專利名稱：由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯a、b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法。是屬于天然銀杏內(nèi)酯單一成分的制備技術(shù)。
銀杏內(nèi)酯是銀杏葉中獨有的物質(zhì)，它包括銀杏內(nèi)酯A、B、C、M和J，而且它們均為血小板活化因子拮抗劑，其中以銀杏內(nèi)酯B的生理活性最強。銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)是目前天然血小板活化因子拮抗劑中最有應(yīng)用前景的藥物。注射用的純品銀杏內(nèi)酯B已在臨床試驗中用于移植排斥、中風(fēng)、血液透析和休克等病癥的治療，還可能為預(yù)防和治療過敏性哮喘提供一類新的藥物。銀杏內(nèi)酯A具有協(xié)同作用。
銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)在銀杏葉中的含量很低，而且隨著季節(jié)的變化而改變，據(jù)統(tǒng)計最多含量時僅為0.5％。對于銀杏內(nèi)酯B，則更少。銀杏內(nèi)酯的來源主要有三種(1)化學(xué)合成；(2)植物細胞培養(yǎng)；(3)天然植物提取。其中化學(xué)合成和植物細胞培養(yǎng)的研究均處于初期階段，生產(chǎn)技術(shù)難度大，生產(chǎn)成本高，無法與從人工栽培經(jīng)濟林天然提取的途徑相競爭。
現(xiàn)有銀杏類藥物主要為銀杏制劑(含多種成份的混合物)，銀杏制劑所用原料為銀杏葉浸膏Egb761，其質(zhì)量標(biāo)準為黃酮甙24％以上，萜內(nèi)酯(銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯的總和)6％以上，白果酸0.0005％以下。主要用于治療冠心病、心絞痛、老年癡呆癥及增強記憶功能等。上市的銀杏制劑藥品主要有德國Schwabe制藥公司的TEBONIN(金納多)，法國博福-益普生(Beaufour-Ipsen)制藥公司的TANAKAN(達那康)，天保寧(浙江康恩貝)、銀可絡(luò)(深圳海王藥業(yè))、999銀杏葉片(三九集團立華制藥)、銀杏口服液(河北遵化制藥廠)、銀杏膠囊(山西心研所)等。
現(xiàn)已報道的有關(guān)銀杏藥用成分的制備方法僅限于銀杏葉浸膏Egb761和銀杏內(nèi)酯混合物的制備方法兩類，如專利“DE3，940，092”報道中指出，采用有機溶劑萃取和離子交換法制得含有銀杏黃酮與銀杏內(nèi)酯的銀杏葉浸膏Egb761；專利“US Patent5，089，636”報道中指出，用有機溶劑多次萃取并結(jié)晶得到銀杏內(nèi)酯A、B、C、J和M的混合物專利“CN1195665A”報道中指出，由銀杏葉或銀杏根皮，經(jīng)水煮，吸附劑吸附與脫附，結(jié)晶和重結(jié)晶過程制得富含銀杏內(nèi)酯的混合物。目前，尚無關(guān)于銀杏內(nèi)酯單一成分制備方法的報道。
本發(fā)明的目的，在于提供一種由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法。該方法具有工藝過程簡單、成本低、耗能少、制品純度高的特點。
為達到上述目的，本發(fā)明是通過下述具體方案加以實現(xiàn)的。以銀杏葉或銀杏葉浸膏為原料，加入乙醇、或甲醇、或丙酮、或丁酮、或乙酸乙酯有機溶劑浸取，浸取液經(jīng)過濾、靜置分層，得到的有機層液進行去雜質(zhì)處理，然后再靜置分層得到的有機層液經(jīng)濃縮、干燥得到富集銀杏內(nèi)酯A和B的濃縮物，采用制備型液相色譜對含有銀杏內(nèi)酯A和B的濃縮物進行分離，后處理，得到銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B，其特征在于在加入浸取劑的同時加入氯化物鹽析劑；去雜過程是向浸取液的有機層液加入鉀鹽或鈉鹽；制備型液相色譜的分離柱的流動相是采用乙酸乙酯和石油醚的混合液，固定相采用硅膠。
