一種微生物有機(jī)肥及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供的一種微生物有機(jī)肥，包括腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌；所述的克立本類芽孢桿菌有效活菌數(shù)為0.5×108cfu/g以上。本發(fā)明是以腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌制成為微生物有機(jī)肥，微生物有機(jī)肥中的克里本類芽孢桿菌廣譜性好，抑菌活性高，對(duì)多種植物病害都有防治效果，能代替部分化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低化學(xué)農(nóng)藥的施用次數(shù)，減少農(nóng)戶生產(chǎn)成本；與此同時(shí)克立本類芽孢桿菌在土壤中作用可達(dá)到疏松深層土壤，增大深層土壤孔隙度，增加通氣孔隙數(shù)量和毛管孔隙數(shù)量的效果，達(dá)到提高化肥的利用率，同時(shí)改善土壤、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的目的。微生物有機(jī)肥不會(huì)產(chǎn)生抗藥性，長(zhǎng)期使用能減少化肥和化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境污染問題。CGMCC No.799620130813
【專利說明】
一種微生物有機(jī)肥及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及有機(jī)肥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種含有克里本類芽孢桿菌微生物有機(jī)肥及其制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]中國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，農(nóng)藥和肥料在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著十分重要的作用。在農(nóng)作物種植或蔬菜栽培過程中，由于病蟲害發(fā)生危害農(nóng)作物或蔬菜的生長(zhǎng)，農(nóng)民在種植或栽培過程中，為了保證農(nóng)作物產(chǎn)量和蔬菜順利上市，長(zhǎng)期使用大量化學(xué)農(nóng)藥來預(yù)防或抑制病蟲害的發(fā)生和發(fā)展。由于化學(xué)農(nóng)藥的使用，使農(nóng)業(yè)成本急增，化學(xué)農(nóng)藥的殘留問題不僅危害蔬菜的品質(zhì)安全和人類身體健康，還會(huì)造成病蟲害的抗藥性，同時(shí)也造成農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的污染，不利于綠色環(huán)保。
[0003]與此同時(shí)，在農(nóng)作物種植或栽培中，化學(xué)肥料的用量在不斷增加，有機(jī)肥的用量越來越少，而農(nóng)作物對(duì)化學(xué)肥料的利用率僅僅在30 %作用，約70%的化學(xué)肥料沉積固定在土壤中或隨雨水流失與江河中而不被農(nóng)作物吸收和利用，這造成了土壤板結(jié)，環(huán)境污染，江河和地下水富營(yíng)養(yǎng)化日益嚴(yán)重，土壤有機(jī)質(zhì)含量降低，肥力下降，土壤中有益微生物生存空間變小，數(shù)量減少，從而造成土壤板結(jié)嚴(yán)重，農(nóng)作物生長(zhǎng)越來越差。
[0004]近年來，隨著人們對(duì)綠色食品、有機(jī)食品的認(rèn)識(shí)不斷提高，隨著人們健康意識(shí)的提高，大多數(shù)國(guó)家都非常重視農(nóng)產(chǎn)品的安全性，對(duì)農(nóng)藥殘留的限制十分嚴(yán)格。中國(guó)在加入WT0 以后，農(nóng)產(chǎn)品入口面臨著非常嚴(yán)峻的綠色壁皇”其中農(nóng)藥殘留超標(biāo)是經(jīng)常遇到問題，嚴(yán)重影響了我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)力。因此，在種植或栽培農(nóng)作物時(shí)，人們需要急需能替代化學(xué)肥料和化學(xué)農(nóng)藥的物質(zhì)應(yīng)用在綠色食品的生產(chǎn)中?