專利名稱：通過(guò)在聚合樹脂柱上的工業(yè)制備低壓色譜分離和純化紫杉醇和其它相關(guān)的紫杉烷類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分離技術(shù)，本發(fā)明更具體地涉及分離紫杉醇和相關(guān)的紫杉烷類化合物的技術(shù)。
紫杉醇是已知的用于治療各種轉(zhuǎn)移癌的化學(xué)治療藥物。它已經(jīng)被FDA和HPB批準(zhǔn)用于治療卵巢癌和乳腺癌。
該化合物最初是從太平洋紫杉樹，短葉紅豆杉的樹皮中提取的天然產(chǎn)物，并且發(fā)現(xiàn)它也存在于歐洲紅豆杉，喜馬拉雅紅豆杉，云南紅豆杉和加拿大紅豆杉中。
紫杉醇在各種原材料中的濃度典型地都很低，例如在太平洋紫杉樹皮中的含量在0.0004和0.01％(w/w)之間。如此低的濃度使從原材料中提取和純化該化合物以達(dá)到藥品純度是非常困難的，因此難以實(shí)現(xiàn)商業(yè)規(guī)模的生產(chǎn)。已經(jīng)開發(fā)了多種從原材料的粗提物中純化紫杉醇的正相和反相色譜以及低壓和高壓柱色譜技術(shù)。
低壓色譜的成功主要取決于柱的特性。很多問(wèn)題均與硅膠和三氧化鋁的使用有關(guān)，而它們均是分離系統(tǒng)中固定相的傳統(tǒng)載體。它們與大多數(shù)溶劑系統(tǒng)形成一個(gè)穩(wěn)定的固定相，但它們是強(qiáng)吸收劑并且會(huì)在一定程度上參與分離過(guò)程而影響色譜性能和樣品的回收。
已經(jīng)開發(fā)了多種在分析和制備的基礎(chǔ)上從多種紅豆杉植物中檢測(cè)和分離紫杉醇的色譜方法。這些分離方法主要是在小的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模下進(jìn)行的并且由于低選擇性，回收和產(chǎn)品成本高等問(wèn)題，因此迫切需要開發(fā)一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法從相似的三尖杉寧堿和其它近似的相關(guān)紫杉烷類化合物中分離有價(jià)值的抗癌化合物紫杉醇。
現(xiàn)有技術(shù)中公開了使用各種色譜技術(shù)分離紫杉醇和相關(guān)紫杉烷類化合物的方法，包括在硅膠或鍵合硅膠柱上的正相和反相色譜?，F(xiàn)有技術(shù)的方法由于收率低，產(chǎn)品成本高或包括多步難以大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的分離步驟而被放棄。
現(xiàn)有技術(shù)主要有1997年4月15日發(fā)行的Hoffman等的美國(guó)專利5,620,875。該文獻(xiàn)指出了通過(guò)多步己烷萃取和高效液相色譜(HPLC)分離紫杉醇和其它紫杉烷類化合物的方法。該方法包括，勞動(dòng)強(qiáng)度的增加但卻只能提供中等收率的所需化合物。
在1997年9月23日出版的Rao等的美國(guó)專利5,670,673中，描述了紫杉醇和其類似物的分離和純化。該方法包括在C18吸附劑上的反相液相色譜并用吸附的類似物洗脫。雖然這些方法有可取的地方，但鑒于其生產(chǎn)力和所得到化合物的純度該技術(shù)存在其局限性。
本發(fā)明提供基于聚合樹脂柱的簡(jiǎn)單分離方法而沒(méi)有上述方法的局限性。
因此本發(fā)明的目的是提供簡(jiǎn)單和更經(jīng)濟(jì)有效的方法分離和純化重要的紫杉烷類化合物，如13-乙?；?9-二氫漿果赤霉素III，10-去乙酰基漿果赤霉素III，漿果赤霉素III，三尖杉寧堿和紫杉醇。
