專利名稱：一種HuPBL－SCID鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，特別是涉及細(xì)胞免疫學(xué)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域的一種HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
醫(yī)學(xué)研究的最終目的是改善人民健康。然而對(duì)人類疾病的多種研究不能直接在人體內(nèi)進(jìn)行，需要先進(jìn)行動(dòng)物的體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。在過去的生物醫(yī)學(xué)研究中，因缺乏合適的動(dòng)物模型用于研究人體細(xì)胞在體內(nèi)的生理及病理機(jī)能，而且由于道德、倫理、法律等多方面的制約，在人體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)受到極嚴(yán)格限制，因此涉及人體細(xì)胞的研究一般只能進(jìn)行體外試驗(yàn)，而體外試驗(yàn)的結(jié)果與體內(nèi)情況往往相去甚遠(yuǎn)。近年來，陸續(xù)報(bào)道了有關(guān)實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物模型的研究，如將人的胎兒胸腺、胎肝和胎骨甚至成人的外周血造血干細(xì)胞移植到患有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷綜合征(severe combined immunodeficiencysyndrome，SCID)的小鼠體內(nèi)，分別構(gòu)建成SCID hyTHy/Liv、SCID huBone、SCID HuPBL等幾種人鼠嵌合小鼠模型。其中，人外周血淋巴細(xì)胞(HuPBL)，具有來源方便，重建后的動(dòng)物模型中T、B淋巴細(xì)胞都具有功能，并可以檢測(cè)到人免疫球蛋白的存在的優(yōu)點(diǎn)，因而更廣受重視。
1988年，Mosier等首先證明人外周血淋巴細(xì)胞(HuPBL)輸入SCID鼠后可形成人體的免疫系統(tǒng)并維持?jǐn)?shù)月(Mosier DE et al.Transfer of a functional human immunesystem to mice with severe combined immunodeficiency.Nature，1988；335256)。他們將HuPBL經(jīng)腹腔注入SCID鼠，發(fā)現(xiàn)可在小鼠的腹腔和外周淋巴器官檢出人的T細(xì)胞和B細(xì)胞(Mosier DE et al.Immunodeficient mice xenografted with humanlymphoid cellsnew models for in vivo studies of human immunobiology andinfectious diseases.J Clin Immunol.1990；10185)。然而，早期的HuPBL-SCID模型，只有少量的人淋巴細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)移成功(大約0.1％)，用這樣的模型分析抗原特異的細(xì)胞免疫和體液免疫極度困難，大大降低了模型的價(jià)值。
針對(duì)上述缺陷，人們采取了多種方法試圖改進(jìn)，如增加淋巴細(xì)胞的輸入數(shù)量、轉(zhuǎn)輸之前給予小鼠亞致死量的放射線照射、注射抗ASGM1(Anti asialo GM1)以清除小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞的排斥反應(yīng)，但是這些方法的效果并不理想。人們又嘗試使用人造血細(xì)胞刺激因子進(jìn)行改進(jìn)，先后有Murphy WJ，et al.使用人生長(zhǎng)因子激素作為刺激劑(Humangrowth hormone promotes engraftment of murine or human T cells in severecombined immunodeficient mice.Proc Natl Acad Sci USA.1992；894481)，BombilF et al.使用IL-4作為刺激劑(Bombil F et al.Human recombinant interleukin-4(HurIL-4)improves SCID mouse reconstitution with human peripheral bloodlymphocytes.Immunobiology 1996；196437)，Coccia MA et al.使用IL-6作為刺激劑(Human IL-6 enhances human lymphocyte engraftment and activation but nothuman antibody production in SCIDhu PBL mice.Immunobiology 1998；198396)，但這幾種改進(jìn)方法都只能促進(jìn)人T淋巴細(xì)胞在SCID小鼠體內(nèi)重建，且促進(jìn)作用有限。1995年，Martensson C et al.(Enhancement of specific immunoglobulin productionin SCID-hu-PBL mice after in vitro priming of human B cells with superantigen.Immunology.1995；86224)采用體外葡萄球菌腸毒素A(SEA)刺激HuPBL后再轉(zhuǎn)輸SCID小鼠，該方法促進(jìn)了B淋巴細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的重建，但主要是促進(jìn)了B細(xì)胞的重建，對(duì)T淋巴細(xì)胞的重建效果不明顯?？傮w看來，上述方法并沒有真正把人的免疫系統(tǒng)很好地重建在SCID小鼠體內(nèi)，且需要轉(zhuǎn)輸?shù)牧馨图?xì)胞的量較大。因此，迫切需要一種既能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞重建又能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞重建的實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物模型。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種T、B淋巴細(xì)胞都具有完全功能的實(shí)驗(yàn)用HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型。
