(tuán)的_OCH2CH20-、-OCH2CH2CH20-或_OCH2CH2CH2CH20-。如本文提及的，AA1、AA2和AA3在具有式(I)(Acy-AAln-AA2m_AA3p-)的?；糠种谐霈F(xiàn)的次序可以獨立地互換。因此，式Acy-AAln-AA2m-AA3p-還包含部分如例如式Acy_AA2m_AAln_AA3p_禾口式Acy_AA3p_AA2m_AAln_，其中Acy、AA1、AA2、AA3、n、m禾口p如本文定義。如本文提及的，部分Acy、AA1、AA2和/或AA3之間的連接是酰胺鍵(-C0NH-其中-CO-源于部分Acy、AA1、AA2和AA3之一，并且-NH-源于部分AA1、AA2和AA3之一)。本發(fā)明優(yōu)選實施方案在一個實施方案中，除位置A22中的賴氨酸外，和除連接于A21氨基酸殘基C末端的最高達(dá)4個氨基酸的任何肽殘基外，和除B29R和/或desB30突變外，本發(fā)明的親本胰島素可以包括一個或多個下述突變。此處，首先給出在A或B鏈中的位置，并且其后，可能的一個或多個氨基酸殘基作為單字母密碼給出。在一個實施方案中，存在5個突變，在另一個實施方案中，存在4個突變，在另一個實施方案中，存在3個突變，在另一個實施方案中，存在2個突變，在另一個實施方案中，存在1個突變，并且在另一個實施方案中，除位置A22中的賴氨酸外，和除連接于A21氨基酸殘基C末端的最高達(dá)4個氨基酸的任何肽殘基外，和除B29R和/或desB30突變外，不存在突變。A4:A或Q。A5:L。A8:R、N、Q、E、H、L或W。A9:R或L。A14:E或D。A15:A或T。A16:M。A17:D或F。A18:R、L、1、D或V。A21:G或A。B3:A、R、H、1、L、M、F、W、Y、S或T。B10:D或E。B25:Y、H或desB25。B26:Q、E、S或desB26。B27:H、L、M、W或Y。B28:D或E。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A4A或A4Q突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A5L突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A8L、A8N、A8Q、A8E、A8H、A8L或A8W突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A8H突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A9R或A9L突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A9L突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A14E或A14D突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A15A或A15T突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A16M突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A17D或A17F突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A18R、A18L、A18I、A18D或A18V突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A18L或A18V突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A181突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A21G或A21A突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B3A、B3R、B3H、B3I、B3L、B3M、B3F、B3W、B3Y、B3S或B3T突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B10D或B10E突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B25Y、B25H或desB25突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B26Q、B26E、B26S或desB26突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B27H、B27L、B27M、B27W或B27Y突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B27W或B27Y突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括B28D或B28E突變。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的親本胰島素包括A21Q、B1Q、desBl、B3Q、B3S、B3T、B13Q或desB27突變?？梢栽诒景l(fā)明的酰化胰島素類似物中存在的親本胰島素類似物的非限制性具體例子包括下述的，其中給出與人胰島素的偏離<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>可以存在于本發(fā)明的?；葝u素類似物中的式Acy-AAln-AA2m-AA3p-的?；糠值姆窍拗菩跃唧w例子如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>在一個實施方案中，指定為AA3的部分選自從其中氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除的下述化合物其中r是1-100的整數(shù)，優(yōu)選1-10,更優(yōu)選3。h2nHi0^o"Y。hr0其中r是1-100的整數(shù)，優(yōu)選1-10，更優(yōu)選1。0其中t是1-150的整數(shù)，優(yōu)選20-70,更優(yōu)選43。0其中r是1-100的整數(shù)，優(yōu)選1-10,更優(yōu)選5-7。h&」s其中s是1-30的整數(shù)，優(yōu)選1-10，更優(yōu)選1。式Acy-AAln-AA2,,,-AA3p_的酰基部分的上述非限制性具體例子中的任何一種都可以與胰島素類似物的上述非限制性具體例子的任何一種中存在的賴氨酸殘基的e氨基附著，從而給出本發(fā)明的?；葝u素類似物的進(jìn)一步具體例子。親本胰島素可以以本身已知的方式進(jìn)行制備。例如，它們可以通過如例如EP1，246，845中公開的眾所周知技術(shù)，在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼所討論的單鏈胰島素的DNA序列進(jìn)行生產(chǎn)。胰島素在轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中作為前體分子表達(dá)，所述前體分子通過酶促和化學(xué)體外過程轉(zhuǎn)化成所需胰島素分子，如例如EP163，529和EP214，826中公開的。前體分子可以與N末端延伸一起表達(dá)，所述N末端延伸隨后如例如EP1246，845中公開的切割。在本發(fā)明中合適類型的N末端延伸的例子例如公開于美國專利號5，395，922和EP專利號765，395中。更具體而言，可以參考W02006/082205，從第37頁第31行到第39頁第29行。通過在胰島素類似物中的賴氨酸殘基中引入式八(^4八1114八214八31)-的所需基團(tuán)，親本胰島素類似物可以轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的酰化胰島素類似物。式Acy-AAln-AA2m-AA3p-的所需基團(tuán)可以通過任何方便的方法引入，并且許多方法公開于關(guān)于此種反應(yīng)的現(xiàn)有技術(shù)中。更多細(xì)節(jié)由下述例子可見。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以以基本上不含鋅的化合物的形式或以鋅絡(luò)合物的形式提供。當(dāng)提供本發(fā)明的?；葝u素類似物的鋅絡(luò)合物時，2個Zn2+離子、3個Zn2+離子或4個Zn2+離子可以與每個胰島素六聚物結(jié)合。這個?；葝u素類似物的鋅絡(luò)合物溶液將包含此種種類的混合物。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包括治療有效量的本發(fā)明的?；葝u素類似物連同藥學(xué)上可接受的載體，所述藥物組合物可以用于治療在需要此種治療的患者中的l型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖癥的其他狀態(tài)。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以用于制造藥物組合物，用于在治療1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖癥的其他狀態(tài)中使20用。此種組合物以本身已知的方式進(jìn)行制備。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了用于治療在需要此種治療的患者中的1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖癥的其他狀態(tài)的藥物組合物，其包括與具有作用的快速發(fā)作的胰島素或胰島素類似物混合的治療有效量的本發(fā)明的?；葝u素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體和添加劑。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明涉及用于治療在需要此種治療的患者中的l型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖癥的其他狀態(tài)的肺應(yīng)用，其包括任選與具有作用的快速發(fā)作的胰島素或胰島素類似物混合的、治療有效量的本發(fā)明的酰化胰島素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體和添加劑。在一個方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其為本發(fā)明的?；葝u素類似物以及選自AspB28人胰島素；LysB28ProB29人胰島素和LysB3GluB29人胰島素的速效胰島素類似物的混合物。本發(fā)明的?；葝u素類似物和速效胰島素類似物可以以約90/10%;約70/30%或約50/50%的比混合。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了治療在需要此種治療的患者中的l型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖癥的其他狀態(tài)的方法，其包括給患者施用治療有效量的本發(fā)明的酰化胰島素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體和藥學(xué)上可接受的添加劑。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了治療在需要此種治療的患者中的l型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖癥的其他狀態(tài)的方法，其包括給患者施用與具有作用的快速發(fā)作的胰島素或胰島素類似物混合的治療有效量的本發(fā)明?；葝u素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體和藥學(xué)上可接受的添加劑。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了用于治療在需要此種治療的患者中的糖尿病的藥物組合物，其包括與具有作用的快速發(fā)作的胰島素或胰島素類似物混合的治療有效量的本發(fā)明?；葝u素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了預(yù)期用于肺施用的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了治療在需要此種治療的患者中的糖尿病的方法，其包括給患者施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的酰化胰島素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體。在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供了治療在需要此種治療的患者中的糖尿病的方法，其包括給患者施用與具有作用的快速發(fā)作的胰島素或胰島素類似物混合的、治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的?；葝u素類似物，連同藥學(xué)上可接受的載體。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的?