分離包括紫杉醇，13-乙?；?9-二氫漿果赤霉素III和漿果赤霉素III的紫杉烷類化合物的常規(guī)方法通常含有用醇溶劑從原材料中提取紫杉烷類化合物，將提取物脫脂，用色譜法分離和純化單一的紫杉烷類化合物的步驟。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供從含有紫杉烷類化合物的原料中分離和純化紫杉烷類似物的方法，包括用有機(jī)萃取劑萃取紫杉烷原料；用萃取劑覆蓋吸附介質(zhì)并將介質(zhì)填充到柱中，該柱中含有吸附劑；第一步，在10和20psi之間的壓力下用有機(jī)溶劑混合物洗脫得到含有紫杉烷化合物的洗脫部分；使該部分結(jié)晶以得到固體紫杉烷類化合物和母液；將母液濃縮，并且第二步，將母液通過(guò)聚合樹脂并用極性溶劑混合物洗脫得到至少第二個(gè)紫杉烷化合物。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供從含有紫杉烷類化合物的原料中分離和純化紫杉烷類化合物的方法，包括提供紫杉烷類化合物原料；將紫杉烷類化合物從原料中萃取至有機(jī)萃取劑介質(zhì)以制備含有紫杉烷類化合物的有機(jī)層；用有機(jī)層處理載體材料；制備含有吸附劑的低壓柱；第一步，通過(guò)色譜柱洗脫有機(jī)溶劑至洗提到純化的紫杉烷洗脫部分；使紫杉烷洗脫部分結(jié)晶得到第一個(gè)紫杉烷類似物和母液；第二步，通過(guò)在色譜柱上的聚合樹脂洗脫母液以純化并洗脫至至少第二個(gè)紫杉烷類似物和第三個(gè)紫杉烷類似物；和收集分離的紫杉烷類似物。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供從含有紫杉烷類化合物的原料中分離和純化紫杉烷類化合物的方法，包括提供紫杉烷類化合物原料；將紫杉烷類化合物從原料中萃取至有機(jī)萃取介質(zhì)中以制備含有紫杉烷類化合物的有機(jī)層；用有機(jī)層處理載體材料；制備含有吸附劑的低壓柱；第一步，在10至20psi的壓力下通過(guò)色譜柱洗脫有機(jī)溶劑至洗提到純化的紫杉烷部分并除去黃酮和木酚素雜質(zhì)；使紫杉烷洗脫部分結(jié)晶得到第一個(gè)紫杉烷類似物和母液；第二步，在30psi的壓力下通過(guò)在色譜柱上的聚乙烯DVB樹脂洗脫母液以純化并洗脫至至少第二個(gè)紫杉烷類似物和第三個(gè)紫杉烷類似物；和第三步，將第二個(gè)紫杉烷類似物和第三個(gè)紫杉烷類似物通過(guò)正相硅膠柱洗脫以純化第二個(gè)紫杉烷類似物和第三個(gè)紫杉烷類似物；和收集分離的紫杉烷類似物。
起始的紫杉烷類化合物原料可以是植物原料，盛產(chǎn)于加拿大東部的加拿大紅豆杉，使用加拿大紅豆杉的樹枝或針葉或其混合物。原料可以是新采集的或干燥的。
將原料粉碎并用甲醇在60℃萃取5小時(shí)并過(guò)濾。將甲醇萃取液與活性炭混合并室溫靜置1小時(shí)。然后過(guò)濾。將濾液蒸發(fā)濃縮至最初體積的約15％。在濃縮物中加入1∶1的水∶二氯甲烷混合物(v/v)得到富含紫杉醇的部分(有機(jī)層)。
將有機(jī)層濃縮至小體積并將其覆蓋在載體材料上，此時(shí)，載體材料是硅藻土545。
將覆蓋的材料裝載在工業(yè)制備柱(例如150mm×1500mm并填充了吸附劑Al2O3的柱子)頂部。將該柱用己烷∶丙酮混合物(開始為100∶0最后為45∶55)在10psi至20psi的壓力下洗脫。收集含有紫杉烷類混合物的洗脫部分并通過(guò)薄層色譜(TLC)分析并隨后根據(jù)TLC結(jié)果合并。