，F(xiàn)有技術(shù)中，有關(guān)于微生物有機(jī)肥的報(bào)道，例如，申請(qǐng)?zhí)枮镃N103756931的中國(guó)專利公開了一種防治番茄青枯病的解淀粉芽孢桿菌菌株及微生物有機(jī)肥，該微生物有機(jī)肥含有豐富的有機(jī)質(zhì)、氨基酸和小分子多肽，沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列問題，可以在營(yíng)養(yǎng)缽施用，也可以在大田施用，但解淀粉芽孢桿菌菌株T-5是一種抑制番茄青枯病病原菌生長(zhǎng)的專一性高效菌株，但對(duì)其他病原菌沒有較好的抑制性，因此，也不能滿足人們?cè)谏a(chǎn)綠色食品的應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種微生物有機(jī)肥，該微生物有機(jī)肥能防治多種植物病害同時(shí)利于促進(jìn)植物生長(zhǎng)。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0007]本發(fā)明提供了一種微生物有機(jī)肥，包括腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌;所述的克立本類芽孢桿菌有效活菌數(shù)為〇.5 X 108cfu/g以上。
[0008]優(yōu)選的，所述克立本類芽孢桿菌與腐熟堆肥的體積比為1:100?500。
[0009]優(yōu)選的，所述腐熟堆肥的原料包括木薯渣、竹醋原液和填充料。
[0010]優(yōu)選的，所述腐熟堆肥的原料包括以下體積含量的組分:40?60 %木薯渣、15?25 %竹醋原液、15?35 %填充料。[〇〇11] 優(yōu)選的，所述木薯渣含水率為40?60 %。[〇〇12]優(yōu)選的，所述填充料為鋸末和秸桿的一種或兩種。[〇〇13]優(yōu)選的，所述竹醋原液由竹材燒炭過程中產(chǎn)生的氣體冷卻得到，所述竹醋原液包括有機(jī)酸類、醇類、酮類、醛類、酯類及微量的堿性成分。
[0014]本發(fā)明還提供了上述有機(jī)肥的制備方法，包括以下步驟:
[0015]a)將克里本類芽孢桿菌菌種接入活化培養(yǎng)基中進(jìn)行活化培養(yǎng)，將所述活化培養(yǎng)后的菌種接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0016]b)將堆肥原料混合堆肥處理，直至腐熟，得到腐熟堆肥；
[0017]c)將所述步驟a)得到的克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液與所述步驟b)得到的腐熟堆肥混合，得到生物有機(jī)肥；
[0018]所述步驟a)和步驟b)之間沒有時(shí)間順序限定。
[0019]優(yōu)選的，所述步驟1)中活化培養(yǎng)的溫度為25?30°C，培養(yǎng)時(shí)間48?72h。[〇〇2〇]優(yōu)選的，所述活化培養(yǎng)在攪拌的條件下進(jìn)行，所述攪拌的轉(zhuǎn)速為100?150rpm。
[0021]所述液體發(fā)酵培養(yǎng)需持續(xù)通入無菌氧氣，所述通入無菌氧氣與發(fā)酵液的體積比為 1:0.5?1.5〇[0〇22]優(yōu)選的，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵液的量是發(fā)酵罐體積的50?65%，培養(yǎng)時(shí)間為4 ?5d，培養(yǎng)溫度為25?28 °C，pH值為6.5?8。
[0023]優(yōu)選的，所述步驟2)中采用靜態(tài)強(qiáng)制通風(fēng)方式進(jìn)行堆肥處理，所述通風(fēng)的種類為普通空氣，通風(fēng)量為20?25m3/(h ? t);所述堆肥時(shí)間為25?35天。
[0024]本發(fā)明提供的一種微生物有機(jī)肥，包括腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌;所述的克立本類芽孢桿菌有效活菌數(shù)為0.5 X108cfu/g以上。本發(fā)明是以腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌為原料制成微生物有機(jī)肥，微生物有機(jī)肥中的克里本類芽孢桿菌廣譜性好，抑菌活性高，對(duì)多種植物病害都有防治效果，能代替部分化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低化學(xué)農(nóng)藥的施用次數(shù)，減少農(nóng)戶生產(chǎn)成本;與此同時(shí)克立本類芽孢桿菌在土壤中作用可達(dá)到疏松深層土壤，增大深層土壤孔隙度，增加通氣孔隙數(shù)量和毛管孔隙數(shù)量的效果，達(dá)到提高化肥的利用率，同時(shí)改善土壤、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的目的。而且，本發(fā)明提供的微生物有機(jī)肥不會(huì)產(chǎn)生抗藥性，長(zhǎng)期使用能減少化肥和化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境污染問題。[〇〇25]進(jìn)一步的，所述微生物有機(jī)肥，微生物有機(jī)肥中有機(jī)質(zhì)含量多40%，氮磷鉀總含量多5%，能夠滿足植物生長(zhǎng)的要求，同時(shí)促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。[〇〇26]生物保藏說明
