專利名稱：：多肽作為增附劑的用途的制作方法多肽作為增附劑的用途本發(fā)明涉及包含化合物的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中以重量計該化合物的至少40%由作為復(fù)合材料的至少兩個相鄰層之間或涂層與基材之間的增附劑的通過肽鍵連接的a-氨基酸(下文中簡稱為多肽)組成。更具體地，本發(fā)明涉及疏水蛋白(Hydr叩hobin)作為增附劑的用途。疏水蛋白是大約100至150個氨基酸的小蛋白質(zhì)，為絲狀真菌，例如裂褶菌(Schizophyllumcommune)所特有。它們最常見地具有8個半胱氨酸單位。疏水蛋白具有對界面的顯著親和力并且因而適合于涂布表面。因此有可能將疏水蛋白涂于特富龍(Teflon)上而得到疏7JC表面。疏水蛋白可以從天然物質(zhì)中分離。我們先前的申請DE102005007480.4公開了用于制備疏水蛋白的方法。疏水蛋白在多種應(yīng)用中的用途已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)內(nèi)提出。WO96/41882提出疏水蛋白作為乳化劑、增稠劑、表面活性劑用于使疏水表面親水化、用于改善親水性基材的防水性、用于水包油乳狀液或油包水乳狀液的制備。還提出在藥學(xué)中應(yīng)用，例如制備軟膏劑或乳膏劑，并且還在化妝品中應(yīng)用，如皮膚保護(hù)或者制備洗發(fā)香波或護(hù)發(fā)液。EP1252516公開了用含疏水蛋白的溶液在30。C至80。C對窗戶、接觸透鏡、生物傳感器、醫(yī)學(xué)裝置、用于開展實驗或用于貯存的容器、船身、固體粒子或載客交通工具的底盤或主體的涂布。WO03/53383公開了疏水蛋白用于在化妝品應(yīng)用中處理角蛋白材料的用途。WO03/10331公開了疏7JC蛋白涂層的傳感器，例如測量電極，其中已經(jīng)將其它非共價的物質(zhì)例如電活性物質(zhì)、抗體或酶附著至該傳感器。先前，極為不同的增附劑例如已經(jīng)用于改善涂層對類型繁多的基材的粘合。根據(jù)RiimppChemieLexikon(19卯編輯)，合適的增附劑是例如鈥酸鹽、硅烷、不飽和羧酸的鉻絡(luò)合物。對于粘合劑，特別提到的增附劑是乙烯/丙烯酰胺共聚物、聚合異氰酸酯或活性有機(jī)珪化合物。聚氨基甲酸酯和聚乙烯亞胺也是已知的增附劑。本發(fā)明的目的旨在提供具有良好應(yīng)用特性并且實現(xiàn)特別良好地粘合多層復(fù)合材料的各層或在基材上涂層的替代性增附劑。因此，找到了如本文開始所定義的多層復(fù)合材料或貼面基材。增附劑多層復(fù)合材料或貼面基材包含在本文開始所定義的多肽作為增附劑。多肽由通過肽鍵連接的以重量計至少40%、優(yōu)選至少70%、特別優(yōu)選至少90%和極特別優(yōu)選至少95%或99%的a-氨基酸組成。在具體的實施方案中，多肽僅由通過肽鍵連接的a-氨基酸組成。特別合適的o;-氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸和組氨酸。多肽優(yōu)選地包與其它a-氨基酸混合的a-半胱氨酸。多肽特別優(yōu)選地由以重量計至少0.1%、特別優(yōu)選至少0.5%、極特別優(yōu)選至少1%的半胱氨酸組成。多肽內(nèi)半胱氨酸含量以重量計通常不超過15%、尤其是10%并且極特別優(yōu)選地不超過7%。在具體的實施方案中，多肽是疏水蛋白。根據(jù)本發(fā)明的術(shù)語"疏水蛋白"意指具有下面通用結(jié)構(gòu)式(I)的蛋白質(zhì)Xn-Cl-Xi-50-C2-Xo-5-C3-Xi-ioo-C4-Xi-ioo-C5-Xi-50-C6-Xo-5-C7-Xi-50-C8-Xm(1)，其中X可以是20種天然存在^J^酸(Phe、Leu、Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)中的任意M酸。各個X可以相同或不同。緊跟X的各個下標(biāo)表示氨基酸數(shù)目，c是半胱氨酸、丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或蘇氨酸，標(biāo)為C的殘基中至少4個殘基是半胱氨酸，并且下標(biāo)n和m彼此獨立地是0至500、優(yōu)選地是15至300的自然數(shù)。根據(jù)式(I)的多肽還具有如此的特性，即在每一情況下與具有未涂層玻璃表面的大小相似的水滴的接觸角相比，在室溫對玻璃表面涂層后，水滴的接觸角增加至少20。、優(yōu)選地至少25。并且特別優(yōu)選地是30。。標(biāo)為C1至C8的M酸優(yōu)選地是半胱氨酸；然而，它們還可以由空間大小相似的其它氨基酸替換，優(yōu)選地是丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸或甘氨酸。然而，位置d至CS中至少4個、優(yōu)選地至少5個、特別優(yōu)選地至少6個并且尤其至少7個位置由半胱氨酸組成。半胱氨酸可以處于還原狀態(tài)或可以在彼此間形成二硫橋。特別優(yōu)選在分子內(nèi)形成C-C橋，尤其是具有至少1個、優(yōu)選地2個、特別優(yōu)選地3個和極特別優(yōu)選地4個分子內(nèi)二石克橋。以上所述的半胱氨酸由空間大小相似的其它氨基酸置換有利地包含成對置換可以在彼此間形成分子內(nèi)二硫橋的那些C位置。如果半胱氨酸、絲氨酸、丙氨酸、甘氨酸、曱硫氨酸或蘇氨酸也用于由X標(biāo)示的位置內(nèi)，通式中各個C位置的編號可以相應(yīng)改變。為實施本發(fā)明，優(yōu)選采用具有通式(II)的疏水蛋白Xn-C、X3-25國C2-Xo-2-C3-X5-50-C4-X2-35國C5畫X2-i5-C6畫X。-2陽C7-X3-35-C8-Xm(II)其中X、C及緊跟X和C的下標(biāo)如上定義，但是下標(biāo)n和m是0至300間的數(shù)字，并且蛋白質(zhì)還通過以上提及的接觸角改變得到區(qū)分。特別優(yōu)選利用具有式(III)的疏水蛋白Xn-C、X5-9國C2國C3-Xn-39畫C4誦X2-23-C5-X5.9-C6-C7-X6-l8_C8-Xm(III),其中X、C及緊跟X和C的下標(biāo)如上定義，下標(biāo)n和m是0至200間的數(shù)字，并且蛋白質(zhì)還通過以上提及的接觸角改變得到區(qū)分，并標(biāo)為C的殘基中至少6個殘基是半胱氨酸。特別優(yōu)選全部殘基C是半胱氨酸。殘基Xn和Xm可以是與疏7jC蛋白天然連接的肽序列，然而，兩種殘基之一或兩種殘基還可以是不天然地與疏水蛋白連接的肽序列。這也包括那些殘基Xn和/或Xm，在其中天然存在于疏水蛋白內(nèi)的肽序列已經(jīng)由不天然存在于疏水蛋白內(nèi)的肽序列延長。若Xn和/或Xm是不天然地與疏7JC蛋白連接的肽序列，則此類序列的長度通常是至少20個、優(yōu)選地是至少35個、特別優(yōu)選地是至少50個并且極特別優(yōu)選地是至少100個氨基酸。不天然地與疏7JC蛋白連接的這類殘基還將在下文中稱為融合配偶體。