；葝u素，其具有如本文描述的胰島素受體結(jié)合親和力，在HSA的存在下(例如在O.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%或4.5%HSA的存在下)測量的，相對于人胰島素，所述結(jié)合親和力測量為>3%、更優(yōu)選>5%、更優(yōu)選>10%、更優(yōu)選>15%、更優(yōu)選>20%、更優(yōu)選>30%、更優(yōu)選>40%、更優(yōu)選>50%、更優(yōu)選>60%。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的?；葝u素類似物，其具有與人胰島素的那種基本上相似的總體疏水性。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明的?；葝u素類似物具有疏水指數(shù)k'^，其為約0.02-約2110，約0.1-約5;約0.5-約5;約0.2-約2;約0.2-約1;約0.1-約2;或約0.5-約2。相對于人胰島素，本發(fā)明的?；葝u素類似物的疏水性(疏水指數(shù))k'^，通過在4(TC下的等度洗脫在LiChrosorbRP18(5ym，250x4mm)HPLC柱上進(jìn)行測量，其中使用A)包含10%乙腈的0.1M磷酸鈉緩沖液，pH7.3，和B)溶于水的50%乙腈的混合物作為洗脫劑。通過跟蹤洗脫物在214nm處的UV吸收監(jiān)控洗脫。通過注射0.ImM硝酸鈉發(fā)現(xiàn)空隙時間(voidtime)t。。通過改變A和B溶液之間的比，使關(guān)于人胰島素的保留時間t人調(diào)整為至少2t。。在另一個方面，本發(fā)明涉及包括本發(fā)明的?；葝u素類似物的藥物組合物，其在生理pH值下是可溶的。在另一個方面，本發(fā)明涉及包括本發(fā)明的?；葝u素類似物的藥物組合物，其在約6.5至約8.5的間隔中的pH值下是可溶的。在另一個方面，本發(fā)明涉及具有延長的作用概況的藥物組合物，其包括本發(fā)明的?；葝u素類似物。在另一個方面，本發(fā)明涉及具有肝選擇性或肝優(yōu)先性作用的胰島素。在另一個方面，本發(fā)明涉及這樣的藥物組合物，其為包含約120nmol/ml-約2400nmol/ml、約400nmol/ml_約2400nmol/ml、約400nmol/ml_約1200nmol/ml、約600nmol/ml-約2400nmol/ml、或約600nmol/ml-約1200nmol/ml本發(fā)明的酰化胰島素類似物或本發(fā)明的?；葝u素類似物連同速效胰島素類似物的混合物的溶液。本發(fā)明化合物的用途施用途徑可以是使本發(fā)明的化合物有效轉(zhuǎn)運到身體中的所需或合適位置的任何途徑，例如腸胃外，例如，皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)?？商娲兀景l(fā)明的化合物可以經(jīng)口、肺或鼻施用。對于腸胃外施用，本發(fā)明的化合物與已知胰島素的制劑類似地配制。此外，對于腸胃外施用，本發(fā)明的化合物與已知胰島素的施用類似地施用，并且醫(yī)生熟悉這種程序。腸胃外施用可以借助于注射器，任選筆樣注射器來執(zhí)行?？商娲兀c胃外施用可以借助于輸注泵來執(zhí)行。本發(fā)明的化合物的可注射組合物可以使用制藥工業(yè)的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行制備，所述常規(guī)技術(shù)涉及適當(dāng)時使成分溶解且混合，以給出所需最終產(chǎn)物。因此，根據(jù)一個程序，本發(fā)明的化合物溶解于略微少于待制備的組合物的最終體積的水量中。根據(jù)需要添加等滲劑、防腐劑和緩沖劑，并且根據(jù)需要，若需要則使用酸例如鹽酸或堿例如含水氫氧化鈉調(diào)整溶液的pH值。最后，用水調(diào)整溶液的體積，以給出成分的所需濃度。更精確地，本發(fā)明的胰島素制劑，例如溶液或懸浮液，可以通過在微酸性條件下以例如約240至約1200nmole/ml的濃度，使本發(fā)明的化合物溶解于含水介質(zhì)中進(jìn)行制備。含水介質(zhì)例如用氯化鈉或甘油制成等滲的。此夕卜，含水介質(zhì)可以包含濃度最高達(dá)約20ygZn+7單位胰島素活性的鋅離子、緩沖液例如乙酸鹽和檸檬酸鹽以及防腐劑例如間甲酚或苯酚。溶液的PH值朝向中性進(jìn)行調(diào)整，無需太接近本發(fā)明的化合物的等電點，以避免沉淀。最終胰島素制劑的PH值依賴于任選地在本發(fā)明的化合物中已改變的電荷數(shù)目、鋅離子濃度、本發(fā)明的化合物的濃度和選擇的本發(fā)明的化合物。胰島素制劑例如通過過濾除菌制成無菌的。本發(fā)明的胰島素制劑與已知胰島素制劑的用途類似地使用。待施用的本發(fā)明化合物的量、如何頻繁施用本發(fā)明化合物的確定、和任選連同另一種抗糖尿病化合物施用的本發(fā)明一種或多種化合物的選擇，在與熟悉糖尿病治療的從業(yè)者的咨詢中決定。因此，本發(fā)明還涉及治療糖尿病的方法，其包括給需要此種治療的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。藥物組合物本發(fā)明的?；葝u素類似物可以皮下、經(jīng)口或肺施用。對于皮下施用，本發(fā)明的?；葝u素類似物與已知胰島素制劑類似地配制。此外，對于皮下施用，本發(fā)明的?；葝u素類似物與已知胰島素的施用類似地施用，并且一般地，醫(yī)生熟悉這種程序。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以通過吸入以有效增加循環(huán)胰島素水平和/或降低循環(huán)葡萄糖水平的劑量進(jìn)行施用。此種施用可以有效用于治療病癥例如糖尿病或高血糖癥。達(dá)到胰島素的有效劑量需要施用在約0.5iig/kg至約50iig/kg范圍中的本發(fā)明?；葝u素類似物的吸入劑量。治療有效量可以通過博知的從業(yè)者進(jìn)行確定，所述從業(yè)者將考慮包括胰島素水平、血糖水平、患者的身體健康狀況、患者的肺狀態(tài)等的因素。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以通過吸入進(jìn)行遞送，以達(dá)到其緩慢吸收和/或減少的全身清除。當(dāng)比較相似顆粒大小和相似水平的肺沉積時，不同吸入設(shè)備一般提供類似藥物代謝動力學(xué)。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以通過本領(lǐng)域已知用于通過吸入施用治療劑的多種吸入設(shè)備中的任何一種進(jìn)行遞送。這些設(shè)備包括計量劑量吸入器、噴灑器、干粉發(fā)生器、噴霧器等。優(yōu)選地，本發(fā)明的?；葝u素類似物通過干粉吸入器或噴霧器進(jìn)行遞送。存在用于施用本發(fā)明的酰化胰島素類似物的吸入設(shè)備的幾種所需特征。例如，通過吸入設(shè)備的遞送有利地是可靠、可重復(fù)且精確的。對于良好適合呼吸性，吸入設(shè)備應(yīng)遞送小顆?；驓馊苣z，例如小于約10iim，例如約l-5iim。適合于實踐本發(fā)明的商購可得吸入設(shè)備的一些具體例子是Cyclohaler、Turbohaler(Astra)、Rotahaler(Glaxo)、DiskllS(Glaxo)、SpirosTM吸入器(Dura)、由InhaleTher即eutics銷售的設(shè)備、AERxTM(Aradigm)、Ultravent⑧噴灑器(Mallinckrodt)、AcornH⑧噴灑器(MarquestMedicalProducts)、Ventolin⑧計量劑量吸入器(Glaxo)、Spinhaler⑧粉末吸入器(Fisons)等。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到的，本發(fā)明的?；葝u素類似物制劑、遞送的制劑量和單劑的施用持續(xù)時間依賴于采用的吸入設(shè)備類型。對于一些氣溶膠遞送系統(tǒng)，例如噴灑器，施用頻率和系統(tǒng)激活的時間長度將主要依賴于氣溶膠中的?；葝u素類似物濃度。例如，較短的施用時間段可以在噴灑器溶液中更高濃度的?；葝u素類似物下使用。設(shè)備例如計量劑量吸入器可以產(chǎn)生更高的氣溶膠濃度，并且可以操作更短時間段，以遞送所需量的本發(fā)明的?；葝u素類似物。設(shè)備例如粉末吸入器遞送活性劑直至給定裝填量的試劑從設(shè)備中排出。在這種類型的吸入器中，在給定量粉末中的本發(fā)明的胰島素?；葝u素類似物量決定在單次施用中遞送的劑量。就胰島素使其進(jìn)入肺內(nèi)并且優(yōu)選進(jìn)入下氣道或肺泡內(nèi)的能力而言，在通過吸入設(shè)備遞送的制劑中本發(fā)明的?；葝u素類似物的顆粒大小是關(guān)鍵的。優(yōu)選地，本發(fā)明的?；葝u素類似物如此配制，從而使得遞送的至少約10%?；葝u素類似物沉積在肺中，優(yōu)選約10至約20%或更多。通過吸入遞送的?；葝u素類似物的顆粒具有優(yōu)選小于約10iim、更優(yōu)選約1Pm至約5i！m的顆粒大小。選擇?；葝u素類似物的制劑，以在選擇的吸入設(shè)備中產(chǎn)生所需顆粒大小。對于作為干粉施用有利地，本發(fā)明的酰化胰島素類似物以具有小于約10ym、優(yōu)選約1Pm至約5iim的顆粒大小的微粒形式進(jìn)行制備。優(yōu)選顆粒大小對于遞送至患者肺的肺泡有效。優(yōu)選地，干粉在很大程度上由產(chǎn)生的顆粒組成，從而使得大多數(shù)顆粒具有所需范圍中的大小。有利地，至少約50%的干粉由具有小于約lOym直徑的顆粒制成。此種制劑可以通過溶液的噴霧干燥、研磨、微粉化或臨界點冷凝來達(dá)到，所述溶液包含本發(fā)明的酰化胰島素類似物和其他所需成分。也適合于產(chǎn)生在本發(fā)明中有用的顆粒的其他方法是本領(lǐng)域已知的。顆粒通常在容器中與干粉制劑分開，并且隨后經(jīng)由載體氣流轉(zhuǎn)運到患者的肺內(nèi)。一般地，在目前的干粉吸入器中，用于破碎固體的力量通過患者的吸入單獨提供。在另一種類型的吸入器中，由患者的吸入產(chǎn)生的氣流激活使顆粒解凝集的葉輪發(fā)動機。用于從干粉吸入器施用的本發(fā)明的?；葝u素類似物制劑一般包括包含衍生物的精細(xì)分開的干粉，但粉末還可以包括填充劑、載體、賦形劑、另一種添加劑等。添加劑可以包括在酰化胰島素類似物的干粉制劑中，例如以根據(jù)需要稀釋粉末用于從特定粉末吸入器遞送，以促進(jìn)制劑的處理，以給制劑提供有利的粉末性質(zhì)，以促進(jìn)粉末從吸入設(shè)備分散，以穩(wěn)定制劑(例如，抗氧化劑或緩沖劑)，以給制劑提供味道等。有利地，添加劑不會不利地影響患者的氣道。?；葝u素類似物可以與添加劑在分子水平下混合，或固體制劑可以包括與添加劑顆?；旌匣蛟谔砑觿╊w粒上包被的?；葝u素類似物顆粒。一般的添加劑包括單糖、二糖和多糖；糖醇和其他多元醇，例如乳糖、葡萄糖、棉子糖、松三糖、拉克替醇(lactitol)、麥芽糖醇(maltitol)、海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉或其組合；表面活性劑，例如山梨糖醇、二磷脂酰膽堿或卵磷脂；等。一般地，添加劑例如填充劑以對于上述目的有效的量存在，通常為制劑的約50重量％至約90重量％。本領(lǐng)域已知用于配制蛋白質(zhì)例如胰島素類似物蛋白質(zhì)的另外試劑也可以包括制劑中。包括本發(fā)明的?；葝u素類似物的噴霧可以通過在壓力下迫使?；葝u素類似物的懸浮液或溶液通過噴嘴來產(chǎn)生?？梢赃x擇噴嘴大小和結(jié)構(gòu)、應(yīng)用的壓力和液體進(jìn)料速度，以達(dá)到所需輸出和顆粒大小。電噴霧可以例如通過與毛細(xì)管或噴嘴進(jìn)料結(jié)合的電場來產(chǎn)生。有利地，通過噴霧器遞送的胰島素綴合物的顆粒具有小于約10iim、優(yōu)選在約1iim至約5ym范圍中的顆粒大小。適合于與噴霧器一起使用的本發(fā)明的?；葝u素類似物制劑一般將包括在約lmg至約500mg?；葝u素類似物/ml溶液的濃度下在水溶液中的?；葝u素類似物。依賴于選擇的?；葝u素類似物和醫(yī)學(xué)顧問已知的其他因素，上限可以更低，例如450、400、350、300、250、200、150、120、100或50mg酰化胰島素類似物/ml溶液。制劑可以包括試劑例如賦形劑、緩沖劑、等滲劑、防腐劑、表面活性劑和優(yōu)選地鋅。制劑還可以包括賦形劑或用于穩(wěn)定?；葝u素類似物的試劑，例如緩沖劑、還原劑、填充蛋白質(zhì)或碳水化合物。在配制胰島素綴合物中有用的填充蛋白質(zhì)包括清蛋白、魚精蛋白等。在配制酰化胰島素類似物中有用的一般碳水化合物包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。?；葝u素類似物制劑還可以包括表面活性劑，其可以減少或阻止通過溶液在形成氣溶膠中的噴霧引起的表面誘導(dǎo)的胰島素綴合物聚集。可以采用各種常規(guī)表面活性劑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇類、和聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。量一般將為制劑的約0.001至約4重量％范圍。包含本發(fā)明的?；葝u素類似物的藥物組合物還可以腸胃外施用于需要此種治療的患者。