專利名稱：凝血酶抑制劑的前藥的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥理學活性雜環(huán)脒的前藥，在體內由它產生的作為胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，尤其是凝血酶的競爭性抑制劑的化合物，其制備方法及其作為藥物的用途。本發(fā)明還涉及含活性化合物的前藥成分的藥物組合物，以及這些化合物作為凝血酶抑制劑、抗凝劑和抗炎劑的用途。
凝血酶屬于絲氨酸蛋白酶并作為末端酶在凝血鏈鎖反應中起核心作用。內源性和外源性凝血鏈鎖反應都通過多個增強步驟導致由凝血酶原產生凝血酶。然后血纖蛋白原被凝血酶催化裂解為血纖蛋白，引發(fā)凝血和血小板凝集，其本身由于血小板因子3和凝血因子XIII的結合以及一整系列的高活性介體而增強了凝血酶的形成。
在動脈白血栓和靜脈紅血栓的形成過程中，凝血酶的形成和作用是關鍵所在，因此它是藥物作用的潛在有效部位。與肝素相反，凝血酶抑制劑能獨立于輔因子，同時徹底抑制游離凝血酶和結合在血小板上的凝酶的作用。它們能防止經皮經腔冠狀動脈成形術(PTCA)和細胞溶解后在急性階段的血栓栓塞，并作為體外循環(huán)(心肺，血透析)的抗凝劑。它們一般還可用于預防血栓形成，例如在外科手術后。
已知，合成精氨酸衍生物通過與蛋白酶凝血酶的活性絲氨酸殘基相互作用而影響凝血酶的酶活性?；赑he-Pro-Arg(其N末端氨基酸是D形式)的肽被證明是特別有利的。D-Phe-Pro-Arg-異丙基酯被描述為一種競爭性凝血酶抑制劑(C.Mattson等，FoliaHaematol，109(1983)43-51)。
WO94/29336、EP0601459、WO95/23609、EP0672658、WO97/23499、WO98/06740和WO95/35309代表了進一步發(fā)展，其中胍基丁胺被芳基脒殘基代替。
盡管這些化合物具有顯著的抗血栓形成的作用，但在口服或腸胃外給藥后其藥物動力學性質有待改善。
特別地，以下的藥物動力學性質的影響是期望的I、改善胃腸道的吸收以獲得高生物利用率II、通過恒定吸收的方式使生物利用率的個體間和個體內差異最小。
III、獲得隨時間變化盡可能保持恒定的與治療相關的活性水平。關于治療廣度，有必要使血漿濃度盡可能隨時間變化而保持恒定，因為太大的變化會導致不良的副作用。如果該活性化合物的血漿濃度太高，預期會出血；如果該濃度太低，則血栓形成的風險增大。
IV、延長該活性化合物的作用持續(xù)時間?；钚曰衔锢斫鉃榕c必須首先代謝轉化為活性化合物的物質(前藥)相比較的藥理學活性物質(藥物)。
V、減少胰蛋白酶的抑制作用由于前藥對消化酶胰蛋白酶的作用明顯地較小，該前藥的預期的副作用越小。
前藥相對于藥物的進一步的優(yōu)點在于藥物的高局部濃度不會在靶部位以外發(fā)生。而且使具有較小選擇性的藥物的副作用最小化，例如，在胃腸道中，如果藥物必須在胃腸道通過之后或期間通過代謝而形成，則不會進一步抑制絲氨酸蛋白酶。
本發(fā)明的目的在于通過適宜的前藥，改善尤其在WO95/35309和WO96/25426中提到的凝血酶抑制劑的藥物動力學性質。
本發(fā)明涉及式I的化合物 其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R1OOC-C(CH3)2-、HO-CH2-CH2-、R2R3N(O)C-CH2-、R2R3N-O-CO-CH2-、R2N(OH)-CO-CH2-，其中R2和R3相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，或芐基，或者R2和R3共同形成C4-C6-亞烷基鏈，其中R1為H-、C1-C16-烷基-、H3C-[O-CH2-CH2]q(q＝1-4)、C10-三環(huán)烷基-、C10-三環(huán)烷基-CH2-、C3-C8-環(huán)烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，其中，苯環(huán)可以稠合到環(huán)烷基環(huán)，吡喃基-、哌啶基-、芳基-或苯基-C1-C3-烷基-，其中，除了H，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、NO2、HO或C1-C4-烷氧基的基團；或者R1為2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基-甲基-，它可以在5-位被C1-C16-烷基或芳基取代；或者R1為R4-C(O)O-C(R5)2-，R4-C(O)NR2-C(R5)2-，其中R4可以是C1-C4-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-、C1-C4-烷氧基-、C3-C8環(huán)烷基-C1-C3-烷氧基-、C3-C8-環(huán)烷氧基-、芳基-或苯基-C1-C6-烷基- 兩個R5基團相互獨立地是H、CH3或C2H5，而R2具有以上所示的含義，R6OOC-C1-C6-烷基-，R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6R7N-C2-C6-烷基-，其中R6和R7相互獨立地是H或C1-C6-烷基-，或者如果R1為R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6和R7共同形成C4-C6-亞烷基鏈，或者A為C1-C4-烷基-SO2-(CH2)2-6-、HO3S-(CH2)4-6-、5-四唑基-(CH2)1-6-、C1-C4-烷基-O-(CH2)2-6-、R2R3N-(CH2)2-6-、R2S-(CH2)2-6-、R2R3NSO2-(CH2)2-6-、HO-(CH2)2-6-，B為
p為0、1、2R8為H-、R10OOC-，其中R10＝C1-16-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、苯基-C1-C4-烷基-、R11C(O)-O-CH2-、R11C(O)-O-CH(CH3)-、其中，R11可以是C1-C4-烷基-、苯基-、芐基-、C3-C8-環(huán)烷基-或環(huán)己基-CH2-，R9為C3-8-環(huán)烷基-，它可以攜帶至多四個相同或不同的C1-4-烷基。
D為 G為-H、-OH、-OR12，其中，R12為-C1-8-烷基、-C3-C8-環(huán)烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它們任選攜帶至多三個C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、或C1-C4-烷氧基；K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，它們的構型異構體、互變體和它們與生理學上可耐受的酸的鹽，其中適用以下規(guī)則(i)如果G＝-H、-OH、-OR12，其中R12為-C1-C8-烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它任選攜帶至多3個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl或C1-C4-烷氧基的基團，K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，然后A和B具有以下含義AR1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R1OOC-C(CH3)2-、HO-CH2-CH2-、R2aR3aN(O)C-CH2-、R2R3N-O-CO-CH2-、R2N(OH)-CO-CH2-，其中R2和R3相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基，或R2和R3共同形成C4-C6-亞烷基鏈，R2a等于H而R3a為C5-C8-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基；其中，R1為C5-C16-烷基-、H3C-[O-CH2-CH2]q(q＝1-4)、C10-三環(huán)烷基-、C10-三環(huán)烷基-CH2-、C3-C8-環(huán)烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，其中苯環(huán)可以稠合到環(huán)烷基環(huán)，吡喃基-、哌啶基-或芳基-，其中，除了H，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、NO2、HO或C1-C4-烷氧基的基團；或者R1為2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基-甲基-，它可以在5-位被C1-C16-烷基或芳基取代；或者R1為R4-C(O)O-C(R5)2-，R4-C(O)NR2-C(R5)2-，其中R4可以是C1-C4-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-、C1-C4-烷氧基-、C3-C8環(huán)烷基-C1-C3-烷氧基-、C3-C8-環(huán)烷氧基-、芳基-或苯基-C1-C6-烷基-、兩個R5基團相互獨立地是H、CH3或C2H5，而R2具有以上所示的含義，R6OOC-C1-C6-烷基-，R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6R7N-C2-C6-烷基-，其中R6和R7相互獨立地是H或C1-C6-烷基，或者如果R1為R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6和R7共同形成C4-C6-亞烷基鏈；或者A為C1-C4-烷基-SO2-(CH2)2-6-、HO3S-(CH2)4-6-、5-四唑基-(CH2)1-6-、C1-C4-烷基-O-(CH2)2-6-、R2R3N-(CH2)2-6-、R2S-(CH2)2-6-、R2R3NSO2-(CH2)2-6-、HO-(CH2)2-6-，B為 p為0、1、2