這將表達(dá)這樣的事實，即蛋白質(zhì)可以由在自然界中不以這種形式一起存在的至少一個疏7K蛋白部分和一個融合配偶體組成。融合配偶體可以選自多種蛋白質(zhì)。還有可能多種融合配偶體與一個疏水蛋白部分連接，例如與所述疏水蛋白部分的M末端(Xn)及與羧基末端(Xm)連接。然而，還可能例如將兩個融合配偶體部分連接至本發(fā)明蛋白質(zhì)的一個位置(Xn或Xm)。特別合適的融合配偶體部分是天然存在于微生物內(nèi)、尤其大腸桿菌(E.coli)或枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)內(nèi)的蛋白質(zhì)。此類融合配偶體部分的實例是序列yaad(SEQIDNO:15和16)、yaae(SEQIDNO:17和18)和石克氧還蛋白。所述序列中這樣的片段或衍生物也是適合的，即其僅包含該序列的一部分，優(yōu)選地是70-99%、特別優(yōu)選地是80-98%，或與所提及序列相比，在其中各個M酸或核苷酸已經(jīng)被改變，其中所給出的每一百分?jǐn)?shù)指氨基酸數(shù)目。還可能根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)的多肽序列已經(jīng)例如通過糖基化作用、乙酰化作用或還通過例如與戊二酪的化學(xué)交聯(lián)而修飾。根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)的一個特征是當(dāng)表面用所述蛋白質(zhì)涂層時表面特性發(fā)生改變。表面特性的改變可以通過測量在用蛋白質(zhì)對表面涂布之前或之后的水滴接觸角并確定兩個量值間的差異而實驗性測定。接觸角的測量對技術(shù)人員而言一般是已知的。量值基于室溫和51水滴。對于(例如適用于)測量接觸角方法的確切實驗條件在實驗部分說明。在那里所提及的條件下，本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)具有這樣的特性，即在全部情況下與具有未涂層的玻璃表面的大小相似的水滴的接觸角相比，接觸角增加至少20°、優(yōu)選地至少25°、特別優(yōu)選地至少30°。迄今已知的疏水蛋白中疏水蛋白部分的極性和非極性M酸的位置是保守的，產(chǎn)生特征性的疏水性曲線。生物物理特性和疏水性的差異導(dǎo)致將迄今已知的疏水蛋白分成兩類，即I和II(Wessels等1994,Ann.Rev.Phytopathol"32，413-437)。組裝的I類疏水蛋白膜在很大程度上是不溶解的(甚至在升高的溫度上對l%十二烷基石危酸鈉(SDS))并且僅可以借助濃三氟乙酸(TFA)或甲酸再次解離。相反，組裝的II類疏水蛋白形式具有較低穩(wěn)定性。它們可以由甚至60。/。強(qiáng)度乙醇或1。/。SDS(在室溫)再次溶解。M酸序列的比較顯示半胱氨酸C3和C4間區(qū)域的長度在II類疏水蛋白中比在I類疏水蛋白中明顯較短。II類疏水蛋白還比I類疏水蛋白具有更多的帶電荷氨基酸。特別優(yōu)選用于實施本發(fā)明的疏水蛋白是在以下序列表內(nèi)加以結(jié)構(gòu)表征的dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basfl、basf2型的那些疏水蛋白。它們還可以僅是所述類型疏水蛋白的部分或衍生物。還可能使相同或不同結(jié)構(gòu)的多個疏水蛋白部分、優(yōu)選地是2或3個疏水蛋白部分彼此連接或使之連接至不天然地與疏水蛋白連接的相應(yīng)的合適多肽序列。特別適合實施本發(fā)明的是具有SEQIDNO:20、22、24內(nèi)所示多肽序列的融合蛋白及其編碼性核酸序列，尤其是根據(jù)SEQIDNO:19、21、23的序列。特別優(yōu)選的實施方案還是這樣的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)從SEQIDNO:20、22或24內(nèi)所示的多肽序列開始，因置換、插入或缺失至少1個、至多10個、優(yōu)選地是5個氨基酸、特別優(yōu)選地是5%的全部氨基酸而產(chǎn)生，并仍具有起始蛋白質(zhì)至少50%的生物學(xué)特性。蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性在本文中意指以上所述的接觸角增加至少20°。根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)可以通過已知的肽合成方法進(jìn)行化學(xué)制備，例如通過才艮據(jù)Merrifield的固相合成。天然存在的疏水蛋白可以借助合適的方法自天然來源分離。例如，參考W6sten等，Eur.JCellBio.63，122-129(1994)或WO96/41882。融合蛋白可以通過這樣的遺傳工程方法優(yōu)選地進(jìn)行制備，即在遺傳工程方法中一種編碼融合配偶體的核酸序列、尤其DNA序列和編碼疏7JC蛋白部分的一種核^列以如此方式組合以致所需的蛋白質(zhì)通過所組合的核酸序列在宿主生物內(nèi)基因表達(dá)而產(chǎn)生。此類制備方法在我們先前的申請DE102005007480.4內(nèi)7>開?？梢栽诒疚闹羞m用于所述制備方法的宿主生物(生產(chǎn)者生物)是原核生物(包括古細(xì)菌(Archaea))或真核生物，特別是包括嗜鹽菌(halobacteria)和甲烷球菌(methanococci)的細(xì)菌、真菌、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞，特別優(yōu)選大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌(Bacillusmegaterium)、米曲霉(Aspergillusoryzea)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillusniger)、巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)、假單胞菌種(Pseudomonasspec.)、乳酸桿菌(lactobacilli)、多形漢遜酵母(Hansenulapolymorpha)、里氏木霉(Trichodermareesei)、SF9(或相關(guān)細(xì)胞)及其它。本發(fā)明還涉M達(dá)構(gòu)建體的用途，其中該表達(dá)構(gòu)建體包含處于調(diào)節(jié)性核酸序列的遺傳性控制下的編碼本發(fā)明所用多肽的核酸序列，并且還涉及包含這些表達(dá)構(gòu)建體中至少一種表達(dá)構(gòu)建體的載體。所用的構(gòu)建體優(yōu)選地包含在全部情況下列均與編碼序列有效連接的特定編碼序列5，上游的啟動子和3'下游的終止子序列以;^才艮據(jù)需要的其它常見調(diào)節(jié)元件。"有效連接"意指啟動子、編碼序列、終止子及根據(jù)需要的其它調(diào)節(jié)元件以如此方式順序排列，以致每一種調(diào)節(jié)元件能夠充分履行它在表達(dá)編碼序列中所需要的功能?？