本發(fā)明所提供的HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型，是將經(jīng)CD40抗體刺激的人外周血淋巴細(xì)胞(HuPBL)轉(zhuǎn)輸SCID小鼠，轉(zhuǎn)輸后用重組人白細(xì)胞介素15(rhIL-15)進(jìn)行免疫，得到HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型。
為獲得更好的效果，可在轉(zhuǎn)輸前，先后用抗ASGM1和放射線對(duì)SCID鼠進(jìn)行處理。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種上述HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。
本發(fā)明所提供的HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟1)體外培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)加入CD40抗體進(jìn)行刺激；2)將步驟1)得到的人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)輸SCID小鼠；3)用rhIL-15對(duì)SCID小鼠進(jìn)行免疫，得到HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型。
為獲得更好的效果，所述構(gòu)建方法中還包括在轉(zhuǎn)輸前12-36小時(shí)，給SCID小鼠注射40-60μL抗ASGM1和在轉(zhuǎn)輸前2-4小時(shí)，對(duì)SCID鼠用放射線進(jìn)行照射，照射劑量為150-250cGy，優(yōu)選為200cGy。
構(gòu)建時(shí)，一般采用6-8周的SCID小鼠，鼠齡過大構(gòu)建的模型效果較差。
采用HIV、HBV均呈陰性的人血液分離人外周血淋巴細(xì)胞，分離方法為密度梯度離心法(Ficoll density gradient centrifugation)；培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞時(shí)，所述CD40的濃度為40-60ng/mL，優(yōu)選為50ng/mL，所述刺激時(shí)間為8-12小時(shí)，優(yōu)選為10小時(shí)，所用培養(yǎng)基優(yōu)選為RPMI-1640完全培養(yǎng)基。
所述步驟2)中每只SCID小鼠注射經(jīng)CD40抗體刺激的HuPBL的數(shù)量為1×107至1×108個(gè)，優(yōu)選為5×107個(gè)，數(shù)量過少，重建效果不好；過多，則移植物抗宿主病(GVHD)發(fā)生的幾率越大，造成小鼠的死亡率也會(huì)越高；所述注射途徑可為腹腔注射或靜脈注射，優(yōu)選為腹腔注射，在相同數(shù)量HuPBL的注射條件下，腹腔注射途徑引起的GVHD較輕，且腹腔注射容易操作。
所述步驟3)中rhIL-15的制備方法可參見文獻(xiàn)孫汭等，重組人白細(xì)胞介素15表達(dá)載體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的高效表達(dá)。中國(guó)生化藥物雜志2000年第21卷163-165；孫安源等，重組人白細(xì)胞介素15的純化及生物活性鑒定。中國(guó)免疫學(xué)雜志2001年第17卷292-295，rhIL-15的免疫劑量為0.5-2μg/只，優(yōu)選為1.0μg/只，轉(zhuǎn)輸當(dāng)天進(jìn)行第一次免疫，此后，每隔24小時(shí)免疫一次，共十次；免疫方式為腹腔注射。劑量過小，促進(jìn)轉(zhuǎn)移重建的效果不是很理想，劑量過大，則對(duì)T細(xì)胞有較強(qiáng)的促增殖作用，可導(dǎo)致GVHD的發(fā)生，同時(shí)rhIL-15本身的一些副作用也可能造成小鼠死亡，采取這種免疫方式可大大降低小鼠的死亡率，同時(shí)重建效果十分理想。
在轉(zhuǎn)輸HuPBL后的第7、14、21天，可取小鼠的尾靜脈，檢測(cè)人免疫球蛋白的水平；轉(zhuǎn)輸HuPBL后的第28天，可處死小鼠，檢測(cè)小鼠淋巴器官人淋巴細(xì)胞的水平及功能，若指標(biāo)達(dá)到要求則HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型構(gòu)建成功。
CD40是與B淋巴細(xì)胞表面特異性結(jié)合并在其表面進(jìn)行表達(dá)的一類分子，二者結(jié)合后，CD40可以促進(jìn)B細(xì)胞的增殖，分化和發(fā)育，進(jìn)一步引起免疫球蛋白分泌增加。因此用小劑量CD40抗體在體外使B細(xì)胞活化、增殖，有利于B淋巴細(xì)胞的體內(nèi)重建。
IL-15是一種造血促進(jìn)因子，它可以促進(jìn)NK細(xì)胞的發(fā)育、分化，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和B細(xì)胞的成熟。其中，rhIL-15是基因重組的人IL-15，是一類促造血的細(xì)胞因子，但迄今為止，還未見報(bào)道它可以促進(jìn)HuPBL在SCID鼠體內(nèi)重建。