R8為H-、R10OOC-，其中R10＝C1-16-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、苯基-C1-C4-烷基-、R11C(O)-O-CH2-、R11C(O)-O-CH(CH3)-、其中，R11可以是C1-C4-烷基-、苯基-、芐基-、C3-C8-環(huán)烷基-或環(huán)己基-CH2-，R9為C3-8-環(huán)烷基-，它可以攜帶至多四個相同或不同的C1-4-烷基。
ia)優(yōu)選i)中的式I的化合物，其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-其中，R1為C5-C16-烷基-、H3C-[O-CH2-CH2]q(q＝1-4)、C10-三環(huán)烷基-、C10-三環(huán)烷基-CH2-、C3-C8-環(huán)烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，其中苯環(huán)可以稠合到環(huán)烷基環(huán)，吡喃基-或哌啶基-，其中，除了H，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自CH3、CF3、F、Cl、HO或甲氧基的基團；或者R1為2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基-甲基-，它可以在5-位被C1-C3-烷基或芳基取代，或者R1為R4-C(O)O-C(R5)2-，其中R4可以是C1-C4-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-、C1-C4-烷氧基-、C3-C8環(huán)烷基-C1-C3-烷氧基-、C3-C8-環(huán)烷氧基-或芳基-，兩個R5基團相互獨立地是H、CH3或C2H5，R6OOC-C1-C6-烷基-，R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6R7N-C2-C6-烷基-，其中R6和R7相互獨立地是H或C1-C6-烷基-，或者如果R1為R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6和R7共同形成C4-C6-亞烷基鏈，B為
p為0、1，R8為H-、R10OOC-，而R10＝C1-8-烷基-、苯基-、C3-C8環(huán)烷基-、苯基-C1-C4-烷基-，R9為C3-C8-環(huán)烷基-，它可攜帶至多4個相同或不同的C1-4烷基-，D＝(II)而G＝-H、-OH、-O-C1-8-烷基-，K為H或者G和K共同形成-C(O)O-基團。
(ii)如果G＝-OR12，其中R12為-C5-C8-烷基、-C3-C8-環(huán)烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它任選攜帶至多3個C1-C4-烷基、CF3、F、Cl或C1-C4-烷氧基，K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，然后A和B具有以下含義AR1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R1OOC-C(CH3)2-、R2aR3aN(O)C-CH2-，其中R2a和R3a相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基，或R2a和R3a共同形成C4-C6-亞烷基鏈，其中，R1為H-、C1-C4-烷基-或苯基-C1-C4-烷基-，其中除了H以外，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、NO2、HO或C1-C4-烷氧基的基團，B、p和R8、R9、R10與R11具有在i)中所表示的含義。
iia)優(yōu)選ii)中式I的化合物，其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R2aR3aN(O)C-CH2-，其中R2a和R3a相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基，或者R2a和R3a共同形成C4-C6-亞烷基鏈，其中，R1為H-、C1-C4-烷基-或苯基-C1-C4-烷基-，其中除了H以外，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自CH3、CF3、F、Cl、HO或甲氧基的基團，P為0，1，B為 p為0、1R8為H-、R10OOC-，而R10＝C1-16-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、芐基-，而R9具有在i)中所示的含義。
D＝(II)G＝-OR12，其中，R12為-C5-C8-烷基、-C3-C8-環(huán)烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它任選攜帶至多3個CH3-、CF3-、F-、Cl-、或甲氧基，K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，特別優(yōu)選式I的前藥，其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-，其中，R1為C5-C10-烷基-、C4-C7-環(huán)烷基-、C4-C7-環(huán)烷基-CH2-，其中所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自CH3-和甲氧基的基團。
B為 p為0、1，R8為H-，R9為C4-7-環(huán)烷基-，它可攜帶至多4個相同或不同的甲基或乙基，D為 G為-OH，K為H。
上述的化合物屬于三組物質·第一組包括本身僅有可忽略的抗血栓形成作用，但它在有機體內轉化為相應的活性物質(G等于H)的凝血酶抑制劑的前藥(如G等于-OH、-OR12)。這些化合物包含在所有的權利要求中。這些前藥的優(yōu)點在于其在有機體內改善的藥物動力學和藥效學表現。G為-OH、-OR12，同時A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-等的化合物為雙前藥，它在有機體內通過轉化兩種前藥基團而被轉化為相應的藥物(G等于-H，A等于HOOC-CH2-等)。
·第二組包括作為前藥已具有凝血酶抑制作用的凝血酶抑制劑的前藥(如A等于R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-等，同時G等于-H)。它在有機體中形成的有效物質(藥物；A等于HOOC-CH2-、HOOC-CH2-CH2-、HOOC-CH(CH3)-等，G等于-H)也表現出凝血酶抑制作用。這些是權利要求1(i)、2和5中的部分化合物。這些前藥的優(yōu)點在于它們在有機體中改善的藥物動力學和藥效學表現。
·第三組包括本身表現出抗凝血酶作用的凝血酶抑制劑(如A等于C1-4-烷基-SO2-(CH2)2-6-、HO3-S-(CH2)2-6-、5-四唑基-(CH2)1-6-、C1-4-烷基-O-(CH2)2-6-、R2R3N-(CH2)2-6-，R2S-(CH2)2-6-、R2R3NSO2-(CH2)2-6-，同時G等于-H)。這些化合物包含在權利要求1(i)中。
以下的化合物，其構型異構體、互變體及其與生理學上耐受的酸的鹽是本發(fā)明的進一步的主題。HOOC-CH2-(D)Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoBnO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoHOOC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am(OH)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoHOOC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(O-Allyl)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OCH3)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OCH3)]-pico
特別優(yōu)選以下物質