[0027]克里本類芽孢桿菌，拉丁名為Paenibacillus kribbensis，屬于芽孢桿菌科，類芽孢桿菌屬，菌種保藏號(hào)為:CGMCC N0.7996，菌種代號(hào)為TRCC82001，保藏地點(diǎn)為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為中國(guó)北京，保藏時(shí)間為2013年8月13日?！揪唧w實(shí)施方式】
[0028]本發(fā)明提供了一種微生物有機(jī)肥，包括腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌;所述的克立本類芽孢桿菌有效活菌數(shù)為〇.5 X 108cfu/g以上。
[0029]本發(fā)明提供的一種微生物有機(jī)肥，微生物有機(jī)肥中的克里本類芽孢桿菌廣譜性好，抑菌活性高，對(duì)多種植物病害都有防治效果，能代替部分化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低化學(xué)農(nóng)藥的施用次數(shù)，減少農(nóng)戶生產(chǎn)成本;與此同時(shí)克立本類芽孢桿菌和堆肥中的微生物在土壤中作用可達(dá)到疏松深層土壤，增大深層土壤孔隙度，增加通氣孔隙數(shù)量和毛管孔隙數(shù)量的效果，達(dá)到提高化肥的利用率，同時(shí)改善土壤、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的目的。
[0030]本發(fā)明提供的微生物有機(jī)肥包括腐熟堆肥。本發(fā)明對(duì)所述腐熟堆肥的原料優(yōu)選包括木薯渣、竹醋原液和填充料。所述的木薯渣含水率優(yōu)選為40?60%，更優(yōu)選為50%。在本發(fā)明中，所述木薯渣為木薯提取淀粉后的副產(chǎn)物，本發(fā)明對(duì)所述木薯渣的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的木薯渣即可。
[0031]在本發(fā)明中，所述填充料優(yōu)選為鋸末和秸桿的一種或多種。本發(fā)明對(duì)所述鋸末和秸桿的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知鋸末和秸桿的即可。本發(fā)明實(shí)施例中所使用的鋸末為松樹鋸末，所使用的秸桿為小麥或玉米秸桿，所述秸桿堆肥前經(jīng)過粉碎，所述粉碎程度為粉碎成3?5cm長(zhǎng)度。
[0032]在本發(fā)明中，所述竹醋原液優(yōu)選由竹材燒炭過程中產(chǎn)生的氣體冷卻得到，所述竹醋原液中包括有機(jī)酸類、醇類、酮類、醛類、酯類及微量的堿性成分。[〇〇33]在本發(fā)明中，所述燒炭過程優(yōu)選溫度為500?1000°C，在80°C?150°C條件下收集燒炭產(chǎn)生的氣體。[〇〇34]在本發(fā)明中，所述克立本類芽孢桿菌與腐熟堆肥的體積比優(yōu)選為1:100?500，更優(yōu)選為1:200?300，最優(yōu)選為1:280。[〇〇35]在本發(fā)明中，所述腐熟堆肥的原來優(yōu)選包括以下體積含量的組分:40?60%木薯渣、15?25 %竹醋原液、15?35 %填充料。[〇〇36]本發(fā)明中，所述腐熟堆肥的原料優(yōu)選包括體積含量為40?60%的木薯渣，更優(yōu)選為45?55 %，最優(yōu)選為50 %。[〇〇37]本發(fā)明對(duì)所述腐熟堆肥優(yōu)選包括體積含量為15?25%竹醋原液，更優(yōu)選為18? 23%，最優(yōu)選為21 %。[〇〇38]本發(fā)明對(duì)所述腐熟堆肥優(yōu)選包括體積含量為15?35 %填充料，更優(yōu)選為20? 32%，最優(yōu)選為29 %。
[0039]本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述微生物有機(jī)肥的制備方法，包括以下步驟:
[0040]a)將克里本類芽孢桿菌菌種接入活化培養(yǎng)基中進(jìn)行活化培養(yǎng)，將所述活化培養(yǎng)后的菌種接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0041]b)將堆肥原料混合堆肥處理，直至腐熟，得到腐熟堆肥；[〇〇42] c)將所述步驟a)得到的克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液與所述步驟b)得到的腐熟堆肥混合，得到生物有機(jī)肥；