將收集的洗脫部分真空濃縮，將所得材料溶解在甲醇中并在室溫過(guò)夜。將所形成的晶體過(guò)濾并用甲醇洗滌，然后用丙酮重結(jié)晶。得到13-乙?；?9-二氫漿果赤霉素III的白色結(jié)晶。
將母液濃縮至干并將殘余物溶解在丙酮中。將丙酮溶液與聚合樹脂(DowexTM樹脂，聚乙烯DVB)混合。將混合物減壓蒸發(fā)除去丙酮。將所得粉末進(jìn)行低壓色譜層析。將工業(yè)規(guī)模的色譜柱(150mm×1500mm)填充以DowexTM樹脂并用丙酮水(45∶55，v/v)以流速150ml/min在30psi的操作壓下洗脫。以約每份2L收集洗脫部分并將其用TLC和HPLC監(jiān)控。將含有漿果赤霉素III和10-去乙?；鶟{果赤霉素III的洗脫部分合并并減壓蒸發(fā)除去幾乎所有有機(jī)溶劑，然后用水洗脫并用CH2Cl2萃取。將萃取液濃縮至干并將所得殘余物溶解在EtOAc中并用正相硅膠柱以己烷∶EtOAc作溶劑系統(tǒng)(開始為5∶5最終為35∶65)進(jìn)行色譜純化。最后得到漿果赤霉素III和10-去乙?；鶟{果赤霉素III的白色粉末且純度高于98％。
將含有紫杉醇和三尖杉寧堿的洗脫部分合并并真空蒸發(fā)除去幾乎所有丙酮，然后將其在水和CH2Cl2之間分配，分離有機(jī)層并真空蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在甲醇中。在該甲醇溶液中加入大約30％(w/v)的水并將混合物在60℃加熱5分鐘，然后室溫過(guò)夜。將甲醇溶液中的粗結(jié)晶固體過(guò)濾并在70℃至75℃真空干燥。將固體用HPLC分析。其中含有約70％的紫杉醇和25％的三尖杉寧堿，及一些其它紫杉烷類化合物。
紫杉醇粗品可以用三種不同方法中的一種處理。第一，可以將其溶解在丙酮中并用反相柱色譜純化。將色譜柱用聚合樹脂填充(Diaion樹脂，HP2MG)并用乙腈∶水(45∶55)洗脫。所得紫杉醇為白色結(jié)晶且純度高于99％。所得三尖杉寧堿為白色粉末且純度高于98％。
另外，第二種方法，紫杉醇和三尖杉寧堿可以通過(guò)化學(xué)反應(yīng)然后再通過(guò)鍵合硅膠反相柱色譜純化。將紫杉醇，三尖杉寧堿混合物粗品溶解在CH2Cl2或CHCl3(1∶10，w/v)中，使其在置于冰浴(在0℃至5℃之間)中的圓底燒瓶中與10當(dāng)量溴反應(yīng)約40分鐘。將所得紫杉醇和2”，3”-溴代三尖杉寧堿的混合物容易地通過(guò)反相色譜柱(C18或苯基)，以CH3CN∶H2O(45∶55)洗脫而分離。所得紫杉醇為白色結(jié)晶且純度高于99％。所得2”，3”-溴代三尖杉寧堿為非對(duì)映異構(gòu)體混合物，將其與在乙酸中活化的鋅于室溫下反應(yīng)，然后用閃式色譜柱純化得到純度高于95％的純?nèi)馍紝帀A。
另外第三種方法，將紫杉醇和溴代三尖杉寧堿用正相硅膠柱純化。洗脫的溶劑系統(tǒng)包括己烷∶EtOAc(開始為6∶4最后為4∶6)，或CH2Cl2∶Me2CO(開始為8∶2最后為65∶35)或CH2Cl2∶EtOAc(開始為75∶25最后為6∶4)。從該方法中得到的紫杉醇為白色結(jié)晶，純度高于99％，且三尖杉寧堿的含量低于0.2％。
為了說(shuō)明本發(fā)明，下列實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供了更準(zhǔn)確的參考。
