專利名稱：：一種氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑，屬于生物高
技術(shù)領(lǐng)域：
，是利用微生物的方法降解化學(xué)農(nóng)藥殘留，適用于現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中綠色無公害農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)。二
背景技術(shù)：
：化學(xué)農(nóng)藥的使用大大地促進(jìn)了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)挽回了大量因植物病、蟲、草害等原因造成的損失，并極大地提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的勞動(dòng)效率和機(jī)械化程度，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的現(xiàn)代化進(jìn)程中起了不可估量的作用。但同時(shí)農(nóng)藥是一些有毒有害化學(xué)物質(zhì)，它們進(jìn)入生態(tài)環(huán)境后，不僅殺死了對(duì)人類有害的生物，同時(shí)也對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成了嚴(yán)重的危害。農(nóng)藥的大量使用引起農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，嚴(yán)重影響了人們的身體健康及農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯。隨著人們生活水平的提高和環(huán)境保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，全社會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留帶來的直接危害和潛在影響也越來越關(guān)注，人們迫切需要無農(nóng)藥殘留污染的清潔綠色農(nóng)產(chǎn)品。但從目前我國的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)形式和人口狀況來看，以停止農(nóng)藥使用降低農(nóng)業(yè)產(chǎn)量為代價(jià)的無公害生產(chǎn)模式是行不通的，農(nóng)藥作為控制植物病、蟲、草害的有效手段還將繼續(xù)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮巨大的作用。如何能解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的這個(gè)兩難問題就成為各個(gè)學(xué)科的研究熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室和實(shí)際應(yīng)用研究都表明利用微生物來降解土壤中的農(nóng)藥殘留，從而降低糧食、蔬菜、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值是可行的?，F(xiàn)有技術(shù)中本課題組已擁有降解菌的發(fā)明專利(ZL96106317.3，公開號(hào)CN1145408A，公開日1997年3月19日)，該專利是一株芽孢桿菌J5，能有效地降解甲胺磷農(nóng)藥殘留。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于針對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中的實(shí)際問題和需求，開發(fā)研制出一種新型的農(nóng)藥殘留降解菌劑，使用本菌劑可以使氟磺胺草醚的殘留量降低67%以上，生產(chǎn)和使用成本較低。使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長過程中正常使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行草害防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。技術(shù)方案下面為本發(fā)明的主要內(nèi)容本發(fā)明提供一種氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留的降解菌ZB-l,為革蘭氏染色陽性菌，2008年11月3日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.2782，經(jīng)鑒定為芽孢桿菌(Baa7/"s平)。主要生物學(xué)特性為G+，菌體為短桿狀，大小為0.5-1.0xl.5-5.0tim，芽孢圓形，接觸酶反應(yīng)、明膠水解、苯丙氨酸脫氨酶為陽性；V-P反應(yīng)、M.R反應(yīng)、硝酸鹽反應(yīng)、淀粉水解、酪氨酸水解為陰性。使用上述氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解菌ZB-1生產(chǎn)菌劑的工藝為:試管斜面種一搖瓶種一種子罐一生產(chǎn)罐一產(chǎn)品(包裝劑型為液體菌劑或固體吸附菌劑)。本發(fā)明的詳細(xì)實(shí)施步驟為1.將氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解菌ZB-1試管種接種于肉湯培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；2.將上述培養(yǎng)好的菌種按種子罐培養(yǎng)基的10%接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，種子罐所用的培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分比)葡萄糖0.8%,NH4N031%，K2HPO40.2%,MgSO40.05%，NaC10.01%，CaCO30.3%，酵母膏0.02%，pH7.2-7.5;3.將種子液按生產(chǎn)罐培養(yǎng)基的10%接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1:0.6-1.2，攪抨速度為180-240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30-35°C，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液即為菌劑。有益效果使用該發(fā)明生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑具有生產(chǎn)使用成本低，使用方便，去除效果好的優(yōu)點(diǎn)，適合在全國糧油蔬菜生產(chǎn)出口基地或有綠色食品商標(biāo)標(biāo)志的地區(qū)大面積推廣使用。本發(fā)明對(duì)于保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保護(hù)人民的身體健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的附加值具有重要的意義。降解菌ZB-l能將土壤中氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解67n/。以上(表1)，使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長過程中正常使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行草害防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。本發(fā)明成功地解決了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題，既充分發(fā)揮了化學(xué)農(nóng)藥在草害防治中的高效快速的作用，又可以生產(chǎn)出無毒無公害的綠色農(nóng)產(chǎn)品。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種消除氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留的降解菌劑，所用菌株為革蘭氏染色陽性菌ZB-1，分離自黑龍江省齊齊哈爾市長期使用氟磺胺草醚農(nóng)藥的農(nóng)田土壤。