本發(fā)明屬于真菌多糖應(yīng)用，具體涉及一種銀耳孢子胞外多糖及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、銀耳多糖被認(rèn)為是與營(yíng)養(yǎng)和人體健康有關(guān)的主要活性成分，具有多種有益的生物活性及功效，如抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)腸道菌群等作用，被用作滋補(bǔ)保健佳品。目前銀耳多糖主要是從子實(shí)體中提取，但已有研究表明，通過(guò)深層液體發(fā)酵法獲取銀耳多糖是可行的。近年來(lái)，液態(tài)深層發(fā)酵技術(shù)逐步替代傳統(tǒng)子實(shí)體提取，解決了菌菇栽培地域氣候限制多、時(shí)間成本高的產(chǎn)業(yè)瓶頸，推動(dòng)了食藥用真菌多糖產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。

2、隨著社會(huì)的發(fā)展和人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，使得糖尿病、高血壓、高血脂等代謝疾病患病率逐年上升。糖尿病是一種以血糖升高為特征的代謝紊亂，目前最主要的患病類(lèi)型是2型糖尿病，主要表現(xiàn)為血液、肝臟等組織糖脂水平的異常改變，與血脂異常、糖尿病腎病、動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病密切相關(guān)。高脂血癥是一種由于脂質(zhì)代謝紊亂引起的脂質(zhì)含量增加的疾病，也與動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、腦出血等心血管疾病的發(fā)生息息相關(guān)，嚴(yán)重影響人體健康。目前市場(chǎng)上多有各種用于降糖、降脂的藥物，但這些藥物存在低血糖、惡心腹瀉、肝臟損傷、肌損害等副作用。因此，開(kāi)發(fā)天然無(wú)毒無(wú)副作用的降糖降脂成分，從而制備成預(yù)防或治療高血糖、血脂的食品或藥物具有深遠(yuǎn)的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中深層發(fā)酵銀耳多糖的應(yīng)用局限，提供一種銀耳孢子胞外多糖。

2、本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供上述銀耳孢子胞外多糖的制備方法。

3、本發(fā)明最后要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供上述銀耳孢子胞外多糖的應(yīng)用。

4、為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

5、一種銀耳孢子胞外多糖tfpb，所述的銀耳孢子胞外多糖的單糖組成及相應(yīng)的單糖摩爾百分比為：甘露糖：葡萄糖醛酸：葡萄糖：木糖：巖藻糖：半乳糖：阿拉伯糖＝53.31％～55％：4.63％～6.6％：2.25％～5.1％：19.98％～25.2％：8.76％～14.63％：1.69％～1.8％：0.47％～0.67％。

6、其中，所述的銀耳孢子胞外多糖的分子量為1000～1500kda；優(yōu)選的分子量為1183.48～1200.77kda。

7、其中，所述的銀耳孢子胞外多糖甘露糖以→2,3)-manp-(1→、manp-(1→、→3)-manp-(1→、→3,4)-manp-(1→連接，木糖以→4)-xylp-(1→和xylp-(1→殘基形式連接，巖藻糖以→3)-fucp-(1→和fucp-(1→連接，葡萄糖以glcp-(1→形式存在，少量的半乳糖以→6)-galp-(1→、→3,4)-galp-(1→和→3,6)-galp-(1→連接。

8、上述銀耳孢子胞外多糖的制備方法也在本發(fā)明所保護(hù)的范圍之內(nèi)，具體的，利用銀耳tremella?fuciformis?s-41cgmcc?no.40060發(fā)酵制備得到銀耳孢子胞外多糖。

9、進(jìn)一步的，利用銀耳tremella?fuciformis?s-41cgmcc?no.40060發(fā)酵制備得到發(fā)酵液，經(jīng)粗提得到銀耳孢子胞外粗多糖，再經(jīng)離子交換柱純化得到銀耳孢子胞外多糖。

10、其中，所述的銀耳tremella?fuciformis?s-41cgmcc?no.40060，該菌株于2021年3月21日分離自福建古田的銀耳子實(shí)體，已于2022年01月14日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌株號(hào)：s-41，分類(lèi)命名：銀耳tremella?fuciformis，保藏編號(hào)：cgmcc?no.40060，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。該菌株的詳細(xì)信息已公開(kāi)在專(zhuān)利cn117187080a和cn117187237a中。