捎行нB接序列的實例是乾向性序列以及還有增強(qiáng)子、聚腺苷酸化信號等。其它調(diào)節(jié)元件包含選擇標(biāo)記、擴(kuò)增信號、復(fù)制起點等。合適的調(diào)節(jié)序歹'J侈寸3口4笛述于Goeddel,GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego，CA(1990》除了這些調(diào)節(jié)序列之外，這些序列的天然調(diào)節(jié)作用仍可以存在于實際結(jié)構(gòu)基因上游并且根據(jù)需要可能已經(jīng)以如此方式被遺傳性改變，以致關(guān)閉天然調(diào)節(jié)作用并增加基因的表達(dá)。優(yōu)選的核酸構(gòu)建體還有利地包含與啟動子功能性連接的并能夠增加核酸序列表達(dá)的一種或多種上述增強(qiáng)子序列。額外有利的序列如其它調(diào)節(jié)元件或終止子也可以插入于DNA序列3，末端。核酸可以以一個或多個拷貝存在于構(gòu)建體內(nèi)。構(gòu)建體還可以包含根據(jù)需要使用的旨在選擇該構(gòu)建體的額外標(biāo)記，如抗生素抗性基因或營養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)基因。有利地用于本發(fā)明方法的調(diào)節(jié)序列存在于例如啟動子如cos、tac、trp、tet、trp國tet、lpp、lac、lpp-lac、lacIq國T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、入-PR或在X-P啟動子內(nèi)，所述的啟動子有利地用于革蘭氏陰性菌內(nèi)。其它有利的調(diào)節(jié)序列例如存在于革蘭氏陽性菌啟動子amy和SP02、存在于酵母啟動子或真菌啟動子ADC1、MFa、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH內(nèi)。還可能使用人工啟動子用于調(diào)節(jié)。為在宿主生物內(nèi)表達(dá)，將核酸構(gòu)建體有利地插入例如能夠在宿主內(nèi)使基因優(yōu)化表達(dá)的載體如質(zhì)?；蚴删w內(nèi)。除質(zhì)粒和噬菌體之外，載體還意指技術(shù)人員已知的任何其它載體，即例如病毒如SV40、CMV、桿狀病毒和腺病毒、轉(zhuǎn)座子、IS元件、噬粒、粘粒和線性DNA或環(huán)狀DNA并且還意指農(nóng)桿菌(Agrobacterium)系統(tǒng).這些載體可以在宿主生物中自主地復(fù)制或隨染色體復(fù)制。這些栽體構(gòu)成本發(fā)明的又一實施方案。合適質(zhì)粒的實例是大腸桿菌內(nèi)的pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pR印4、pHSl、pKK223畫3、pDHE19,2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III"3-Bl、tgtll或pBdCI;鏈霉菌(Streptomyces)內(nèi)的pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361;芽孢桿菌(Bacillus)內(nèi)的pUB110、pC194或pBD214;棒狀桿菌(Corynebacterium)內(nèi)的pSA77或pAJ667;真菌內(nèi)的pALSl、pIL2或pBB116;酵母內(nèi)的2a、pAG誦l、YEp6、YEpl3或pEMBLYe23或植物內(nèi)的pLGV23、pGHlac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。所述質(zhì)粒是可能質(zhì)粒的一小部分。其它質(zhì)粒是技術(shù)人員眾所周知的并且可以例如在圖書CloningVectors(編者PouwelsP.H.等，Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985，ISBN0444卯4018)內(nèi)找到。為表達(dá)存在的其它基因，核酸構(gòu)建體還有利地包含用來增加表達(dá)的3，-末端調(diào)節(jié)序列和/或5，-末端調(diào)節(jié)序列，其中選擇調(diào)節(jié)序列以便不依賴于宿主生物和所選基因而優(yōu)化表達(dá)。這些調(diào)節(jié)序列能夠使基因和蛋白質(zhì)特異性表達(dá)。取決于宿主生物，這可以意指例如基因僅在誘導(dǎo)后才表達(dá)或it^達(dá)，或者基因立即表達(dá)和/或過表達(dá)。在本上下文中，調(diào)節(jié)序列或調(diào)節(jié)因子可以優(yōu)選地正向影響并因而增加已經(jīng)導(dǎo)入的基因的表達(dá)。因此，調(diào)節(jié)元件可以通過使用強(qiáng)轉(zhuǎn)錄信號如啟動子和/或增強(qiáng)子有利地在轉(zhuǎn)錄水平上受到加強(qiáng)。然而，除此之外，還有可能通過例如改善mRNA的穩(wěn)定性而加強(qiáng)翻譯。在載體的又一個實施方案中，包含本發(fā)明核酸構(gòu)建體或本發(fā)明核酸的載體還有利地以線性DNA形式導(dǎo)入^l:生物并通過同源重組或異源重組整合至宿主生物基因組內(nèi)。這種線性DNA可以由線性化載體如質(zhì)粒組成，或僅由核酸構(gòu)建體或核酸組成。為在生物內(nèi)優(yōu)化地表達(dá)異源基因，有利地才艮據(jù)生物內(nèi)采用的特定密碼子選擇改變核酸序列。密碼子選擇可以借助計算機(jī)分析所述生物的其它已知基因而容易地確定。表達(dá)盒通過融合合適的啟動子至合適的編碼核苷酸序列以及終止子信號或聚腺苷酸化信號而制備。為此目的，使用如描述于例如T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989)以及T丄Silhavy,M丄.Berman和LW.Enquist,ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1984)及Ausubel,F.M.等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.和WileyInterscience(1987)內(nèi)的常見重組技術(shù)和克隆技術(shù)。為實現(xiàn)在合適宿主生物內(nèi)的表達(dá)，將重組核酸構(gòu)建體或基因構(gòu)建體有利地插入能夠使基因在宿主內(nèi)優(yōu)化表達(dá)的宿主特異性載體中。載體是4支術(shù)人員眾所周知的并且可以例如在"CloningVectors，，(編者PouwelsP.H.等，Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985)內(nèi)找到。有可能借助載體而制備例如用至少一種載體轉(zhuǎn)化并可以用于產(chǎn)生本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)的重組;微生物。