[0043]所述步驟a)和步驟b)之間沒有時(shí)間順序限定。
[0044]本發(fā)明將克里本類芽孢桿菌菌種接入活化培養(yǎng)基中進(jìn)行活化培養(yǎng)。本發(fā)明對(duì)接種過程沒有特殊限定，選用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的接種方法即可。本發(fā)明對(duì)接種量沒有特殊限制，選用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的接種量即可，本發(fā)明實(shí)施例中，所述活化培養(yǎng)過程的接種量具體為總活化培養(yǎng)基體積的1?5%。
[0045]在本發(fā)明中，所述活化培養(yǎng)基優(yōu)選為營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基。本發(fā)明對(duì)所述營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基的組成沒有特殊限制，選用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基的配方即可。本發(fā)明對(duì)所述營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基的配制方法沒有特殊限制，選用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基配制方法即可。
[0046]活化培養(yǎng)后，本發(fā)明將得到的活化菌種接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液。本發(fā)明優(yōu)選將活化菌種接入搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)。
[0047]在本發(fā)明中，所述搖瓶培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為25?32°C，更優(yōu)選為30°C。[0〇48]本發(fā)明對(duì)所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為48?72h，更優(yōu)選為60h。
[0049]本發(fā)明優(yōu)選在所述搖瓶培養(yǎng)過程中對(duì)菌液進(jìn)行顯微鏡檢測(cè)，以選擇結(jié)束活化培養(yǎng)的時(shí)機(jī)，本發(fā)明優(yōu)選鏡檢無雜菌，且〇D66Q在0.5以上時(shí)結(jié)束。
[0050]在本發(fā)明中，所述搖瓶培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基種類為不添加瓊脂的活化培養(yǎng)基。[0051 ]經(jīng)所述搖瓶培養(yǎng)得到菌液后，本發(fā)明將所述菌液接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液。[〇〇52]在本發(fā)明中，所述液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括下列質(zhì)量濃度的組分:25?35g/L蔗糖、1.0 ?2.0g/L硝酸鈉、0.8?1.2g/L磷酸氫二鉀、0.2?0.7g/L硫酸鎂、0.3?0.7g/L氯化鉀、 0.008?0.015g/L硫酸鐵和2?4g/L消泡劑，更優(yōu)選為30g/L蔗糖、1.5g/L硝酸鈉、lg/L磷酸氫二鉀、0.5g/L硫酸鎂、0.5g/L氯化鉀、0.01g/L硫酸鐵和3g/L消泡劑。
[0053]本發(fā)明對(duì)消泡劑的種類和來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的消泡劑的種類和來源即可。本發(fā)明實(shí)施例用采用的消泡劑的種類為豆油。[〇〇54]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)過程中發(fā)酵液的pH值優(yōu)選為6.5?8,更優(yōu)選為 7.0〇[〇〇55]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)的接種量?jī)?yōu)選為50?65%，更優(yōu)選為60%。
[0056]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)的時(shí)間優(yōu)選為4?5d。[〇〇57]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為25?32°C，更優(yōu)選為30°C。
[0058]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)優(yōu)選在攪拌的條件下進(jìn)行，所述攪拌的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為100?150rpm，更優(yōu)選為120rpm。