2008年11月3日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.2782，經(jīng)鑒定為芽孢桿菌(5ac///"s平)。主要生物學(xué)特性為G+，菌體為短桿狀，大小為0.5-1.0xl.5-5.0拜，芽孢圓形，接觸酶反應(yīng)、明膠水解、苯丙氨酸脫氨酶為陽性；V-P反應(yīng)、M.R反應(yīng)、硝酸鹽反應(yīng)、淀粉水解、酪氨酸水解為陰性。無機(jī)鹽酵母膏液體培養(yǎng)基中降解菌ZB-1降解特性測定挑取ZB-1單菌落于3mlLB液體培養(yǎng)基(蛋白胨10克，酵母膏5克，NaC110克，水1000毫升，pH7.0-7.2)中，30°C、160rmp/min振蕩培養(yǎng)12h，獲得新鮮菌液。在100ml的50mg/l氟磺胺草醚的無機(jī)鹽酵母膏液體培養(yǎng)基(NH4N031.0克，K2HP041.5克，KH2P040.5克，MgS040.2克，NaC10.5克，酵母膏0.01克，水1000毫升，pH7.0-7.2)中，接入3ml離心懸浮后的菌液(菌液濃度為107個(gè)細(xì)胞/毫升)，于3(TC搖床培養(yǎng)(160rmp/min)，定時(shí)取樣測定，測定氟磺胺草醚的含量，結(jié)果見表l，無機(jī)鹽酵母膏液體培養(yǎng)基中降解菌ZB-1對(duì)氟磺胺草醚的降解率達(dá)到82.4%。土壤中降解菌ZB-1對(duì)氟磺胺草醚降解特性測定稱取1000g土壤，加入氟磺胺草醚，使土壤中含藥濃度為10mg/kg，加入ZB-1菌液，混勻，使土壤中的ZB-1濃度為108個(gè)細(xì)胞/克土，置于3(TC培養(yǎng)箱中黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，定時(shí)取樣測定氟磺胺草醚在土壤中的殘留量，結(jié)果見表l，土壤中降解菌ZB-1降解氟磺胺草醚達(dá)到67.1%。表1:菌株ZB-1在無機(jī)鹽酵母膏液體培養(yǎng)基中和土壤中對(duì)氟磺胺草醚的降解特性<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>將本發(fā)明的農(nóng)藥殘留降解菌ZB-1的原種在培養(yǎng)皿上活化，接種于試管斜面上備用。斜面種培養(yǎng)基配方蛋白胨10克，酵母膏5克，NaC110克，水1000毫升，瓊脂2克，pH7.0-7.2。將試管斜面菌種接種于含200ml肉湯培養(yǎng)基(牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaCl5克，水1000毫升，pH7.0-7.2)的1000ml搖瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，準(zhǔn)備接種種子罐。種子罐500升，投料量400升，培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分比)葡萄糖0.8%,NH4N031%，K2HPO40.2%，MgSO40.05%，NaCl0.01%，CaCO30.3%,酵母膏0.02%,pH值7.2-7.5。投料完畢后12rC高壓濕熱滅菌，冷卻至33'C后，將上述培養(yǎng)好的搖瓶菌種按10%的接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，攪拌速度為220轉(zhuǎn)/分，無菌空氣通入量為1:0.8。將到達(dá)對(duì)數(shù)期的種子液按10%的接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基成分與種子罐培養(yǎng)基相同。生產(chǎn)罐容量5噸，投料量4.5噸。投料后的生產(chǎn)罐1.1kg/cr^的壓力下，12rC高壓濕熱滅菌，滅菌后冷卻至35'C以下，通無菌空氣保持無菌狀態(tài)備用。接種后的生產(chǎn)罐溫度控制在30-35°C，生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1:0.8-1.0，攪拌速度為240轉(zhuǎn)/分，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)。發(fā)酵結(jié)束后菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/ml以上。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。權(quán)利要求1.一種氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留的降解菌ZB-1，為革蘭氏陽性菌，經(jīng)鑒定為芽孢桿菌(Bacillussp.)，2008年11月3日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.2782。2.—種用權(quán)利要求1所述的氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解菌ZB-1生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑，是通過以下方法生產(chǎn)而成的1)將權(quán)利要求1所述氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留降解菌ZB-1菌種接種于肉湯培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；2)將上述培養(yǎng)好的菌種按種子罐培養(yǎng)基的體積比10%接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，種子罐所用的質(zhì)量百分比培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HP040.2%,MgS040.05%，NaCl0.01%，CaC030.3%，酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3)將種子液按生產(chǎn)罐培養(yǎng)基的體積10%接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；4)在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無菌空氣的通氣量為1:0.6-1.2,攪拌速度為180-240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30-35'C，全流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/ml以上，發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。全文摘要本發(fā)明提供一種消除氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留的降解菌劑，屬于生物高
技術(shù)領(lǐng)域：
。所用菌株為革蘭氏染色陽性菌ZB-1，經(jīng)鑒定為芽孢桿菌(Bacillussp.)。主要生物學(xué)特性為G⁺，菌體為短桿狀，大小為0.5-1.0×1.5-5.0μm，芽孢圓形，接觸酶反應(yīng)、明膠水解、苯丙氨酸脫氨酶為陽性；V-P反應(yīng)、M.R反應(yīng)、硝酸鹽反應(yīng)、淀粉水解、酪氨酸水解為陰性。將ZB-1菌種發(fā)酵完成后的培養(yǎng)液即為菌劑。降解菌產(chǎn)品的施用可使土壤中氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留量降低67％以上，可以解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中氟磺胺草醚農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題。文檔編號(hào)A62D3/00GK101525584SQ20091002861公開日2009年9月9日申請(qǐng)日期2009年1月5日優(yōu)先權(quán)日2009年1月5日發(fā)明者馮昭中,孫紀(jì)全,李順鵬,波梁,星黃申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)