一種兼具抗菌及促成骨細(xì)胞功能的醫(yī)用鈦合金及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法。首先通過(guò)酯化反應(yīng)制備出不同濃度的殼聚糖-月桂酸(1％，1.67％，2.5％)偶聯(lián)物；其次，利用物理吸附法及化學(xué)固定法，聚多巴胺作為中間層，將殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物固定在鈦植入體表面，從而在鈦材表面構(gòu)建出一種具有抗菌-促成骨細(xì)胞增殖雙重性能的納米結(jié)構(gòu)層，以調(diào)控成骨細(xì)胞的生物學(xué)功能，并提高鈦植入體短期抗菌的能力。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種兼具抗菌及促成骨細(xì)胞功能的醫(yī)用鈦合金及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，涉及一種功能性鈦合金界面的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鈦及鈦合金移植體，因?yàn)槠涑錾牧W(xué)性質(zhì)和良好的生物相容性，被廣泛應(yīng)用于骨修復(fù)等外科手術(shù)中。然后，鈦移植體植入體內(nèi)后，與骨以機(jī)械整合的方式結(jié)合，這種被動(dòng)的方式將會(huì)引發(fā)炎癥、移位，最終導(dǎo)致移植失敗。為了解決這一難題，對(duì)鈦材進(jìn)行表面改性以提高其骨整合性成為醫(yī)用材料研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容。
[0003]鈦基表面自發(fā)形成一層Ti02鈍化層，可以提高鈦金屬的生物相容性和抗腐蝕性，但是自發(fā)形成的鈍化層無(wú)規(guī)則的表面形貌，當(dāng)植入人體后，新生骨組織與植入體只能接觸生長(zhǎng)，無(wú)法形成牢固的骨性鍵合。要想獲得理想的生物材料，使植入時(shí)間更長(zhǎng)，效果持久，與機(jī)體有機(jī)結(jié)合，鈦材料的抗菌、生物相容性等性能仍有待提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供的一種具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法。利用該方法制備的功能性的鈦合金界面有利于提高鈦合金的抗菌性能，并且提高其骨整合性，對(duì)于鈦植入體的成功植入以及在體內(nèi)長(zhǎng)期穩(wěn)定的存在具有重要意義。
[0005]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下措施實(shí)現(xiàn)的:
[0006]上述醫(yī)用鈦合金制備方法，包括以下步驟:
[0007]I)在鈦材表面固定聚多巴胺作為連接層；
[0008]2)在聚多巴胺固定的鈦合金表面結(jié)合殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物構(gòu)建T1-PDOP-Ch1-LA偶聯(lián)物。所述殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物采用酯化反應(yīng)制得，包括以下步驟:①殼聚糖加入醋酸溶液配制殼聚糖溶液；以甲醇配制月桂酸溶液，EDC水溶液加入月桂酸溶液，用以激活月桂酸的羧基將加有EDC的月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中，攪拌生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中透析，冷凍，干燥，得到殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物。
[0009]在制備過(guò)程中，諸多因素會(huì)影響殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的合成以及鈦材表面層狀薄膜的構(gòu)建，例如酯化反應(yīng)合成殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的時(shí)間、月桂酸的濃度、聚多巴胺的濃度和浸泡時(shí)間等，不同的控制條件將影響到功能化鈦材界面薄膜的形成狀況。
[0010]步驟I)中聚多巴胺優(yōu)選濃度為2mg/ml，浸泡時(shí)間為12h，表面形成均勻的單層膜，有利于殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的進(jìn)一步吸附和固定。
