一種蟬花孢梗束液體培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的原料主要包括：酵母浸出粉0.2～3％，大豆水解蛋白0.1～2％，余量補水至100％；本發(fā)明培養(yǎng)基還可加入蔗糖1～8％、氯化鈣0.005～0.1％和磷酸二氫鉀0.01～0.5％。本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)的蟬花孢梗束產(chǎn)量及其有效成分含量顯著提高，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，適用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】
一種蟬花孢梗束液體培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及蟬花人工培養(yǎng)孢梗束中液體培養(yǎng)基，具體的說，涉及蟬花人工培養(yǎng)的 親if工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 蝴花（Isaria cicadae Miquel)屬于真菌界（FUNGI)的子囊菌門（Ascomycota)、 盤菌亞門（Pezizomycotina)、奠殼菌綱（Sordariomycetes)、肉座菌目（Hypocreales)、蟲 草科（Cordycipitaceae)、棒束抱屬（Isaria)。
[0003] 4單花（Isaria cicadae Miquel)是廣布種，其菌種可以自已采集分離也可以購買。 蟬花在我國秦嶺-淮河以南的18個省、市、區(qū)有廣泛分布。在我國長江以南的亞熱帶和熱 帶地區(qū)，且多在低洼地帶及滇藏高原的金沙江、怒江、瀾滄江和雅魯藏布江等河谷地帶。只 要在其生長季節(jié)，每年的6-8月，按照一般中藥材的采集方法都可采到。
[0004] 蟬花是我國名貴的中藥材，是寄生在蟬（俗稱"知了"）上的一種蟲草菌。其藥用 已有1000多年歷史，是我國傳統(tǒng)的名貴藥材之一，具有多方面的藥用價值。主要成分有：腺 苷、蟲草多糖、蟲草酸（甘露醇）、蟲草素、尿嘧啶、留醇、生物堿、維生素、無機鹽、礦物質(zhì)元 素等。
[0005] 蟬花具有調(diào)節(jié)人體免疫的功能，提高食欲，促進睡眠，增強自身抗病的能力。在這 些成分當中，蟲草多糖具有獨特的生物活性，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗輻射、抗衰老等 功效，免疫調(diào)節(jié)作用成為研究開發(fā)的熱點。腺苷能抑制中樞神經(jīng)元的興奮性，可以擴張冠狀 及周圍血管、增加冠狀動脈血流量、降低血壓、減慢心率等作用。腺苷還具有抗血小板聚集、 抗輻射和抗腫瘤等作用。不僅如此，蟬花中的活性成分ISP-1具有雙向免疫調(diào)節(jié)活性，可以 大大的提高器官移植手術(shù)的成功率，對患者的康復(fù)也有著明顯的積極效果。
[0006] 自1993年陳祝安先生研究了蟬花的人工培養(yǎng)開始，蟬花人工培養(yǎng)孢梗束的種子 液和發(fā)酵液一直采用20%土豆煮汁，3%白砂糖，余量補水至100%。
[0007] 現(xiàn)有技術(shù)尚無使用相同的培養(yǎng)基配方用于蟬花人工培養(yǎng)孢梗束的相關(guān)報道和應(yīng) 用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的液體培養(yǎng)基。
[0009] 本發(fā)明進一步提供一種用于人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的方法。
[0010] -種用于人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的原料主要包括：酵母浸 出粉，大豆水解蛋白，水。
[0011] 進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0.2~3%，大豆水 解蛋白〇. 1~2 %，余量補水至100 %。
[0012] 更進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0.3~1%，大豆 水解蛋白〇. 2~1 %，余量補水至100 %。
[0013] 更進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0.4~0.8%，大 豆水解蛋白〇. 3~0. 8 %，余量補水至100 %。