11、其中，所述的利用銀耳tremella?fuciformis?s-41cgmcc?no.40060發(fā)酵制備得到發(fā)酵液，具體是將銀耳菌株的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)制備得到發(fā)酵液。

12、其中，所述的種子液，是將活化后的銀耳菌株接種至種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)得到的。

13、具體的，所述的種子培養(yǎng)基配方為：葡萄糖5～30g/l，酵母粉1～5g/l，蛋白胨1～5g/l，硫酸鎂0.1～2g/l，磷酸二氫鉀1～10g/l，磷酸氫二鉀0.1～2g/l，余下為水。

14、具體的，所述的種子培養(yǎng)，其條件為：20～32℃，轉(zhuǎn)速150～200rpm條件下培養(yǎng)3～5天。

15、其中，所述的發(fā)酵，其發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖50～70g/l、玉米漿5～10g/l、硫酸鎂0.5～2g/l、磷酸氫二鉀1～5g/l、磷酸二氫鉀0.5～2g/l；發(fā)酵條件為：20～32℃，150～200rpm條件下培養(yǎng)7～10天。

16、其中，所述的粗提包括濃縮、除蛋白、醇沉提取多糖、透析、冷凍干燥的步驟。

17、具體的，所述的粗提包括將發(fā)酵液離心后，取上清液蒸發(fā)濃縮，利用sevage法脫去蛋白得到過(guò)濾液，再利用乙醇醇沉提取過(guò)濾液中的多糖，經(jīng)透析、冷凍干燥得到銀耳孢子胞外粗多糖的步驟。

18、具體的，所述的濃縮為濃縮至上清液體積的1/3～1/5；所述的乙醇，其加入量為過(guò)濾液體積的3～5倍。

19、其中，所述的離子交換樹(shù)脂純化包括將銀耳孢子胞外粗多糖溶于水制得粗多糖溶液，上樣至離子交換柱進(jìn)行梯度洗脫，收集單一峰洗脫液進(jìn)行透析、除鹽后冷凍干燥得到銀耳孢子胞外多糖的步驟。

20、具體的，所述的粗多糖溶液，其濃度為5～10g/l，溶劑為水；所述的梯度洗脫，以0～2mol/l?nacl溶液進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為：流速0.5～2ml/min，溫度20～30℃。

21、進(jìn)一步的，所述的nacl溶液濃度為：0、0.3mol/l、0.7mol/l和2mol/l。

22、上述銀耳孢子胞外多糖在制備降血糖藥物和/或降血脂藥物中的應(yīng)用也在本發(fā)明所保護(hù)的范圍之內(nèi)。

23、具體的，對(duì)高脂飲食和鏈脲菌素誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型進(jìn)行不同劑量的銀耳孢子胞外多糖治療，通過(guò)測(cè)定相關(guān)指標(biāo)探究了銀耳孢子胞外多糖對(duì)糖尿病小鼠的體內(nèi)降糖降脂活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，銀耳孢子胞外多糖能改善高脂飲食導(dǎo)致的肥胖；顯著降低小鼠的空腹血糖水平，提高糖尿病小鼠的糖耐量，改善小鼠的胰島素抵抗；降低tg、tc、ldl-c水平，提高h(yuǎn)dl-c水平；降低alt、ast、akp肝酶水平。因此，銀耳孢子胞外多糖具有優(yōu)異的降糖降脂活性。

24、有益效果：

25、本發(fā)明利用銀耳孢子發(fā)酵制備得到了一種分子量為1000～1500kda的多糖tfpb，該銀耳孢子胞外多糖制備方式簡(jiǎn)單，條件易控制，成本低周期短，可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，有望替代傳統(tǒng)高成本的子實(shí)體多糖，也可作為調(diào)節(jié)血糖、血脂潛在的選擇進(jìn)行單用或和西藥聯(lián)用，從而減少二甲雙胍等西藥在降血糖、血脂過(guò)程中產(chǎn)生的依賴性，降低其毒副作用。

26、本發(fā)明制備得到的銀耳孢子胞外多糖具有優(yōu)異的降糖、降脂活性，可用于開(kāi)發(fā)天然無(wú)毒無(wú)副作用的預(yù)防或治療高血糖血脂的功能食品或藥物。