[0011]步驟I)中殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物浸泡24h，表面形成均勻且厚度適當(dāng)?shù)谋∧?，從而得到功能化鈦材界面的薄膜?br> [0012]制備上述殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物時(shí)月桂酸的濃度為I~2.5%，優(yōu)選為1%、
1.67%、2.5%，反應(yīng)完成后不易形成白色顆粒狀物質(zhì)，反應(yīng)更徹底，有利于更好地檢測(cè)抗菌及骨整合性能。
[0013]優(yōu)選的，上述殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物采用酯化反應(yīng)制得。具體地，包括以下步驟:I)以0.5%醋酸溶液配制殼聚糖(濃度為1%)，磁力攪拌過(guò)夜，以甲醇配制月桂酸溶液，濃度分別為0.5~5%，以雙蒸水配制EDC(125mM)溶液，加入梯度的月桂酸溶液(體積比為1:5)，用以激活月桂酸的羧基，磁力攪拌4h ；2)將梯度的月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中，體積比為3:5，磁力攪拌20~26h，生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中，透析三天，冷凍，干燥，得到殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物。更優(yōu)選的，上述殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的制備方法包括以下步驟:1)以0.5%醋酸溶液配制殼聚糖(濃度為1% )，磁力攪拌過(guò)夜，以甲醇配制月桂酸溶液，濃度分別為1^,1.67^,2.5，以雙蒸水配制EDC (125mM)溶液，加入梯度的月桂酸溶液(體積比為1:5)，用以激活月桂酸的羧基，磁力攪拌4h;2)將梯度的月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中(體積比為3:5)，磁力攪拌24h,生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中，透析三天，冷凍，干燥，得到梯度殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物。
[0014]優(yōu)選的，所述步驟I)利用化學(xué)固定法，在鈦材表面固定聚多巴胺復(fù)合物作為連接層，包括以下步驟:以雙蒸水配制Tris-Buffer溶液(IOmM, pH 8.5)，用配好的Tris-Buffer溶液溶解聚多巴胺(I~2mg/mL)，避光過(guò)濾；將鈦片浸入20ml聚多巴胺溶液中(避光操作)，包錫箔紙反應(yīng)10-16h，雙蒸水清洗三遍，形成T1-PDOP。更優(yōu)選的，以雙蒸水配制Tris-Buffer溶液(IOmM, pH 8.5),用配好的Tris-Buffer溶液溶解聚多巴胺(2mg/mL),避光過(guò)濾；將鈦片浸入20ml聚多巴胺溶液中(避光操作)，包錫箔紙反應(yīng)12h，雙蒸水清洗三遍，形成T1-PDOP。
[0015]優(yōu)選的，所述步驟2)利用物理吸附法及化學(xué)固定法，在鈦合金表面構(gòu)建鈦-多巴胺-殼聚糖-月桂酸(1^,1.67^,2.5% )偶聯(lián)物，包括以下步驟:以0.5%醋酸配制殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，將固定有多巴胺的鈦片浸入其中，浸泡20-28h，雙蒸水清洗三次，干燥，最終形成T1-PDOP-Ch1-LA(I % , 1.67% ,2.5% )偶聯(lián)物。更優(yōu)選的，所述步驟2)利用物理吸附法及化學(xué)固定法，在鈦合金表面構(gòu)建鈦-聚多巴胺-殼聚糖-月桂酸(I %，1.67%，2.5% )偶聯(lián)物。以0.5%醋酸配制殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，將固定有多巴胺的鈦片浸入其中，浸泡24h，雙蒸水清洗三次，干燥，最終形成T1-PD0P-Ch1-LA(1 %，1.67%, 2.5%)偶聯(lián)物。
[0016]T1-PDOP-Ch1-LA表示鈦-聚多巴胺-殼聚糖-月桂酸。Ti為鈦，HXff為聚多巴胺，Chi為殼聚糖，LA為月桂酸。
[0017]有益效果
[0018]1.本發(fā)明提供的鈦合金界面有利于提高鈦合金的抗菌性能，并且提高其骨整合性，對(duì)于鈦植入體的成功植入以及在體內(nèi)長(zhǎng)期穩(wěn)定的存在具有重要意義。制備方法不需要特殊器材，操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，可控性強(qiáng)。