縮略詞表Adaala 金剛烷基丙氨酸Adagly金剛烷基甘氨酸AIBN 偶氮二異丁腈Ac乙酰基Ala 丙氨酸am脒基Asp 天冬氨酸Aze 氮雜環(huán)丁烷羧酸Bn芐基Boc 叔丁氧羰基Bu丁基Cbz 芐氧羰基Cha 環(huán)己基丙氨酸Chea 環(huán)庚基丙氨酸Cheg 環(huán)庚基甘氨酸Chg 環(huán)己基甘氨酸Cog 環(huán)辛基甘氨酸Cpa 環(huán)戊基丙氨酸Cpg 環(huán)戊基甘氨酸DC 薄層色譜DCC 二環(huán)己基碳二亞胺Dch 二環(huán)己基丙氨酸Dcha 二環(huán)己基胺DCM 二氯甲烷Dep 4，5-脫氫-2-哌啶酸DMF 二甲基甲酰胺DIPEA二異丙基乙胺Et 乙基Eq 等量Gly 甘氨酸ham 羥基脒基HOSucc 羥基琥珀酰亞胺HPLC 高效液相色譜iPr 異丙基Lsg 溶液Me 甲基bb-Me2Cha2-氨基-3-環(huán)己基-3-甲基丁酸或bb-二甲基環(huán)己基丙氨酸4-MeCha (4-甲基-1-環(huán)己基)丙氨酸g-MeCha (1-甲基-1-環(huán)己基)丙氨酸3，3-Me2Cha (3，3-二甲基-1-環(huán)己基)丙氨酸4-MeChg (4-甲基-1-環(huán)己基)甘氨酸3，3-Me2Chg (3，3-二甲基-1-環(huán)己基)甘氨酸MPLC 中壓液相色譜MTBE 甲基叔丁基醚NBS N-溴代琥珀酰亞胺Nog 降冰片基甘氨酸Oxaz 噁唑Ph 苯基Phe 苯丙氨酸Pic 2-哌啶酸pico 吡啶甲基PPA 丙基膦酸酐Pro 脯氨酸Py 吡啶Pyr 3，4-脫氫脯氨酸Pyraz吡唑Pyrr 吡咯RT 室溫RP-18 反相C-18t叔tBu 叔丁基tert 叔TBAB 四丁基溴化胺TEA 三乙胺TFA 三氟乙酸TFAA 三氟乙酸肝thiaz噻唑thioph 噻吩TOTU 氟硼酸O-[氰基-乙氧羰基亞甲基)氨基]-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓Z芐氧羰基nPent正戊基neoPent 新戊基(2，2-二甲基-1-丙基)nHex 正己基cHex 環(huán)己基c-Pent 環(huán)戊基cHN4C-四唑基-(3-四唑基-或5-四唑基)C(CH2)5N-N-哌啶基nOct 正辛基O-p-Me-Bn 對甲芐氧基-N-Me-4-Pip-OHN-甲基-4-哌啶基醇MeO-tetraethoxy四甘醇基單甲醚CH3-(CH2)15O十六烷氧基CH3-(CH2)10O十一烷氧基4-Pip-O4-哌啶氧基1-Pip-O1-哌啶氧基tBu-cHexyl-O 4-叔丁基環(huán)己氧基Ada-CH2-O 1-金剛烷基甲氧基4-tBu-cHexyl-CH2-O4-叔丁基環(huán)己基甲氧基cHept-O環(huán)庚氧基3，3，5，5-TetraMe-cHex-O3，3，5，5-四甲基環(huán)己氧基4-pyranyl-O4-吡喃氧基nPrO 正丙氧基nBu-O 正丁氧基iBu-O 叔丁氧基2，4-DiMe-3-Pentyl-O 1-異丙基-2-甲基丙氧基1-Me-cPentyl-O 1-甲基-環(huán)戊氧基a，a-Di-cHex-CH2-O二環(huán)己基甲氧基tBu-N 叔丁氨基nHex-N 正己氨基H2N-3-[6-am-(-COO-)]-pico3-[5-(氨甲基)-2-吡啶基]-1，2，4-噁二唑-5-酮H2N-3-[6-am-(OH)]-pico 5-(氨甲基)-N’-羥基-2-吡啶-甲酰亞胺酰胺(carboximidamid)在說明書和權利要求書中，以下的定義適用于各取代基術語“環(huán)烷基”本身或作為其它取代基的一部分，包括飽和的，含有所示的碳原子數，并且其中至多有兩個CH2基團被氧、硫或氮原子替代的環(huán)烴基。C3-8-環(huán)烷基指具有3-8個碳原子的飽和脂族環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、4-甲基環(huán)己基、環(huán)己基亞甲基、環(huán)庚基或環(huán)辛基、吡咯烷、哌啶、嗎啉。優(yōu)選純碳環(huán)。
術語“烷基”本身或作為其它取代基的一部分，指直鏈或支鏈的，具有在每種情況下所定義長度的烷基鏈基，它可以是飽和或不飽和的，并且其中至多有5個CH2基團被氧、硫或氮原子取代。在這種情況下，雜原子彼此被至少兩個碳原子分離開。因此，C1-4烷基例如為甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丙基、1-丁基、1-丁-2-烯基、2-丁基，C1-6-烷基例如為C1-4-烷基、戊基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、1-己基、2-己基、3-己基、4-甲基-1-戊基或3，3-二甲基丁基，C1-8-烷基，除C1-4-烷基所示的基團之外，還例如為C1-6-烷基、庚基、2-(2-甲氧基乙氧基)乙基或辛基。優(yōu)選不具有雜原子的飽和烷基鏈。
術語“烷氧基”本身或作為其它取代基的一部分，指直鏈或支鏈的，具有在每種情況下所定義長度的烷基鏈基，它可以是飽和或不飽和的，并且通過氧原子結合到各自的母體化合物上。因此，C1-4-烷氧基例如為甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、2-甲基-2-丙氧基、2-甲基-1-丙氧基、1-丁氧基、2-丁氧基。
術語“芳基”本身或作為其它取代基的一部分，包括單-、雙-或三環(huán)芳香烴基，如苯基、萘基、四氫萘基、茚基、芴基、2，3-二氫化茚基、蒽基、菲基。
式I的化合物可以本身或以其與生理學上耐受的酸的鹽的形式存在。該類型的酸的實例為鹽酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、磷酸、甲磺酸、醋酸、甲酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、羥基琥珀酸、硫酸、戊二酸、天冬氨酸、丙酮酸、苯甲酸、葡糖醛酸、草酸、抗壞血酸和乙酰甘氨酸。
式I的新化合物可以用于以下適應癥-病理機制為直接或間接基于凝血酶的蛋白水解作用的疾??；-病理機制基于凝血酶依賴性受體的活化和信息傳導的疾??；-伴隨體細胞中基因表達的刺激(例如，由PAI-1、PDGF(血小板衍生生長因子)、P-選擇蛋白、ICAM-1、組織因子)或抑制(例如，在平滑肌細胞中NO合成)的疾??；-基于凝血酶的致有絲分裂作用的疾??；-基于上皮細胞(如血管內皮細胞)的凝血酶依賴性收縮性和滲透性的變化的疾?。?凝血酶依賴性血栓栓塞如深層靜脈栓塞、肺栓塞、心肌或或腦梗塞、動脈原纖維形成、旁路閉塞；-彌漫性血管內凝血(DIC)；-用血栓溶解劑如鏈激酶、尿激酶、尿激酶原、t-PA、APSAC、得自動物唾液腺的纖維蛋白溶酶原活化劑以及所有這些物質的重組和變異形式進行聯合藥物治療時，為了降低再灌注的時間，以及再閉塞；-PTCA后早期再閉塞和晚期再狹窄的出現；-平滑肌細胞的凝血酶依賴性增殖；-在CNS中活性凝血酶的蓄積(如在早老性癡呆中)；-腫瘤生長及防止腫瘤細胞的粘著和轉移。
這些新化合物特別用于治療和預防凝血酶依賴性血栓栓塞如深度靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌或腦梗塞和不穩(wěn)性心絞痛，還可治療彌漫性血管內凝血(DIC)。它們還適合與溶解血栓藥如鏈激酶、尿激酶、尿激酶原、t-PA、APSAC和其它纖維蛋白溶酶原活化劑聯合治療，來縮短再灌注時間和延長再閉塞時間。
進一步優(yōu)選的使用范圍是預防在經皮經腔(transluminaler)冠狀血管成形術之后凝血酶依賴性早期再閉塞和晚期再狹窄，預防凝血酶誘發(fā)的平滑肌細胞增生，預防CNS中活性凝血酶的蓄積(例如在早老性癡呆疾病中)、腫瘤控制和預防導致腫瘤細胞粘連和轉移的機理。
該新化合物可以進一步用于病理學機理直接或間接基于激肽原酶，特別是激肽釋放酶的蛋白水解作用的病癥，如炎癥如哮喘、胰腺炎、鼻炎、關節(jié)炎、蕁麻疹和其它內部炎癥。
本發(fā)明的化合物可以以常規(guī)的方式口服。還可以采用蒸汽或噴霧通過鼻咽腔進行給藥。
劑量取決于患者的年齡、癥狀和體重以及給藥的方式。一般來說，每人的活性物質的日劑量為，口服給藥約10-2000mg。此劑量可每天以2至4個單劑量形式使用或以緩釋形式給藥一次。
該新化合物可以常規(guī)的給藥劑型以固體或液體的形式使用，如片劑、包衣片劑、膠囊、散劑、顆粒劑、糖衣丸、溶液或噴霧劑。這些劑型以常規(guī)的方式制備。在這種情況下，這些活性化合物可以與常規(guī)的藥學助劑如片劑粘合劑、填充劑、防腐劑、片劑崩解劑、流動調節(jié)劑、增塑劑、濕潤劑、分散劑、乳化劑、溶劑、緩釋劑、抗氧化劑和/或拋射劑(cf.H.Sucker等人PharmazeutischeTechnologie[制藥技術]，Thieme-Verlag，Stuttgart，1978)一起加工。通常得到的給藥劑型含0.1-99％重量的活性化合物。
實驗部分藥理學試驗口服藥物的胃腸道(GIT)吸收率是該藥物的一個重要的生物利用率因素。高生物利用率的先決條件是良好的吸收率。
已有大量的體外模型用于研究腸內吸收。因此，通常使用人結腸腺癌細胞系HT-29、Caco-2和T84用于研究各種腸內轉運過程(Madara等，Am.J.Physiol.1988，254G416-G423；K.L.Audus等，Pharm.Res.1990，7，435-451)。IEC-18細胞系被證實是研究親水物質通過腸膜的滲透性的合適模型(Ma等，J.Lab.Clin.Med.1992；Duizer等，J.Contr.Rel.1997)。
為進行轉運實驗(Materials，Methodssee R.T.Borchardt，P.L.Smith，G.Wilson，Models for Assessing Drug Absorptionand Metabolism，lst Edition，Plenum Press New York and London，1996，Chapter2)，在Transwell聚碳酸酯膜上培養(yǎng)細胞17-24天。排列實驗隔室以使膜分隔尖端隔室和基底外側隔室。測定取決于pH梯度，例如尖端(pH6.0)，基底外側(pH8.0)，從尖端側經細胞層到基底外側的試驗物質的轉運。
在用試驗物質溫育該細胞以后，在特定的時間間隔(如24小時)之后從尖頂和基底外側移出試樣。采用HPLC(對比保留時間)和HPLC-MS(闡明代謝產物)分析測定在兩個隔室的每一個中所用試驗物質和可能的代謝產物的含量。計算轉運率。
借助這些試驗得到的值，可以將試驗物質分成以下種類+++非常良好的轉運++ 良好的轉運+ 中等的轉運○ 不良的轉運在下表中，將所選擇的實施例分成所述種類。實施例序號轉運01++03++05+++07+14+++15+++31○32+在大鼠體內的藥物動力學和凝固參數將試驗物質溶于等滲鹽水溶液中，然后立即對清醒的SpragueDawley大鼠給藥。靜脈藥團注射至尾靜脈時的給藥體積為1ml/kg，而對于管飼法經口給藥，則為10ml/kg。如果沒有另外指出，在口服21.5mg.kg-1或靜脈內給予1.0mg.kg-1的試驗物質或相應的賦形劑(對照)的1小時以后進行取血。在取血的5分鐘之前，通過i.p.給予處在生理鹽水溶液中的25％濃度的烏拉坦溶液(劑量1g.kg-1i.p.)將動物麻醉。分離出頸動脈，插入導管并將血樣(2ml)取至檸檬酸化管內(1.5份的檸檬酸鹽和8.5份的血液)。在取樣以后立即測定全血中ecarin凝固時間(ECT)。離心制備血漿以后，采用血凝度計測定血漿凝血酶時間和活化的部分凝血激酶時間(APTT)。