實(shí)施例1在60℃的溫度下，將約200千克加拿大紅豆杉的干燥針葉和樹枝用1000升甲醇在工業(yè)多功能萃取器中萃取5小時(shí)然后過(guò)濾。將原材料用700升甲醇在55℃和60℃之間的溫度下再萃取4小時(shí)并過(guò)濾。將濾液合并并與10千克活性炭(5％w/w)混合并室溫靜置1小時(shí)，然后過(guò)濾除去活性碳。將濾液真空濃縮至約100升，然后在其中加入300升水∶二氯甲烷(1∶1)。收集有機(jī)層，然后將水溶液用200升二氯甲烷萃取兩遍以上。合并二氯甲烷溶液并真空蒸發(fā)至成淤將形式，然后用20升丙酮稀釋。
將丙酮溶液覆蓋在20千克硅藻土545上。將表層材料用空氣干燥然后裝載到三個(gè)低壓工業(yè)色譜柱上(直徑150×15cm)。將每個(gè)色譜柱填充1 5千克氧化鋁(Al2O3)吸附劑。應(yīng)該理解色譜柱的準(zhǔn)確直徑并不是關(guān)鍵的只要該柱足夠大以便足以填充用于分離的Al2O3便可。使用氧化鋁可以有效地吸附從原料中一起被萃取出來(lái)的黃酮和木酚素。它們難以除去而且也是影響最終的紫杉醇產(chǎn)品純度的問(wèn)題。
將色譜柱在10至15psi的壓力下用溶劑系統(tǒng)己烷∶丙酮(開始為100∶0最后為45∶55)以約150ml/min的流速洗脫。
收集含有紫杉烷類化合物的洗脫部分并根據(jù)薄層色譜(TLC)結(jié)果合并，然后真空濃縮除去溶劑。將所得材料溶解在甲醇中并在室溫靜置過(guò)夜，得到針狀結(jié)晶。將晶體過(guò)濾并用丙酮重結(jié)晶進(jìn)一步得到白色針狀結(jié)晶確定為13-乙酰-9-二氫漿果赤霉素III且純度高于96％(148克)(基于原料為0.074％)。
將從13-乙酰-9-二氫漿果赤霉素III結(jié)晶的母液真空濃縮至干。將殘余物溶解在3升丙酮中。將丙酮溶液與1.5千克聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物樹脂混合。將混合物蒸發(fā)除去溶劑并將所得粉末裝載在填充聚苯乙烯-二乙烯苯共聚物樹脂的低壓工業(yè)色譜柱的頂部，并用45％的丙酮水溶液以150ml/min的流速在30psi的操作壓力下洗脫。以每份2L收集洗脫部分并將它們用TLC和HPLC監(jiān)控。
將含有紫杉醇和三尖杉寧堿的洗脫部分合并并真空蒸發(fā)除去大部分丙酮，然后用去離子水稀釋并用2.5升二氯甲烷萃取三次。將有機(jī)層真空濃縮至干，將殘余物溶解在1升甲醇中。
在該甲醇溶液中加入30％(w/v)水并將混合物在60℃加熱幾分鐘然后室溫過(guò)夜。將從甲醇溶液析出的粗結(jié)晶固體過(guò)濾并在70℃至75℃的溫度下真空干燥。得到31克由約70％的紫杉醇和約25％的三尖杉寧堿組成的固體。
將紫杉醇粗品(30g)溶解在200ml乙腈中并用250ml去離子水稀釋并將其抽入低壓色譜柱(尺寸10×150cm)中并填充聚合樹脂(Diaion，大孔聚甲基丙烯酸酯)。將樣品抽入后將色譜柱用35，40，45和50％的乙腈/水梯度洗脫。溶劑的變化由洗脫部分的TLC和HPLC結(jié)果指示。
以每份約1升收集洗脫部分并用TLC和HPLC分析監(jiān)控。流速為75ml/min。將含有紫杉醇或三尖杉寧堿的柱洗脫部分分別合并。將兩個(gè)合并的溶液在約5℃靜置直至各化合物分別完全結(jié)晶。
將結(jié)晶分別過(guò)濾并將它們?cè)?5℃的甲醇水中重結(jié)晶。
得到18.5g(0.009％)紫杉醇的白色針狀結(jié)晶且純度高于99％。
得到6.5g(0.003％)三尖杉寧堿的白色針晶且純度高于98％。
