專利名稱：一種綠麥隆農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明一種綠麥隆除草劑殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑，屬于生物技術領域，是利用微生 物的方法降解化學農(nóng)藥殘留，適用于現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中綠色無公害農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)與加工。
二背景技術：
除草劑的使用大大地促進了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)挽回了大量因雜草或者殘留藥 害等原因造成的損失，并極大地提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的勞動效率和機械化程度，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的現(xiàn) 代化進程中起了不可估量的作用。但同時農(nóng)藥都是一些有毒有害化學物質，當進入生態(tài)環(huán)境 后，由于有些除草劑在土壤中殘效時間長，殘留農(nóng)藥對后茬作物敏感，造成不良影響。雖然 控制了對農(nóng)作物生長有害的雜草，同時也對生態(tài)系統(tǒng)和后茬作物造成了的危害。農(nóng)藥的大量 使用引起農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標，嚴重影響了人民的身體健康及農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯。隨著人 們生活水平的提高和環(huán)境保護意識的增強，全社會對農(nóng)藥殘留帶來的直接危害和潛在影響亦 愈來愈關注，人們迫切需要無農(nóng)藥殘留污染的清潔的綠色農(nóng)產(chǎn)品。但從目前我國的農(nóng)業(yè)生產(chǎn) 形式和人口狀況來看，以停止農(nóng)藥使用降低農(nóng)業(yè)產(chǎn)量為代價的無公害生產(chǎn)模式是行不通的， 農(nóng)藥作為控制雜草危害的有效手段還將繼續(xù)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮巨大的作用。如何能解決農(nóng)業(yè) 生產(chǎn)中的這個兩難問題就成為各個學科的研究熱點。實驗室和實際應用研究都表明利用微生 物來降解消除土壤中的農(nóng)藥殘留"庫"容量，從而降低糧食、蔬菜、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥 殘留，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質和經(jīng)濟價值是可行的?，F(xiàn)有技術中本課題組已擁有降解菌的發(fā)明專 利(ZL96106317.3，公開號CN1145408A，
公開日1997年3月19日)，該專利是一株芽 胞桿菌J5，能有效地降解甲胺磷,但該菌株降解譜窄，僅能降解甲胺磷一種農(nóng)藥，從而使用受 到限制。
三
發(fā)明內容
技術問題本發(fā)明的目的在于針對生產(chǎn)實踐中的實際問題和需求，開發(fā)研制出一種新 型的農(nóng)藥殘留降解菌劑，使用本菌劑可以使綠麥隆的殘留量降低95%以上，生產(chǎn)和使用 成本較低。使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長過程中正常使用化學農(nóng)藥進行雜草防 治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求，消除綠麥隆殘留引起的除草劑對非靶 標作物的藥害。
技術方案下面為本發(fā)明的主要內容
本發(fā)明提供一種消除綠麥隆農(nóng)藥殘留的降解菌，其菌株是革蘭氏染色反應陰性菌
YBL3 (2008年5月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，菌種保藏號為CCTCC NO: M 208076)，經(jīng)鑒定為鞘氨醇桿菌屬(S/^/"goW"附sp.)。主要生物學特性為革蘭氏反應陰性， 菌體為無芽孢的直桿狀，菌體大小0.6-0.7xl.5-1.6pm，不發(fā)酵乳糖發(fā)酵陽性，伏-普反 應陰性，甲基紅反應陰性，不產(chǎn)生吲哚，硫化氫產(chǎn)生陰性，硝酸鹽還原反應陽性。該菌株 16S rDNA的Genbank登陸號為EU159273。使用上述綠麥隆農(nóng)藥殘留降解菌生產(chǎn)菌劑 的工藝為斜面種一搖瓶種一種子罐一生產(chǎn)罐一產(chǎn)品(包裝劑型為液體菌劑或固體吸附菌 劑)。
本發(fā)明的詳細實施步驟為
(1) 將綠麥隆除草劑殘留的降解菌的試管種接種于LB培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至
對數(shù)期；
(2) 將上述培養(yǎng)好的菌種按10%的接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對數(shù)生長期。 種子罐所用的培養(yǎng)基配方為麥芽糖0.8%， (NH4)2S041%， K2HPO40.2%， MgS04 0.05%, NaC10.01%， CaCO30.3%，酵母膏0.02%， pH值7,0-7.2。
(3) 將種子液按10%的接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同。
(4) 在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1: 0.6—1.2，攪拌速度為 180—240轉/分，培養(yǎng)溫度為30—35'C，整個工藝流程培養(yǎng)時間為48—60小時。發(fā)酵完
成后培養(yǎng)液即為菌劑。
有益效果使用該發(fā)明生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑具有生產(chǎn)使用成本低，使用方便，去 除效果好的優(yōu)點，適合在全國糧油蔬菜生產(chǎn)出口基地或有綠色食品商標標志的地方大面積 推廣使用。本發(fā)明對于保護生態(tài)環(huán)境，保護人民的身體健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的附加值具有重 要的意義。降解菌YBL3能使綠麥隆這種苯基取代脲類除草劑的殘留量降低90%以上， 而且還能降解敵草隆和異丙隆等，大大降低了生產(chǎn)和使用過程中的工作量，降低了生產(chǎn)和
