專利名稱：多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)觀察池。
背景技術(shù)：
目前，醫(yī)學(xué)界普遍采用的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿是在底板1
上開(kāi)一個(gè)直徑為10mm左右的圓孔1-1，再用膠粘上一個(gè)0.13mm 0.17mm厚 的蓋玻片2，圓孔1-1的壁與蓋玻片2之間形成圓柱形空池用于培養(yǎng)細(xì)胞， 熒光探針標(biāo)記也在圓柱形空池中進(jìn)行(如圖1所示)。上述培養(yǎng)皿存在如下缺 點(diǎn) 一、由于蓋玻片2很薄且易碎，因此給加工帶來(lái)難度，成品率低；二、 培養(yǎng)皿的深度較淺，定量加入的培養(yǎng)液極易流出來(lái)，而后向培養(yǎng)液中加入藥 物，因培養(yǎng)液流出使預(yù)先計(jì)算好的藥物濃度發(fā)生改變，從而降低了實(shí)驗(yàn)精度； 三、培養(yǎng)皿的深度較淺還會(huì)在灌流時(shí)產(chǎn)生虹吸現(xiàn)象。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿存在 的加工難度大、成品率低、實(shí)驗(yàn)精度低和易產(chǎn)生虹吸現(xiàn)象的問(wèn)題，進(jìn)而提供 一種多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池。
本發(fā)明的技術(shù)方案是多功能激光掃描共聚焦顯挺鏡用培養(yǎng)觀察池包括 池體，所述池體由池壁板和池底板組成，所述池壁板和池底板由上至下制成 一體，所述池底板的上端面上沿池體的軸向開(kāi)有培養(yǎng)觀察池，所述池底板的 上端面上沿池體的軸向還開(kāi)有兩個(gè)灌流池，所述兩個(gè)灌流池沿培養(yǎng)觀察池的 軸線對(duì)稱設(shè)置，所述兩個(gè)灌流池均與培養(yǎng)觀察池連通，且兩個(gè)灌流池的深度
h均小于培養(yǎng)觀察池的深度H，所述培養(yǎng)觀察池的底面到池底板的下端面的 距離S為0.1mm lmm。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果本發(fā)明通過(guò)模具澆鑄一次成 型，易于加工，成品率達(dá)到99.8%以上；本發(fā)明的培養(yǎng)觀察池與兩個(gè)灌流池 連通，可定時(shí)或隨時(shí)對(duì)培養(yǎng)觀察池進(jìn)行灌流更換培養(yǎng)液，控制培養(yǎng)液量，避 免了培養(yǎng)液的流失，給細(xì)胞生長(zhǎng)提供一個(gè)良好環(huán)境，從而保證了預(yù)先計(jì)算好的藥物濃度恒定，提高了實(shí)驗(yàn)精度；另外本發(fā)明的培養(yǎng)觀察池與兩個(gè)灌流池連通還有效避免了虹吸現(xiàn)象的發(fā)生。


圖l是現(xiàn)有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本發(fā)明的主視剖視圖，圖3是圖2的俯視圖，圖4是現(xiàn)有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿培養(yǎng)的急性早幼粒細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞在激光掃描共聚焦顯微鏡下的觀察圖，圖5是與圖4相隔2分鐘的觀察圖，圖6是本發(fā)明培養(yǎng)的急性早幼粒細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞在激光掃描共聚焦顯微鏡下的觀察圖，圖7是與圖6相隔2分鐘的觀察圖。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施方式
一(參見(jiàn)圖2和圖3)本實(shí)施方式的多功能激光掃描共聚
焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池包括池體3，所述池體3由池壁板4和池底板5組成，所述池壁板4和池底板5由上至下制成一體，所述池底板5的上端面上沿池體3的軸向開(kāi)有培養(yǎng)觀察池5-1，所述池底板5的上端面上沿池體3的軸向還開(kāi)有兩個(gè)灌流池5-2，所述兩個(gè)灌流池5-2沿培養(yǎng)觀察池5-1的軸線對(duì)稱設(shè)置，所述兩個(gè)灌流池5-2均與培養(yǎng)觀察池5-1連通，且兩個(gè)灌流池5-2的深度h均小于培養(yǎng)觀察池5-1的深度H，所述培養(yǎng)觀察池5-1的底面到池底板5的下端面的距離S為0.1mm lmm。
具體實(shí)施方式
二(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-1的底面到池底板5的下端面的距離S為0.13mm。如此設(shè)置，實(shí)驗(yàn)精度更高，激光掃描共聚焦顯微鏡下的觀察圖清晰。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-1的底面到池底板5的下端面的距離S為0.17mm。如此設(shè)置，實(shí)驗(yàn)精度更高，激光掃描共聚焦顯微鏡下的觀察圖清晰。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-1的底面上涂有細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7。如此設(shè)置，縮短了細(xì)胞貼壁所需的時(shí)間，促使血液原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞完全貼壁。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
一、二或三相同。