腸胃外施用可以通過皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射，借助于注射器任選地筆樣注射器來執(zhí)行?？商娲?，腸胃外施用可以借助于輸注泵來執(zhí)行。本發(fā)明的?；葝u素類似物的可注射組合物可以使用制藥工業(yè)的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行制備，所述常規(guī)技術(shù)涉及適當(dāng)時使成分溶解且混合，以給出所需最終產(chǎn)物。因此，根據(jù)一個程序，?；葝u素類似物溶解于略微少于待制備的組合物的最終體積的水量中。根據(jù)需要添加鋅(Zink)、等滲劑、防腐劑和/或緩沖劑，并且根據(jù)需要，若需要則使用酸例如鹽酸或堿例如含水氫氧化鈉調(diào)整溶液的pH值。最后，用水調(diào)整溶液的體積，以給出成分的所需濃度。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，緩沖劑選自乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸、甘氨酰甘氨酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉和三(羥甲基)-氨基甲烷、N-二[羥乙基]甘氨酸(bicine)、N-[2-羥-l，l-二羥甲基乙基]甘氨酸(tricine)、蘋果酸、琥珀酸鹽、馬來酸、延胡索酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。這些特定緩沖劑中的每一種構(gòu)成本發(fā)明的可替代實施方案。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，制劑進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的防腐劑，其可以選自苯酚、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、2_苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸丁酯、2_苯基乙醇、苯甲醇、氯代丁醇和硫柳汞、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪唑烷基脲、氯己定、脫氫乙酸鈉、氯甲酚、對羥基苯甲酸乙酯、氯化芐乙銨、氯苯甘油醚(3-(4-氯苯氧基)-l，2-丙二醇)或其混合物。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，防腐劑以約O.lmg/ml至20mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，防腐劑以約O.lmg/ml至5mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，防腐劑以約5mg/ml至10mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，防腐劑以約10mg/ml至20mg/ml的濃度存在。這些具體防腐劑中的每一種構(gòu)成本發(fā)明的可替代實施方案。防腐劑在藥物組合物中的使用對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是眾所周知的。為了方便，參考Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第19版，1995。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，制劑進(jìn)一步包括等滲劑，其可以選自鹽(例如，氯化鈉)、糖或糖醇、氨基酸(例如，L-甘氨酸、L-組氨酸、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸或蘇氨酸)、糖醇(例如甘油(丙三醇)、l，2-丙二醇(丙二醇)、l，3-丙二醇或1，3-丁二醇)、聚乙二醇(例如，PEG400)或其混合物?？梢允褂萌魏翁牵鐔翁?、二糖或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、支鏈淀粉、糊精、環(huán)糊精、可溶性淀粉、羥乙基淀粉和羧甲基纖維素-Na。在一個實施方案中，糖添加劑是蔗糖。糖醇定義為具有至少一個-0H基團(tuán)的C4-C8烴，并且包括例如，甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、半乳糖醇、衛(wèi)矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。在一個實施方案中，糖醇添加劑是甘露糖醇。上文提及的糖或糖醇可以個別或組合使用。關(guān)于使用的量無固定限制，只要糖或糖醇在液體制劑中是可溶的，并且不會不利地影響使用本發(fā)明的方法達(dá)到的穩(wěn)定作用。在一個實施方案中，糖或糖醇濃度是約lmg/ml至約150mg/ml。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，等滲劑以約lmg/ml至50mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，等滲劑以約lmg/ml至7mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，等滲劑以約8mg/ml至24mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方案中，等滲劑以約25mg/ml至50mg/ml的濃度存在。這些具體等滲劑中的每一種構(gòu)成本發(fā)明的可替代實施方案。等滲劑在藥物組合物中的使用對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是眾所周知的。為了方便，參考Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy，第19片反，1995。—般的等滲劑是氯化鈉、甘露糖醇、二甲砜和甘油，并且一般的防腐劑是苯酚、間甲酚、對羥基苯甲基甲酯和苯甲醇。合適緩沖劑的例子是乙酸鈉、甘氨酰甘氨酸、HEPES(4_(2-羥乙基)_1_哌嗪乙磺酸)和磷酸鈉。用于本發(fā)明的?；葝u素類似物的鼻施用的組合物可以例如如歐洲專利號272097中所述制備。包含本發(fā)明的?；葝u素類似物的組合物可以在治療對胰島素敏感的狀態(tài)中使用。因此，它們可以用于治療1型糖尿病、2型糖尿病和高血糖癥，例如，如有時在嚴(yán)重?fù)p傷的人和已經(jīng)歷大外科手術(shù)的人中可見。用于任何患者的最佳劑量水平將依賴于多種因素，包括采用的具體胰島素衍生物的功效，患者的年齡、體重、身體活動性和飲食，與其他藥物的可能組合，和待治療狀態(tài)的嚴(yán)重程度。推薦本發(fā)明的?；葝u素類似物的日劑量通過本領(lǐng)域技術(shù)人員以與關(guān)于已知胰島素組合物相似的方式對于每個個別患者進(jìn)行確定。本發(fā)明的重要特征總之，本發(fā)明的一些特征如下1.?；葝u素類似物，其中胰島素類似物包括連接于A21氨基酸殘基C末端的賴氨酸殘基、或包括賴氨酸殘基的最高達(dá)4個氨基酸殘基的肽殘基，所述肽殘基連接于A21氨基酸殘基C末端，特征在于包括亞烷基二醇部分的?；糠峙cA22位置中的賴氨酸殘基附著、或與A21氨基酸殘基的C末端附著的肽殘基中存在的賴氨酸殘基附著，并且其中在胰島素類似物中僅存在一個賴氨酸(K，Lys)。2.根據(jù)條款1的?；葝u素類似物，其中?；糠志哂型ㄊ絀:Acy-AAln-AA2m-AA3p-(I)，其中n是0或l-3的整數(shù)，m是0或l-6的整數(shù)，p是l、2或3，Acy是包括約8-24個碳原子的脂肪酸或脂肪二酸，從其中在形式上羥基已從脂肪酸的羧基中或從脂肪二酸的羧基之一中去除，AA1是中性環(huán)狀氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA2是酸性氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA3是中性、包含亞烷基二醇的氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和26羥基已從羧基中去除，AA1、AA2和AA3在式中出現(xiàn)的次序可以獨立地互換，Acy、AA1、AA2和/或AA3之間的連接是酰胺(肽)鍵，和與親本胰島素的附著可以來自式(I)的?；糠种械腁A1、AA2或AA3殘基的C末端或來自式(I)的部分中存在的AA2殘基的一條或多條側(cè)鏈之一。3.?；葝u素類似物，其中胰島素類似物包括連接于A21氨基酸殘基C末端的賴氨酸殘基、或包括賴氨酸殘基的最高達(dá)4個氨基酸殘基的肽殘基，所述肽殘基連接于A21氨基酸殘基C末端，特征在于包括亞烷基二醇部分的?；糠峙cA22位置中的賴氨酸殘基附著、或與A21氨基酸殘基的C末端附著的肽殘基中存在的賴氨酸殘基附著，并且其中在胰島素類似物中僅存在一個賴氨酸(K，Lys)，并且其中包括亞烷基二醇部分的?；糠志哂型ㄊ絀:Acy-AAln-AA2m-AA3p-(I)，其中n是0或1-3的整數(shù)，m是0或1-6的整數(shù)，p是1、2或3，Acy是包括約8-24個碳原子的脂肪酸或脂肪二酸，從其中在形式上羥基已從羧基中或從羧基之一中去除，AA1是中性環(huán)狀氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA2是酸性氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA3是中性、包含亞烷基二醇的氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA1、AA2和AA3在式中出現(xiàn)的次序可以獨立地互換，Acy、AA1、AA2和/或AA3之間的連接是酰胺(肽)鍵，和與親本胰島素的附著可以來自式(I)的?；糠种械腁A1、AA2或AA3殘基的C末端或來自式(I)的部分中存在的AA2殘基的一條或多條側(cè)鏈之一。4.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中Acy源于具有14-20個碳原子的脂肪酸或脂肪二酸，優(yōu)選16-20個碳原子、更優(yōu)選16—18個碳原子、可替代地18-20個碳原子，并且具體是8、10、12、14、16、17、18、20、22或24個碳原子。5.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中Acy源于二羧酸。6.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中Acy是從其中羥基已去除的十四烷二酸、十五烷二酸、十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸或二十烷二酸。7.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中Acy是從其中羥基已去除的十六烷二酸、十八烷二酸或二十烷二酸。8.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中AA1選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>其中q是0、l、2、3或4，并且從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除。9.根據(jù)前述條款的?；葝u素類似物，其中AA1是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除。10.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中AA2選自Glu、Asp、D-Glu、D-Asp、yG1u、YAsp、y-D-G1u、Y-D-Asp或下述化合物中的任何一種其中箭標(biāo)指示與AA1、AA2或AA3的氨基的附著點，并且從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除。11.根據(jù)前述條款的?；葝u素類似物，其中AA2是YGlu。12.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中AA3選自下述化合物中的任何一種<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>r是1-100的整數(shù)，優(yōu)選1-10，s是1-30的整數(shù)，優(yōu)選1-10，t是1-150的整數(shù)，優(yōu)選20-70，并且從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除。13.根據(jù)前述條款的?；葝u素類似物，其中r是l、2、3、4、5、7、ll、23或27。14.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中s是l、2、3、4、10、20或30。15.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中整數(shù)t如此選擇，從而使得其中整數(shù)t出現(xiàn)的上式的平均分子量是2000Da、3400Da或5000Da。