[0014] 更進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0. 4%，大豆水解 蛋白0. 3%，余量補水至100%。
[0015] 進一步，所述培養(yǎng)基的原料組成中還可以加入鹿糖1~8% ;更進一步，鹿糖加入 量為2~5% ;更進一步，蔗糖加入量為3~4% ;更進一步，蔗糖加入量為3.5% ;更進一 步，所述蔗糖為白砂糖。
[0016] 進一步，所述培養(yǎng)基的原料組成中還可以加入氯化鈣0. 005~0. 1%，磷酸二氫鉀 0. 01~0. 5 % ;更進一步，氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量為氯化鈣0. 008~0. 05%，磷酸二 氫鉀0. 02~0. 2% ;更進一步，氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量為氯化鈣0. 01~0. 02%，磷 酸二氫鉀〇. 05~0. 1 %;更進一步，氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量為氯化鈣0. 01 %，磷酸二 氛鐘0? 05%。
[0017] 本發(fā)明所述的培養(yǎng)基用于蟬花菌種經(jīng)斜面菌種培養(yǎng)、液體搖瓶培養(yǎng)、種子罐液體 培養(yǎng)、發(fā)酵罐液體發(fā)酵培養(yǎng)及固體出草培養(yǎng)，通過上述培養(yǎng)步驟得到孢梗束、孢子粉和菌 質(zhì)；其中斜面菌種培養(yǎng)、液體搖瓶培養(yǎng)、種子罐液體培養(yǎng)、發(fā)酵罐液體發(fā)酵培養(yǎng)及固體出草 培養(yǎng)均可采用常規(guī)方法。
[0018] 本發(fā)明進一步提供一種人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的方法，該方法包括斜面菌種培養(yǎng)、 液體搖瓶培養(yǎng)、種子罐液體培養(yǎng)、發(fā)酵罐液體發(fā)酵培養(yǎng)及固體出草培養(yǎng)步驟，其中所述液體 搖瓶培養(yǎng)、種子罐液體培養(yǎng)、發(fā)酵罐液體發(fā)酵培養(yǎng)及固體出草培養(yǎng)步驟中液體培養(yǎng)基原料 主要包括：酵母浸出粉，大豆水解蛋白，水。
[0019] 所述培養(yǎng)方法步驟還包括種子罐擴大培養(yǎng)。
[0020] 進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0.2~3%，大豆水 解蛋白〇. 1~2 %，余量補水至100 %。
[0021] 更進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0.3~1%，大豆 水解蛋白〇. 2~1 %，余量補水至100 %。
[0022] 更進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0.4~0.8%，大 豆水解蛋白〇. 3~0. 8 %，余量補水至100 %。
[0023] 更進一步，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分比）：酵母浸出粉0. 4%，大豆水解 蛋白0. 3%，余量補水至100%。
[0024] 進一步，所述培養(yǎng)基的原料組成中還可以加入鹿糖1~8% ;更進一步，鹿糖加入 量為2~5% ;更進一步，蔗糖加入量為3~4% ;更進一步，蔗糖加入量為3.5% ;更進一 步，所述蔗糖為白砂糖。
[0025] 進一步，所述培養(yǎng)基的原料組成中還可以加入氯化鈣0. 005~0. 1 %，磷酸二氫鉀 0. 01~0. 5 % ;更進一步，氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量為氯化鈣0. 008~0. 05%，磷酸二 氫鉀0. 02~0. 2% ;更進一步，氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量為氯化鈣0. 01~0. 02%，磷 酸二氫鉀〇. 05~0. 1 %;更進一步，氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量為氯化鈣0. 01 %，磷酸二 氛鐘0? 05%。
[0026] 本發(fā)明中所用4單花（Isaria cicadae Miquel)是廣布種，可以自制也可以購買。蟲單 花在我國秦嶺-淮河以南的18個省、市、區(qū)有廣泛分布。在我國長江以南的亞熱帶和熱帶 地區(qū)，且多在低洼地帶及滇藏高原的金沙江、怒江、瀾滄江和雅魯藏布江等河谷地帶。只要 在其生長季節(jié)，每年的6-8月，按照一般中藥材的采集方法都可采到。采到的蟬花可以依下 法分離到蟬花菌種，具體步驟如下：