具體實(shí)施方式
五(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-l的底面上的
4細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7為多聚賴氨酸涂層。分子量為7 30 ku多聚賴氨酸(poly-lysine)可以使細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至1小時(shí)，急性分離細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至30分鐘；并促使血液原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞完全貼壁，血液原代細(xì)胞及懸浮細(xì)胞的貼壁時(shí)間在10小時(shí)以內(nèi)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
具體實(shí)施方式
六(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-l的底面上的細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7為纖維連接蛋白涂層。纖維連接蛋白(fibronectin)可以使貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至4小時(shí)，急性分離細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至30分鐘；并促使血液原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞完全貼壁，懸浮細(xì)胞的貼壁時(shí)間在12小時(shí)以內(nèi)，血液原代細(xì)胞貼壁時(shí)間在11小時(shí)以內(nèi)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
具體實(shí)施方式
七(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-l的底面上的細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7為層黏蛋白涂層。層黏蛋白(laminin)可以使貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至3.5小時(shí)，急性分離細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至1小時(shí)；并促使血液原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞完全貼壁，懸浮細(xì)胞的貼壁時(shí)間在7小時(shí)以內(nèi)，血液原代細(xì)胞貼壁時(shí)間在8小時(shí)以內(nèi)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
具體實(shí)施方式
八(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-1的底面上的細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7為膠原涂層。膠原可以使貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至3.5小時(shí)，急性分離細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至25分鐘；并促使血液原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞完全貼壁，懸浮細(xì)胞的貼壁時(shí)間在8小時(shí)以內(nèi)，血液原代細(xì)胞貼壁時(shí)間在9小時(shí)以內(nèi)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
具體實(shí)施方式
九(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-l的底面上的細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7為韌黏素涂層。韌黏素(tenascins)可以使貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至5小時(shí)，急性分離細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至30分鐘；并促使血液原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞完全貼壁，懸浮細(xì)胞的貼壁時(shí)間在9小時(shí)以內(nèi)，血液原代細(xì)胞貼壁時(shí)間在12小時(shí)以內(nèi)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
具體實(shí)施方式
十(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的培養(yǎng)觀察池5-1的底面上的細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層7為層粘蛋白涂層。層粘蛋白(vitronectin)可以使貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至4.5小時(shí)，急性分離細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短至30分鐘；并促使血液原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞完全貼壁，懸浮細(xì)胞的貼壁時(shí)間在8小時(shí)以內(nèi)，血液原代細(xì)胞貼壁時(shí)間在9小時(shí)以內(nèi)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