[0059]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)優(yōu)選持續(xù)通入無菌氧氣。所述通入無菌氧氣與發(fā)酵液的體積比優(yōu)選為1:0.5?1.5，更優(yōu)選為1:1。
[0060]在本發(fā)明中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)出罐時(shí)機(jī)優(yōu)選為克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液呈粘稠狀態(tài)出罐，所述發(fā)酵液含菌量?jī)?yōu)選多100 X 108cfu/g。本發(fā)明對(duì)所述發(fā)酵液的含菌量的測(cè)定方法沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的含菌量測(cè)定方法即可。
[0061]本發(fā)明將堆肥原料進(jìn)行混合堆肥處理，直至腐熟，得到腐熟堆肥。本發(fā)明在所述堆肥處理的過程中，優(yōu)選向所述堆肥原料中通風(fēng);所述通風(fēng)的種類優(yōu)選為普通空氣。本發(fā)明對(duì)普通空氣的制備方法沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的普通空氣的制備方法即可。
[0062]在本發(fā)明中，所述通風(fēng)優(yōu)選采用靜態(tài)強(qiáng)制通風(fēng)方式進(jìn)行。[〇〇63] 在本發(fā)明中，所述通風(fēng)的速率優(yōu)選為20?25m3/(h ? t)，更優(yōu)選為23m3/(h ? t)。 [〇〇64] 在本發(fā)明中，所述堆肥處理的時(shí)間優(yōu)選為25?35天，更優(yōu)選為30天。
[0065]得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液和腐熟堆肥后，本發(fā)明將堆肥和克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液混合，得到微生物有機(jī)肥。所述混合時(shí)克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液和腐熟堆肥的體積比優(yōu)選為1:100?500。本發(fā)明對(duì)所述混合過程沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的混合技術(shù)方案即可，如在本發(fā)明的實(shí)施例中，采用攪拌的方式對(duì)混合物料進(jìn)行混合。 [〇〇66]本發(fā)明中，所述微生物有機(jī)肥按照每畝施肥量為500?1000kg/畝施用在蔬菜種植田中，并且以不施用微生物有機(jī)肥的蔬菜田作為對(duì)照組，記錄蔬菜的生長(zhǎng)情況，病害情況和蔬菜產(chǎn)量。
[0067]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的微生物有機(jī)肥及其制備方法進(jìn)行詳細(xì)的說明， 但是不能把它們理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0068]實(shí)施例1
[0069]將克里本類芽孢桿菌菌種接入營(yíng)養(yǎng)瓊脂糖培養(yǎng)基中在無菌環(huán)境中進(jìn)行活化培養(yǎng)， 將活化后的菌種按照接種量為3%接入到搖瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C，培養(yǎng)時(shí)間72h，經(jīng)過鏡鑒無雜菌并且0D660為0.6時(shí)結(jié)束搖瓶培養(yǎng)，將搖瓶培養(yǎng)的克里本類芽孢桿菌菌種按照接種量65 %接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，液體培養(yǎng)基配方具體為30g/L蔗糖、1.5g/L硝酸鈉、lg/L磷酸氫二鉀、0.5g/L硫酸鎂、0.5g/L氯化鉀、0.01g/L硫酸鐵、3g/L的豆油為消泡劑， 發(fā)酵溫度控制32°C;發(fā)酵過程中控制發(fā)酵液pH值為7,發(fā)酵過程中不斷通入無菌氧氣，使通入無菌氧氣與發(fā)酵液的體積比為1:0.5，同時(shí)不斷攪拌，發(fā)酵培養(yǎng)5天后，克里本發(fā)酵液呈粘稠狀態(tài)，并且經(jīng)檢測(cè)發(fā)酵液中含菌量為l〇〇X108cfu/g出罐得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液。