將從上一步驟得到的含有漿果赤霉素III和10-去乙?；鶟{果赤霉素III的洗脫部分合并并真空蒸發(fā)除去幾乎所有丙酮，然后將它們?cè)?升水和二氯甲烷(1∶1v/v)之間分配。將有機(jī)層濃縮至干并將殘余物進(jìn)行正相色譜。色譜柱的尺寸為4”×4’，并填充硅膠(200-300目)。洗脫溶劑是梯度的己烷∶乙酸乙酯(開始為50∶50最后為35∶65)。以約每份1,000ml收集洗脫部分并將各份用TLC監(jiān)控。
將含有漿果赤霉素III或10-去乙?；鶟{果赤霉素III的洗脫部分分別收集并根據(jù)TLC結(jié)果合并，然后濃縮至干。
將漿果赤霉素III部分溶解在200ml甲醇中并在冰箱中過(guò)夜。將所形成的白色結(jié)晶過(guò)濾并將其在甲醇中重結(jié)晶得到7.5g(0.003％)漿果赤霉素III的白色結(jié)晶。
將10-去乙?；鶟{果赤霉素III粗品溶解在150ml丙酮中然后用150ml己烷稀釋。將混合物室溫過(guò)夜。將所形成的白色結(jié)晶過(guò)濾并用相同的溶劑重結(jié)晶得到10-去乙?；鶟{果赤霉素III白色結(jié)晶。得到15g(0.007％)。
實(shí)施例2用與實(shí)施例1相同的儀器和方法，得到紫杉醇粗品。將紫杉醇粗品溶解在300ml加在1,000ml三頸圓底燒瓶中的二氯甲烷中。將燒瓶置于冰浴中并將溶液用磁力攪拌器攪拌。當(dāng)溫度達(dá)到5℃時(shí)，攪拌下緩緩加入溴(10當(dāng)量)在二氯甲烷中的溶液(1∶1v/v)。三尖杉寧堿的溴代率為1至10摩爾。
在5至10分鐘間用TLC分析監(jiān)控溴代反應(yīng)。然后在反應(yīng)完全后(反應(yīng)完成的時(shí)間需要40至50分鐘)將反應(yīng)混合物用300ml二氯甲烷稀釋并將其轉(zhuǎn)移至分離的漏斗中。在該反應(yīng)混合物中，加入350ml10％的硫代硫酸鈉(Na2S2O3)水溶液以吸收過(guò)量的溴。分離二氯甲烷層并用水和鹽水洗滌。然后真空濃縮至干，得到淺灰色粉末。
實(shí)施例3將實(shí)施例2得到的粗材料(10g)溶解在120ml用150ml去離子水稀釋的乙腈中。將溶液抽入反相色譜柱(5×100cm)的頂部并填充C18鍵合硅膠。
將色譜柱在30至40psi的操作壓下用乙腈∶水(45∶55)洗脫。流速30ml/min。收集洗脫部分(每份250ml)，用TLC監(jiān)控并合并。
將含有紫杉醇的部分冰凍過(guò)夜；將所形成的結(jié)晶過(guò)濾并用70％的甲醇重結(jié)晶。得到6.1g純度高于99％的紫杉醇針狀結(jié)晶。
將含有2”，3”-溴代三尖杉寧堿的洗脫部分合并，并在水和二氯甲烷之間分配。收集有機(jī)層并真空蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在150ml甲醇中，用50ml水稀釋得到針狀結(jié)晶。將白色結(jié)晶在甲醇∶水中重結(jié)晶得到2”，3”-溴代三尖杉寧堿的白色結(jié)晶。
將2克2”，3”-溴代三尖杉寧堿溶解在30mlAcOH中并加入新活化的鋅(2g)。將混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)并將反應(yīng)通過(guò)TLC監(jiān)控。TLC分析顯示反應(yīng)完全后，將混合物在二氯甲烷和10％NaHCO3(300ml，2∶1)之間分配。將有機(jī)層用水洗滌并濃縮至干。將粗品用閃式色譜純化得到三尖杉寧堿的白色粉末。
實(shí)施例4將實(shí)施例2得到的原料粗品(10g)溶解在120ml二氯甲烷中。將有機(jī)層濃縮至干并將殘余物進(jìn)行正相色譜。色譜柱的尺寸為4”×4’并填充硅膠(200至300目之間)。洗脫溶劑為梯度的二氯甲烷∶乙酸乙酯(開始75∶25最后6∶4)，分離紫杉醇和2”，3”-溴代三尖杉寧堿的溶劑系統(tǒng)為己烷∶乙酸乙酯(開始6∶4最后4∶6)且二氯甲烷∶丙酮(開始8∶2最后65∶35)也可使用。以每份約500ml收集洗脫部分，并將每份用TLC監(jiān)控。