凝固參數Ecarin凝固時間(ECT)在血凝度計(CL8，球型，Bender &Hobein，Munich，FRG)中在37℃下將100μl的檸檬酸鹽血液溫育2分鐘。在加入100μl預熱(37℃)的ecarin試劑(Pentapharm)之后，測定形成直至血纖蛋白凝塊的時間。
活化的凝血激酶時間(APTT)混合50μl檸檬酸鹽血漿和50μl的PTT試劑(Pathrombin，Behring)，并在血凝度計(CL8，球型，Bender & Hobein，Munich，FRG)中在37℃下溫育2分鐘。在加入50μl預熱(37℃)的氯化鈣之后，測定直至形成血纖蛋白凝塊的時間。
凝血酶時間(TT)在血凝度計(CL-8，球型，Bender & Hobein，Munich，FRG)中在37℃下將100μl的檸檬酸鹽處理的血漿溫育2分鐘。在加入100μl預熱(37℃)的凝血酶試劑(Boehringer Mannheim)之后，測定直至形成血纖蛋白凝塊的時間。
在狗體內的藥物動力學和凝固參數將受試物質溶于等滲生理鹽水中，然后立刻施用于有意識的雜種狗。靜脈藥團注射的給藥體積為0.1ml/kg，而對于管飼法的給藥體積為1ml/kg。在靜脈給藥1.0mg/kg之前或之后的5、10、20、30、45、60、90、120、180、240、300和360分鐘(如果需要的話，還可以在給藥后的420、480分鐘和24小時)時刻，或者在口服給藥4.64mg/kg之前或之后的10、20、30、60、120、180、240、300、360、480分鐘和24小時時刻，取靜脈血樣(2ml)放入到檸檬酸化管內。取樣后立即測定全血的ecarin凝固時間(ECT)。離心制備血漿后，采用凝固儀測定血漿凝血酶時間和活化部分凝血激酶時間(APTT)。
此外還測定抗-F IIa活性(ATU/ml)，并且通過生色(S-2238)凝血酶測定法，根據受試化合物血漿中的抗-F IIa活性，采用利用r水蛭素和受試物質的校準曲線測定受試物質的濃度。
試驗物質的血漿濃度是計算藥物動力學參數的基礎，這些參數包括最大血漿濃度時間(Tmax)、最大血漿濃度、血漿半衰期t0.5；曲線下面積(AUC)、受試物質的吸收部分(F)。
凝固參數ecarin時間(ECT)將100μl檸檬酸鹽處理過的血液在凝固儀(CL8，球型，Bender & Hobein，Munich，FRG)內于37℃下溫育2分鐘。加入100μl預熱(37℃)ecarin試劑(Pentapharm)，測定直至形成血纖蛋白凝塊的時間。
活化凝血激酶時間(APTT)混合50μl檸檬酸鹽處理過的血漿和50μl的PTT試劑(Pathrombin，Behring)，并在凝固儀(CL8，球型，Bender & Hobein，Munich，FRG)內于37℃下溫育2分鐘。加入50μl預熱(37℃)的氯化鈣后，測定直至形成血纖蛋白凝塊的時間。
凝血酶時間(TT)在血凝度計(CL8，球型，Bender & Hobein，Munich，FRG)中在37℃下將100μl的檸檬酸鹽處理的血漿溫育2分鐘。在加入100μl預熱(37℃)的凝血酶試劑(Boehringer Mannheim)之后，測定直至形成血纖蛋白凝塊的時間。
由于前藥在某些情況下是非常差的凝血酶抑制劑，通過測定凝固參數而直接測得所形成的活性化合物(藥物)的比例。因此動力學包括前藥的吸收、其代謝和排泄，以及轉化成它的活性化合物及其代謝和排泄。
根據方案I-III制得式I的化合物。
構件A、B和D優(yōu)選分別合成并以適當保護的形式使用(見方案I-III，使用與所用合成方法相容的每種情況下正交的保護基(P或P*))。
方案I (P＝保護基，(P)＝保護基或H)方案I描述了分子I的線性合成，該合成通過從P-D-L(L＝CONH2、CSNH2、CN)上除去保護性基團，將胺H-D-L偶聯至N-保護氨基酸P-E-OH得到P-E-D-L，消除N-末端保護基得到H-E-D-L，偶聯至N-末端保護的氨基酸P-B-OH得到P-B-E-D-L，除去保護基團P得到H-B-E-D-L，隨后偶聯或用無保護或保護的(P)-A-U構件(U＝離去基團)烷基化或用(P)-A’-U(U＝醛、酮)進行還原烷基化或者用適當的(P)-A”-C＝C-衍生物進行邁克爾加成反應得到(P)-A-B-E-D-L。如果L為酰胺官能團，則可以在每一種情況的保護階段通過三氟乙酸酐的脫水作用而將它轉化為對應的腈官能團。結構類型I的化合物的脒合成起始于對應的羧酰胺、腈、硫代羧酰胺和羥基脒，在許多專利申請中描述了該合成(例如，參見WO 95/35309，WO 96/17860，WO96/24609，WO 96/25426，WO 98/09950)。然后除去可能仍存在的保護基。
方案II 方案II描述了分子I的線性合成，該合成通過偶合、烷基化、還原胺化或邁克爾加成H-B-P至對應的適宜的無保護或保護的(P*)-A構件[(P*)-A-U(U＝離去基團)或(P*)-A’-U(U＝醛、酮)，或(P*)-A”-C＝C衍生物]得到(P*)-A-B-P。在消除C-末端保護基以得到(P*)-A-B-OH之后，與H-E-P偶合得到(P*)-A-B-E-P，再次除去C末端保護基得到(P*)-A-B-E-OH，與H-D-L*(L*＝CONH2、CSNH2、CN、C(＝NH)NH-R*；R*為氫原子或保護基)偶合得到(P*)-A-B-E-D-L*，與方案I類似地進行該中間產物的反應得到最終產物。羥基-、烷氧基-或芳氧基脒(G＝OH、OR)的合成是通過相應的腈或亞氨基硫酯鹽與鹽酸羥胺或O-取代的羥胺衍生物的反應進行的。然后通過酯交換或者從游離酸起始引入(P**)。為合成噁二唑酮(G和K共同形成COO-基團)，特別是三取代的1，2，4-噁二唑-5-酮，在加入堿(如NaOH、吡啶、叔胺)下，將對應的偕胺肟與碳酸衍生物如碳酰氯、二-和三光氣、羰基二咪唑或氯甲酸酯反應(R.E.Bolton等Tetrahedron Lett.1995，36，4471；K.Rehse F.Brehme，Arch.Pharm.Med.Chem.1998，331，375)。
方案III 方案III描述了通過匯集合成制備化合物I的非常有效的途徑。適當保護的構件(P*)-A-B-OH和H-E-D-L*互相偶合且所得中間體(P*)-A-B-E-D-L*類似于方案I和II反應得到終產物。
所用N-末端保護基為Boc、Cbz或Fmoc；C-末端保護基為甲基、叔丁基和芐基酯。脒保護基優(yōu)選Boc和Cbz。如果該中間體含有烯屬雙鍵，則氫解除去的保護基不是合適的。
根據肽化學(參見M.Bodanszky，A.Bodanszky″The Practiceof Peptide Synthesis″，2nd Edition， Springer VerlagHeidelberg，1994)的標準條件進行所需的偶合反應和常規(guī)的保護基引入和消除反應。
Boc保護基用二噁烷/HCl、二乙醚/HCl、二氯甲烷/HCl或TFA/DCM消除，而Cbz保護基通過氫解或HF消除，而Fmoc保護基采用哌啶消除。酯官能團皂化在醇溶劑或二噁烷/水中用LiOH進行，叔丁酯的裂解采用TFA或二噁烷/HCl。
該反應通過DC檢測，一般使用如下的展開劑A. DCM/MeOH 95∶5B. DCM/MeOH 9∶1C. DCM/MeOH 8∶2D. DCM/MeOH/50％HOAc 40∶10∶5E. DCM/MeOH/50％HOAc 35∶15∶5F. 環(huán)己烷/EA 1∶1如果提及通過柱色譜分離，則該分離使用上述展開劑在硅膠上進行。
反相HPLC分離用乙腈/水和HOAc緩沖液進行。
可以通過以下方法制備起始化合物。
用于烷基化反應的構件A的例子為α-溴代乙酸叔丁酯、α-溴代乙酸金剛烷酯、b-溴代丙酸叔丁酯、α-溴代丙酸叔丁酯、α-溴代丁酸叔丁酯、α-溴代乙酸2，3-二甲基-2-丁酯、THP保護的溴代乙醇、N-叔丁基-α-溴乙酰胺和N，N-二乙基-α-溴乙酰胺。如果不能購買到所述叔丁基酯，可通過與G.Uray，W.Lindner，Tetrahedron，44，1988 4357-4362相似的方法制備。如果購買不到溴乙酸酯，可以利用溴乙酰溴與適宜的醇在加入堿吡啶下的反應來制備它。
B構件在文獻中提供了很多的關于氨基酸一般的及特定的合成的可能性。特別是Houben-Weyl，E16d冊/第一部分，406頁往后提供了一個綜述。
通常使用的原料為二苯酮亞胺乙酸乙酯、乙酰氨基丙二酸二乙酯和異腈乙酸乙酯。
各種甘氨酸和丙氨酸的衍生物，例如，由異腈乙酸乙酯和適當的酮或醛開始制備(見H.-J.Praetorius，J.Flossdorf，M.-R.KulaChem.Ber.1975，108，3079)。
環(huán)辛基甘氨酸、4-異丙基環(huán)已-1-基-丙氨酸、4-甲基環(huán)己-1-基丙氨酸和4-甲基環(huán)己-1-基甘氨酸的合成經相應的2-甲?；被┧嵋阴?U.Schoellkopf和R.Meyer，Liebigs Ann.Chem.1977，1174)由異氰基乙酸乙酯開始，采用各種羰基化合物如環(huán)辛烷酮、2-降冰片酮、1-甲?；饎偼?、1-甲酰基-1-甲基環(huán)己烷、1-甲酰基-4-異丙基環(huán)己烷、1-甲?；?4-甲基環(huán)己烷和4-甲基-環(huán)己烷酮，通過下面的一般方法進行2-甲?；被┧嵋阴サ囊话愫铣煞椒ㄔ?至-10℃，將100mmol異氰基乙酸乙酯的50ml THF溶液滴加到150毫升THF中的100毫摩爾叔丁醇鉀中。在相同溫度下，15分鐘后，加入存在于50毫升THF中的100毫摩爾適當的羰基化合物，將反應混合物的溫度慢慢升至室溫，在旋轉蒸發(fā)器中除去溶劑。將此殘余物與50ml水、100毫升乙酸及100毫升DCM混合，并用DCM萃取產物。用硫酸鈉干燥DCM相，在旋轉蒸發(fā)器中除去溶劑。所得產物幾乎是純品，但如果需要，可進一步通過硅膠柱色譜(流動相乙醚/石油醚混合物)純化。