[0070]將占總體積的50 %的木薯渣、15 %竹醋原液和35 %鋸末進(jìn)行充分混合，置于堆肥槽中進(jìn)行堆肥處理，采用靜態(tài)強(qiáng)制通風(fēng)方式進(jìn)行堆肥處理，通入普通空氣，通氣量為20m3/ (h ? t)，經(jīng)30天堆肥達(dá)到腐熟，得到腐熟堆肥。
[0071]將獲得的克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液和堆肥按照體積比1:100進(jìn)行混合，保證得到的微生物有機(jī)肥中克立本類芽孢桿菌的含量為〇.5 X 108cfu/g。[〇〇72] 實(shí)施例2[〇〇73]將實(shí)驗(yàn)室冷藏保存的克里本類芽孢桿菌菌種按照接入營(yíng)養(yǎng)瓊脂糖培養(yǎng)基中在無菌環(huán)境中進(jìn)行活化培養(yǎng)，將活化后的菌種按照接種量為5%接入到搖瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30 °C，培養(yǎng)時(shí)間60h，經(jīng)過鏡鑒無雜菌并且0D66Q為0.5時(shí)結(jié)束搖瓶培養(yǎng)，將搖瓶培養(yǎng)的克里本類芽孢桿菌菌種按照接種量50%接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，液體培養(yǎng)基配方具體為 35g/L蔗糖、1.0g/L硝酸鈉、lg/L磷酸氫二鉀、lg/L硫酸鎂、0.3g/L氯化鉀、0.02g/L硫酸鐵、 2g/L的豆油為消泡劑，發(fā)酵溫度控制30°C;發(fā)酵過程中控制發(fā)酵液pH值為6.5,發(fā)酵過程中不斷通入無菌氧氣，使通入無菌氧氣與發(fā)酵液的體積比為1:1.5，同時(shí)不斷攪拌，發(fā)酵培養(yǎng)4 天后，克里本發(fā)酵液呈粘稠狀態(tài)，并且經(jīng)檢測(cè)發(fā)酵液中含菌量為200X 108cfu/g出罐得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液。將占總體積的60 %的木薯渣、10 %竹醋原液和30 %秸桿進(jìn)行充分混合，置于堆肥槽中進(jìn)行堆肥處理，采用靜態(tài)強(qiáng)制通風(fēng)方式進(jìn)行堆肥處理，通入普通空氣， 通氣量為25m3/(h ? t)，經(jīng)35天堆肥達(dá)到腐熟，得到腐熟堆肥。將獲得的克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液和堆肥按照體積比1:200進(jìn)行混合，保證得到的微生物有機(jī)肥中克立本類芽孢桿菌的含量為〇.5X108cfu/g。
[0074] 實(shí)施例3[〇〇75]將實(shí)驗(yàn)室冷藏保存的克里本類芽孢桿菌菌種按照接入營(yíng)養(yǎng)瓊脂糖培養(yǎng)基中在無菌環(huán)境中進(jìn)行活化培養(yǎng)，將活化后的菌種按照接種量為5%接入到搖瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度32°C，培養(yǎng)時(shí)間48h，經(jīng)過鏡鑒無雜菌并且0D66Q為0.7時(shí)結(jié)束搖瓶培養(yǎng)，將搖瓶培養(yǎng)的克里本類芽孢桿菌菌種按照接種量50%接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，液體培養(yǎng)基配方具體為 35g/L蔗糖、1.0g/L硝酸鈉、lg/L磷酸氫二鉀、lg/L硫酸鎂、0.3g/L氯化鉀、0.02g/L硫酸鐵、 2g/L的豆油為消泡劑，發(fā)酵溫度控制30°C;發(fā)酵過程中控制發(fā)酵液pH值為7.5,發(fā)酵過程中不斷通入無菌氧氣，使通入無菌氧氣與發(fā)酵液的體積比為1:1，同時(shí)不斷攪拌，發(fā)酵培養(yǎng)6天后，克里本發(fā)酵液呈粘稠狀態(tài)，并且經(jīng)檢測(cè)發(fā)酵液中含菌量為500 X 108cfu/g出罐得到克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液。將占總體積的40 %的木薯渣、20 %竹醋原液和40 %填充料進(jìn)行充分混合，所述填充料是按體積比1:1的鋸末和秸桿，置于堆肥槽中進(jìn)行堆肥處理，采用靜態(tài)強(qiáng)制通風(fēng)方式進(jìn)行堆肥處理，通入普通空氣，通氣量為23m3/(h ? t)，經(jīng)32天堆肥達(dá)到腐熟，得到腐熟堆肥。將獲得的克里本類芽孢桿菌發(fā)酵液和堆肥按照體積比1:280進(jìn)行混合，保證得到的微生物有機(jī)肥中克立本類芽孢桿菌的含量為1 X 108cfu/g。