[0019]2.本發(fā)明首先采用化學(xué)合成法(酯化反應(yīng))制備殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，聚多巴胺作為連接層固定在鈦合金表面，利用物理吸附和化學(xué)合成法，將固定有聚多巴胺的鈦合金表面進(jìn)一步固定殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，制備出具有良好骨整合性及抗菌能力的功能化鈦材界面。本發(fā)明的鈦合金表面形成均勻且厚度適當(dāng)?shù)谋∧ぃ磻?yīng)完成后不易形成白色顆粒狀物質(zhì)，反應(yīng)更徹底，有利于更好地檢測(cè)抗菌及骨整合性能。
[0020]3.本發(fā)明提供的鈦合金界面細(xì)胞活性高，無(wú)副作用，且具有良好的生物相容性?？商岣邏A性磷酸酶活性，有利于早期骨生成，提高礦化能力，具有良好的短期抗菌性能。本發(fā)明為成骨細(xì)胞提供了良好的微環(huán)境，增加了鈦材的生物相同性，提高鈦合金移植體的骨整合性，另一方面，賦予了鈦合金移植物短期抗菌性能，為之后的長(zhǎng)期和體內(nèi)的抗菌研究奠定基礎(chǔ)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1不同修飾表面形態(tài)觀察一SEM ；a為T(mén)i組，b為T(mén)1-PDOP組，c為T(mén)1-PDOP-Ch1-1% LA 組，d 為 T1-PDOP-Ch1-1.67% LA 組，e 為 T1-PDOP-Ch1-2.5% LA 組。
[0022]圖2不同修飾表面成骨細(xì)胞培養(yǎng)4天、7天后細(xì)胞活性，η = 6, **ρ〈0.01。
[0023]圖3不同修飾表面成骨細(xì)胞培養(yǎng)4天、7天后堿性磷酸酶活性，η = 6, **ρ〈0.01。
[0024]圖4不同修飾表面成骨細(xì)胞培養(yǎng)14天后礦化定量檢測(cè)，η = 6，**ρ〈0.01。
[0025]圖5不同修飾鈦材表面材料耐受性實(shí)驗(yàn)——CCK-8檢測(cè)，η = 6，**ρ〈0.01。
【具體實(shí)施方式】
[0026]為了使本研究發(fā)明的技術(shù)方案以及優(yōu)點(diǎn)更為清晰，下面將根據(jù)附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0027]實(shí)施例1
[0028]鈦合金表面促進(jìn)成骨細(xì)胞功能-抗菌性能的功能化結(jié)構(gòu)構(gòu)建，包括以下步驟:
[0029]a.殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的制備:首先，以0.5%醋酸溶液配制殼聚糖(濃度為1% ),磁力攪拌過(guò)夜，以甲醇配制月桂酸溶液，濃度分別為I %，1.67 %，2.5 %，以雙蒸水配制EDC(125mM)溶液，加入梯度的月桂酸溶液(體積比為1:5)，用以激活月桂酸的羧基，磁力攪拌4h ;其次，將梯度的月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中(體積比為3:5)，磁力攪拌24h,生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中，透析三天，冷凍，干燥，得到殼聚糖-梯度月桂酸偶聯(lián)物。
[0030]b.聚多巴胺的固定:利用化學(xué)固定法，在鈦材表面固定聚多巴胺復(fù)合物作連接間層。以雙蒸水配制Tris-Buffer溶液(IOmM, pH 8.5)，用配好的Tris-Buffer溶液溶解聚多巴胺(2mg/mL)，避光過(guò)濾；將鈦片浸入20ml聚多巴胺溶液中(避光操作)，包錫箔紙反應(yīng)12h,雙蒸水清洗三遍，形成T1-PDOP。
[0031]c.功能化鈦合金表面的構(gòu)建:是利用物理吸附法及化學(xué)固定法，在鈦合金表面構(gòu)建鈦-多巴胺-殼聚糖-月桂酸(I %，1.67 %，2.5 % )偶聯(lián)物。以0.5 %醋酸配制殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，將固定有多巴胺的鈦片浸入其中，浸泡24h，雙蒸水清洗三次，干燥，最終形成T1-PDOP-Ch1-LA(T1-PDOP-Ch1-1 % LA, T1-PDOP-Ch1-1.67% LA, T1-PDOP-Ch1-2.5% LA)偶聯(lián)物。
[0032]鈦合金性能驗(yàn)證:
[0033]1)改性后鈦合金表面的細(xì)胞活性，探究成骨細(xì)胞在不同修飾的鈦合金表面的細(xì)胞活性。