16.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中式29Acy-AAln-AA2m-AA3p-的?；糠峙c位置A22中的賴氨酸殘基連接，其中Acy、AAl、AA2、AA3、n、m和p如上文定義。17.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中式Acy-AAln-AA2m-AA3p-的?；糠峙c位置A23中的賴氨酸殘基連接，其中Acy、AAl、AA2、AA3、n、m和p如上文定義。18.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中式Acy-AAln-AA2m-AA3p-的酰基部分與位置A24中的賴氨酸殘基連接，其中Acy、AAl、AA2、AA3、n、m和p如上文定義。19.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中式Acy-AAln-AA2m-AA3p-的?；糠峙c位置A25中的賴氨酸殘基連接，其中Acy、AAl、AA2、AA3、n、m和p如上文定義。20.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物包括52水水21.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物包括51水22.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中胰島素類似物包括53水23.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中胰島素類似物包括54水24.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中胰島素類似物包括50水25.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物包括4926.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物的位置A1-A21和B1-B30中的僅1個氨基酸殘基偏離人胰島素中存在的那些氨基酸殘基。27.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中胰島素類似物的位置A1-A21和B1-B30中的僅2個氨基酸殘基偏離人胰島素中存在的那些氨基酸殘基。28.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物的位置A1-A21和B1-B30中的僅3個氨基酸殘基偏離人胰島素中存在的那些氨基酸殘基。29.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中胰島素類似物的位置A1-A21和B1-B30中的僅4個氨基酸殘基偏離人胰島素中存在的那些氨基酸殘基。30.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中不存在與位置Al或B1中存在的氨基酸殘基的N末端連接的氨基酸殘基，并且不存在與位置B30中存在的氨基酸殘基的C末端連接的氨基酸殘基。31.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中在胰島素類似物的A14位置中的氨基酸殘基是E。32.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的A18位置中的氨基酸殘基是Q。33.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的30A21位置中的氨基酸殘基是A、G或Q。34.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的A22位置中的氨基酸殘基是K或G。35.根據(jù)前述條款的酰化胰島素類似物，其中在胰島素類似物的A22位置中的氨基酸殘基是K。36.根據(jù)前述條款的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的A22位置中的氨基酸殘基是K，并且不存在與所述A22K氨基酸殘基的C末端連接的氨基酸殘基。-項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的-項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的-項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的Bl項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的B3-項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的-項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的-項的酰化胰島素類似物，其中在胰島素類似物的-項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的項的?；葝u素類似物，其中在B28位置中的氨基酸殘基是R，并且在B29位置中的氨基酸殘基是P。47.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的B29位置中的氨基酸殘基是R。48.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的B30位置中的氨基酸殘基不存在。49.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物的A14位置中的氨基酸殘基是Y或E，在胰島素類似物的A18位置中的氨基酸殘基是N或Q，在胰島素類似物的A21位置中的氨基酸殘基是N、A、G或Q，在胰島素類似物的A22位置中的氨基酸殘基是K或G，在胰島素類似物的A23位置中的氨基酸殘基是不存在、K或G，在胰島素類似物的A24位置中的氨基酸殘基是不存在、K或G，在胰島素類似物的A25位置中的氨基酸殘基是不存在或K，在胰島素類似物的B1位置中的氨基酸殘基是F、Q或不存在，在胰島素類似物的B3位置中的氨基酸殘基是N、Q或T，在胰島素類似物的B13位置中的氨基酸殘基是E或Q，在胰島素類似物的B25位置中的氨基酸殘基是F或H，在胰島素類似物的37.根據(jù)前述可能條款中任-A23位置中的氨基酸殘基是K或G。38.根據(jù)前述可能條款中任-A24位置中的氨基酸殘基是K或G。39.根據(jù)前述可能條款中任-A25位置中的氨基酸殘基是K。40.根據(jù)前述可能條款中任一位置中的氨基酸殘基是Q或不存在。41.根據(jù)前述可能條款中任一位置中的氨基酸殘基是Q或T。42.根據(jù)前述可能條款中任-B13位置中的氨基酸殘基是Q。43.根據(jù)前述可能條款中任-B25位置中的氨基酸殘基是H。44.根據(jù)前述可能條款中任-B27位置中的氨基酸殘基不存在。45.根據(jù)前述可能條款中任-B28位置中的氨基酸殘基是D、E或R。46.根據(jù)前述可能條款中任一B27位置中的氨基酸殘基是T或不存在，在胰島素類似物的B28位置中的氨基酸殘基是P、D、E或R，在胰島素類似物的B29位置中的氨基酸殘基是K或R，并且在胰島素類似物的B30位置中的氨基酸殘基是T或不存在。50.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中在胰島素類似物中的所有氨基酸殘基都是可編碼氨基酸的殘基。51.根據(jù)前述可能條款中任一項的?；葝u素類似物，其中AA2是gGlu。52.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其中通式Acy-AAln-AA2m-AA3p-的?；糠志哂型ㄊ紸cy-AA3_、Acy-AA2_AA3-、Acy-AA2-AA3_AA2-、Acy-AA2-(AA3)2-、Acy_AA2-(AA3)2_AA2或Acy-AA3_AA2-之一，其中Acy、AA2和AA3各自如本文定義。53.根據(jù)前述可能條款中任一項的酰化胰島素類似物，其是本文具體提及的化合物中的任何一種，例如在本文具體實施例中描述的化合物。54.根據(jù)前述可能產(chǎn)品條款中任一項的化合物，其用于作為藥物使用或用于在藥物中使用。55.根據(jù)前述可能產(chǎn)品條款中任一項的化合物，其用于治療糖尿病，或根據(jù)前述可能產(chǎn)品條款中任一項的化合物用于制備用于治療糖尿病的藥物的用途。56.用于治療糖尿病的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用治療有效量的根據(jù)前述可能產(chǎn)品條款中任一項的化合物。57.本文描述的任何新特征或特征組合。使本文描述的一個或多個實施方案、任選地以及下文權(quán)利要求中的一項或多項和本文提及的一個或多個條款組合，導(dǎo)致進(jìn)一步的實施方案，并且本發(fā)明涉及所述實施方案、條款和權(quán)利要求的所有可能組合。本文引用的所有參考文獻(xiàn)，包括出版物、專利申請和專利均在此整體引入作為參考，并且其程度與每個參考文獻(xiàn)個別且特別指出引入作為參考并且在本文中整體闡述一樣(至法律允許的最大程度)。所有標(biāo)題和子標(biāo)題在本文中都僅為了方便而使用，并且不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明。本文提供的任何和所有例子或示例性語言(例如，"例如")的使用僅意欲更好地舉例說明本發(fā)明，并且除非另有說明，否則不對本發(fā)明的范圍造成限制。說明書中的語言不應(yīng)解釋為將任何非請求保護(hù)的要素表示為本發(fā)明實踐所必需的。本文專利文件的引用和引入僅為了方便而完成，并且不反映此種專利文件的任何有效性、專利性和/或可實施性觀點。參考文獻(xiàn)在本文中的提及并非承認(rèn)它們構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)。此處，單詞"包含"應(yīng)廣泛地解釋為意指"包括"、"含有"或"包含"(EP0指南C4.13)。本發(fā)明包括如由可應(yīng)用法律允許的與之附著的權(quán)利要求中敘述的主題的所有修飾和等同方案。下述實施例為了舉例說明提供，而不是為了限制。32實施例—般程序輛,表汰謝本,、,麵靴柳夷歸餘表汰所有表達(dá)質(zhì)粒都是C-POT類型的，類似于EP171142中描述的那些，其特征在于包含粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomycespombe)丙糖磷酸異構(gòu)酶基因(POT)用于在啤酒糖酵母(S.cerevisiae)中的質(zhì)粒選擇和穩(wěn)定目的。質(zhì)粒還包含啤酒糖酵母丙糖磷酸異構(gòu)酶啟動子和終止子。這些序列類似于質(zhì)粒pKFN1003(WO90/10075中描述)中的相應(yīng)序列，因為是除編碼前導(dǎo)區(qū)和胰島素產(chǎn)物的融合蛋白的EcoRI-XbaI片段的序列外的所有序列。為了表達(dá)不同的融合蛋白，pKFN1003的EcoRI-XbaI片段通過編碼目的前導(dǎo)區(qū)_胰島素融合物的EcoRI-XbaI片段簡單地替換。此種EcoRI-XbaI片段可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)使用合成寡核苷酸和PCR來合成。酵母轉(zhuǎn)化體通過轉(zhuǎn)化宿主菌株啤酒糖酵母菌株MT663(MATa/MATap印4-3/p印4-3HIS4/his4tpi::LEU2/tpi::LEU2Cir+)進(jìn)行制備。酵母菌株MT663與提交W092/11378結(jié)合保藏于DeutscheSamml皿gvonMikroorganismen皿dZellkulturen，并且給予保藏號DSM6278。MT663在YPGaL(l^細(xì)菌用酵母提取物、2^細(xì)菌用蛋白胨、2^半乳糖、l^乳酸鹽)上生長至在600nm下0.6的0.D.。通過離心收獲100ml培養(yǎng)物，用10ml水洗滌，再次離心且重懸浮于10ml溶液中，所述溶液包含1.2M山梨糖醇、25mMNa2EDTApH=8.0和6.7mg/ml二硫蘇糖醇。使懸浮液在3(TC下溫育15分鐘，離心并且使細(xì)胞重懸浮于10ml溶液中，所述溶液包含1.2M山梨糖醇、10mMNa2EDTA、0.1M檸檬酸鈉，pH05.8和2mgNovozym234。使懸浮液在3(TC下溫育30分鐘，通過離心收集細(xì)胞，在10ml1.2M山梨糖醇和10mlCAS(l.2M山梨糖醇、10mMCaCl2、10mMTrisHC1(pH=7.5)中洗滌，并且重懸浮于2mlCAS中。為了轉(zhuǎn)化，使lmlCAS懸浮的細(xì)胞與約0.lmg質(zhì)粒DNA混合，并且在室溫下靜置15分鐘。加入lml(20X聚乙二醇4000、10mMCaCl2、10mMTrisHC1，pH=7.5)，并且使混合物在室溫下靜置另外30分鐘。使混合物離心，并且使沉淀重懸浮于0.lmlSOS(l.2M山梨糖醇、33^v/vYPD、6.7mMCaCl2)中，并且在30。C下溫育2小時。隨后使懸浮液離心，并且使沉淀重懸浮于0.5ml1.2M山梨糖醇中。