由2-甲?；被┧嵋阴ラ_始合成氨基酸鹽酸鹽的一般方法將100毫摩爾2-甲?；被┧嵋阴ピ?00毫升冰酯酸中用Pd/C(10％)和氫氣氫化至反應完全。然后，濾出催化劑，在旋轉蒸發(fā)器中盡可能除去乙酸，并將此殘余物在200毫升半濃的鹽酸中回流5小時。在旋轉蒸發(fā)器中除去鹽酸，并將該產物在50℃下減壓干燥，然后用乙醚洗滌幾次。所得鹽酸鹽為灰色結晶。
由18.9g(150mmol)環(huán)辛酮得到25.0g環(huán)辛基甘氨酸鹽酸鹽。由16.5g(150mmol)2-降冰片酮開始得到26.6g 2-降冰片基甘氨酸鹽酸鹽。由19.7g(120mmol)1-甲?；饎偼榈玫?6.0g金剛烷基丙氨酸鹽酸鹽。由12.6g(100mmol)1-甲?；?1-甲基環(huán)己烷開始得到16.6gg-甲基環(huán)己基丙氨酸鹽酸鹽。用16.8g(150mmol)4-甲基環(huán)己酮開始得到25.9g 4-甲基環(huán)己基甘氨酸鹽酸鹽。用15g反式-1-甲?；?4-甲基-環(huán)己烷得到18g反式-4-甲基-1-環(huán)己基丙氨酸鹽酸鹽。用9g3，3-二甲基-1-甲?；h(huán)己烷開始得到10g 3，3-二甲基-1-環(huán)己基丙氨酸鹽酸鹽。
合成所需醛1-甲?；?3，3-二甲基環(huán)己烷根據基于Moskal和Lensen(Rec.Trav.Chim.Pays-Bas 106(1987)137-141)的方法制備。
在10分鐘內，在-60℃將在正己烷中的正丁基鋰(72毫升，115毫摩爾)溶液滴加到攪拌的異氰基甲基膦酸二乙酯(17毫升，105毫摩爾)的280毫升無水乙醚溶液中。再將此所得混懸液在-60℃攪拌15分鐘，并在10分鐘內，加入3，3-二甲基環(huán)己酮(13g，105mmol)的100毫升無水乙醚溶液，在此過程中保持溫度在-45℃以下。將此反應混合物的溫度升至0℃并在此溫度攪拌90分鐘后，小心加入150-200毫升38％濃鹽酸水溶液。室溫下將此混合物劇烈攪拌15小時至徹底水解，分離出有機相并用水、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液各200毫升洗滌。用硫酸鎂干燥，過濾并在旋轉蒸發(fā)器中濃縮除去溶劑。將所得殘余物不經進一步純化作為起始物用于氨基酸合成。
環(huán)庚基甘氨酸、環(huán)戊基甘氨酸、4-異丙基環(huán)己基甘氨酸和3，3-二甲基-環(huán)己基甘氨酸的制備按照H.-J.Praetorius(H.-J.Praetorius，J.Flossdorf，M.Kula，Chem.Ber.108(1985)3079)的方法，通過環(huán)庚酮、環(huán)戊酮、4-異丙基環(huán)己酮或3，3-二甲基環(huán)己酮分別與異腈乙酸乙酯反應制備這些氨基酸。
H-D，L-chea-OH的制備將4.0g由環(huán)庚基甲醇和甲磺酰氯制備的甲磺酸環(huán)庚基甲酯(19.39mmol)與4.9g二苯酮亞胺甘氨酸乙酯(18.47mmol)、8.9g干燥的碳酸鉀細粉末(64.65mmol)和1g四丁基溴化銨(3mmol)在50ml干燥的乙腈中在惰性氣體氛下一起回流10小時。然后濾出碳酸鉀，將此濾液蒸發(fā)至干，并將此粗品直接與20ml 2N鹽酸在40毫升乙醇中水解，室溫攪拌1.5小時。將此反應溶液稀釋，然后在酸性條件下用乙酸乙酯萃取二苯酮，隨后在堿性條件下(pH=9)用DCM萃取H-D，L-Chea-OEt，并將此溶液用硫酸鎂干燥并在旋轉蒸發(fā)器中濃縮。得到3.7g產物， 理論收率的95％。
在每種情況下，將所述氨基酸通過常規(guī)方法在水/二噁烷中用二碳酸二叔丁基酯轉變?yōu)锽oc保護的形式，并隨后用乙酸乙酯/己烷混合物重結晶或通過硅膠柱色譜純化(流動相乙酸乙酯/石油醚混合物)。
Boc保護的氨基酸用作方案I中所示的B構件。
某些情況下，所述氨基酸作為構件B也轉變?yōu)橄鄳钠S基酯并連接至適當保護的A構件上。此時，化合物的N-H官能因仍是自由的，隨后用Bog基因保護，通過氫化除去芐基酯基團，并通過結晶、成鹽沉淀或柱色譜純化構件A-B-OH。例如此途徑通過如下用tBuOOC- CH2(Boc)(D)Cha-OH為例子來說明。
D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯的合成將100g(481mmol)D一環(huán)己基丙氨酸鹽酸鹽、104g(962mmol)芐醇和109.7g(577mmol)對甲苯磺酸一水合物在2200毫升甲苯中的懸浮液在水分離器上慢慢加熱至回流。在80-90℃觀察到放出氯化氫以及此懸浮波溶解得到清澈的溶液。當不再有水分離出時(約4小時)，蒸餾出500毫升甲苯，將此反應混合物放置過夜冷卻，濾出所得殘余物并用己烷洗滌兩次，每次1000毫升。然后，將所得殘余物(195g)懸浮于2000毫升二氯甲烷中，加入1000毫升水后，通過邊攪拌邊逐步加入50％氫氧化鈉溶液將pH調節(jié)至9-9.5。分離出有機相，用水洗滌兩次，每次用水500毫升，用硫酸鈉干燥并濾出干燥劑，將此濾液濃縮得到115g(94％)標題產物，為淺色油狀物。
N-(叔丁氧羰基亞甲基)-D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯將115g(440mmol)D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯溶解于2000毫升乙腈中，室溫加入607.5g(4.40mmol)碳酸鉀和94.3g(484mmol)溴代乙酸叔丁基酯，并在此溫度將此混合物攪拌3天。濾出碳酸鹽，用乙腈洗滌，將母液濃縮(30℃，20毫巴)，在1000毫升甲基叔丁基醚中回收此殘余物，并用5％檸檬酸和飽和碳酸氫鈉溶液萃取有機相。用硫酸鈉干燥有機相，過濾掉干燥劑并濃縮，所得油狀物(168g)直接用于下一步反應。
N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞甲基)-D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯將如上合成的油狀物(168g，447mmol)溶解于1400毫升乙腈中，加入618g(4.47mmol)碳酸鉀粉和107.3(492mmol)二碳酸二叔丁基酯后，室溫攪拌6天。抽濾掉碳酸鉀，用約1000毫升乙腈洗滌，并濃縮濾液，得到230g所需產物。
N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-D-環(huán)己基丙氨酸環(huán)己基銨鹽將115g N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯溶解于1000毫升純乙醇中并在常壓下在25-30℃在9g 10％Pd/活性炭存在下用氫氣氫化2小時。過濾并在旋轉蒸發(fā)器中除去溶劑得到100g(260mmol)黃色油狀物，將其在1600毫升丙酮中吸收并加熱回流，將熱浴除去，并通過滴液漏斗快速加入27g(273mmol)環(huán)己胺的丙酮溶液。將反應混合物冷卻至室溫結晶出所需的鹽。濾出固體，用200毫升丙酮洗滌，為了最終純化再用丙酮結晶一次。在約30℃真空箱中將此殘余物干燥，得到70.2g所需鹽，為白色粉末。
N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞甲基)-D-環(huán)己基甘氨酸環(huán)己基銨鹽以相似的方法由環(huán)己基甘氨酸為原料制備。
N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞乙基)-D-環(huán)己基丙氨酸環(huán)己基銨鹽a)3-溴代丙酸叔丁基酯將16.64g(109mmol)溴代丙酸、150毫升濃的2-甲基丙烯和2毫升濃硫酸在-30℃氮氣流下加入適用于高壓釜的玻璃容器中，密封并室溫攪拌72小時。為了處理，將反應容器再次冷卻至-30℃，并將此溶液小心地倒入200毫升冰冷的飽和碳酸氫鈉溶液中。攪拌下讓過量的2-甲基丙烯蒸發(fā)掉，每次用50毫升二氯甲烷萃取此殘余物，萃取3次，用硫酸鈉干燥合并的有機相，濾出干燥劑，并在水抽真空下將此溶液濃縮。將此油狀殘余物通過柱色譜(流動相正己烷，然后用正己烷/乙醚9∶1)純化，得到18.86g標題化合物。
b)N-(叔丁氧羰基亞乙基)-D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯將49.4g(189mmol)D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯溶解于250ml乙腈中，室溫加入31.6g(151mmol)溴代丙酸叔丁基酯后，回流5天。濾出所得沉淀并用乙腈洗滌幾次，水泵抽真空下將此濾液濃縮，在350毫升二氯甲烷中回收此殘余物，并用5％檸檬酸和飽和碳酸氫鈉溶波萃取此有機相。將此有機相用硫酸鈉干燥，濾出干燥劑并濃縮。將此油狀殘余物通過柱色譜(流動相二氯甲烷，而后用二氯甲烷/甲醇95∶5)純化。得到稍不純的油狀物并直接用于下一步反應。
c)N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞乙基)-D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯上步合成獲得的油狀物(30g，最多70mmol)溶解于150毫升乙腈中，加入28ml(160mmol)二異丙基乙胺和19.2g(88mmol)二碳酸二叔丁基酯后，室溫攪拌3天。在水泵抽真空下將此反應混合物在旋轉蒸發(fā)器中濃縮，在正己烷中回收此殘余物并用3ml 5％檸檬酸洗滌，共洗滌5次，用硫酸鈉干燥合并的有機相，濾出干燥劑，并將此殘余物濃縮后進行柱色譜分離(流動相己烷/乙酸乙酯95∶5)。得到32.66g(64mmol)所需產物。