本發(fā)明將rhIL-15與CD40抗體聯(lián)合使用共建HuPBL-SCID動(dòng)物模型，具有重復(fù)性好，效果顯著，小鼠遺傳背景清楚、死亡率低，操作方法簡(jiǎn)便、安全、實(shí)驗(yàn)的成本較低且適合大規(guī)模動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型轉(zhuǎn)移效率高，重建后的T、B淋巴細(xì)胞具有完全功能，彌補(bǔ)了現(xiàn)有動(dòng)物模型轉(zhuǎn)移效率較低，重建效果較差的缺陷，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)外對(duì)該項(xiàng)研究的空白。該模型將在免疫學(xué)基礎(chǔ)研究，人類疫苗的研制，人類的病毒性疾病如HIV病原學(xué)研究，腫瘤的動(dòng)物模型構(gòu)建，自身免疫性疾病等多種人類疾病模型的構(gòu)建等方面發(fā)揮十分重要的作用，具有良好的應(yīng)用前景。
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
實(shí)施例1、HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建及其T、B淋巴細(xì)胞的檢測(cè)動(dòng)物6-8周CB-17 SCID小鼠，體重20g左右，雌、雄性均可。飼養(yǎng)條件在無菌條件下，飼養(yǎng)溫度22℃，濕度55％，12小時(shí)白/晝節(jié)律，飲用水中給于適當(dāng)?shù)目股亍?br> RPMI-1640完全培養(yǎng)基2mM谷氨酰胺，1％非必需氨基酸，20％FCS，50μg/mL鏈霉素，100U/mL青霉素。
一、HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建及檢測(cè)HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型的具體構(gòu)建方法，包括以下步驟1、SCID小鼠處理將6-8周CB-17 SCID小鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組5只。在轉(zhuǎn)輸HuPBL前24小時(shí)，給每只SCID小鼠腹腔注射50μL抗ASGM1(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.Japan)，并在轉(zhuǎn)輸HuPBL前4小時(shí)，對(duì)每只SCID小鼠用直線加速器進(jìn)行照射，照射劑量為200cGy。
2、人外周血淋巴細(xì)胞(HuPBL)的體外培養(yǎng)及CD40抗體刺激從血庫(kù)取HIV和HBV均呈陰性的人血液，用密度梯度離心法分離出人外周血淋巴細(xì)胞。將分離出的HuPBL分成兩組，一組置于含50ng/mL CD40抗體(Cappel，West Chester，PA)的RPMI-1640完全培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，一組置于RPMI-1640完全培養(yǎng)基中生長(zhǎng)(對(duì)照組)，10小時(shí)后將兩組HuPBL洗滌三次，調(diào)細(xì)胞濃度為1×108個(gè)/mL，備用。
3、轉(zhuǎn)輸HuPBL將步驟1的實(shí)驗(yàn)組SCID小鼠每只腹腔注射0.5mL(5×107個(gè))步驟2中經(jīng)CD40抗體刺激的HuPBL，將對(duì)照組SCID小鼠每只腹腔注射0.5mL步驟2中未經(jīng)CD40抗體刺激的HuPBL。
4、rhIL-15免疫轉(zhuǎn)輸后當(dāng)天，給步驟3中的每只SCID小鼠腹腔注射1μg rhIL-15進(jìn)行第一次免疫，rhIL-15的制備方法可參見文獻(xiàn)(孫安源等，重組人白細(xì)胞介素15的純化及生物活性鑒定。中國(guó)免疫學(xué)雜志2001年第17卷292-295)，此后，每隔24小時(shí)以相同劑量免疫一次，共十次，得到HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型。
5、SCID小鼠的監(jiān)測(cè)1)體內(nèi)免疫球蛋白(Ig)的檢測(cè)在轉(zhuǎn)輸HuPBL后的第7、14、21天，取SCID小鼠的尾靜脈，采用人免疫球蛋白定量試劑盒(山東濰坊3V公司)并按照試劑盒說明書的操作流程檢測(cè)SCID小鼠體內(nèi)的人免疫球蛋白水平，測(cè)定免疫球蛋白G(IgG)的OD700值和免疫球蛋白M(IgM)的OD340值，按照標(biāo)準(zhǔn)品(試劑盒自帶)的OD值做標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣品的數(shù)值，結(jié)果實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比IgG和IgM都有十分明顯的增加，實(shí)驗(yàn)組IgG在21天達(dá)到2.8mg/mL，IgM達(dá)到1.5mg/mL，而相應(yīng)的對(duì)照組IgG為1.1mg/mL，IgM為0.5mg/mL。
2)轉(zhuǎn)輸HuPBL后第28天，取實(shí)驗(yàn)組小鼠的外周血后處死小鼠進(jìn)行解剖觀察，小鼠的胸腺、淋巴結(jié)的部位長(zhǎng)出人的胸腺和淋巴結(jié)，脾臟開始變大，小鼠并無明顯的病理變化。且在小鼠血清中檢測(cè)出人的免疫球蛋白，上述檢測(cè)結(jié)果證明在SCID鼠體內(nèi)已建成類似于人體的免疫系統(tǒng)，HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型構(gòu)建成功。