[0027] 菌株的分離方法是：在超鏡工作臺上，在無菌條件下，將采來的新鮮蟲草用無菌 水沖洗干凈，置于已滅菌的直徑為15cm的培養(yǎng)皿中，蟲草的內(nèi)菌核部分（蟲體）用打濕 的脫脂棉包裹，以保濕。蟲草的子實體下方放置一滅菌的載玻片，蟲草菌核部分用小玻片 墊起，以使可孕部分不要直接接觸載玻片，其距離約〇. 5cm左右。然后將培養(yǎng)皿放置于 20°C ±0. 5°C的光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待蟬花孢子彈射于載玻片上時，在孢子周圍滴加剛?cè)芑?PDA培養(yǎng)基少許，移出玻片，置于另一滅菌的培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)，待長出菌絲后用接種針挑 取少量菌絲轉(zhuǎn)另一平皿（SDAY培養(yǎng)基）培養(yǎng)（同上），直至長出單一的純化的菌落為止。并 經(jīng)形態(tài)學或分子生物學方法驗證，該菌株為蝴花蟲草（Isaria cicadae Miquel)無性型。
[0028] 本發(fā)明優(yōu)選 CN102851353A 公開的蝴擬青霉菌株[Paecilomyces cicadae (Miq.) Samson]已于2009年11月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱 CGMCC)注冊保藏，保藏號為CGMCC No. 3453。
[0029] 本發(fā)明與原有培養(yǎng)基技術(shù)相比具如下優(yōu)點：去掉了原使用土豆煮汁的繁瑣工藝， 節(jié)約了勞動力，提高了勞動生產(chǎn)率；解決了土豆不同品種和不同季節(jié)的質(zhì)量不一問題；本 發(fā)明首次提供了大豆水解蛋白與酵母浸出粉配比用于人工蟬花孢梗束液體培養(yǎng)中，蟬花孢 梗束產(chǎn)量及其有效成分含量顯著提高，保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，改善了生產(chǎn)環(huán)境，適用于大規(guī)模 工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】：
[0030] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步的說明：
[0031] 實施例1
[0032] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白0.3%，酵母浸出粉0.4%，白砂糖3. 5%，氯化鈣 0. 01 %，磷酸二氫鉀0. 05 %，余量蒸餾水補足100 %。
[0033] 實施例2
[0034] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白0. 3%，酵母浸出粉1 %，白砂糖2%，氯化鈣0. 05%，磷 酸二氫鉀〇. 02 %，余量蒸餾水補足100 %。
[0035] 實施例3
[0036] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白1%，酵母浸出粉0.2%，白砂糖5%，氯化鈣0.008%， 磷酸二氫鉀〇. 2 %，余量蒸餾水補足100 %。
[0037] 實施例4
[0038] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白0. 1 %，酵母浸出粉3 %，白砂糖1 %，氯化鈣0. 1 %，磷 酸二氫鉀0.01%，余量蒸餾水補足100%。
[0039] 實施例5
[0040] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白2%，酵母浸出粉0. 2%，白砂糖6%，氯化鈣0. 005%， 磷酸二氫鉀〇. 5 %，余量蒸餾水補足100 %。
[0041] 實施例6
[0042] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白0. 6%，酵母浸出粉0. 4%，白砂糖4%。
[0043] 實施例7
[0044] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白0. 5%，酵母浸出粉0. 4%，白砂糖3. 5%。
[0045] 實施例8
[0046] 培養(yǎng)基配方：大豆水解蛋白1. 5%，酵母浸出粉0. 3%，白砂糖3. 5%。