d)N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞乙基)-D-環(huán)己基丙氨酸環(huán)己基銨鹽將32.66g(64mmol)N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞乙基)-D-環(huán)己基丙氨酸芐基酯溶解于325毫升純乙醇中并在常壓下在25-30℃在3g10％Pd/活性炭存在下用氫氣氫化14小時。用Celite將此溶液過濾，用乙醇洗滌并在旋轉蒸發(fā)器中除去溶劑得到26.7g黃色油狀物，將其在丙酮中回收并加熱回流，將熱浴除去，并通過滴液漏斗快速加入7g(70mmol)環(huán)己胺的丙酮溶液。將反應混合物冷卻至室溫結晶出所需的鹽。濾出固體，用25毫升丙酮洗滌，為了最終純化再用丙酮結晶一次。在約30℃真空箱中將此殘余物干燥，得到26.6g(54mmol)所需鹽，為白色粉末。
N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨?；?3，4-脫氫脯氨酸a)將N-Boc-Pyr-OH(5g，23.45mmol)溶解于甲醇(50毫升)中并加入存在于二噁烷中的HCl(4N，30ml)?；亓?2小時后，在旋轉蒸發(fā)器中除去溶劑并得到產物H-Pyr-OMe鹽酸鹽。產率3.84g(100％)。
b)在-10℃，將N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-OH(8g，20.75mmol)溶解于二氯甲烷(75毫升)中，加入乙基二異丙基胺(15.5ml，89.24mmol)。在此溫度下攪拌5分鐘后，滴加H-Pyr-OMe鹽酸鹽(3.4g，20.75mmol)的二氯甲烷(25毫升)溶液。再滴加丙烷膦酸酐的乙酸乙酯(50％，20ml，26.96mmol)溶液，并將此混合物在-10至0℃攪拌2小時。用二氯甲烷稀釋此混合物并用飽和碳酸氫鈉溶液(2×80毫升)、5％檸檬酸溶液(2×15毫升)和飽和氯化鈉溶液(1×20毫升)洗滌。用硫酸鈉干燥有機相，并在旋轉蒸發(fā)器中除去溶劑。將此粗產物通過快速色譜純化(硅膠，二氯甲烷/甲醇＝95/5)。產率＝6.2g(60％)。
c)將N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OMe(5.5g，11.12mmol)溶解于二噁烷(40毫升)中，加入氫氧化鈉溶液(1N，22.2ml，22.24mmol)后，室溫攪拌2小時。在旋轉蒸發(fā)器中除去二噁烷，用乙酸乙酯洗滌水相并用硫酸氫鉀溶液(20％)酸化至pH＝1-2。用二氯甲烷萃取水相，并用硫酸鈉干燥合并的有機相。得到5g(94％)無色泡沫。用以水飽和的正己烷重結晶得到無色結晶(m.p.＝158-160℃)。
N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基甘氨酰基-3，4-脫氫脯氨酸此化合物由N-Boc-N-(叔丁氧羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基甘氨酸和3，4-脫氫脯氨酸甲酯以類似方式制備。
作為D構件的(L)3，4-脫氫脯氨酸是可以購買到的，而(D，L)-4，5-脫氫-2-哌啶酸可通過A.Burgstahler，C.E.Aiman，J.Org.Chem.25(1960)489或C.Herdeis，W.Engel Arch.Pharm.326(1993)，297的方法制備并隨后用(Boc)2O轉變?yōu)锽oc-(D，L)-Dep-OH。
3-(6-氰基)吡啶甲基胺的合成如在WO 96/25426和WO 96/24609中所述。
3-(6-氰基)吡啶甲基胺該組分的制備按照WO 96/25426和WO 96/24609所述進行。
實施例1N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺用1.3g的濃氨水處理在50ml乙醇中的1.22g(17.6mmol)的鹽酸羥胺，攪拌30分鐘。抽濾出沉淀物(氯化銨)。然后往羥胺乙醇溶液中加入4.3g(8.9mmol)的N-(叔-丁氧羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰-(6-氰基-3-吡啶甲基)酰胺(WO 96/25426，實施例93，步驟a)，將其室溫下放置1小時。根據DC(展開劑二氯甲烷/乙醇＝9∶1或二氯甲烷/甲醇/濃氨水＝45∶5∶0.3)，不再檢測到起始物質。在真空蒸餾掉溶劑以后，將殘留物溶于100ml的二氯甲烷中，用水和碳酸氫鈉水溶液洗滌該溶液，并在硫酸鈉上干燥。在濃縮之后，留下4.1g(87％)的無定形殘留物。
FAB-MS(M+H+)529實施例2N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽將3.5g(6.6mmol)的N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)-酰胺(參見實施例1)溶于15ml的二氯甲烷，用25ml 4N的處在二噁烷中的氯化氫溶液處理，并在室溫下靜置過夜。在真空蒸餾掉溶劑以后(在結束時加入甲苯)，用二乙醚多次浸煮該無定形殘留物。干燥后，剩余3.1g(理論值的90％)白色無定形粉末。
FAB-MS(M+H+)473實施例3N-(乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺將2.5g(5.3mmol)的N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)溶于50ml的干燥乙醇中，用3ml處在二噁烷中的4N的HCl溶液處理，回流4小時并在室溫下靜置2天。
在35℃的浴溫度下真空蒸餾掉溶劑之后，用二乙醚多次浸煮該殘留物，然后在乙酸乙酯中處理并用飽和的碳酸氫鈉溶液提取。在硫酸鈉上干燥有機相，采用柱色譜法(洗脫劑二氯甲烷/乙醇＝9∶1，結束時為4∶1)純化殘留物。在蒸餾掉溶劑之后，剩余1.85g(理論值的70％)的白色無定形粉末。
FAB-MS(M+H+) 501實施例4N-(甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例3類似地制備，在用柱色譜法(洗脫劑二氯甲烷/甲醇＝9∶1)對殘留物進行純化之前，已用乙醚浸煮的殘余物首先溶于甲醇中，然后通過離子交換劑將其轉化為乙酸鹽。
FAB-MS (M+H+) 487實施例5N-(異丙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例3類似地制備，將起始物質N-(羥基羰基亞甲基)-(D)環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)溶于異丙醇中并引入氯化氫。其處理和純化的進行與實施例4類似。
FAB-MS (M+H+) 515實施例6N-(芐氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似地由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)和芐醇制備。
FAB-MS (M+H+) 563實施例7N-(乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[(6-脒基)-3-吡啶甲基酰胺]鹽酸鹽。
將HO2C-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-am)-pico(4.93g，10mmol；制備WO96/25426，實施例93)溶于60ml的乙醇，用乙醚(4.5N，15ml)中的HCl處理，并在60℃下攪拌6小時。根據DC(二氯甲烷/甲醇/乙酸(在水中的濃度50％)35/15/7)，該轉化仍未完成，進一步往該混合物中加入25ml的4.5N的乙醚中的HCl和50ml的乙醇，并在60℃下再攪拌5小時。在旋轉蒸發(fā)器中真空濃縮反應混合物以后，多次與乙醇和乙醚共蒸餾以除去附帶的鹽酸。然后在少量的丙酮/二氯甲烷中攪拌洗滌該產物，抽濾出殘留物并真空干燥。得到5.4g標題化合物，為白色吸濕性固體物質。
FAB-MS(M+H+)485實施例8N-(甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[(6-脒基)-3-吡啶甲基酰胺)鹽酸鹽該化合物與實施例7類似通過HO2C-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-am)-pico與甲醇的酯化而制得。
FAB-MS (M+H+) 471實施例9N-(正丙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[(6-脒基)-3-吡啶甲基酰胺]鹽酸鹽該化合物與實施例7類似通過HO2C-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-am)-pico與正丙醇的酯化而制得。
FAB-MS (M+H+) 499實施例10N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基-脒基-3-吡啶甲基)酰胺a)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-氨基硫代羰基-3-吡啶甲基)酰胺將t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico(WO 96/25426，實施例93，步驟b)與硫化氫在吡啶/三乙胺中反應得到相應的硫代酰胺t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CSNH2)-pico(根據WO 96/25426，實施例93，步驟c)。
b)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-S-甲基亞氨基硫代羰基-3-吡啶甲基)-酰胺氫碘酸鹽類似于WO 96/25426，實施例93，步驟d，由a)得到的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CSNH2)-pico與碘甲烷反應得到t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI。