隨后，在52t:下加入6ml頂層瓊脂(Sherman等人(1982)MethodsinYeastGenetics,ColdSpringHarborLaboratory)的SC培養(yǎng)基，其包含1.2M山梨糖醇加上2.5%瓊脂)，并且將懸浮液傾注到包含相同瓊脂固化的、含山梨糖醇的培養(yǎng)基的板之上。用表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的啤酒糖酵母菌株MT663在YPD中在3(TC下生長72小時。本發(fā)明的?；葝u素類似物的產(chǎn)生、純化和表征下述實施例涉及說明書和實施例中鑒定的中間化合物和最終產(chǎn)物。本發(fā)明的?；葝u素類似物的制備使用下述實施例詳細(xì)描述，但所描述的化學(xué)反應(yīng)和純化方案就其制備本發(fā)明的胰島素衍生物的一般適用性而言公開。偶然地，反應(yīng)可能不如所述的應(yīng)用于本發(fā)明的公開范圍內(nèi)包括中的每種化合物。出現(xiàn)這種情況的化合物將通過本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地識別。在這些情況下，反應(yīng)可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)修改成功地執(zhí)行，即，通過干擾基團(tuán)的合適保護(hù)，通過改變成其他常規(guī)試劑，或通過反應(yīng)條件的常規(guī)修改?？商娲?，本文公開或在其他方面常規(guī)的其他反應(yīng)將可應(yīng)用于制備本發(fā)明的相應(yīng)化合物。在所有制備方法中，所有原材料都是已知的或可以使用本身已知的方法容易地由已知原材料制備。所有溫度都以攝氏度闡述，并且除非另有說明，當(dāng)提及得率時，所有份和百分比都按重量計，并且當(dāng)提及溶劑和洗脫劑時，所有份都按體積計。本發(fā)明的?；葝u素類似物可以通過采用一般在本領(lǐng)域內(nèi)的一種或多種下述程序進(jìn)行純化。若需要，那么這些程序可以就梯度、pH、鹽、濃度、流動、柱等進(jìn)行修飾。依賴于因素例如雜質(zhì)概況、所討論的胰島素溶解度等等，這些修改可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地識別且進(jìn)行。關(guān)于通式(II)的酰化試劑的固相合成的一般程序(II):Acy-AAln-AA2m-AA3p-Act，其中Acy、AA1、AA2、AA3、n、m和p如上文定義，并且Act是活性酯的離去基團(tuán)，例如N-羥基琥珀酰亞胺(0Su)、或1-羥基苯并三唑，酯和其中在酰基部分內(nèi)的羧酸保護(hù)為叔丁酯。根據(jù)本發(fā)明的通式(II)的化合物可以在固體支持物上合成，其中使用固相肽合成領(lǐng)域中的技術(shù)人員眾所周知的程序。這個程序包括使Fmoc保護(hù)的氨基酸與聚苯乙烯2-氯三苯甲基氯樹脂附著。附著可以例如使用游離N-保護(hù)的氨基酸在叔胺的存在下來完成，所述叔胺如三乙胺或N，N-二異丙基乙胺(參見下文參考文獻(xiàn))。這個氨基酸的C末端(其與樹脂附著)在與本發(fā)明的親本胰島素偶聯(lián)的合成序列的末端處。在Fmoc氨基酸與樹脂附著后，使用例如仲胺如哌啶或二乙胺使Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)，隨后為另一個(或相同)Fmoc保護(hù)的氨基酸的偶聯(lián)和脫保護(hù)。合成序列通過使單叔丁基保護(hù)的脂肪(a，")二酸偶聯(lián)而終止，所述單叔丁基保護(hù)的脂肪(a，")二酸如十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸或二十烷二酸單叔丁酯。化合物從樹脂中的切割使用稀酸來完成，所述稀酸如0.5-5%TFA/DCM(溶于二氯甲烷的三氟乙酸)、乙酸(例如溶于DCM的10%、或H0Ac/三氟乙醇/DCMl:1:8)、或溶于DCM的六氟異丙醇(參見例如"OrganicSynthesisonSolidPhase",F.Z.D6rwald,Wiley-VCH，2000.ISBN3-527-29950-5，"P印tides:ChemistryandBiology",N.Sewald&H._D.Jakubke，Wiley-VCH，2002，ISBN3-527-30405-3或"TheCombinatorialCheemistryCatalog"1999，NovabiochemAG，以及其中引用的參考文獻(xiàn))。這確保化合物中作為羧酸保護(hù)基團(tuán)存在的叔丁酯未脫保護(hù)。最后，活化C末端羧基(從樹脂中釋放)，例如作為N-羥基琥珀酰亞胺酯(OSu)，并且直接或在純化后在與本發(fā)明的親本胰島素的附著中用作偶聯(lián)劑。這個程序在實施例4中舉例說明?？商娲?，上文通式(II)的酰化試劑可以通過如下所述的溶液相合成進(jìn)行制備。單叔丁基保護(hù)的脂肪二酸，例如十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸或二十烷二酸單叔丁酯，如下所述活化為例如OSu-酯或活化為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其他活化酯，例如HOBt-或HOAt-酯。在合適溶劑例如THF、DMF、NMP(或溶劑混合物)中在合適堿例如DIPEA或三乙胺的存在下，使這種活性酯與氨基酸AA1、單叔丁基保護(hù)的AA2或AA3之一偶聯(lián)。中間體例如通過提取程序或通過層析程序進(jìn)行分離。再次如上所述對所得到的中間體實施活化(如上所述)，并且與氨基酸AA1、單叔丁基保護(hù)的AA2或AA3之一偶聯(lián)。重復(fù)這個程序直至獲得所需保護(hù)的中間體Acy-AAln-AA2m-AA3p-0H。這依次活化以提供通式(II)Acy-AAln-AA2m-AA3p-Act的酰化試劑。這個程序在實施例9中舉例說明。用于制備本發(fā)明的?；葝u素類似物的一般程序(A)34—般程序(A)在下文概述并且在第一個實施例中舉例說明實施例l，一般程序(A):A22K(NE-十六烷二酰-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基_YGlu)，B29R，desB30人胰島素這種胰島素與WO2006/082205，實施例3中描述的胰島素類似地制備，其中使用A22K，B29RdesB30人胰島素代替desB30人胰島素。LC-MS(電噴霧);m/z:1627(M+4)+/4;1302(M+5)+/5.實施例2，一般程序(A):A22K(NE-十六烷二酰-(2-氨乙基-PEG2000-基乙?；?)，B29RdesB30人胰島素歩驟1:使十六烷二酸叔丁酯2，5-二氧吡咯烷-1-基酯(218mg，0.497mmo1)溶解于DCM(10mL)中，加入丙胺-PEG-羧酸麗2000(來自NOF公司的SUNBRIGHT⑧PA-20HC，1000mg，約0.497rnrno1)，并且使混合物在氮下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至硅膠柱，并且用DCM伴隨乙醇梯度(0-10%)進(jìn)行洗脫，以獲得叔丁基十六烷二酰丙胺-PEG-羧酸(麗2000)中間體。歩驟2:A22K(NE_十六烷二酰-(2-氨乙基-PEG2000-基乙?；?)，B29R，desB30人胰島素的合成。使叔丁基十六烷二酰丙胺-PEG-羧酸(麗2000)(72mg，0.031mmo1)溶解于THF(4mL)中，加入DIPEA(6.3iiL，0.037,1)和TSTU(ll.lmg，0.037mmo1)，并且使混合物在氮下攪拌過夜，加入DMSO(lmL)，并且將混合物加入A22K，B29RdesB30人胰島素(180mg，0.031mmo1)連同三乙胺(43yL，0.31mmo1)—起溶解于DMSO(2mL)中的溶液中。使混合物在冰上冷卻，并且加入水(15mL)，用INHC1將pH首先調(diào)整至5.2，隨后用溶于水的1%氨調(diào)整回pH7-8?；旌衔镌谥苽湫虷PLC上進(jìn)行純化，其中使用在包含0.1%TFA的水中的35-75%乙腈梯度。在LC-MS上分析級分，并且使包含所需產(chǎn)物的級分合并，在真空中去除h-GIVEQCCTSICSLYQLENYCN—N^ij"OH1，-h-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPR'w35溶劑，并隨后凍干。凍干材料用TFA/水95:5處理30分鐘，并且在真空中去除溶劑。使用陰離子交換層析(RessourceQ柱，lml(AmershamBiosciences)純化粗產(chǎn)物，并且用在42.5%EtOH，O.25%TRIS，pH7.5中的乙酸銨梯度(0.25%至1.25X經(jīng)過25CV)洗脫，隨后為使用JupiterC4，5ii柱的制備型HPLC，用包含0.1%TFA的30-70%乙腈/水梯度在90分鐘內(nèi)洗脫，以產(chǎn)生標(biāo)題化合物。HPLC-MS:m/z約1360(M+/6).實施例3，一般程序(A):A22K(『-3-(3-(4-[3-(5-羧基戊酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲?；?丙酰-YGlu)，B29R，desB30人胰島素這種胰島素與W02006/082205，實施例8中描述的胰島素類似地制備，其中使用A22K，B29RdesB30人胰島素代替desB30人胰島素，并且使用己二酸單叔丁酯代替辛二酸單叔丁酯。MALDI-TOFMS(基質(zhì):芥子酸);m/z:6411。實施例4，一般程序(A):A22K(NE-[2-(2-[2-(2-[2-(十八烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠)，B29R，desB30人胰島素"一GIVEQCpTSICSLYQLENY"-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPR_°"h-GIVEQC(TSICSLYQLENYh-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTP"MALDI-TOFMS(基質(zhì)芥子酸)；m/z:6581。用于制備這種胰島素的?；噭┤缦挛闹兴鲞M(jìn)行制備,2^三笨甲*樹，H2_一t!。iFmoc'N0OO^OHFmOC'N0OO"^cr2-CI-三笨甲碁樹腐Fmoc'Nxv^0^^o^ij-Nv^o-^O^o一2-CI-三笨甲基樹腐HOFmocH&■0,2-CI-三笨甲碁樹脂、NO0。、N0。CQ9、2-CI-三笨曱基樹腐H3CO'OCI"UO^CH,3、NO0O、B0OOJ0H41i義、O"N。0O、N00。、起始樹脂2-氯三苯甲基樹脂，1.60mmol/g使1.0g樹脂在DCM(10ml)中膨脹30分鐘。1.用Fmoc-8-氨基_3，6_二氧雜辛酸的酰化:使0.39g(0.63eq，1.Ommol)Fmoc-8-氨基_3，6_二氧雜辛酸(Fmoc-OEG-OH)溶解于DCM(15ml)中，并且加入樹脂中。逐滴加入N，N-二異丙基乙胺(DIEA)(0.44ml，2.5mrno1)。使反應(yīng)混合物渦旋30分鐘，并且隨后加入甲醇(2ml)，并且使混合物渦旋另外15分鐘。使樹脂過濾，并且用NMP(2x8ml)和DCM(8x8ml)洗滌。加入20%哌啶/NMP(8ml)，靜置10分鐘，重復(fù)1次。過濾且用NMP(2x8ml)、DCM(3x8ml)和NMP(5x8ml)洗滌。陽性TNBS測試給出紅色樹脂。2.用Fmoc-8-氨基_3，6_二氧雜辛酸的酰化:使0.78g(2eq，2.Ommol)Fmoc-8-氨基_3，6_二氧雜辛酸溶解于NMP/DCM1:1(10ml)中。加入O.28g(2.2eq，2.4mmol)H0Su，隨后加入0.37ml(2.2eq，2.4mmol)DIC。允許反應(yīng)混合物靜置1小時，并且隨后加入樹脂中，并且最后加入O.407ml(2.2eq)DIEA。使反應(yīng)混合物渦旋16小時，過濾且用NMP(2x8ml)、DCM(3x8ml)和NMP(5x8ml)洗滌。37陽性TNBS測試給出無色樹脂。加入20%哌啶/NMP(10ml)，靜置10分鐘，重復(fù)1次。過濾且用NMP(2x8ml)、DCM(3x8ml)和NMP(5x8ml)洗滌。陽性TNBS測試給出紅色樹脂。用Fmoc-Glu-OtBu的?；?.86g(2eq，2.Ommol)Fmoc-Glu-OtBu溶解于NMP/DCM1:1(10ml)。力口入0.32g(2.2eq，2.4,1)H0BT，隨后加入0.37ml(2.2eq，2.4,1)DIC。允許反應(yīng)混合物靜置20分鐘，并且隨后轉(zhuǎn)移至樹脂中，并且最后加入0.407ml(2.2eq)DIEA。使反應(yīng)混合物渦旋16小時，過濾且用NMP(2x8ml)、DCM(3x8ml)和NMP(5x8ml)洗滌。陽性TNBS測試給出無色樹脂。加入20%哌啶/NMP(10ml)，靜置10分鐘，重復(fù)1次。過濾且用NMP(2x8ml)、DCM(3x8ml)和NMP(5x8ml)洗滌。陽性TNBS測試給出紅色樹脂。ffl+八'烷二,釘麵艦:使0.75g(2eq，2.0,1)十八烷二酸單叔丁酯溶解于NMP/DCM1:1(10ml)。加入0.32g(2.2eq，2.4,1)H0BT，隨后加入0.37ml(2.2eq，2.4,1)DIC。允許反應(yīng)混合物靜置20分鐘，并且隨后轉(zhuǎn)移至樹脂中，并且最后加入0.41ml(2.2eq)DIEA。