有利地，將以上所述的本發(fā)明重組構(gòu)建體導(dǎo)入合適的宿主系統(tǒng)并進(jìn)行表達(dá)。在此上下文中，優(yōu)選地使用技術(shù)人員已知的常見克隆方法和轉(zhuǎn)染方法例如共沉淀、原生質(zhì)體融合、電穿孔、逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染等以便引起所述核酸在特定表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)表達(dá)。合適的系統(tǒng)描述于例如CurrentProtocolsinMolecularBiology,編者F.Ausubel等，WileyInterscience,NewYork1997或Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual.2ndedition,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989內(nèi)。還有可能制備同源重組的微生物。為此目的，制備如此載體，其包含根據(jù)本發(fā)明待使用的基因的至少一部分和編碼序列的至少一部分，在所述的編碼序列中根據(jù)需要已經(jīng)導(dǎo)入至少一個M酸缺失、氨基酸添加或M酸置換以#"飾(例如功能性破壞)序列(敲除載體)。導(dǎo)入的序列還可以例如是來自相關(guān)孩史生物的同系物或衍生自哺乳動物、酵母或昆蟲。備選地，用于同源重組的載體可以以如此方式設(shè)計以致內(nèi)源基因在同源重組情況下被突變或改變，但是仍編碼有功能的蛋白質(zhì)(例如上游調(diào)節(jié)區(qū)域可能已經(jīng)以4吏得內(nèi)源性蛋白質(zhì)的表達(dá)被改變的方式被改變)。本發(fā)明所用的基因中已改變的部分處于同源重組載體內(nèi)。構(gòu)建適用于同源重組的載體例如描述于Thomas，K.R.和Capecchi，M.R.(1987)Cell51:503。合適于本發(fā)明所用的核酸或核酸構(gòu)建體的重組宿主生物原則上是任何原核生物或真核生物。有利地，使用微生物如細(xì)菌、真菌或酵母作為宿主生物。有利地使用革蘭氏陽性細(xì)菌或革蘭氏陰性細(xì)菌，優(yōu)選地是腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、假單胞菌科(Pseudomonadaceae)、才艮瘤菌科(Rhizobiaceae)、鏈霉菌科(Streptomycetaceae)或諾卡氏菌科(Nocardiaceae)的細(xì)菌，特別優(yōu)選地是埃希桿菌屬(Escherichia)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、沙門氏菌屬(Salmonella)、農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)或紅球菌屬(Rhodococcus)細(xì)菌。取決于宿主生物，以技術(shù)人員已知的方式生長或培養(yǎng)在制備融合蛋白過程中所用的生物。通常使微生物在溫度0。C至100°C間、優(yōu)選地在10。C至60°C間生長在液體培養(yǎng)基內(nèi)，同時供應(yīng)氧氣，其中所述的液體培養(yǎng)基包含碳源(通常是糖形式)、氮源(通常是有機(jī)氮源形式如酵母提取物或鹽形式如硫酸銨)、微量元素如鐵鹽、錳鹽和鎂鹽以及根據(jù)需要含有維生素。在本上下文內(nèi)，營養(yǎng)液體的pH在培養(yǎng)期間可以保持或可以不保持在固定值上，即可以受到或可以不受調(diào)節(jié)。培養(yǎng)可以以間歇式、半間歇式或連續(xù)地實施。營養(yǎng)素可以在發(fā)酵開始時最初加入或在半連續(xù)或連續(xù)方式中隨后加入。酶可以通過實施例內(nèi)所述的方法自生物分離或作為粗制提取物加以利用。可以如此制備根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)或其功能性生物活性片段，即借助重組方法用正在培養(yǎng)的產(chǎn)生蛋白質(zhì)的微生物，根據(jù)需要誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的表達(dá)并從所述培養(yǎng)物中分離蛋白質(zhì)。根據(jù)需要，蛋白質(zhì)還可以工業(yè)M^莫地以此方式產(chǎn)生。重組微生物可以通過已知的方法進(jìn)行培養(yǎng)和發(fā)酵。例如，細(xì)菌可以在TB培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基內(nèi)并在溫度20至40°C及pH6至9下進(jìn)行培養(yǎng)。合適的培養(yǎng)條件例如詳細(xì)描述于T.Maniatis、E.F.Fritsch和J.Sambrook,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989)內(nèi)。如果才艮據(jù)本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)沒有分泌至培養(yǎng)基內(nèi)，則隨后破碎細(xì)胞并從裂解物內(nèi)通過已知的蛋白質(zhì)分離方法得到產(chǎn)物。細(xì)胞可以如所述通過高頻超聲波、通過高壓例如在French壓力室內(nèi)、通過滲透裂解、通過去垢劑、裂解酶或有機(jī)溶劑的作用、通過勻漿器或通過兩種或多種以上所列方法的組合進(jìn)行破碎。根據(jù)本發(fā)明所用的蛋白質(zhì)可以使用已知方法如分子篩(凝膠過濾)例如QSepharose層析、離子交換層析和疏7JC層析，以及其它常用方法如超濾、結(jié)晶、脫鹽、透析和天然凝膠電泳進(jìn)行純化。合適的方法例如描述于Cooper,F.G.，BiochemischeArbeitsmethoden，VerlagWalterdeGruyter,Berlin,NewYork或于Scopes,R.，ProteinPurification,SpringerVerlag，NewYork,HeiddbergjBerlin內(nèi)《可以有利地通過使用載體系統(tǒng)或寡核苷酸分離重組蛋白質(zhì)，其中所述的栽體系統(tǒng)或寡核苷酸將cDNA延長特定的核苷酸序列并且因此編碼用來例如簡化純化的已改變的蛋白質(zhì)或融合蛋白。這類合適修飾的實例U錨鉤作用的"標(biāo)簽"，如已知為6組氨酸錨鉤或可由抗體識別的抗原表位(在Harlow,E.和Lane,D.，1988，Antibodies:ALaboratoryManual.ColdSpringHarbor(N.Y.)Press內(nèi)描述)的修飾作用。其它合適的標(biāo)簽是例如HA、4丐調(diào)蛋白-BD、GST、MBD;殼多糖-BD、鏈親和素-BD-avi-標(biāo)簽、Flag-標(biāo)簽、T7等。