分別收集含有紫杉醇和2”，3”-溴代三尖杉寧堿的洗脫部分并根據(jù)TLC結(jié)果合并，然后濃縮至干。
將紫杉醇部分溶解在100ml甲醇中并用35ml水是、稀釋，然后冰凍。將形成的白色結(jié)晶過(guò)濾并用甲醇∶水重結(jié)晶得到紫杉醇(5.5g)白色結(jié)晶。
將2”，3”-溴代三尖杉寧堿粗品溶解在50ml丙酮中然后用50ml己烷稀釋。將混合物室溫過(guò)夜。將所形成的白色結(jié)晶過(guò)濾并用相同的溶劑系統(tǒng)重結(jié)晶得到2”，3”-溴代三尖杉寧堿白色結(jié)晶。
下列實(shí)施例以結(jié)構(gòu)式的形式說(shuō)明化合物。
紫杉醇
三尖杉寧堿
10-去乙?；鶟{果赤霉素IV＝R＝H
13-乙?；?9-二氫漿果赤霉素III
雖然本發(fā)明方案如上所述，但并不因此限制本發(fā)明而且不背離權(quán)利要求和所述發(fā)明的精神，特性和范圍，對(duì)本發(fā)明所作的各種改變對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。
權(quán)利要求
1.從含有紫杉烷類化合物的原料中分離和純化紫杉烷類似物的方法，包括用有機(jī)萃取劑從紫杉烷原料中萃?。挥盟鲚腿└采w吸附介質(zhì)并將所述介質(zhì)填充到柱中，該柱含有吸附劑；第一步，在10至20psi的壓力下用有機(jī)溶劑混合物洗脫得到含有紫杉烷類化合物的洗脫部分；使該部分結(jié)晶以得到固體紫杉烷類化合物和母液；將所述母液濃縮，并且第二步，將母液通過(guò)聚合樹脂并用極性溶劑混合物洗脫得到至少第二個(gè)紫杉烷類化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，在所述第一步進(jìn)一步包括除去木酚素和黃酮雜質(zhì)的步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的紫杉烷類化合物原料包括植物原料。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述植物原料選自一種下列植物短葉紅豆杉，歐洲紅豆杉，喜馬拉雅紅豆杉，云南紅豆杉和加拿大紅豆杉。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述紫杉烷類化合物至少包括13-乙?；?9-二氫漿果赤霉素III，10-去乙酰基漿果赤霉素III，漿果赤霉素III，三尖杉寧堿，紫杉醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述有機(jī)萃取劑包括二氯甲烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中弱吸收介質(zhì)包括硅藻土545。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中吸收劑包括氧化鋁。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中第一步有機(jī)溶劑混合物包括己烷和丙酮。