使用成本(表1)。使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長過程中正常使用化學農(nóng)藥進 行雜草防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。并且該菌為革蘭氏陰性菌， 在田間的存活時間適當不會影響以后農(nóng)藥使用的效果。
本發(fā)明成功地解決了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)藥殘留超標問題，既充分發(fā)揮了化學農(nóng)藥在農(nóng)作物 雜草防治中的高效快速的作用，又可以生產(chǎn)出無毒無公害的綠色農(nóng)產(chǎn)品。具體實施例方式
以下敘述本發(fā)明的實施例。
本發(fā)明提供一種消除綠麥隆農(nóng)藥殘留的降解菌，其菌株YBL3 (2008年5月22日保 藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，菌種保藏號為CCTCC NO: M 208076)是專利申請人分離 于采自農(nóng)藥廠的土壤樣品，屬革蘭氏染色反應陰性菌，經(jīng)鑒定為鞘氨醇桿菌屬 (Sp/H力go6/wwsp，)。主要生物學特性為革蘭氏反應陰性，菌體為無芽孢的直桿狀，菌體 大小0.6-0.7xl.5-1.6pm，不發(fā)酵乳糖發(fā)酵陽性，伏-普反應陰性，甲基紅反應陰性，不產(chǎn) 生噴哚，硫化氫產(chǎn)生陰性，硝酸鹽還原反應陽性。該菌株16SrDNA的Genbank登陸號 為EU159273。
無機鹽液體培養(yǎng)基((NH4)2S04 1 .Og， K2HP04 1.5g， KH2P04 0,5g, NaCl 1.0 g， MgS047H20 0.05 g ,水1000mL，pH7.0 7.2.)中降解菌YBL3降解特性測定
挑取YBL3單菌落于5ml LB液體培養(yǎng)基中，30°C、 165 r /min振蕩培養(yǎng)24h，獲得新 鮮菌液。在100ml的50mg/L綠麥隆無機鹽液體培養(yǎng)基中，接入5ml離心懸浮后的菌液， 于3(TC搖床培養(yǎng)(170r/min)，定時取樣測定，測定綠麥隆的含量，結果見表1，無機鹽液 體培養(yǎng)基中降解菌YBL3降解綠麥隆達到95%。
——表YBL3在無機鹽培5^f ，^麥，的降解特性 底物 綠麥隆敵草隆 異丙隆
降解率％ >95% >95% >99%
土壤中降解菌綠麥隆降解特性測定
稱取1000g土壤，加入綠麥隆，使土壤中含藥濃度為30mg/kg，加入YBL3菌液，混勻， 置于3(TC培養(yǎng)箱中黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，定時取樣測定綠麥隆在土壤中的殘留量，結果見表 1， 土壤中降解菌YBL3降解綠麥隆達到90%。
使用上述綠麥隆農(nóng)藥殘留降解菌生產(chǎn)菌劑的工藝為斜面種一搖瓶種一種子罐一生產(chǎn)罐一產(chǎn)品(包裝劑型為液體菌劑或固體吸附菌劑)。
將本發(fā)明的微生物苯基取代脲類除草劑綠麥隆農(nóng)藥殘留的降解菌YBL3的原種在培養(yǎng)皿 上活化，并測定降解性能，接種于試管斜面上備用。試管種接種于含200ml肉湯培養(yǎng)基1000ml 搖瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)至對數(shù)期，準備接種種子罐。種子罐500升，投料量400升，培養(yǎng)基配 方為麥芽糖0.8%， (NH4)2S041%， K2HPO40.2%， MgSO40.05%， NaC10.01%， CaC03 0.3%， 酵母膏0.02%， pH值7.0-7.2。投料完畢后121。C高壓濕熱滅菌，冷卻至33。C后，將上述培養(yǎng) 好的搖瓶菌種按10%的接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，攪拌速度為220轉 /分，無菌空氣通入量為1: 0.8。將到達對數(shù)期的種子液按10%的接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)， 生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基成分與種子罐培養(yǎng)基相同。生產(chǎn)罐容量5噸，投料量4.5噸。投料后的生 產(chǎn)罐l.lkg/cn^的壓力下，12rC高壓濕熱滅菌，滅菌后冷卻至35。C以下，通無菌空氣保持無 菌狀態(tài)備用。接種后的生產(chǎn)罐溫度控制在30—35。C，生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量 為l: 0.8—1.0，攪拌速度為240轉/分，整個工藝流程培養(yǎng)時間為48—60小時。發(fā)酵結束后 菌體數(shù)量達到10億個/ml以上。
發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附 用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。
權利要求
1.一種農(nóng)藥殘留降解菌，其特征在于，該微生物是革蘭氏染色陰性的鞘氨醇桿菌屬(Sphingobium sp.)的菌株YBL3，2008年5月22日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，菌種保藏號為CCTCC NOM 208076。
全文摘要
本發(fā)明提供一種消除除草劑綠麥隆殘留的降解菌劑，所用菌株為革蘭氏染色反應陰性菌YBL3，經(jīng)鑒定為鞘氨醇桿菌屬(Sphingobium sp.)。2008年5月23日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，菌種保藏號為CCTCC M 208076。生產(chǎn)菌劑的工藝為斜面種—搖瓶種—種子罐—生產(chǎn)罐—產(chǎn)品(包裝劑型為液體菌劑或固體吸附菌劑)。降解菌產(chǎn)品直接施用可使作物中農(nóng)藥殘留量降低90％以上，解決了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)藥殘留超標問題，可生產(chǎn)出無毒無公害的綠色農(nóng)產(chǎn)品。
文檔編號A62D3/00GK101338286SQ200810021458
公開日2009年1月7日 申請日期2008年8月15日 優(yōu)先權日2008年8月15日
發(fā)明者健 何, 孫紀全, 李順鵬, 斌 梁, 趙煜坤, 星 黃 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學