使反應(yīng)混合物渦旋16小時，過濾且用NMP(2x8ml)、DCM(3x8ml)和NMP(5x8ml)洗滌。用TFA切割將8ml5%TFA/DCM加入樹脂中，并且使反應(yīng)混合物渦旋2小時，過濾，并且收集濾液。再將5%TFA/DCM(8ml)加入樹脂中，并且使混合物渦旋10分鐘，過濾，并且用DCM(2xl0ml)洗滌樹脂。使用約800ulDIEA使組合的濾液和洗液pH調(diào)整至堿性。使混合物在真空中蒸發(fā)，提供油(3.5g)。加入二乙醚(30ml)，并且通過傾析分離不溶解的油，并且在真空中蒸發(fā)。這提供作為油的l.lg17-KS)-l-叔丁氧-羰基-3-[2-(2-([2-(2-羧基甲氧基乙氧基)-乙基氨基甲?；鵠甲氧基}乙氧基)乙基氨基甲酰基]丙基氨基甲?；鶀_十七烷酸叔丁酯(替代名稱叔丁基十八烷二酰-Glu(OEG-OEG-OH)-OTBU)。LC-MS(SciexlOOAPI):m/z=846.6(M+l)+。OSu活化使上述叔丁基十八烷二酰-Glu(0EG-0EG-0H)-OTBU(0.63g)溶解于THF(35ml)中。加入DIEA(O.255ml，2eq.)，隨后為TSTU(O.45g，2eq.)，并且使混合物在室溫下下攪拌16小時?；旌衔镌谝宜嵋阴?250ml)和含水NaHS04(3xl00ml)之間分配。使有機相干燥(MgS04)，并且在真空中濃縮，以提供作為油的0.65g17-((S)-1-叔丁氧羰基-3-{2-[2-({2_[2-(2，5-二氧吡咯烷-l-基氧羰基甲氧基)乙氧基]乙基氨基甲酰基}甲氧基)乙氧基]乙基氨基甲?；鶀丙基氨基甲酰基)十七烷酸叔丁酯(替代名稱叔丁基十八烷二酰_Glu(0EG-0EG-0Su)-OT則。LC-MS:m/z=943.4(M+l)+。實施例5，一般程序(A):A22K(NE-3-(3-(4-[3-(13-羧基十三烷酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲?；?丙?！猋Glu)，B29R，desB30人胰島素38<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>LC-MS(電噴霧):m/z=1630，(M+4)+/4實施例6，一般程序(A):A22K(NE-[2-(2-[2-(2-[2-(二十烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠)，B29R，desB30人胰島素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>MALDI-MS(基質(zhì)芥子酸)；m/z:6606實施例7，一般程序(A):A14E，A22K(NE-[2-(2-[2-(2-[2-(十八烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠)，B25H，B29R，desB30人胰島素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>LC-MS(電噴霧)m/z=1634，(M+4)+/4實施例8，一般程序(A):A22K(NE-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基乙氧基)乙氧基]乙?；?，desB29，desB30人胰島素"陽GIVEQCCTSICSLYQLENY(N—(|"-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTP-om使63mgA22K(NE-十八烷二酰-yGlu_[2-(2_{2_[2_(2_氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素(實施例4)溶解于Tris緩沖液，pH8(50mM，10mL)中，并且加入固定在瓊脂糖凝膠上的在包含20%乙醇的Tris緩沖液，pH8(50mM，0.2mL)中的羧肽酶B，并且使混合物于室溫輕輕振蕩16小時。再加入固定在瓊脂糖凝膠上的在包含20X乙醇的Tris緩沖液，pH8(50rnM，0.8mL)中的羧肽酶B，并且使混合物輕輕振蕩24小時。過濾混合物，并且用包含20%乙醇的Tris緩沖液，pH8(50mM，0.8mL)洗滌過濾器。使組合的濾液和洗液凍干。通過HPLC純化殘渣，以提供標(biāo)題胰島素。MALDI-TOFMS:m/z=6424實施例9，一般程序(A):A14E，A22K(NE-二十烷二酰-YGlu-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙?；?)，B25H，B29R，desB30人胰島素?；噭?9-{1-叔丁氧羰基-3-[2-(2-{2-[2-(2_羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基氨基甲酰基]丙基氨基甲?；鶀十九烷酸叔丁酯N-羥基琥珀酰亞胺酯的制備和與親本胰島素的偶聯(lián)二十烷二酸叔丁酯N-羥某琥珀酰亞胺酯:使二十烷二酸單叔丁酯(5g，12.54mmo1)和TSTU(4.53g，15.05mmo1)在THF(50mL)中混合，加入DIPEA(2.62mL)，并且使所得到的混濁混合物在RT下攪拌2小時，隨后加入匿F(30mL)，導(dǎo)致澄清溶液，使其進(jìn)一步攪拌過夜。使所得到的混合物蒸發(fā)至幾乎干燥，并且使殘渣與冷乙腈混合，導(dǎo)致沉淀物的沉淀。過濾出沉淀物，并且在真空中干燥過夜，提供6.01g(97%)二十烷二酸叔丁酯N-羥基琥珀酰亞胺酯。MS(電噴霧):m/z:440(M-56(tBu))。2-(19-叔丁氣羰某十九烷酰氡某)戊二酸1-叔丁酯h.GIVEQCgTSICSLEQLENY(^N-[^Yif.h-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFHYTPR-oH使二十烷二酸叔丁酯2，5-二氧-吡咯烷-1-基酯(6.Olg，12.124,1)溶解于THF(150mL)中，并且與H-Glu-OtBu(2.71g，13.33mmol)在DMF/水(1/1，40mL)中的槳混合。這導(dǎo)致凝膠樣溶液，使所述凝膠樣溶液加熱，以產(chǎn)生澄清溶液，使所述澄清溶液在RT下攪拌3小時。隨后蒸發(fā)溶液，加入lOOmL水，并且使混合物加熱至60°C，這導(dǎo)致在冷卻時結(jié)晶的溶液。沉淀由乙腈重結(jié)晶，并且使晶體在真空中干燥。得率6.82g(96X)。MS(電噴霧)m/z584(M+1)。2-(19-叔丁氣羰某十九烷酰氡某)戊二酸l-叔丁酯5-(2，5-二氣吡咯烷-l-某)跑使2-(19-叔丁氧羰基十九烷酰氨基)戊二酸l-叔丁酯(6.52g，ll.17mmol)溶解于THF(100mL)，加入DIPEA(2.14mL)，隨后為TSTU(3.70g，12.29,1)溶于乙月青(25mL)的溶液。使混合物在RT下攪拌過夜，隨后使其蒸發(fā)，從而導(dǎo)致由乙腈重結(jié)晶的呈褐色的殘渣。在5t:冷卻過夜后，形成粉末。使這溶解于THF中，并且用MgS04干燥，過濾并且蒸發(fā)至干燥，以提供6.17g(81%)標(biāo)題化合物。MS(電噴霧)m/z:681(M+l)。19-{1-叔丁氣羰某-3-「2-(2-{2-「2-(2-羧某乙氣某)乙氣某]乙氣某}乙氣某)乙某M某甲酰某]丙某M某甲酰某1十九烷酸叔丁酯使2-(19-叔丁氧羰基十九烷酰氨基)戊二酸l-叔丁酯5-(2，5-二氧吡咯烷-1-基)酉旨(0.56g，0.822mmol)溶解于THF(20mL)中，加入溶于THF(20mL)中的3-(2-{2-[2-(2-氨基-乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸(0.22g，0.82mmo1)，并且使混合物在RT下攪拌3小時。LCMS指示反應(yīng)完成(MS:m/z831(M+l))，并且反應(yīng)混合物直接用于與TSTU的下述反應(yīng)。19-(1-叔丁氣羰某-3-{2-「2-(2-{2_「2_(2，5_二氣-吡咯烷_1_某氣羰某)乙氣乙氣某i乙氣某)乙氣某]乙;SM;S申酉先;gu^i;SM;S申酉先;S)+力,'烷11,卡又^酉旨4，RaaaaaaaaaJA00使19-{1-叔丁氧羰基-3-[2-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基氨基甲?；鵠丙基氨基甲酰基}十九烷酸叔丁酯(0.68g溶于THF40mL的粗溶液，0.82mmol)和TSTU(O.296g，0.982mmol)混合，通過加入DIPEA(0.171mL)調(diào)整pH，并且使所得混合物在RT下攪拌過夜。這導(dǎo)致澄清溶液，使其蒸發(fā)至干燥，并且用二乙醚處理，這提供作為蠟狀團(tuán)塊的1.2g標(biāo)題化合物，其無需進(jìn)一步純化而使用。MS(電噴霧):m/z816(M_2tBu)(calcd.816)。19-Q-叔丁氣羰某_3-{2-「2-(2-{2-「2-(2，5-二氣-吡咯烷_1_某氣羰某)乙氧某]二氧某1二氧某)二氧某]二魏某利編M魏某利媒)+力細(xì),卡汀船A14E,A22K,B25H,B29R,desB30人胰島素的偶聯(lián);使A14E，A22K，B25H，B29R，desB30人胰島素(0.3g，0.052mmol)溶解于乙腈(4mL)和琴03(0.lM，10mL)的混合物中，用NaOH(lM)將pH調(diào)整至10.6。將溶于乙月青(4mL)的19-(1-叔丁氧羰基-3-{2-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧-吡咯烷-1-基氧羰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基氨基甲?；鶀丙基氨基甲?；?十九烷酸叔丁酯(0.048g，0.052mmo1)加入溶液中，并且使混合物在RT下輕輕攪拌1小時。加入5滴甲胺溶液(溶于MeOH的40%)，并且使混合物攪拌另外5分鐘。隨后加入1份乙酸(冰的，5mL)，并且通過制備型HPLC(C18，3cm柱，梯度0-7分鐘20%乙腈、7_32分鐘20-100%乙腈、32-37分鐘100%乙腈)純化所得到的混合物。使純級分合并且冷凍干燥。使所得到的化合物溶解于TFA(30mL)中，并且在RT下攪拌2小時，隨后加入乙腈(20mL)和水(20mL)，并且通過制備型HPLC(C18，3cm柱，梯度0-7分鐘20%乙腈、7_32分鐘20-60%乙腈、32-37分鐘60%乙腈)純化混合物。使純級分合并且冷凍干燥。通過HPLC(C18，3cm柱，梯度0-7分鐘25%乙腈、7_47分鐘25-60%乙腈、47-52分鐘60%乙腈)純化，使純級分合并且冷凍干燥。這產(chǎn)生13mg最終產(chǎn)物。MS(電噴霧):m/z6520(calcd.6520)。實施例IO，一般程序(A):A18L，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>MS(電噴霧):m/z:6578(Calcd:6578)。實施例ll，一般程序(A):A8H，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素乙氧基)乙氧基0NOz0、l^0oJ|ho-GIVEQCtpAsiCSLYQLENY^n-.oh"-fvnqhlcgshlvealylvcgergffytp"MALDI-TOFMS:m/z=6615(Calcd.:6615)。實施例12，一般程序(A):A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基:乙氧基]乙?；鵢yGlu)，B29R，desB30人胰島素』-f一-giveqc(tsicslyqlenycn—n'"-fvnqhlcgshlvealylv^;gergffytp"MS(電噴霧)m/z=1677(m+4)/4。實施例13，一般程序(A):A22K(NE-二十烷二酰-yGlu-(3-{2-[2-(2-{2-[2-(2-氨基-乙氧基)乙氧基]乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基))，B29R，desB30人胰島素43<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>MS(電噴霧):m/z=6653(CalccL:6653)。實施例14，一般程序(A):A22K(NE-十八烷二酰-YGlu-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基乙氧基)丙?；?)，B29R，desB30人胰島素MALDI—T0FMS:m/z=6535(CalccL:6535)實施例15，一般程序(A):A14E，A22K(Ne-十八烷二酰-^6111-(3-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2_氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]丙?；?)，B25H，B29R，desB30人胰島素MS(電噴霧):m/z=1667.9(m+4)/4。