這些錨鉤可以例如用來將蛋白質(zhì)附著至可以例如裝填于層析柱內(nèi)或可以用在微量滴定平板表面或另一種支持物表面的固體支持物，如多聚體基質(zhì)。相應(yīng)的純化方案可以從商業(yè)的親和標(biāo)簽供應(yīng)商處得到。如所述制備的蛋白質(zhì)可以作為融合蛋白直接使用，或在切下并去除融合配偶體后作為"純"疏水蛋白使用。如果意圖去除融合配偶體，推薦將潛在切割位點(蛋白酶的專一性識別位點)在疏水蛋白部分與融合配偶體部分之間加至融合蛋白內(nèi)。合適的切割位點尤其是在疏水蛋白部分和融合配偶體部分均不存在的可以通過生物信息學(xué)工具容易確定的那些肽序列。例如，BrCN對甲硫氨酸的切割或用因子Xa、腸激酶切割、凝血酶切割、TEV切割(煙草蝕紋病毒蛋白酶)的蛋白酶介導(dǎo)性切割是特別合適的。對序列表內(nèi)DNA和多肽序列所賦予的序列名稱<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>多層復(fù)合材料多層復(fù)合材料科用于多種極為不同的目的，例如作為包裝用具(尤其是復(fù)合材料薄膜)或自粘性制品(至少具有支持物和粘性層的多層復(fù)合材料)。多層復(fù)合材料包含至少兩層、優(yōu)選地2至5層，各個層例如有可能具有0.01至5mm的厚度。各個層可以由天然多聚體或合成多聚體組成或由金屬組成。層尤其是多聚體膜、紙、金屬箔、金屬化的多聚體膜等。將以上的多肽用作多層復(fù)合材料的至少兩個相鄰層之間的增附劑。優(yōu)選地，相鄰層中至少一層是天然多聚體層或合成多聚體層。合適的多聚體尤其是縮聚物如聚酯、聚加合物如聚氨基甲酸酯、聚酰胺、聚碳酸酯或聚苯醚或聚苯疏醚或通過烯鍵式不飽和化合物的自由基聚合或離子型聚合可得到的多聚體(簡稱為自由基多聚體)。此類自由基多聚體優(yōu)選地由以重量計至少60%、特別優(yōu)選地至少80%的"主單體，，組成，其中主單體選自Cl至C20烷基(甲基)丙烯酸酯、包含至多20個碳原子的羧酸的乙烯基酯、具有至多20個碳原子的乙烯基芳香化合物、烯鍵式不飽和腈、乙烯基卣化物、包含1至10個碳原子的醇的乙烯基醚、具有2至8個碳原子和1個或2個雙鍵的脂肪族烴，尤其是乙烯和丙烯。本發(fā)明的多肽尤其還合適作為非極性多聚體的增附劑；因而相鄰層中至少一層優(yōu)選地由非極性多聚體組成。多聚體極性的度量是空氣(21。C)中的表面張力。表面張力越低，多聚體的非極性越強(qiáng)。因此，相鄰層中的至少一層優(yōu)選地由表面張力小于50mN/m(毫牛/米)、尤其小于40mN/m的非極性多聚體組成。此類非極性多聚體的實例是聚酰胺66(42.5mN/m)、聚苯乙烯(43.5mN/m)、PVC(38.4mN/m)、聚乙烯(36.1mN/m)、聚丙烯(29mN/m)或聚四氟乙烷(22.5mN/m)。特別優(yōu)選相鄰兩層均由此種非極性多聚體組成。粘合促進(jìn)作用所需要的多肽量通常是從0.01至1000mg(毫克/m2(平方米))，尤其是從0.01至100mg/m2并且特別優(yōu)選地是從0.1至10mg/m2。多肽可以應(yīng)用于兩個相鄰層中的任一層，并且備選地，如果這兩層均已預(yù)加工則還可以應(yīng)用于這兩個層。多肽優(yōu)選地為水溶液的形式；溶液的多肽含量優(yōu)選地是從0.01至5份重量的多肽對IOO份重量的水。為本發(fā)明的用途，溶液的濃度優(yōu)選地進(jìn)一步稀釋至從每毫升水1/ig至10000/ig，尤其從每亳升水10/ig至1000pg。因此應(yīng)用后還首先進(jìn)行干燥過程以去除水。其次，兩個相鄰層可以通過常用方法結(jié)合，例如通過層壓法。多肽尤其還可以應(yīng)用至相鄰層中的一層(第一層)，并且另一相鄰層(第二層)可以隨后通過應(yīng)用多聚體*液、多聚體溶液或無溶劑多聚體至第一層而制備，前提是存在增附劑并且隨后形成薄膜和/或進(jìn)行熱固化或光化學(xué)固化。為此目的，多聚體尤其處于水*液或溶液的形式，特別優(yōu)選地是乳液多聚體、優(yōu)選是以上所列的任意自由基多聚體的水M液形式。在應(yīng)用多聚體后，隨后根據(jù)需要實施干燥過程。貼面基材基材因極為不同的目的而進(jìn)行涂層。特別應(yīng)當(dāng)提到的是裝飾性涂層或保護(hù)性涂層(一般術(shù)語涂層)或粘合層，有可能應(yīng)用粘合層至基材或者以自粘性制品形式(標(biāo)簽或粘性帶)自身結(jié)合?；幕蚧谋砻婵梢杂扇魏尾牧辖M成。類似地，涂層或涂層的面向基材的表面可以由任何材料組成。優(yōu)選地，基材表面或涂層、或涂層的面向基材的表面由天然多聚體或合成多聚體組成。合適的多聚體尤其是縮聚物如聚酯、聚加合物如聚氨基曱酸酯、聚酰胺、聚碳酸酯或聚苯醚或聚笨琉醚或通過烯鍵式不飽和化合物的自由基聚合或離子型聚合可得到的多聚體(簡稱為自由基多聚體)。對自由基多聚體的結(jié)構(gòu)及其主要單體含量而言，適用以上所做的描述。本發(fā)明的多肽尤其還適合作為增附劑用于非極性多聚體；因此至少基材表面或涂層的面向基材的表面優(yōu)選地由非極性多聚體組成。就作為極性度量的接觸角而言，類似地適用以上所做的描述。成。為粘合促進(jìn)所需要的多肽量對應(yīng)于以上所提到的量。多肽可以是施加至基材表面、涂層的面向基材的表面或這兩種表面,如果已經(jīng)預(yù)加工所述涂層，即如果簡單的薄膜或多層復(fù)合材料(見以上)將應(yīng)用于基材上，則應(yīng)用至涂層面向基材的表面是可能的。多肽優(yōu)選地為水溶液的形式；所述溶液的含量如上所述。因此在施用后有可能首先實施干燥過程以去除水。涂層可以通過常規(guī)方法應(yīng)用于基材；薄膜或多層復(fù)合材料可以例如層壓在基材上。尤其，涂層還可以通過應(yīng)用多聚體分散液、多聚體溶液或無溶劑多聚體至面向基材的表面而制備，前提是存在增附劑并且隨后形成薄膜和/或進(jìn)行熱固化或光化學(xué)固化。為此目的，多聚體尤其處于水*液或溶液形式，特別優(yōu)選地是乳液多聚體、優(yōu)選是以上所列的任意自由基多聚體的水^t液形式。在應(yīng)用多聚體后，隨后根據(jù)需要實施干燥過程。本發(fā)明的多層復(fù)合材料和貼面基材具有顯著增加的強(qiáng)度。通過使用多肽作為增附劑，涂層對基材的粘合作用更強(qiáng)并且多層復(fù)合材料的各層彼此間極好地粘合。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案中，基材是金屬。原則上，金屬可以是任何金屬。金屬基材的實例包括鐵、鋼、鋅、錫、鋁、銅和所述金屬與自身及與其它金屬的合金。它們尤其可以是鋼、鍍鋅鋼、鋅合金、鋁或鋁合金。特別優(yōu)選鋅或鋅合金或具有它們的基材，例如鍍鋅鋼。Zn或Al合金是技術(shù)人員已知的。技術(shù)人員根據(jù)所需應(yīng)用目的選擇合金成分的類型和量。鋅合金的代表性成分尤其包括A1、Pb、Si、Mg、Sn、Cu或Cd。鋁合金的4戈表性成分尤其包括Mg、Mn、Si、Zn、Cr、Zr、Cu或Ti。合金還可以是包含大約等量Al和Zn的Al/Zn合金?？梢陨虡I(yè)性獲得用此類合金涂層的鋼。