c)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺將O-甲基羥胺鹽酸鹽(0.9g，8.1mmol)溶于30ml的甲醇中并通過離子交換劑(Fluka聚合物載體上的乙酸鹽，3.0mmol乙酸鹽每g)轉化成對應的乙酸。往該甲醇溶液中加入t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI(4.8g，6.2mmol；參見b)，并在室溫下將反應混合物攪拌過夜。真空濃縮之后，在200ml的乙酸乙酯中處理殘留物，用每次30ml的水洗滌三次，用每次20ml的20％濃度的硫酸氫鈉溶液洗滌兩次，并用30ml的飽和氯化鈉溶液洗滌一次，然后通過柱色譜法在硅膠上純化，分離出0.9g的期望產物。
d)N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺根據c)得到的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(NHOCH3))-pico(0.9g，0.7mmol)溶于10ml的無水二噁烷中，冷卻至0℃并用5ml 4N的二噁烷中的HCl溶液處理。在室溫下在隔絕濕氣下攪拌該混合物6小時，然后將其溶于水中，通過乙酸鹽交換劑法進行鹽交換并冷凍干燥含水相。得到0.38g的標題化合物，為白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 487
實施例11N-(甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺用4N的處在二噁烷中的HCl溶液處理處在甲醇中的1.5g(2.9mmol)的N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺(見實施例10d)溶液，并在室溫下攪拌2天。將其濃縮，殘留物用二乙醚共餾兩次以除去過量的酸，并采用柱色譜法將殘留產物純化。
FAB-MS (M+H+) 501實施例12N-(異丙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例11類似通過N-(甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺(見實施例10d)與異丙醇的酯化而制備。
FAB-MS (M+H+) 529實施例13N-(正辛氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與正辛醇制備。
FAB-MS (M+H+) 585實施例14N-(c-己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例3類似由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與環(huán)己醇制備。
FAB-MS (M+H+) 555實施例15N-(新戊氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例3類似由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與新戊醇制備。
FAB-MS (M+H+) 543實施例16N-(甲氧基乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與乙醇單甲醚制備。
FAB-MS (M+H+) 531實施例17N-(O-甲基二乙氧基氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)已基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與二甘醇單甲醚制備。
FAB-MS (M+H+) 575
實施例18N-(環(huán)己基甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與環(huán)己基甲醇制備，濾出用乙醚浸煮的殘留物并用反相HPLC法純化。
FAB-MS (M+H+) 569實施例19N-(環(huán)辛氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與環(huán)辛醇制備。由于采用洗脫劑二氯甲烷/甲醇＝9∶1的柱色譜法純化失敗，采用MPLC(硅膠)進行另一種純化(洗脫劑∶乙酸乙酯)得到的標題化合物為白色粉末FAB-MS (M+H+) 583實施例20N-(反-4-甲基環(huán)己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與反-4-甲基環(huán)己醇制備。由于采用洗脫劑二氯甲烷/甲醇＝9∶1和95∶5的柱色譜法純化失敗，采用MPLC(硅膠)進行第三種純化(洗脫劑∶乙酸乙酯)得到的標題化合物為白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 569
實施例21N-(正己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與正己醇制備。在硅膠上進行柱色譜法純化(MPLC；洗脫劑乙酸乙酯/正己烷＝7∶3)。
FAB-MS (M+H+) 557實施例22N-(環(huán)戊氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與環(huán)戊醇制備。在硅膠上進行柱色譜法純化(MPLC；洗脫劑乙酸乙酯/正己烷＝1∶1)。
FAB-MS (M+H+) 541實施例23N-(4-甲氧基環(huán)己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例4類似，由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(見實施例2)與4-甲氧基環(huán)己醇制備。在硅膠上進行柱色譜法純化(MPLC；洗脫劑乙酸乙酯/甲醇＝99∶1，每分鐘增大甲醇的比率0.1％)。得到的標題化合物為正/反式混合物(根據HPLC，兩種異構體的比率為29∶71)。
FAB-MS (M+H+) 585實施例24N-(1，1，2-三甲基丙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺a)溴乙酸1，1，2-三甲基丙基酯室溫下將3.5ml(1.1當量)的吡啶和-5℃下將7.9g(39mmol)的溴乙酰溴加到處在20ml的二氯甲烷中的4.0g(39mmol)的2，3-二甲基-2-丁醇溶液。在以強放熱的方式進行的加該溴化物的期間，形成淺色沉淀。在此期間，將溫度升至20℃。室溫下攪拌該混合物1小時，用乙酸乙酯稀釋，并用每次5ml的飽和氯化鈉溶液提取三次。在硫酸鎂上干燥乙酸乙酯相，所得的殘留物不經純化用于下一步的反應。
b)N-(1，1，2-三甲基丙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-氰基-3-吡啶甲基)酰胺-5℃下將30ml 4N處在二噁烷中的HCl溶液加到處在30ml二噁烷中的14.1g(29.3mmol)的BOC-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico的溶液(WO 96/25426，實施例32，步驟d)。室溫下攪拌該混合物3小時并濃縮。在二氯甲烷中處理該殘留物總共三次并再次濃縮以除去過量的鹽酸。在50ml的乙酸乙酯中處理該殘留物和用200ml的二乙醚處理該殘留物以后，沉淀產物。濾出沉淀并用二乙醚洗滌。干燥后，得到12.0g(98％)的鹽酸鹽形式的H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico。
將2.3g(5.5mmol)的H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl溶于20ml二氯甲烷，室溫下用7.6g(54.7mmol)的碳酸鉀處理該溶液并在-5℃下滴加入1.22g(5.5mmol)的溴乙酸1，1，2-三甲基丙基酯。使其回到室溫并攪拌3天。在旋轉蒸發(fā)儀上真空濃縮該反應混合物，置于乙酸乙酯中，用少量的水洗滌該溶液三次并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。干燥有機相并濃縮。殘留物采用MPLC(硅膠)法通過柱色譜法純化(洗脫劑二氯甲烷/甲醇＝9∶1)。得到1.82g(64％)標題化合物，為白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 524c)N-(1，1，2-三甲基丙氧基羰基亞乙基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基-脒基-3-吡啶甲基)酰胺室溫下將0.17g(1.32mmol)二異丙基乙胺和73mg(1.05mmol)羥胺鹽酸鹽加到處在10ml的二氯甲烷中的460mg(0.88mmol)的在b)中得到的化合物。室溫下攪拌該混合物4小時，用二氯甲烷稀釋并用每次5ml的5％濃度的檸檬酸溶液提取兩次。干燥有機相并濃縮。通過柱色譜法，采用反相HPLC純化該殘留物。所得的標題化合物為白色粉末。