上述的氯化物鹽析劑是氯化鉀、或氯化鈣、或氯化鋇、或氯化鈉的水溶液，其加入量為原料重量的0.5～3倍。
上述的鉀鹽或鈉鹽是醋酸鈉、或醋酸鉀、或碳酸鈉、或碳酸氫鈉、或碳酸鉀、或碳酸氫鉀的水溶液，當(dāng)溶液濃度為1mol/l時，其加入量為有機液體積的0.1～0.7倍。
上述的乙酸乙酯和石油醚的最佳混合比為7∶1～9∶1。
下面對本發(fā)明加以詳細說明。
將銀杏葉或銀杏葉浸膏浸于甲醇、或乙醇、或丙酮、或丁酮、或乙酸乙酯有機溶劑中，同時還要加入氯化物水溶液做鹽析劑，鹽析劑的加入量要掌握適當(dāng)，過多不利于下步的分離，過少又不利于銀杏內(nèi)酯的析出。浸泡一定時間后，過濾出浸泡液，加熱攪拌，再過濾，靜置分層，取出有機層液，再向溶液中加入鉀鹽或鈉鹽，鉀鹽或鈉鹽選自碳酸鹽和醋酸鹽，它們是醋酸鈉、或者是醋酸鉀、或者是碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀，以它們的水溶液加入有機層液中，加入量，當(dāng)濃度為1mol/l時，為有機層液體積的0.1～0.7倍。這個過程選擇鉀鹽或鈉鹽的品種及加入量是十分重要的，它們確定的好、壞直接關(guān)系著制品的收率高低。加入鉀鹽或鈉鹽水溶液后，經(jīng)攪拌、靜置分層，得到顏色較淺的有機液層，該液層是富集銀杏內(nèi)酯A和B的濃縮液，該濃縮液送去制備型液相色譜進行分離，色譜柱的固定相采用硅膠，流動相采用乙酸乙酯與石油醚的混合液，從柱口收集流出物，便可得到銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的濃縮液。把得到的濃縮液進行減壓濃縮，結(jié)晶，獲得銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的制品。
下面再以實施例對本發(fā)明加以進一步說明。
實施例一取2kg的磨碎的銀杏葉，分別用5L無水甲醇浸取兩次，然后用布氏漏斗過濾，去除殘渣，收集濾液，將濾液合并用薄膜旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干并收集殘余物46g。將殘余物溶于500ml無水乙醇，40℃下攪拌1h，同時加入氯化鉀的水溶液，用量為60g氯化鉀/l00ml水，濾去不溶物，濾液靜置分層，取出有機層，加入碳酸鈉水溶液(濃度為1mol/1)100ml，攪拌10min后靜置分層，取出有機層，回收乙醇后，干燥得到0.96g濃縮物。取200mg此濃縮物用5ml流動相(乙酸乙酯與石油醚比為7∶3)溶解，制備色譜流動相的流速為25ml/min，進樣量為5ml，采用蒸發(fā)光散射檢測器進行在線檢測，根據(jù)檢測的色譜圖收集先后流出的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B，減壓濃縮、干燥得到濃縮物87.39mg銀杏內(nèi)酯A和56.61mg銀杏內(nèi)酯B。在甲醇與水比為3∶7的體系中分別對銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B進行重結(jié)晶，最后得純品銀杏內(nèi)酯A為70.38mg，純度達95.7％，銀杏內(nèi)酯B為43.24mg，純度達96.3％。
實施例二取40g的銀杏葉浸膏，加入700ml丙酮，60℃下攪拌1h，同時加入氯化鈉的水溶液，用量為50g氯化鈉/100ml水，濾去不溶物，濾液靜置分層，取出有機層，加入醋酸鈉水溶液(濃度為1mol／l)80ml，攪拌10min后靜置分層，取出有機層，回收丙酮后，干燥得到1.0247g濃縮物。取100mg此濃縮物用5ml流動相(乙酸乙酯與石油醚比為8∶2)溶解，制備色譜流動相的流速為25ml/min，進樣量為5ml，采用蒸發(fā)光散射檢測器進行在線檢測，根據(jù)檢測的色譜圖收集先后流出的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B，減壓濃縮、干燥得到濃縮物50.13mg銀杏內(nèi)酯A和29.43mg銀杏內(nèi)酯B。在甲醇與水比為35∶65的體系中分別對銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B進行重結(jié)晶，最后得純品銀杏內(nèi)酯A為38.25mg，純度達96.1％，銀杏內(nèi)酯B為20.18mg，純度達96.2％。