10.從含有紫杉烷類化合物的原料中分離純化紫杉烷類化合物的方法，包括提供紫杉烷類化合物原料；將紫杉烷類化合物從所述原料中萃取至有機(jī)萃取介質(zhì)中以制備含有紫杉烷類化合物的有機(jī)層；用有機(jī)層處理載體材料；制備含有吸附劑的低壓柱；第一步，通過(guò)色譜柱洗脫有機(jī)溶劑至洗提到純化的紫杉烷部分；使所述紫杉烷部分結(jié)晶得到第一個(gè)紫杉烷類似物和母液；第二步，通過(guò)在色譜柱上的聚合樹脂洗脫所述母液以純化并洗脫至少第二個(gè)紫杉烷類似物和第三個(gè)紫杉烷類似物；和收集分離的紫杉烷類似物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，在所述第一步中進(jìn)一步包括除去木酚素和黃酮雜質(zhì)的步驟。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，進(jìn)一步包括粉碎所述紫杉烷類化合物原料和用甲醇萃取的步驟。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，進(jìn)一步包括將萃取物與活性炭混合，過(guò)濾和蒸發(fā)以形成濃縮物的步驟。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述載體材料包括硅藻土545。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述有機(jī)溶劑包括丙酮與己烷的混合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中將所述有機(jī)溶劑在10至20psi的壓力下通過(guò)所述色譜柱。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括收集和用薄層色譜分析所述紫杉烷洗脫部分的步驟。
18.從含有紫杉烷類化合物的原料中分離純化紫杉烷類化合物的方法，包括提供紫杉烷類化合物原料；將所述紫杉烷類化合物從所述原料中萃取至有機(jī)萃取劑介質(zhì)中以制備含有紫杉烷類化合物的有機(jī)層；用所述有機(jī)層處理載體材料；制備含有吸附劑的低壓柱；第一步，在10至20psi的壓力下通過(guò)所述色譜柱洗脫有機(jī)溶劑至洗提到純化的紫杉烷部分并除去黃酮和木酚素雜質(zhì)；使紫杉烷部分結(jié)晶得到第一個(gè)紫杉烷類似物和母液；第二步，在30psi的壓力下通過(guò)在色譜柱中的聚乙烯DVB樹脂洗脫母液以純化并洗脫至少第二個(gè)紫杉烷類似物和第三個(gè)紫杉烷類似物；和第三步，將所述第二個(gè)紫杉烷類似物和所述第三個(gè)紫杉烷類似物通過(guò)正相硅膠柱以純化所述第二個(gè)紫杉烷類似物和所述第三個(gè)紫杉烷類似物；和收集分離的紫杉烷類似物。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述第二個(gè)紫杉烷類似物包括漿果赤霉素III和所述第三個(gè)紫杉烷類似物包括10-去乙?；鶟{果赤霉素III。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中所述類似物的純度至少為98％。
全文摘要
一種從含有紫杉烷類化合物的原料中高收率和高純度地獲得紫杉烷類似物的方法。該方法使用聚合樹脂膜用于在低壓下分離類似物并且不使用現(xiàn)有技術(shù)中常用的復(fù)雜和昂貴分離/純化步驟。
文檔編號(hào)C07D305/14GK1266059SQ00102118
公開日2000年9月13日 申請(qǐng)日期2000年1月7日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月7日
發(fā)明者劉健 申請(qǐng)人:劉健