實施例16，一般程序(A):A14E，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu-yGlu-(3_[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]丙酰基))，B25H，B29R，desB30人胰島素h<3IVEQCCTSICSLYQLENYCN-N、OH^>HOh.FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPRohh'GIVEQCCTSICSLEQLENYN，^"Yh-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFHYTPR.oh44<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>實施例17，一般程序(A):A14E，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-(3-(2-{2-[2-(2_氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰)—YGlu)，B25H，B29R，desB30人胰島素MALDI-T0FMS:m/z=6620(Calcd.:6621)實施例18，一般程序(A):A22K(NE-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-l2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基乙氧基)乙氧基]乙?；?，B28E，B29R，desB30人胰島素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>亂DI-T0FMS:m/z=6610(Calcd.:6610)實施例19，一般程序(A):A22K(NE-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>h-GIVEQC(TSICSLYQLENYCN—ISTYOH■h-FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPR.亂DI-TOFMS:m/z=6724(CalccL:6724)下述實施例中的胰島素可以使用相似程序進(jìn)行制備實施例20:A14E，A22K(『-[2-(2-[2-(2-[2-(二十烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠)，B25H，B29R，desB30人胰島素實施例21:A22K(『-十八烷二酰-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰-yGlu)，B29R，desB30人胰島素實施例22:A22K(ne-二十烷二酰-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰-yGlu)，B29R，desB30人胰島素實施例23:A22K(NE-十八烷二酰-(2-氨乙基-PEG2000-基乙酰基))，B29RdesB30人胰島素實施例24:A22K(NE-二十烷二酰-(2-氨乙基-PEG2000-基乙酰基))，B29RdesB30人胰島素實施例25:A22K(Ne-3-(3-(4-[3-(15-羧基十五烷酰氨基)丙氧基]丁氧基卜丙基氨基甲?；?丙酰_yGlu)，B29RdesB30人胰島素實施例26:A22K(Ne-3-(3-(4-[3-(17-羧基十七烷酰氨基)丙氧基]丁氧基卜丙基氨基甲?；?丙酰_yGlu)，B29RdesB30人胰島素實施例27:A22K(『-十四烷二酰-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰-yGlu)，B29R，desB30人胰島素實施例28:A8H，A22K(『-十八烷二酰-yGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例29:46A18L，A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2_(2_{2_[2-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例30:A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例31:A8H，A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例32:A18L，A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例33:A8H，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu—[2.氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}人胰島素實施例34:A8H，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu—[2.氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}人胰島素實施例35:A18L，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu—[2氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}人胰島素實施例36:A22K(N^二十烷二酰-yGlu-[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例37:A8H，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例38:A18L，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30實施例39:A8H，A22K(NE-十六烷二酰_YGlu-[2_(2_{2_[2_(2_{2_[2_(2_氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例40:A8H，A22K(NE-十六烷二酰_YGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例41:A18L，A22K(NE-十六烷二酰_YGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素實施例42:A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例43:A8H，A22K(NE-十六烷二酰_YGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例44:A18L，A22K(NE-十六烷二酰_YGlu-[2_(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例45:A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例46:A8H，A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素實施例47:A18L，A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素實施例48:本發(fā)明的胰島素衍生物的胰島素受體結(jié)合通過SPA測定(閃爍親近測定法(ScintillationProximityAssay))微量滴定板抗體捕獲測定，測定本發(fā)明的?；葝u素類似物對于人胰島素受體的親和力。使SPA-PVT抗體結(jié)合珠，抗小鼠試劑(AmershamBiosciences，目錄號PRNQ0017)與25ml結(jié)合緩沖液(lOOmMHEPESpH7.8;lOOmM氯化鈉，10mMMgS04，0.025%Tween-20)混合。關(guān)于48單個PackardOptiplate(PackardNo.6005190)的試劑混合物由2.4ii11:5000稀釋的純化重組人胰島素受體(含或不合外顯子11)、一些與5000cpm/100ii1試劑混合物對應(yīng)的A14Tyrr5l]-人胰島素母液、12iUF12抗體的1:1000稀釋物、3mlSPA珠和至總共12ml的結(jié)合緩沖液組成。隨后向PackardOptiplate中的每個孔加入總共100試劑混合物，并且在Optiplate中制備來自合適樣品的胰島素衍生物稀釋系列。隨后使樣品在輕輕振蕩時溫育16小時。隨后通過離心l分鐘分開相，并且在Topco皿ter中計數(shù)板。使用在GraphPadPrism2.01(GraphPadSoftware,SanDiego，CA)中的非線性回歸算法擬合結(jié)合數(shù)據(jù)。本發(fā)明所選擇的胰島素的胰島素受體親和力實施例編號IR-A親和力(0%HSA)IR-A親和力(4.5%HSA)修改親本胰島素(全部是desB30人胰島素)100%100%desB30人胰島素102%NDA22K，B29R24.7%NDA14E，A22K，B25H，B29R9.2%0.16%C18-gGludesB30168%2.8%C18-gGluA22K，B29R4161%14.0%C18-gGlu-0EG-0EGA22K，B29R19ND30%C18-gGlu-0EG-OEG-0EGA22K，B29R149%1.4%C20-gGluA22K，B29R6148%14.9%C20-gGlu-0EG-0EGA22K，B29R18162%13.4%C18-gGlu-0EG-0EGA22K，B28E，B29R10339%23.6%C18-gGlu-0EG-0EGA18L，A22K，B29R11417%63%C18-gGlu-0EG-0EGA8H，A22K，B29R722.4%5.0%C18-gGlu-0EG-0EGA14E，A22K，B25H，B29R49<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>實施例49:在大鼠中靜脈內(nèi)(i.v.)快速濃注本發(fā)明的胰島素衍生物后的血糖降低作用雄性Wistar大鼠，200-300g，禁食18小時，使用枸櫞酸芬太尼-多美康s.c.(1.25mg/ml多美康、2.5mg/ml氟阿尼酮、0.079mg/ml枸櫞酸芬太尼)2ml/kg作為先導(dǎo)劑量(至在測試物質(zhì)給藥前的時間點-30分鐘)和每20分鐘的另外lml/kg進(jìn)行麻醉。動物用靜脈內(nèi)注射(尾靜脈)lml/kg對照和測試化合物(通常劑量范圍0.125-20nmol/kg)進(jìn)行給藥。通過在尾尖中的毛細(xì)血管穿剌將用于測定整體血糖濃度的血樣收集在肝素化的10ii1玻璃管中，至?xí)r間-20分鐘和0分鐘(在給藥前)，以及至給藥后時間10、20、30、40、60、80、120和180分鐘。使用EBIOPlus自動分析儀(E卯endorf，德國)，通過固定葡糖氧化酶法在分析緩沖液中稀釋后測量血糖濃度。對于每個劑量和每種化合物制備平均血漿葡萄糖濃度線(平均值士SEM)。實施例50:本發(fā)明的?；葝u素類似物相對于人胰島素的效力在實驗當(dāng)天重238-383g的SpragueDawley雄性大鼠用于夾鉗實驗。大鼠在受控環(huán)境條件下自由接近飼料，并且在夾鉗實驗前禁食過夜(從3pm起)。實驗規(guī)禾呈在外科手術(shù)程序前使大鼠在動物研究室中適應(yīng)至少1周。在夾鉗實驗前約1周，在氟烷麻醉下將Tygon導(dǎo)管插入頸靜脈(用于輸注)和頸動脈(用于血液取樣)內(nèi)，并且外置(exteriorised)且固定在頸的背部。外科手術(shù)后對大鼠給予Str印tocilinvet.(Boehringerlngelheim;0.15ml/大鼠，i.m.)，并且在恢復(fù)期過程中將其置于動物監(jiān)護(hù)室(25°C)中。為了獲得止痛，在麻醉過程中施用Anorphin(0.06mg/大鼠，s.c.)，并且在從麻醉完全恢復(fù)后(2-3小時)以及再次每天1次施用卡洛芬(Rimadyl)(1.5mg/kg，s.c.)，共2天。在實驗當(dāng)天7am時，禁食過夜(從前一天3pm起)的大鼠進(jìn)行稱重，并且與取樣注身寸器禾口輸注系纟充(Harvard22Basic栗，Harvard,禾口PerfectumHypodermic玻璃注身寸器，Aldrich)連接，并且隨后放置到個別夾鉗籠內(nèi)，在其中它們在實驗開始前休息約45分鐘。在整個實驗期間大鼠能夠在其通常墊草上自由移動，并且自由接近飲用水。30分鐘基礎(chǔ)期后，在這期間以10分鐘時間間隔測量血漿葡萄糖水平，使待測試的胰島素衍生物和人胰島素(1個劑量水平/大鼠，n=6-7只/劑量水平)以恒定速率輸注(i.v.)300分鐘。自始至終以10分鐘時間間隔測量血槳葡萄糖水平，并且相應(yīng)調(diào)整20%含水葡萄糖的輸注，以維持血糖正常(euglyceamia)。使來自每只大鼠的重懸浮紅細(xì)胞樣品合并，并且經(jīng)由頸動脈導(dǎo)管以約1/2ml體積送回。在每次實驗當(dāng)天，在夾鉗實驗前和結(jié)束時獲得待測試的個別胰島素衍生物溶液和人胰島素溶液的樣品，并且通過HPLC證實肽的濃度。在研究前和結(jié)束時的相關(guān)時間點時測量大鼠胰島素和c-肽以及待測試的胰島素衍生物和人胰島素的血漿濃度。在實驗結(jié)束時使用超劑量戊巴比妥殺死大鼠。實施例51:胰島素衍生物肺遞送給大鼠測試物質(zhì)將通過滴注法進(jìn)行肺給藥。簡言之，使雄性Wistar大鼠(約250g)在約60ml芬太尼/dehydrodenzperidol/-多美康中麻醉，其作為6.6ml/kgsc先導(dǎo)劑量并且隨后為30分鐘時間間隔的3.3ml/kgsc的3次維持劑量給予。誘導(dǎo)麻醉后10分鐘，從尾靜脈獲得基礎(chǔ)樣品(t=-20分鐘)，隨后為緊在測試物質(zhì)給藥前的基礎(chǔ)樣品(t=0)。