[0047] 實施例9培養(yǎng)基配方篩選實驗
[0048] 1、一級斜面菌種培養(yǎng)
[0049] 培養(yǎng)基配方：20 %土豆煮汁+2 %蔗糖+2 %瓊脂，余補水至100% ;pH6. 5。
[0050] 具體做法是：將土豆去皮煮熟，過濾去渣后，按照200克配制1升的比例配制，再加 入2%的蔗糖、定容，加入2%瓊脂融化，分裝進試管，在0.1 Mpa壓力下，121°C，滅菌30min， 放氣完畢，擺放成斜面自然冷卻。無菌條件下將蟬花菌種CGMCCNo. 3453接到斜面上，24°C， 培養(yǎng)15天，獲得生產(chǎn)母種（本發(fā)明所涉及的蝴擬青霉菌株[Paecilomyces cicadae(Miq.) Samson]已于2009年11月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱 CGMCC)注冊保藏，保藏號為CGMCC No. 3453)。
[0051] 2、液體搖瓶種子培養(yǎng)
[0052] 培養(yǎng)基配方：配方1-15,詳見表1。
[0053] 具體做法：500ml三角瓶裝液量1/3,取生長良好的蟬花（Isaria cicadae Miquel)斜面種子，勻漿化，按2 %的接種量接種于搖瓶中，在恒溫水浴搖床上25°C、140r/ min培養(yǎng)3天。培養(yǎng)好的種子呈灰黑色，內(nèi)有大量的小米粒大小的菌球，緻密，菌液有蘑菇香 甜味；
[0054] 表1不同液體培養(yǎng)基人工培養(yǎng)蟬花出草情況及主要成份對比表
[0055]
[0056] 3、種子罐擴大培養(yǎng)
[0057] 種子罐所用的培養(yǎng)基同液體種子。
[0058] 具體做法：在30L氣升式發(fā)酵罐中裝入20L液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基溫度大于95 °C、pH 值為6.0~7.0,在14.7 X104Pa壓力下，通入蒸汽加熱到121°C，并保壓30~45分鐘；滅 菌后，冷卻至20 °C時將6瓶上述培養(yǎng)好的500ml搖瓶種子接入培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25~26 °C， 通氣量為1 5V/V ^化，保壓4. 5~7. 0 X 104Pa，經(jīng)20-48h通氣培養(yǎng)，達到對數(shù)生長期后 即可，最終培養(yǎng)體積為20L。在氣泡量較多時，可加入食用消泡劑，加入量為0.03%，；
[0059] 種子罐中1-18小時為延滯期，18-38小時為快速生長期（對數(shù)生長期），38-48小 時為快速生長后期。培養(yǎng)時間以48小時為宜。
[0060] 4、發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)
[0061 ] 發(fā)酵罐所用的培養(yǎng)基同液體種子。
[0062] 具體做法：在300L發(fā)酵罐中裝入200L液體培養(yǎng)基，pH值為6. 0~7. 0,并加入食用 消泡劑，加入量為〇. 03 %，通蒸汽和原位加熱到121°C，在14. 7 X 104Pa壓力下，保壓30~ 45分鐘；滅菌后，冷卻至26°C時，將種子罐的50L液體種子全部接入發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度 25~26°C，通氣量為1 :0. 5V/V "化，保壓4. 903~7. 0845 X 104Pa，經(jīng)過36-48h通氣培養(yǎng)， 達到對數(shù)生長期后即可，最終培養(yǎng)體積為200L。在氣泡量較多時，可加入食用消泡劑，加入 量為0.03% ;
[0063] 發(fā)酵罐中0-12小時為延滯期，12-38小時為快速生長期，38小時后為生長穩(wěn)定期， 48小時達高峰，后進入衰退期。以48小時終至發(fā)酵，轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)。
[0064] 在更大規(guī)模生產(chǎn)時，可將發(fā)酵罐作為二級種子罐，然后將發(fā)酵好的發(fā)酵液轉(zhuǎn)入更 大容積的發(fā)酵罐，以期取得更多的培養(yǎng)液。
[0065] 5、固體出草培養(yǎng)