金屬可以具有任意形狀，然而優(yōu)選金屬箔、金屬帶或金屬片。金屬還可以是具有金屬表面的復(fù)合材料。它可以例如是帶多聚體膜和金屬的復(fù)合材料。金屬表面將用作為增附劑的根據(jù)本發(fā)明所用多肽、優(yōu)選疏7jC蛋白進(jìn)行涂層。這可以使用所述多肽的水溶液實施。涂層過程的細(xì)節(jié)已經(jīng)如上提及。涂層尤其可以是用于涂布金屬表面的代表性漆或漆系統(tǒng)。它們可以是熱固化、光化學(xué)固化或通過其它機(jī)制固化的涂料。用于涂布金屬表面的代表性漆包含至少一種粘合劑并且還包含可交聯(lián)成分。可交聯(lián)成分可以是除粘合劑以外的另外采用的交聯(lián)劑，或它們可以是與粘合劑連接的可交g團(tuán)。粘合劑當(dāng)然還可以具有可交g團(tuán)并且交聯(lián)劑可以額外地進(jìn)行應(yīng)用。在此情況下，可設(shè)想多種可能的組合。例如，粘合劑和交聯(lián)劑可以彼此分開地進(jìn)行應(yīng)用。粘合劑在此情況下包含可以與交聯(lián)劑內(nèi)互補(bǔ)性活性官能團(tuán)M應(yīng)的活性官能團(tuán)。另一種組合是包含這樣的活性官能團(tuán)的自我交聯(lián)粘合劑，其中所述的活性官能團(tuán)能夠與它們同類的基團(tuán)("與自己，，)或與相同多聚體上的互補(bǔ)性活性官能團(tuán)發(fā)生交M應(yīng)。交聯(lián)劑還有可能排他性與自身發(fā)生反應(yīng)。合適的粘合劑的實例包含(甲基)丙烯酸(共)聚物、部分水解的聚乙烯基酯、聚酯、醇酸樹脂、聚內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚醚、環(huán)氧樹脂-胺加成物、聚脲、聚酰胺、聚酰亞胺或聚氨基甲酸酯。當(dāng)然還有可能使用多種多聚體的混合物，只要所述的混合物不產(chǎn)生不想要的效應(yīng)。交聯(lián)成分可以具有熱交聯(lián)基團(tuán)或光化學(xué)交聯(lián)基團(tuán)。合適的熱交聯(lián)劑的實例是基于環(huán)氧化物、基于三聚氰胺或基于封閉性異氰酸酯的交聯(lián)劑。對其是雙官能或多官能的丙烯酸酯。多肽、優(yōu)選疏水蛋白的根據(jù)本發(fā)明的用途以有利方式改變涂料在基材上的粘合。還實現(xiàn)了漆層在防蝕試驗中的改良抗蠕變性。如下實施例意圖更詳細(xì)的說明本發(fā)明A)部分疏水蛋白的制備實施例1用于克隆yaad-His6/yaaE-His6的預(yù)備工作借助寡核苷酸Hal570和Hal571(Hal572/Hal573)實施聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。所用的模板DNA是細(xì)菌枯草芽孢桿菌的基因組DNA。得到的PCR片段包含枯草芽孢桿菌yaaD/yaaE基因的編碼序列并且在全部情況下在它們的末端分別包含Ncol和BglII限制性切割位點。純化PCR片段并用限制性內(nèi)切核酸酶Ncol和BglII切割。使用DNA片段作為插入物并克隆至來自Qiagen的已經(jīng)事先用限制性內(nèi)切核酸酶Ncol和BglII線性化的栽體pQE60內(nèi)。由此得到的載體pQE60YAAD弁2/pQE60YaaE弁5可以用于表達(dá)分別由YAAD::HIS6和YAAE::HIS6組成的蛋白質(zhì)。Hal570:gcgcgcccatggctcaaacaggtactgaHal571:gcagatctccagccgcgttcttgcatacHal572:ggccatgggattaacaataggtgtactaggHal573:gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc實施例2yaad疏水蛋白DewA-His6的克隆用寡核普酸KaM416和KaM417實施聚合S^式反應(yīng)。所用的模板DNA是霉菌構(gòu)巢曲霉的基因組DNA。得到的PCR片段包含疏水蛋白基因dewA和N-末端的因子Xa蛋白酶切割位點的編碼序列。純化PCR片段并用限制性內(nèi)切核酸酶BamHI切割。4吏用此DNA片段作為插入物并克隆至事先用限制性內(nèi)切核酸酶BamHI線性化的載體pQE60YAAD弁2內(nèi)。由此得到的栽體#508可以用于表達(dá)由YAAD::Xa::dewA::HIS6組成的融合蛋白。KaM416:GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGCKaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC實施例3yaad疏水蛋白RodA-His6的克隆使用寡核苷酸KaM434和KaM435,將質(zhì)粒#513類似地克隆至質(zhì)粒#508內(nèi)。KaM434:GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGCKaM435:CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG實施例4yaad疏水蛋白BASF1-His6的克隆使用寡核苦酸KaM417和KaM418，將質(zhì)粒#507類似地克隆至質(zhì)粒#508內(nèi)。采用的模板DNA是人工合成的DNA序列-疏水蛋白BASF1(見附件)。KaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGCKaM418:CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG實施例5yaad疏水蛋白BASF2-His6的克隆4吏用寡核普酸KaM417和KaM418，將質(zhì)粒#506類似地克隆至質(zhì)粒#508內(nèi)。采用的模板DNA是人工合成的DNA序列-疏水蛋白BASF2(見附件)。KaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGCKaM418:CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG實施例6yaad疏水蛋白SC3-His6的克隆4吏用寡核苦酸KaM464和KaM465，將質(zhì)粒#526類似地克隆至質(zhì)粒#508內(nèi)。采用的模板DNA是裂褶菌cDNA(見附件)。KaM464:CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGCKaM465:GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT實施例7重組大腸桿菌菌林yaad疏水蛋白DewA-His6的發(fā)酵在15mlGreiner管內(nèi)用表達(dá)yaad疏水蛋白DewA-His6的大腸桿菌菌林接種3ml的LB液體培養(yǎng)基。在37。C于每分鐘200轉(zhuǎn)的振蕩器內(nèi)溫育8小時。