[0034]以CCK-8表征不同修飾的鈦合金表面的生物相容性。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第三代成骨細(xì)胞，密度為2X IOVcm2接種在不同修飾的鈦合金表面及對(duì)照組TCPS上，分別培養(yǎng)4天和7天，吸棄培養(yǎng)基，每孔加入200ul新鮮培養(yǎng)基及20ulCCK-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)1.5h。每孔吸取50 μ L培養(yǎng)液，測(cè)定各孔在450nm處的吸光值。
[0035]CCK-8法是一種方便快捷、靈敏度高、重復(fù)性好的細(xì)胞活性檢測(cè)法，CCK-8可以被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成有色的甲瓚，而死細(xì)胞無(wú)此功能。因此，活細(xì)胞量與顏色深淺成正比，活細(xì)胞越多，顏色越深，OD值也就越高。如圖2所示，接種4天后，在修飾有殼聚糖-月桂酸(1.67 %，2.5 % )的鈦材表面生成的甲瓚量與純鈦相比，具有顯著性差異(p〈0.01);在接種7天后，在修飾有多巴胺以及殼聚糖-月桂酸的鈦材表面生成的甲瓚量與純鈦相比，均具有顯著性差異(P〈0.01)，對(duì)照組(TCPS)表現(xiàn)出最高的甲瓚生成量，細(xì)胞活性最高。由此，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)中不同濃度的月桂酸-殼聚糖偶聯(lián)物無(wú)無(wú)副作用，且具有良好的生物相容性。
[0036]2)成骨細(xì)胞在改性鈦合金表面的堿性磷酸酶活性
[0037]取長(zhǎng)勢(shì)良好的3代細(xì)胞以2 X IO4Cell/孔的密度接種于各修飾鈦片表面以及TCPS上，分別培養(yǎng)4天和7天，以1% TritonX-1OO裂解細(xì)胞，得到細(xì)胞裂解液。BCA蛋白檢測(cè)試劑盒根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)裂解液中的蛋白總量，進(jìn)而利用ALP試劑盒得到相應(yīng)的堿性磷酸酶活性，490nm處檢測(cè)吸光值。
[0038]堿性磷酸酶(ALP)是骨生成的早期標(biāo)志，較高的堿性磷酸酶活性有助于提高骨組織的礦化能力。圖3顯示了各修飾鈦材表面培養(yǎng)4天和7天后成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性。經(jīng)過(guò)4天的培養(yǎng)，與純鈦和殼聚糖-月桂酸修飾的鈦材相比，多巴胺修飾的鈦材表面具有更高的堿性磷酸酶活性(p〈0.01)。這個(gè)結(jié)果說(shuō)明，培養(yǎng)4天后，多巴胺由于自身的鄰苯二酚和氨基基團(tuán)，有利于早期骨的形成。與此同時(shí)，培養(yǎng)7天后，和純鈦相比，在聚多巴胺和殼聚糖-(1.67^,2.5% )月桂酸組表現(xiàn)出更高的堿酶性磷酸活性(p〈0.01)，其中，殼聚糖-1.67%月桂酸組表現(xiàn) 出最高的ALP活性。結(jié)果表明，殼聚糖-月桂酸修飾的鈦材表面可提高堿性磷酸酶活性，有利于早期骨生成，進(jìn)而提高礦化能力。
[0039](3)成骨細(xì)胞在改性鈦合金表面的礦化能力
[0040]為了進(jìn)一步檢測(cè)不同修飾鈦合金表面對(duì)成骨細(xì)胞骨整合性的促進(jìn)作用，本實(shí)驗(yàn)研究了成骨細(xì)胞的礦化能力。礦化被認(rèn)為是成骨細(xì)胞晚期分化的標(biāo)志。本實(shí)驗(yàn)采用茜素紅染色的方法，此方法是礦化沉積時(shí)對(duì)鈣鹽沉積定性定量檢測(cè)常用的方法。茜素紅與鈣鹽之間的顏色反應(yīng)，導(dǎo)致形成深紅色的鈣鹽結(jié)節(jié)，因此可以生成通過(guò)鈣結(jié)節(jié)顏色的深淺來(lái)判斷其礦化能力。圖4是成骨細(xì)胞培養(yǎng)14天后礦化能力的定量檢測(cè)。由圖可知，經(jīng)過(guò)多巴胺修飾的鈦材表面及殼聚糖-月桂酸修飾的鈦材表面與純鈦相比都具有顯著性差異(P〈0.01)，尤其是殼聚糖-1.67%月桂酸修飾的鈦材表面，表現(xiàn)了最高的鈣沉積量，此結(jié)果與ALP的結(jié)果一致。因此，研究表明，殼聚糖-月桂酸修飾的鈦材表面有助于提高成骨細(xì)胞的礦化能力。
[0041](4)不同修飾鈦合金表面短期抗菌性能的研究