[0066] 將小麥裝入清洗槽內(nèi)清洗干凈，將清洗后的小麥濾水，分裝至培養(yǎng)盒，每盒裝料 330克，加470ml純凈水，加蓋密封。置高壓蒸汽滅菌鍋，121°C，蒸汽滅菌50min，自然冷卻。 用接種器將上述4中的發(fā)酵罐中的種子液按5 %比例注入滅菌后的前述表1的培養(yǎng)基中，充 分震動混勻。將接種后的培養(yǎng)盒移至培養(yǎng)室培養(yǎng)。采用立體培養(yǎng)架培養(yǎng)，初期，培養(yǎng)室溫度 為22°C~24°C，暗培養(yǎng)3~5天，直至菌絲體向培養(yǎng)料生長直至長滿料面；之后改為全光譜 光照培養(yǎng)，光照強度l〇〇lux~2001ux，保持培養(yǎng)室溫度為20°C~22°C，定時通風排氣，保持 培養(yǎng)室空氣新鮮。當孢梗束成熟時（培養(yǎng)23-25天，生物量最大時），及時采收。將子實體 從培養(yǎng)盒取出，將菌質(zhì)與子實體分離，除濕、50°C烘干，包裝。
[0067] 同時在培養(yǎng)結(jié)束后測定了孢梗束產(chǎn)出率（即出草率）和主要的有效成分腺苷、多 糖、蛋白含量。結(jié)果見表2。
[0068] 表2不同液體培養(yǎng)基人工培養(yǎng)蟬花出草情況及主要成份對比表
[0069]

[0070] 實驗結(jié)論：
[0071] 從上表數(shù)據(jù)可以看出，在加入大豆水解蛋白的配方中（配方1-12)，所產(chǎn)蟬花孢梗 束數(shù)量均高于未加大豆水解蛋白的配方（配方13-15)，說明大豆水解蛋白在蟬花培養(yǎng)中是 至關(guān)重要的；除產(chǎn)量外，蟬花的主要活性成分腺苷和多糖均高于未加入大豆水解蛋白的配 方。所以大豆水解蛋白應(yīng)用于蟬花的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方中是蟲草發(fā)酵工藝中的一個大突 破。
[0072] 從試驗檢測的結(jié)果也可以看出，只添加酵母粉的培養(yǎng)液（配方4、10、11、12、14)， 活性成分明顯低于添加酵母浸出粉的培養(yǎng)液（配方1-3)。
[0073] 實施例10穩(wěn)定性考察
[0074] 按實施例9方法進行培養(yǎng)，考察不同批次的液體培養(yǎng)基生產(chǎn)蟬花的產(chǎn)量及質(zhì)量， 結(jié)果見表3。（培養(yǎng)基配方為實施例1的配方，蟬花菌種為CGMCCNo. 3453)。
[0075] 表3本發(fā)明液體培養(yǎng)基孢梗束中有效成分的變化及穩(wěn)定性
[0076]

[0077] 結(jié)果表明，本發(fā)明液體培養(yǎng)基生產(chǎn)的蟬花孢梗束出草率在10%以上，多糖含量高 于5 %，腺苷含量高于0. 09 %，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性良好。
[0078] 實施例11考察不同菌株的液體培養(yǎng)基配方生產(chǎn)蝴花的產(chǎn)量和質(zhì)量
[0079] 菌株獲得：按照《蟲生真菌蟬擬青霉的研究》（陳祝安，真菌學報，1991年）、《蟬 花的人工培養(yǎng)及其藥理作用研究》（陳祝安等，真菌學報，1993年，12(2))文獻所公開的方 法。菌株的分離方法是：在超鏡工作臺上，在無菌條件下，將采來的新鮮蟲草用無菌水沖洗 干凈，置于已滅菌的直徑為15cm的培養(yǎng)皿中，蟲草的內(nèi)菌核部分（蟲體）用打濕的脫脂棉 包裹，以保濕。蟲草的子實體下方放置一滅菌的載玻片，蟲草菌核部分用小玻片墊起，以使 可孕部分不要直接接觸載玻片，其距離約〇. 5cm左右。然后將培養(yǎng)皿放置于20°C ±0. 5°C 的光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待蟬花孢子彈射于載玻片上時，在孢子周圍滴加剛?cè)芑腜DA培養(yǎng)基 少許，移出玻片，置于另一滅菌的培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)，待長出菌絲后用接種針挑取少量菌絲 轉(zhuǎn)另一平皿（SDAY培養(yǎng)基）培養(yǎng)（同上），獲得五個菌株：BACC0019、BACC0033、BACC0036、 BACC0041
[0080] BACC0056。并經(jīng)形態(tài)學和分子生物學方法驗證，分離的菌株均為蟬花蟲草（Isaria cicadae Miquel)無性型。
[0081 ] 培養(yǎng)方法：按實施例9方法進行培養(yǎng)。
[0082] 培養(yǎng)基配方：同實施1的配方。
[0083] 表4本發(fā)明液體培養(yǎng)基不同菌株培養(yǎng)的孢梗束的變化及穩(wěn)定性
[0084]
[0085] 結(jié)果表明，本發(fā)明液體培養(yǎng)基生產(chǎn)的不同蟬花菌株孢梗束出草率在8. 75%以上， 多糖含量高于4. 08%，腺苷含量高于0. 075%，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性良好。