實施例三取40g的銀杏葉浸膏，加入600ml乙酸乙酯，50℃下攪拌1h，同時加入氯化鈣的水溶液，用量為70g氯化鈣/100ml水，濾去不溶物，濾液靜置分層，取出有機層，加入碳酸氫鈉水溶液(濃度為1mol/l)60ml，攪拌10min后靜置分層，取出有機層，回收乙酸乙酯后，干燥得到1.4274g濃縮物。取200mg此濃縮物用5ml流動相(乙酸乙酯與石油醚比為8∶2)溶解，制備色譜流動相的流速為25ml/min，進樣量為5ml，采用蒸發(fā)光散射檢測器進行在線檢測，根據(jù)檢測的色譜圖收集先后流出的銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B，減壓濃縮、干燥得到濃縮物101.7mg銀杏內(nèi)酯A和67.82mg銀杏內(nèi)酯B。在甲醇與水比為40∶60的體系中分別對銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B進行重結(jié)晶，最后得純品銀杏內(nèi)酯A為87.16mg，純度達96.4％，銀杏內(nèi)酯B為56.93mg，純度達96.2％。
本發(fā)明具有工藝過程簡單，制備成本低，主制品純度高的特點。
權(quán)利要求
1.一種由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法，它是以銀杏葉或銀杏葉浸膏為原料，經(jīng)加入乙醇、或甲醇、或丙酮、或丁酮、或乙酸乙酯有機溶劑浸取，浸取液經(jīng)過濾、靜置分層，得到的有機相進行去雜質(zhì)處理，再靜置分層得到的有機相經(jīng)濃縮、干燥得到富集銀杏內(nèi)酯A和B的濃縮物，采用制備液相色譜對含有銀杏內(nèi)酯A和B的濃縮物進行分離，后處理，得到銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B，其特征在于在加入浸取劑的同時加入氯化物鹽析劑；去雜質(zhì)過程是向浸取液的有機層液加入鉀鹽或鈉鹽；制備型液相色譜的分離柱的流動相是采用乙酸乙酯和石油醚的混合液，固定相采用硅膠。
2.按權(quán)利要求1所說的由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法，其特征在于氯化物鹽析劑是氯化鉀、或氯化鈣、或氯化鋇、或氯化鈉的水溶液，其加入量為原料重量的0.5～3倍。
3.按權(quán)利要求1所說的由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法，其特征在于鉀鹽或鈉鹽是醋酸鈉、或醋酸鉀、或碳酸鈉、或碳酸氫鈉、或碳酸鉀、或碳酸氫鉀的水溶液，當(dāng)溶液濃度為1mol/l時，加入量為有機液體積的0.1～7倍。
4.按權(quán)利要求1所說的由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法，其特征在于乙酸乙酯和石油醚的最佳混合比為7∶3～9∶1。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種由銀杏葉或銀杏葉浸膏制備藥物銀杏內(nèi)酯A、B的方法。該方法是向銀杏葉或其浸膏加入乙醇等浸取劑,得到的浸取液經(jīng)過濾、分層,取出有機相去雜,然后經(jīng)濃縮、干燥獲得富集銀杏內(nèi)酯A和B,采用制備型液相色譜再分離A與B。本發(fā)明的特征在于加入浸取液的同時加入氯化物鹽析劑,及去雜過程加入鉀鹽或鈉鹽:液相色譜的分離柱流動相為乙酸乙酯和石油醚混合液,固定相為硅膠。本發(fā)明制備過程簡單,成本低。
文檔編號C07D493/00GK1287121SQ00117758
公開日2001年3月14日 申請日期2000年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月2日
發(fā)明者韓金玉, 褚巧偉, 王 華, 常賀英, 李海靜 申請人:天津大學(xué)