二、HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型T、B淋巴細(xì)胞的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)材料在無菌條件下，取步驟一中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞、胸腺、骨髓和淋巴結(jié)，體外分離小鼠器官淋巴細(xì)胞的方法為先把器官剪碎，過200目不銹鋼鋼絲網(wǎng)，然后用70％和40％ Percoll分離液分離淋巴細(xì)胞，詳細(xì)步驟可參考Mebius RE等論文(Transfer of primitive stem/progenitor bone marrow cells fromLT alpha-/-donors to wild-type hostsimplications for the generation ofarchitectural events in lymphoid B cell domains.J Immunol.1998；1613836-43)。
采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分離的步驟一中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠各器官、組織中人T、B淋巴細(xì)胞的重建效果，包括以下步驟1、用常規(guī)淋巴細(xì)胞表面分子檢測(cè)法，使用PE標(biāo)記的抗HLA-ABC(Becton，Dickinson and Company)，CY標(biāo)記的抗CD3(Becton，Dickinson and Company)，F(xiàn)ITC標(biāo)記的CD19抗體(Becton，Dickinson and Company)。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比，T淋巴細(xì)胞胸腺增加185倍，脾臟增加177倍，淋巴結(jié)增加392倍，外周血增加16倍；B淋巴細(xì)胞脾臟增加124倍，淋巴結(jié)增加146倍，外周血增加21倍。胸腺中人淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的比例為59.24±4.87％，脾臟中人淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的比例為81.24±6.23％，淋巴結(jié)中人淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的比例為91.03±5.74％，骨髓中人淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的比例為24.09±3.79％，外周血中人淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的比例為21.32±5.68％。
2、PHA、LPS是T、B淋巴細(xì)胞特異性的促有絲分裂原，SCID小鼠本身沒有T、B淋巴細(xì)胞，因而若經(jīng)體外刺激后淋巴細(xì)胞有明顯的增值，肯定是人T、B淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增。取步驟一中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞，一部分用于FACS檢測(cè)；另一部分做T、B淋巴細(xì)胞的體外擴(kuò)增試驗(yàn)，方法為用RPMI-1640完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/mL，取200μL細(xì)胞懸液置于96孔培養(yǎng)板中，對(duì)照組加入或不加入10μg/mL PHA(Sigma公司)或LPS(Sigma公司)，實(shí)驗(yàn)組加入或不加入10μg/mL PHA或LPS。(分別在第18、36、72小時(shí)收集PHA刺激組和其對(duì)照組培養(yǎng)上清，-70℃保存，用于細(xì)胞因子的測(cè)定。)培養(yǎng)三天后，加入1mCi(3.7×104Bq)[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷(中國(guó)科學(xué)院上海原子能技術(shù)公司)繼續(xù)培養(yǎng)8小時(shí)，用液體閃爍計(jì)數(shù)器(LS-6500，Beckman，U.S.A)測(cè)定結(jié)果，結(jié)果如表1和表2所示表1 體外PHA刺激人鼠嵌合模型脾臟淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增分組 PHA[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷(cpm)對(duì)照組淋巴細(xì)胞- 214±51實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞- 208±63對(duì)照組淋巴細(xì)胞+ 652±97實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞+ 2,118±248**表2 體外LPS刺激人鼠嵌合模型脾臟淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增分組 LPS[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷(cpm)對(duì)照組淋巴細(xì)胞- 213±32實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞- 250±43對(duì)照組淋巴細(xì)胞+ 628±125實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞+ 1593±269**注**表示顯著表1和表2數(shù)據(jù)表明，在PHA和LPS刺激下，實(shí)驗(yàn)組T、B淋巴細(xì)胞的增殖明顯高于對(duì)照組，表明實(shí)驗(yàn)組人HuPBL在SCID小鼠體內(nèi)重建的效果更佳。