[0042]將金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌接種在不同修飾的鈦合金表面，密度為IX 106cells/mL，在37°C培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)12h和24h ;吸棄培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗3次，洗去懸浮的細(xì)菌；每孔加入200ul新的無(wú)菌MHB肉湯培養(yǎng)基，10ulCCK-8試劑，37°C培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)1.5h ;每孔吸取50ul培養(yǎng)基，酶標(biāo)儀450nm波段檢測(cè)吸光值。
[0043]本實(shí)驗(yàn)采用CCK-8試劑盒定量檢測(cè)細(xì)菌培養(yǎng)12h和24h后的細(xì)菌活性。如圖5所示，培養(yǎng)12h和24h后，兩種細(xì)菌在殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物(1%，1.67%，2.5% )修飾的鈦基材表面的活性明顯低于純鈦和殼聚糖修飾的鈦基材表面，并有極顯著差異(p〈0.01)。這種現(xiàn)象歸因于:殼聚糖和月桂酸的協(xié)同抗菌作用。殼聚糖本身具有抗菌活性，雖然其分子中的部分氨基和月桂酸分子中的羧基發(fā)生酯化反應(yīng)形成殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物而被消耗掉，但并沒(méi)有因此影響其抗菌效果，此外，月桂酸本身也具有抗菌效果。結(jié)果表明，固定有殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的鈦合金表面具有良好的短期抗菌性能。
[0044]因此，本研究一方面，為成骨細(xì)胞提供了良好的微環(huán)境，增加了鈦材的生物相同性，提高鈦合金移植體的骨整合 性，另一方面，賦予了鈦合金移植物短期抗菌性能，為之后的長(zhǎng)期和體內(nèi)的抗菌研究奠定基礎(chǔ)。
[0045]最后說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，并不構(gòu)成對(duì)本
【發(fā)明內(nèi)容】
的限制。盡管通過(guò)上述實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明做了較為詳細(xì)的例舉，但本領(lǐng)域技術(shù)人員仍然可以根據(jù)
【發(fā)明內(nèi)容】
部分和實(shí)施例部分所描述的技術(shù)內(nèi)容，在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書(shū)所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，包括以下步驟: 1)在鈦材表面固定聚多巴胺作為連接層； 2)在聚多巴胺固定的鈦合金表面結(jié)合殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物構(gòu)建T1-PDOP-Ch1-LA偶聯(lián)物； 所述殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物采用酯化反應(yīng)制得，包括以下步驟:①殼聚糖加入醋酸溶液配制殼聚糖溶液；以甲醇配制月桂酸溶液，EDC水溶液加入月桂酸溶液，用以激活月桂酸的羧基將加有EDC的月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中，攪拌生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中透析，冷凍，干燥，得到殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物。
2.如權(quán)利要求1所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，步驟I)中鈦材表面固定聚多巴胺是將鈦材浸泡于聚多巴胺溶液，溶液濃度為2mg/ml,浸泡時(shí)間為12h。
3.如權(quán)利要求1或2所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，步驟2)中聚多巴胺固定的鈦合金表面結(jié)合殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物是將聚多巴胺固定的鈦合金在殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物溶液浸泡24h。