[〇〇76]對(duì)實(shí)施例1-3獲得的微生物有機(jī)肥進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明有機(jī)質(zhì)含量多40%，氮磷鉀總含量多5%;將實(shí)施例1-3獲得的微生物有機(jī)肥按照每畝施肥量為500?1000kg/畝施用在番茄種植田中，并且以不施用微生物有機(jī)肥的蔬菜作為對(duì)照組，試驗(yàn)表明，施用微生物生物月巴，能提高蔬菜的抗病能力，減少施用農(nóng)藥的次數(shù)，同時(shí)能提高深層土壤通氣能力，與對(duì)照組蔬菜相比長(zhǎng)勢(shì)良好，病害發(fā)生較少，大大減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，同時(shí)番茄的產(chǎn)量提高了 40%-45%〇[〇〇77]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種微生物有機(jī)肥，其特征在于，包括腐熟堆肥和克立本類芽孢桿菌；所述的克立本類芽孢桿菌有效活菌數(shù)為〇.5 X 108cfu/g以上。2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的微生物有機(jī)肥，其特征在于，所述克立本類芽孢桿菌與腐熟 堆肥的體積比為1:100?500。3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的有機(jī)肥，其特征在于，所述腐熟堆肥的原料包括木薯渣、竹 醋原液和填充料。4.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的有機(jī)肥，其特征在于，所述腐熟堆肥的原料包括以下體積含 量的組分:40?60 %木薯渣、15?25 %竹醋原液、15?35 %填充料。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述有機(jī)肥，其特征在于，所述木薯渣含水率為40?60 %。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述有機(jī)肥，其特征在于，所述填充料為鋸末和秸桿的一種或多種。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述有機(jī)肥，其特征在于，所述竹醋原液由竹材燒炭過程中產(chǎn)生的氣 體冷卻得到；所述竹醋原液包括有機(jī)酸類、醇類、酮類、醛類、酯類及微量的堿性成分。8.權(quán)利要求1?7任意一項(xiàng)所述的有機(jī)肥的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:a)將克里本類芽孢桿菌菌種接入活化培養(yǎng)基中進(jìn)行活化培養(yǎng)，將所述活化培養(yǎng)后的菌 種接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液；b)將堆肥原料混合堆肥處理，直至腐熟，得到腐熟堆肥；c)將所述步驟a)得到的克立本類芽孢桿菌發(fā)酵液與所述步驟b)得到的腐熟堆肥混合， 得到生物有機(jī)肥；所述步驟a)和步驟b)之間沒有時(shí)間順序限定。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的有機(jī)肥的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中活化培養(yǎng)的溫 度為25?30°C，培養(yǎng)時(shí)間48?72h;所述活化培養(yǎng)在攪拌的條件下進(jìn)行，所述攪拌的轉(zhuǎn)速為100?150rpm;所述液體發(fā)酵培養(yǎng)需持續(xù)通入無菌氧氣，所述通入無菌氧氣與發(fā)酵液的體積比為1: 0 ? 5?1 ? 5;所述液體發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵液的量為發(fā)酵罐體積的50?65 %，培養(yǎng)時(shí)間為4?5d，培養(yǎng)溫 度為25?28°(:4田直為6.5?8。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的有機(jī)肥的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中采用靜態(tài)強(qiáng) 制通風(fēng)方式進(jìn)行堆肥處理，所述通風(fēng)的種類為普通空氣，通風(fēng)量為20?25m3/(h ? t);所述堆肥時(shí)間為25?35天。
【文檔編號(hào)】C05G3/04GK106008072SQ201610323193
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月16日
【發(fā)明人】梁小文, 王根豪, 嚴(yán)藝波, 李肖宇, 吳俊杰, 石崢, 曾升華, 李英武
【申請(qǐng)人】江西天人生態(tài)股份有限公司