將PHA刺激組和其對(duì)照組在第18、36、72小時(shí)收集的培養(yǎng)上清，用定量IL-2和IFN-γ ELISA試劑盒(RayBiotech，Inc.)并按照試劑盒說明書的操作流程檢測(cè)。測(cè)定培養(yǎng)上清的OD值后，用標(biāo)準(zhǔn)品(試劑盒自帶)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的結(jié)果。刺激后第72小時(shí)IFN-γ實(shí)驗(yàn)組為548pg/mL，而對(duì)照組只有247pg/mL；刺激后第72小時(shí)IL-2實(shí)驗(yàn)組為329pg/mL，而對(duì)照組只有153pg/mL。在不同時(shí)間點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生的IL-2和IFN-γ都顯著高于對(duì)照組，表明實(shí)驗(yàn)組重建后的T淋巴細(xì)胞可以分泌大量細(xì)胞因子。
權(quán)利要求
1.一種HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型，是將經(jīng)CD40抗體刺激的人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)輸SCID小鼠，轉(zhuǎn)輸后用rhIL-15進(jìn)行免疫，得到HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型。
2.一種權(quán)利要求1所述HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟1)體外培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)加入CD40抗體進(jìn)行刺激；2)將步驟1)得到的人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)輸SCID小鼠；3)用rhIL-15對(duì)SCID小鼠進(jìn)行免疫，得到HuPBL-SCID鼠動(dòng)物模型。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于在轉(zhuǎn)輸前12-36小時(shí)，給SCID小鼠注射40-60μL抗ASGM1。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的構(gòu)建方法，其特征在于在轉(zhuǎn)輸前2-4小時(shí)，對(duì)SCID鼠用放射線進(jìn)行照射，照射劑量為150-250cGy。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述SCID小鼠的鼠齡為6-8周。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述步驟1)中淋巴細(xì)胞的分離方法為密度梯度離心法；培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞時(shí)，所述CD40的濃度為40-60ng/mL，所述刺激時(shí)間為8-12小時(shí)，所用培養(yǎng)基為RPMI-1640完全培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述CD40的濃度為50ng/mL，所述刺激時(shí)間為10小時(shí)，
8.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述步驟2)中每只SCID小鼠注射經(jīng)CD40抗體刺激的人外周血淋巴細(xì)胞的數(shù)量為1×107至1×108個(gè)；所述注射途徑為腹腔注射或靜脈注射。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述步驟2)中每只SCID小鼠注射經(jīng)CD40抗體刺激的人外周血淋巴細(xì)胞的數(shù)量為5×107個(gè)；所述注射途徑為腹腔注射。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的構(gòu)建方法，其特征在于所述步驟3)中rhIL-15的免疫劑量為0.5-2μg/只，轉(zhuǎn)輸當(dāng)天進(jìn)行第一次免疫，此后，每隔24小時(shí)免疫一次，共十次；免疫方式為腹腔注射。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種HuPBL－SCID鼠動(dòng)物模型。該HuPBL－SCID鼠動(dòng)物模型，是將經(jīng)CD40抗體刺激的人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)輸SCID小鼠，轉(zhuǎn)輸后用rhIL－15進(jìn)行免疫，得到HuPBL－SCID鼠動(dòng)物模型。其構(gòu)建方法，包括以下步驟1)體外培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)加入CD40抗體進(jìn)行刺激；2)將步驟1)得到的人外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)輸SCID小鼠；3)用rhIL－15對(duì)SCID小鼠進(jìn)行免疫，得到HuPBL－SCID鼠動(dòng)物模型。本發(fā)明具有重復(fù)性好，效果顯著，小鼠遺傳背景清楚、死亡率低，操作方法簡(jiǎn)便、安全、實(shí)驗(yàn)的成本較低且適合大規(guī)模動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G09B23/00GK1622144SQ200510000178
公開日2005年6月1日 申請(qǐng)日期2005年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月6日
發(fā)明者田志剛, 孫安源, 魏海明 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)