在全部情況下，具有擋板和250mlLB培養(yǎng)基(+100^g/ml氨節(jié)青霉素)2個1L錐形燒瓶用1ml預(yù)培養(yǎng)物接種并在37。C于每分鐘180轉(zhuǎn)的振蕩器內(nèi)溫育9小時。用0.5L預(yù)培養(yǎng)物接種20L發(fā)酵管內(nèi)13.5L的LM培養(yǎng)基(+100^g/ml氨芐青霉素)(相對H20測量時OD6()。nm1:10)。在OD600nm約3.5添加140ml的100mMIPTG。3小時后，冷卻發(fā)酵罐至10。C并通過離心去除發(fā)酵肉湯。細(xì)胞沉淀用于進(jìn)一步純化。實施例8純化重組疏水蛋白融合蛋白(純化具有C-末端His6標(biāo)簽的疏水蛋白融合蛋白)100g細(xì)胞沉淀(IOO-500mg的疏7jC蛋白)用50mM磷酸鈉緩沖液，pH7.5補(bǔ)齊至總體積200ml并重懸?；鞈乙河肬ltraturraxT25型(Janke和Kunkel;IKA-Labortechnik)處理10分鐘，為了降解核酸，隨后與500單位Benzonase(Merck，Darmstadt;訂單號1.01697.0001)在室溫溫育1小時。在胞破碎細(xì)前，使用玻璃濾芯(P1)實施過濾。為破碎細(xì)胞和剪切剩余的基因組DNA，在1500bar下實施兩輪勻漿(MicrofluidizerM-110EH;MicrofluidicsCo卬.)。將勻漿物離心(SorvallRC-5B,GSA轉(zhuǎn)頭，250ml離心杯，60分鐘，4。C，每分鐘12000轉(zhuǎn)，23000g),上清液i文置在冰上并將沉淀重懸于100ml磷酸鈉緩沖液，pH7.5。離心和重懸重復(fù)三次，第三次用包含1。/。SDS的磷酸鈉緩沖液重懸。在重懸后，攪拌溶液l小時，隨后進(jìn)行終末離心(SorvallRC-5B，GSA轉(zhuǎn)頭，250ml離心杯，60分鐘，4。C，每分鐘12000轉(zhuǎn)，23000g)。根據(jù)SDS-PAGE分析，疏水蛋白存在于終末離心后的上清液內(nèi)(圖1)。實驗顯示疏水蛋白可能以包涵體形式存在于相應(yīng)的大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)。將50ml包含疏水蛋白的上清液加至以50mM的pH8.0Tris-Cl緩沖液平衡的50ml鎳Sepharose高性能17-5268-02柱(Amersham)。該柱用50mMTris-Cl緩沖液，pH8.0洗滌，并且f^r疏水蛋白用包含200mM咪唑的50mMTris-Cl緩沖液，pH8.0洗脫。為了去除咪唑，將溶液對50mMTris-Cl緩沖液，pH8.0透析。圖l描述所制備疏水蛋白的純化道1:施用于鎳Sepharose柱的溶液(I:IO稀釋)道2:流過液=洗滌步驟的洗脫液道3-5:洗脫級分的OD，峰。圖1的疏水蛋白具有大約53kD的分子量。某些較小的帶代表疏水蛋白的降解產(chǎn)物。實施例9性能測試；通過改變水滴在玻璃上的接觸角表征疏水蛋基材玻璃(窗戶玻璃，SiiddeutscheGlas，Mannheim,德國)疏水蛋白濃度lOO^ig/mL玻璃片在50mM乙酸鈉pH4+0.1%Tween20內(nèi)過夜溫育(溫度80。C)，隨后進(jìn)行涂層，在蒸餾水內(nèi)洗涂隨后在蒸餾水內(nèi)的1%SDS溶液中于80°C溫育10分鐘在蒸餾水內(nèi)洗滌樣品在空氣中干燥并且測定5jU水液滴的接觸角(度)。接觸角在軟件為SCA20.2.0(2002年11月)的DataphysicsContactAngleSystemOCA15+4義器上測量。測量才艮據(jù)制造商說明書實施。未處理的玻璃產(chǎn)生30士5。的接觸角，具有根據(jù)實施例8的功能性疏水蛋白(yaad-dewA-his6)的涂層產(chǎn)生75士5。的接觸角。B)部分多肽作為增附劑的用途實施例10聚乙烯基材所用材料所用溶液在性能實驗中采用根據(jù)實施例8所制備的融合蛋白yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:19)水溶液。溶液內(nèi)的疏水蛋白濃度100pg/ml(以重量計0.01%),基材聚乙烯的成型體(小盤)涂層聚酯薄膜用AcronalA240(來自BASF的用于壓力敏感性粘合劑的商業(yè)化含水聚丙烯酸酯*液)涂層并千燥，并切成寬度2.5cm的條。得到的粘性條用于對PE小盤涂層。方法將多肽溶液應(yīng)用于聚乙烯盤并干燥(預(yù)處理的聚乙烯盤)。隨后將粘性條結(jié)合在預(yù)處理的聚乙烯盤上和未處理的聚乙烯盤上(為了比較)，并測定除去粘性條所需要的力量(剝離強(qiáng)度N)具有作為增附劑的多肽的剝離強(qiáng)度4.7N沒有作為增附劑的多肽的剝離強(qiáng)度2.6N實施例11金屬基材在性能實驗中采用根據(jù)實施例8制備的融合蛋白yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:19)的水溶液。溶液內(nèi)疏水蛋白濃度100gg/ml(以重量計0.01%)。使用如下試驗薄板作為金屬基材編號糾實施例11-1鋼(ST2型(材料編號1.0330))實施例11-2鍍鋅鋼(森吉米爾-鍍鋅鋼薄板GARDOBONDOEHDG/2(Chemetal))實施例11-3鋁(AlMgSiAA6016GARDOBOND未處理(Chemetal))所用漆是基于醇酸三聚氰胺的烘烤面漆。實驗描述將鋁薄板浸漬于堿性清潔浸漬槽內(nèi)(60g/1NaOH，60°C，1分鐘)并用蒸餾水淋洗。薄板隨后在酸性除銹槽(NHCVH20(1:1))內(nèi)于室溫進(jìn)行除銹15秒。用蒸餾水、淋洗并用加壓空氣吹干。鍍鋅鋼薄板和鋼薄板用熱河7jC淋洗，隨后用蒸餾水淋洗并用加壓空氣吹干。在全部情況下，通過在室溫下將薄板浸漬于以上提及的溶液內(nèi)而用疏水蛋白對薄板涂層。鋁薄板浸漬16小時。鍍鋅鋼薄板和鋼薄板浸漬4小時。薄板隨后用蒸餾水淋洗并用加壓空氣吹干。在用作為增附劑的疏水蛋白涂層后，將薄板浸漬在塑料碗內(nèi)的基于醇酸三聚氰胺的烘烤面漆內(nèi)15秒并且在空氣中預(yù)干燥大約1小時。隨后在干燥爐內(nèi)于1卯。C干燥30分鐘并進(jìn)行固化。為了比較，在全部情況下，以相同方式用無疏7jc蛋白增附劑的漆制備另外的樣品。性能測試薄板的性能通過ENISO2409(劃格法)、ENISO4628-8(蠕變)和DIN53156(Erichsen杯突法)評估。劃格試驗基于預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)在漆表面劃十字后評估該表面的外觀。這包括評估漆因所產(chǎn)生的十字而脫離表面的程度。評估以已知方式借助等級0至5完成，其中0為最佳，并且5為最差。漆層的蠕變通過薄板的標(biāo)準(zhǔn)侵蝕試驗(暴露于鹽霧室(SSDIN50021)內(nèi))加以確定。在298小時后評價鋁薄板的蠕變，在50小時后評價鋼薄板的蠕變并且在190小時后評價鍍鋅鋼薄板的蠕變，測定在全部情況下均基于預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)并使用從0至5的等級，以0為最佳計分，并且5為最差計分。