4.如權(quán)利要求1所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，酯化反應(yīng)中月桂酸溶液濃度為I~2.5%。
5.如權(quán)利要求1所述的具有抗菌性能和促 成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，所述殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物的制備包括以下步驟:1)以0.5wt%醋酸溶液配制lwt%殼聚糖溶液，磁力攪拌過(guò)夜，以甲醇配制0.5~5% wt月桂酸溶液，濃度為，以雙蒸水配制125mM的EDC溶液，加入月桂酸溶液，EDC溶液與月桂酸溶液的體積比為1:5，用以激活月桂酸的羧基，磁力攪拌4h ；2)將加有EDC溶液的月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中，體積比為3:5，磁力攪拌20~26h，生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中，透析三天，冷凍，干燥，得到殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物。
6.如權(quán)利要求5所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，包括以下步驟:1)以0.5wt%醋酸溶液配制lwt%殼聚糖溶液，磁力攪拌過(guò)夜，以甲醇配制月桂酸溶液，濃度分別為1%，1.67%，2.5，以雙蒸水配制125mM的EDC溶液，加入月桂酸溶液，體積比為1:5，用以激活月桂酸的羧基，磁力攪拌4h;2)將月桂酸溶液逐滴加入到殼聚糖溶液中，體積比為3:5，磁力攪拌24h，生成白色懸濁液；再將懸濁液轉(zhuǎn)入透析袋中，透析三天，冷凍，干燥，得到梯度殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物。
7.如權(quán)利要求1所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，所述步驟I)利用化學(xué)固定法，在鈦材表面固定聚多巴胺復(fù)合物作為連接層，包括以下步驟:以雙蒸水配制IOmM, pH 8.5的Tris-Buffer溶液，用配好的Tris-Buffer溶液溶解聚多巴胺，配成濃度為I~2mg/mL的聚多巴胺溶液，避光過(guò)濾；避光將鈦片浸入20ml聚多巴胺溶液中，包錫箔紙反應(yīng)10-16h，雙蒸水清洗三遍，形成T1-PDOP。
8.如權(quán)利要求7所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，所述步驟I)包括以下步驟:以雙蒸水配制IOmM, pH 8.5的Tris-Buffer溶液，用配好的Tris-Buffer溶液溶解聚多巴胺，濃度為2mg/mL，避光過(guò)濾；避光將鈦片浸入20ml聚多巴胺溶液中，包錫箔紙反應(yīng)12h，雙蒸水清洗三遍，形成T1-PDOP。
9.如權(quán)利要求1所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，所述步驟2)利用物理吸附法及化學(xué)固定法，在鈦合金表面構(gòu)建鈦-多巴胺-殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，包括以下步驟:以0.5%醋酸配制殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，將固定有多巴胺的鈦片浸入其中，浸泡20-28h，雙蒸水清洗三次，干燥，最終形成1%，1.67%或2.5%的 T1-PDOP-Ch1-LA 偶聯(lián)物。
10.如權(quán)利要求9所述的具有抗菌性能和促成骨細(xì)胞功能的納米層醫(yī)用鈦合金的制備方法，所述步驟2)利用物理吸附法及化學(xué)固定法，在鈦合金表面構(gòu)建鈦-多巴胺-殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，以0.5%醋酸配制殼聚糖-月桂酸偶聯(lián)物，將固定有多巴胺的鈦片浸入其中，浸泡24h，雙蒸水清洗三次，干燥，最終形成質(zhì)量濃度為1%，1.67%，2.5%的T1-PDOP-Ch1-LA 偶聯(lián)物。
【文檔編號(hào)】C23C22/64GK104005016SQ201410250146
【公開(kāi)日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年6月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月6日
【發(fā)明者】蔡開(kāi)勇, 趙璐 申請(qǐng)人:重慶大學(xué)