[0086] 實施例12穩(wěn)定性考察
[0087] 本發(fā)明液體培養(yǎng)基，不僅用于實施例9特定的斜面培養(yǎng)基和菌絲體培養(yǎng)基能夠獲 得良好效果，而且當斜面培養(yǎng)基改變，或在蟬花液體培養(yǎng)菌絲體中，使用該培養(yǎng)基同樣可獲 得良好效果。
[0088] 斜面培養(yǎng)基的改變：將實施例9中的培養(yǎng)基改為SDAY培養(yǎng)基，即蛋白胨10g/L，酵 母浸出膏l(xiāng)〇g/L，葡萄糖40g/L，瓊脂20g/L。種子液及固體培養(yǎng)同實施例9,培養(yǎng)結(jié)果為：出 草率12. 6%，多糖含量5. 23%，腺苷含量0. 105%。
[0089] 發(fā)酵罐培養(yǎng)菌絲體：將實施例9中的1、2、3、4步培養(yǎng)相同，發(fā)酵罐培養(yǎng)的菌絲體， 通過離心后干燥，得到菌絲體產(chǎn)品，測其主要化學成分含量，與原培養(yǎng)方法比較，結(jié)果見表 5 ：
[0090] 表5采用液體培養(yǎng)基后菌絲體中有效成分的變化
[0091]
[0092] 以上結(jié)果說明，本發(fā)明液體培養(yǎng)基與不同的斜面培養(yǎng)基或菌絲體培養(yǎng)組合，培養(yǎng) 得到的產(chǎn)品質(zhì)量和數(shù)量都有明顯提高，且產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
[0093] 實施例13
[0094] 液體培養(yǎng)基：實施例2-8 ;
[0095] 培養(yǎng)方法：同實施例9 ;
[0096] 結(jié)果見表6:
[0097]
【主權(quán)項】
1. 一種用于人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的原料主要 包括：酵母浸出粉，大豆水解蛋白，水。2. 如權(quán)利要求1所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分 比）：酵母浸出粉0. 2~3%，大豆水解蛋白0. 1~2%，余量補水至100%。3. 如權(quán)利要求2所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分 比）：酵母浸出粉0. 3~1%，大豆水解蛋白0. 2~1%，余量補水至100%。4. 如權(quán)利要求3所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的原料配比為（重量百分 比）：酵母浸出粉0. 4~0. 8 %，大豆水解蛋白0. 3~0. 8 %，余量補水至100 %。5. 如權(quán)利要求1-4任一項所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的原料組成中 加入鹿糖1~8%。6. 如權(quán)利要求5所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的原料組成中加入氯化 鈣0· 005~0· 1%，磷酸二氫鉀0· 01~0· 5%。7. 如權(quán)利要求8所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述氯化鈣和磷酸二氫鉀的加入量 為氯化鈣〇· 008~0· 05 %，磷酸二氫鉀0· 02~0· 2 %。8. -種人工培養(yǎng)蟬花孢梗束的方法，該培養(yǎng)方法包括斜面菌種培養(yǎng)、液體搖瓶培養(yǎng)、種 子罐液體培養(yǎng)、發(fā)酵罐液體發(fā)酵培養(yǎng)及固體出草培養(yǎng)步驟，其中所述液體搖瓶培養(yǎng)、種子罐 液體培養(yǎng)、發(fā)酵罐液體發(fā)酵培養(yǎng)及固體出草培養(yǎng)步驟中使用權(quán)利要求1-7任一所述的液體 培養(yǎng)基。9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述培養(yǎng)方法還包括種子罐擴大培養(yǎng)步驟。
【文檔編號】C05G1/00GK105985150SQ201510044389
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年1月28日
【發(fā)明人】董建飛, 唐瑤, 紀偉, 胡建峰, 陳昳麗, 陳奇超, 吳迪芬, 高敏逸, 徐煜, 孫長勝
【申請人】浙江泛亞生物醫(yī)藥股份有限公司