Erichsen杯突法包括將球?qū)悠繁趁鎵浩炔a(chǎn)生凹痕?；陬A(yù)定標(biāo)準(zhǔn)評估在標(biāo)記處的漆外觀，在此例子中5為最佳計分并且0為最差計分。性能測試的結(jié)果總結(jié)如下。實施例11-1:鋼基材躍劃格ii蠕變曰Erichsen杯突縱■WW:銅-疏水蛋白無疏水蛋白有疏水蛋白與無疏水蛋白的樣品相比，使用疏水蛋白作為增附劑未改變?nèi)渥?等級5)。在每一情況下劃格試驗(數(shù)值較低)和Erichsen杯突試驗(數(shù)值較高)產(chǎn)生了優(yōu)良結(jié)果。實施例ll-2:鍍鋅鋼基材無疏水蛋白有疏水蛋白園劃格B!蠕變C3Erichsen杯突縱鋅，y疏水蛋白在鍍鋅鋼上4吏用疏7JC蛋白作為增附劑在全部三種情況下產(chǎn)生優(yōu)于無均附劑的記分(對于劃格和蠕變數(shù)值較低，對于Erichsen杯突法數(shù)值較高)。在侵蝕保護(hù)完整性(蠕變)方面，實現(xiàn)最明顯的改善(具有增附劑時等級為1與^目比無增附劑時等級為4)。實施例11-3:鋁基材<image>imageseeoriginaldocumentpage28</image>在鋁基材的情況下，劃格和蠕變在無增附劑時甚至更好。Erichsen杯突法仍產(chǎn)生略^:的改善。權(quán)利要求1.包含化合物的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中以重量計所述化合物的至少40％由作為復(fù)合材料的至少兩個相鄰層之間或涂層與基材之間的增附劑的通過肽鍵連接的α-氨基酸(下文中簡稱為多肽)組成。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中以重量計多肽的至少80%由a-氨基酸組成。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中多肽包含半胱氨酸作為組分。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意項所述的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中多肽由以重量計至少0.5%的半胱氨酸組成。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中多肽是下式的疏水蛋白<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>Ser、Tyr、Cys、Trp、Pro、His、Gln、Arg、Ile、Met、Thr、Asn、Lys、Val、Ala、Asp、Glu、Gly)中的任意氨基酸，緊跟X的各個下標(biāo)表示^J^酸的數(shù)目，并且C是半胱氨酸、丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、曱硫氨酸或蘇氨酸，而標(biāo)為C的殘基中至少4個殘基是半胱氨酸，并且下標(biāo)n和m還彼此獨立地是0至500、優(yōu)選地15至300的自然數(shù)。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意項所述的多層復(fù)合材料，其中相鄰層中的至少一層由天然多聚體或合成多聚體組成。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意項所述的多層復(fù)合材料，其中相鄰層中的至少一層由表面張力小于50mN/m的(非極性)合成多聚體組成。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意項所述的多層復(fù)合材料，其中鄰近的兩層均由天然多聚體或合成多聚體組成。9.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意項所述的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中一個層由金屬或合金組成。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多層復(fù)合材料，其中相鄰層是漆層。11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的多層復(fù)合材料，其中金屬選自鋼、鍍鋅鋼、鋅合金、鋁或鋁合金，或者是鋁或鋁合金。12.用于制備多層復(fù)合材料的方法，其中國將多肽應(yīng)用于相鄰層中的一層，-根據(jù)需要，當(dāng)多肽以水溶液形式應(yīng)用時，實施干燥過程，并且-另一相鄰層隨后壓于上面或者通過形成天然多聚體或合成多聚體的薄膜而制備。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中另一層的天然多聚體或合成多聚體為水溶液或分散液的形式并且在薄膜形成后實施干燥過程。14.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意項所述的貼面基材，其中基材表面或涂層的面向基材的表面由天然多聚體或合成多聚體組成。15.根據(jù)權(quán)利要求1至5或14中任意項所述的貼面基材，其中基材表面或涂層的面向基材的表面由表面張力小于50mN/m的(非極性)合成多聚體組成。16.根據(jù)權(quán)利要求1至5、14或15中任意項所述的貼面基材，其中基材表面或涂層的面向基材的表面由天然多聚體或合成多聚體組成。17.制備根據(jù)權(quán)利要求1至5、14至16中任意項所述的貼面基材的方法，其中-將多肽應(yīng)用于基材表面或涂層劑的面向基材的表面，畫根據(jù)需要，當(dāng)多肽以水溶液形式應(yīng)用時，實施干燥過程，并且-隨后將涂層劑應(yīng)用于基材。18.制備根據(jù)權(quán)利要求17所述的貼面基材的方法，其中-將多肽應(yīng)用于基材表面，-根據(jù)需要，當(dāng)多肽以水溶液形式應(yīng)用時，實施干燥過程，并且-涂層隨后通過在基材表面形成天然多聚體或合成多聚體薄膜加以制備。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中天然多聚體或合成多聚體為水溶液或分散液的形式并且在薄膜形成后實施干燥過程。20.根據(jù)權(quán)利要求13或19所述的方法，其中水溶液或^a液是乳液多聚體的水分歉液。21.化合物的用途，其中以重量計所述化合物的至少40%由作為多層肽鍵連接的o;-氨基酸(簡稱為多肽)組成。全文摘要本發(fā)明涉及包含化合物的多層復(fù)合材料或貼面基材，其中以重量計所述化合物的至少40％由作為復(fù)合材料的至少兩個相鄰層之間或涂層與基材之間的增附劑的通過肽鍵連接的α-氨基酸(下文中簡稱為多肽)組成。文檔編號B32B9/02GK101151148SQ200680010245公開日2008年3月26日申請日期2006年3月28日優(yōu)先權(quán)日2005年3月31日發(fā)明者C·博爾施韋勒,H·塞弗,H-G·勒邁爾,K-H·舒馬徹,M·考羅什,T·海登費爾德爾,T·薩布科夫斯基,U·鮑斯申請人:巴斯福股份公司