在t=0時，使測試物質(zhì)氣管內(nèi)給藥到1個肺內(nèi)。使具有圓形末端的專門插管封固在包含200ul空氣和測試物質(zhì)(lml/kg)的注射器上。經(jīng)由孔，將插管引入氣管內(nèi)，并且向前進(jìn)入一個主支氣管內(nèi)-正好經(jīng)過分叉(bifurcature)。在插入期間，從外部觸摸頸以確保氣管內(nèi)定位。將注射器的內(nèi)容物注射，隨后為2秒暫停。其后，將插管慢慢抽回。在測試期間使大鼠保持麻醉(血樣進(jìn)行最多達(dá)4或8小時)，并且在實驗后實施安死術(shù)。序列表SEQIDNO:1是實施例1_6、8、12-14、18和19的A1-A21鏈。SEQIDN0:2是實施例1-6、10-14和19的B1-B29鏈。SEQIDNO:3是實施例7、9禾P15-17的A1-A21鏈。SEQIDNO:4是實施例7、9禾P15-17的B1-B29鏈。SEQIDNO:5是實施例10的A1-A21鏈。SEQIDNO:6是實施例11的A1-A21鏈。SEQIDNO:7是實施例18的B1-B29鏈。SEQIDNO:8是實施例8的B1-B28鏈。權(quán)利要求一種?；葝u素類似物，其中所述胰島素類似物包括連接于A21氨基酸殘基C末端的賴氨酸殘基、或包括賴氨酸殘基的最高達(dá)4個氨基酸殘基的肽殘基，所述肽殘基連接于A21氨基酸殘基C末端，特征在于包括亞烷基二醇部分的?；糠峙cA22位置中的賴氨酸殘基附著、或與A21氨基酸殘基的C末端附著的肽殘基中存在的賴氨酸殘基附著，并且其中在所述胰島素類似物中僅存在一個賴氨酸(K，Lys)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的酰化胰島素類似物，其中所述?；糠志哂型ㄊ絀:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>射n是0或1-3的整數(shù)，m是0或1-6的整數(shù)，p是l、2或3，Acy是包括約8-24個碳原子的脂肪酸或脂肪二酸，從其中在形式上羥基已從脂肪酸的羧基中或從脂肪二酸的羧基之一中去除，AA1是中性環(huán)狀氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA2是酸性氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA3是中性、包含亞烷基二醇的氨基酸，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，AA1、AA2和AA3在式中出現(xiàn)的次序可以獨立地互換，Acy、AA1、AA2和/或AA3之間的連接是酰胺(肽)鍵，和與親本胰島素的附著可以來自式(I)的?；糠种械腁A1、AA2或AA3殘基的C末端或來自式(I)的部分中存在的AA2殘基的一條或多條側(cè)鏈之一。3.根據(jù)前述可能權(quán)利要求中任一項的?；葝u素類似物，其中AA1選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，并且其中q是0、1、2、3或4。4.根據(jù)前述權(quán)利要求的?；葝u素類似物，其中AA1是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除。5.根據(jù)前述可能權(quán)利要求中任一項的?；葝u素類似物，其中AA2選自YGlu、PAsp或下述化合物中的任何一種<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(5、6，"'、0。H和，從其中在形式上氫原子已從氨基中去除和羥基已從羧基中去除，并且其中箭標(biāo)指示與AA1、AA2或AA3的氨基的附著點。6.根據(jù)前述可能權(quán)利要求中任一項的?；葝u素類似物，其是下述化合物中的任何一種A22K(NE-十六烷二酰-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰-YGlu)，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-十六烷二酰-(2-氨乙基-PEG2000-基乙酰基))，B29RdesB30人胰島素；A22K(NE-3-(3-{4-[3-(5_羧基戊酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)丙酰_yGlu)，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-[2-(2-[2-(2-[2-(十八烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠)，B29R，desB30人胰島素；A22K(『-3-(3-(4-[3-(13-羧基十三烷酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲?；?丙酰-YGlu)，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-[2-(2-[2-(2-[2_(二十烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰-氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰基])，B29R，desB30人胰島素；A14E，A22K(NE-[2_(2_[2_(2_[2_(十八烷二酰-yGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠)，B25H，B29R，desB30人胰島素；A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，desB29，desB30人胰島素；A14E，A22K(『-二十烷二酰-YGlu-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰))，B25H，B29R，desB30人胰島素;A18L，A22K(『-十八烷二酰-yGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(N吣十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?YGlu)，B29R，desB30人胰島素^221((『-二十烷二酰-^6111-(3-{2-[2-(2-{2-[2-(2-氨基-乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰))，B29R，desB30人胰島素；A22K(『-十八烷二酰-YGlu-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰))，B29R，desB30人胰島素；A14E，A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-(3_[2_(2-{2_[2_(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]丙酰))，B25H，B29R，desB30人胰島素；A14E，A22K(NE-二十烷二酰-yGlu-yGlu-(3-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]丙酰))，B25H，B29R，desB30人胰島素；A14E，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰)-YGlu)，B25H，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B28E，B29R，desB30人胰島素；22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A14E，A22K(『-[2-(2-[2-(2-[2-(二十烷二酰-YGlu)氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰-氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰基])，B25H，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-十八烷二酰-(3-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}_乙氧基)丙酰-YGlu)，B29R，desB30人胰島素；A22K(『-二十烷二酰-(3-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰-YGlu)，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-十八烷二酰-(2-氨乙基-PEG2000-基乙酰基))，B29RdesB30人胰島素；A22K(NE-二十烷二酰-(2_氨乙基-PEG2000-基乙酰基))，B29RdesB30人胰島素；A22K(Ne-3-(3-{4-[3-(15_羧基十五烷酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲?；?-丙酰-YGlu)，B29RdesB30人胰島素；A22K(Ne-3-(3-(4-[3-(17-羧基十七烷酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲?；?丙酰-yGlu)，B29RdesB30人胰島素；A22K(NE-十四烷二酰-(3-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰-YGlu)，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A18L，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-十八烷二酰-yGlu-[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素；A18L，A22K(『-十八烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu-[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-二十烷二酰_yGlu-[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A18L，A22K(NE-二十烷二酰-yGlu_[2_(2-{2_[2_(2-{2_[2_(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-二十烷二酰-yGlu_[2_(2-{2_[2_(2-{2_[2_(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-二十烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A18L，A22K(NE-二十烷二酰-yGlu-[2-(2-{2_[2_(2-{2_[2_(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素；A18L，A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-十六烷二酰_YGlu-[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-{2_[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素；A18L，A22K(『-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A22K(NE-十六烷二酰-yGlu-[2-(2-{2-[2_(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素；A8H，A22K(NE-十六烷二酰-YGlu-[2-(2-(2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)，B29R，desB30人胰島素和A18L，A22K(NE-十六烷二酰-yGlu_[2_(2-{2_[2_(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；?，B29R，desB30人胰島素。全文摘要可以方便地通過肺施用?；葝u素類似物，其中所述胰島素類似物包括連接于A21氨基酸殘基C末端的賴氨酸殘基、或包括賴氨酸殘基的最高達(dá)4個氨基酸殘基的肽殘基，所述肽殘基連接于A21氨基酸殘基C末端，特征在于包括亞烷基二醇部分的?；糠峙cA22位置中的賴氨酸殘基附著、或與A21氨基酸殘基的C末端附著的肽殘基中存在的賴氨酸殘基附著，并且其中在胰島素類似物中僅存在一個賴氨酸(K，Lys)。文檔編號C07K14/62GK101784562SQ200880102999公開日2010年7月21日申請日期2008年8月15日優(yōu)先權(quán)日2007年8月15日發(fā)明者D·X·格拉姆,J·T·科德拉,P·W·加里貝,P·雅各布森,P·馬德森,T·B·克爾德森,T·M·塔格摩斯,T·霍格-詹森申請人:諾沃-諾迪斯克有限公司