具體實(shí)施方式
十一(參見(jiàn)圖2)本實(shí)施方式的多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池還增加有池蓋6，所述池蓋6蓋裝在池體3的上端面上。如此設(shè)置，有效的防止了藥物的揮發(fā)，避免了預(yù)先計(jì)算好的藥物濃度因藥物因揮發(fā)而發(fā)生改變，使得實(shí)驗(yàn)精度更精準(zhǔn)。其它組成和連接關(guān)系與具體實(shí)施方式
四相同。
采用現(xiàn)有的培養(yǎng)皿及本發(fā)明在相同的條件下對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞，用臺(tái)氏液洗滌兩次，然后用5nmol/L的Fluo-3/AM染色，再加入0.03%PluronicF-127在37。C恒溫水培養(yǎng)中孵育45min，然后用臺(tái)氏液再洗滌兩次去除細(xì)胞外殘留的Fluo-3/AM，最后在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察，其觀察圖如圖4和圖5所示。所述激光掃描共聚焦顯微鏡由日本奧林巴斯株會(huì)社(Olympus)生產(chǎn)，其型號(hào)為Fluoview-FV300。由圖4和圖5可知，采用現(xiàn)有的培養(yǎng)皿得到的圖像模糊，而且其中的細(xì)胞移動(dòng)明顯；由圖6和圖7可知，采用本發(fā)明得到的圖像清晰，細(xì)胞移動(dòng)不明顯，可見(jiàn)細(xì)胞已經(jīng)完全貼在培養(yǎng)觀察池壁上。
權(quán)利要求
1、一種多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，它包括池體(3)，其特征在于所述池體(3)由池壁板(4)和池底板(5)組成，所述池壁板(4)和池底板(5)由上至下制成一體，所述池底板(5)的上端面上沿池體(3)的軸向開(kāi)有培養(yǎng)觀察池(5-1)，所述池底板(5)的上端面上沿池體(3)的軸向還開(kāi)有兩個(gè)灌流池(5-2)，所述兩個(gè)灌流池(5-2)沿培養(yǎng)觀察池(5-1)的軸線對(duì)稱設(shè)置，所述兩個(gè)灌流池(5-2)均與培養(yǎng)觀察池(5-1)連通，且兩個(gè)灌流池(5-2)的深度h均小于培養(yǎng)觀察池(5-1)的深度H，所述培養(yǎng)觀察池(5-1)的底面到池底板(5)的下端面的距離δ為0.1mm～1mm。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，其特征在于所述培養(yǎng)觀察池(5-1)的底面到池底板(5)的下端面的距離S為0.13mm。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，其特征在于所述培養(yǎng)觀察池(5-1)的底面到池底板(5)的下端面的距離S為0.17mm。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l、 2或3所述多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，其特征在于所述培養(yǎng)觀察池(5-1)的底面上涂有細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層(7)。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，其特征在于所述培養(yǎng)觀察池(5-1)的底面上的細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)涂層(7)為多聚賴氨酸涂層、纖維連接蛋白涂層、層黏蛋白涂層、膠原涂層、韌黏素涂層或?qū)诱车鞍淄繉印?br> 6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，其特征在于所述培養(yǎng)池還包括池蓋(6)，所述池蓋(6)蓋裝在池體(3)的上端面上。
全文摘要
一種多功能激光掃描共聚焦顯微鏡用培養(yǎng)觀察池，它涉及一種培養(yǎng)觀察池。本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿存在的加工難度大、成品率低、實(shí)驗(yàn)精度低和易產(chǎn)生虹吸現(xiàn)象的問(wèn)題。本發(fā)明的池壁板和池底板制成一體，池底板的上端面上開(kāi)有培養(yǎng)觀察池，池底板的上端面上還開(kāi)有兩個(gè)灌流池，兩個(gè)灌流池沿培養(yǎng)觀察池的軸線對(duì)稱設(shè)置，兩個(gè)灌流池均與培養(yǎng)觀察池連通，且兩個(gè)灌流池的深度h均小于培養(yǎng)觀察池的深度H，培養(yǎng)觀察池的底面到池底板的下端面的距離為0.1mm～1mm。本發(fā)明易于加工，成品率達(dá)到99.8％以上；本發(fā)明避免了細(xì)胞培養(yǎng)液的流失，從而保證了預(yù)先計(jì)算好的藥物濃度恒定，提高了實(shí)驗(yàn)精度；另外本發(fā)明還有效避免了虹吸現(xiàn)象的發(fā)生。
文檔編號(hào)G02B21/00GK101498832SQ200910071528
公開(kāi)日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2009年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月12日
發(fā)明者晉 周, 巍 王, 肖建民 申請(qǐng)人:周 晉;王 巍