FAB-MS(M+H+)557實施例25N-(2-甲基-1，3-二噁烷-5-基氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物的制備與實施例24類似，起始于H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl和2-甲基-1，3-二噁烷-5-醇，在乙腈中進行羥胺的加入并通過在硅膠(MPLC；洗脫劑乙酸乙酯/甲醇＝99∶1，每分鐘增大甲醇的比率0.1％)上的柱色譜法進行純化。所得的標題化合物為白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 573實施例26N-(1-異丙基-2-甲基丙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物的制備與實施例24類似，起始于H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl和2，4-二甲基-3-戊醇，在乙腈中進行羥胺的加入并通過在硅膠(MPLC；洗脫劑∶乙酸乙酯/甲醇＝99∶1，每分鐘增大甲醇的比率0.1％)上的柱色譜法進行純化。所得的標題化合物為白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 571實施例27N-(2-二氫化茚基氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物的制備與實施例25類似，起始于H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl和2-二氫化茚醇。
FAB-MS (M+H+) 589實施例28N-(1-異丁基-3-甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物的制備與實施例25類似，起始于H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl和2，6-二甲基庚-4-醇。
FAB-MS (M+H+) 599實施例29N-(4-氧代-4-(1-吡咯烷基)丁氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺a)4-氧代-4-(1-吡咯烷基)-1-丁醇室溫下攪拌7.1g(82mmol)的γ-丁內酯和11.7g(164.5mmol)吡咯烷的混合物3小時。在旋轉蒸發(fā)儀上盡可能地真空蒸餾掉吡咯烷，將殘留物多次溶于甲苯并再次濃縮以除去殘余的堿。所得的產物不經純化用于以下的反應。
b)溴乙酸4-氧代-4-(1-吡咯烷基)丁酯與實施例24a)類似將a)所得的產物與溴乙酰溴反應，其中4-二甲基氨基吡啶代替吡啶用作堿。
該標題化合物的獲得與實施例24類似的，起始于H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl和b)中制備的溴乙酸4-氧代-4-(1-吡咯烷基)丁酯。
FAB-MS (M+H+) 612實施例30N-[2-(環(huán)己基氨基)-2-氧代乙氧基羰基亞甲基]-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)-酰胺a)N-環(huán)己基-2-羥基乙酰胺100℃下攪拌1.2g(10mmol)的1，4-二噁烷-2，5-二酮與4.0g(40mmol)的環(huán)己胺的混合物3小時。在旋轉蒸發(fā)儀上盡可能地真空蒸餾掉環(huán)己胺，將殘留物多次溶于甲苯并再次濃縮以除去殘余的堿。將所得產物溶于于二乙醚中并滴加入石油醚，沉淀出沉淀物。濾出該沉淀物并將其不經純化用于以下的反應。
b)溴乙酸2-(環(huán)己基氨基)-2-氧代乙酯與實施例24a)類似，將在a)中所得的產物與溴乙酰溴反應，4-二甲基氨基吡啶用作堿代替吡啶。
標題化合物的獲得與實施例24類似，起始于H-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico x HCl和在b)中制備的溴乙酸2-(環(huán)己基氨基)-2-氧代乙酯。
FAB-MS (M+H+) 612實施例31N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?{5-[2-(1，2，4-噁二唑-3-基-5-酮))-吡啶基}甲基酰胺鹽酸鹽
a)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(BOC)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-羥基脒基-3-吡啶甲基)酰胺將11.9g(20mmol)的N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(BOC)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-氰基-3-吡啶甲基)-酰胺(WO96/25426，實施例93，步驟b)、2.78g(40mmol)的羥胺鹽酸鹽和4.65g(36mmol)的二異丙基乙胺溶于100ml的乙醇中，并在55-60℃加熱5小時。真空濃縮該溶液，殘余物置于100ml的乙酸乙酯并用飽和的氯化鈉溶液洗滌該混合物兩次。在干燥和蒸餾掉溶劑以后，剩余11.3g(理論值的90％)淺黃色無定形殘留物。
b)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(BOC)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?{5-[2-(1，2，4-噁二唑-3-基-5-酮)]-吡啶基}甲基酰胺將10.2g(16.2mmol)的上述偕胺肟溶于60ml的吡啶，并在加入2.9g(17.9mmol)的羰基二咪唑之后，回流加熱3小時。真空蒸餾掉吡啶以后，將殘留物置于甲基叔丁醚中，用5％濃度的檸檬酸溶液和最終用飽和的氯化鈉溶液洗滌該溶液。在干燥和蒸餾掉溶劑之后，剩余10g(理論值的94％)的無定形殘留物。
c)N-(羥基羰基亞甲基)(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?{5-[2-(1，2，4-噁二唑-3-基-5-酮)]-吡啶基}-甲基酰胺鹽酸鹽將10g(15.3mmol)的在b)中所得的化合物溶于80ml的冰醋酸中，用處在二噁烷中的80ml 4N的HCl溶液處理，并使其在室溫下靜置過夜。
真空蒸餾掉溶劑(末期加入甲苯)之后，用柱色譜法(洗脫劑∶乙醇/25％濃度的氨水＝50∶2.5)純化該無定形殘留物。將該殘留物溶于水和二噁烷的混合物(比率3∶7)，用一個當量的32％濃度的鹽酸處理，并濃縮至干。用乙腈浸煮該殘留物，然后將其抽濾出來。分離出3.9g(理論值的48％)的白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 499
實施例32N-(甲氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?{5-[2-(1，2，4-噁二唑-3-基-5-酮)]-吡啶基}甲基酰胺鹽酸鹽將1.9g(3.6mmol)的N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?{5-[2-(1，2，4-噁二唑-3-基-5-酮)]-吡啶基}甲基酰胺鹽酸鹽(見實施例31)溶于100ml的甲醇，并在加入10ml的處在二噁烷中的4N HCl溶液下，回流加熱8小時。用乙腈浸煮殘留物，然后將其抽濾出。分離出1.65g(理論值的85％)白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 513實施例33N-(新戊氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺與實施例7類似，該化合物由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(制備WO 9625426，實施例93)和新戊醇制備。FAB-MS(M+H+)527實施例34N-(正己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺與實施例7類似，該化合物由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(制備WO9625426，實施例93)和正已醇制備。FAB-MS(M+H+)541實施例35N-(c-己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺與實施例7類似，該化合物由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(制備WO 9625426，實施例93)和環(huán)己醇制備。FAB-MS(M+H+)539實施例36N-(甲氧基乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺與實施例7類似，該化合物由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(制備WO 9625426，實施例93)和乙二醇單甲醚制備。FAB-MS(M+H+)515實施例37N-(O-甲基二乙氧基氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺與實施例7類似，該化合物由N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-脒基-3-吡啶甲基)酰胺鹽酸鹽(制備WO 9625426，實施例93)和二甘醇單甲醚制備。FAB-MS(M+H+)559實施例38N-(甲氧基乙氧基羰基亞甲基)-(D)環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物制備起始于N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺(見實施例10c)。通過處在二噁烷中的4N HCl溶液和大大過量的乙二醇單甲醚的處理除去保護基并酯基交換/酯化t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(NHOCH3))-pico中的羧基。該化合物的處理和純化的進行與實施例11類似。
FAB-MS (M+H+) 545
實施例39N-(正辛氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物制備起始于N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺(見實施例10c)。
通過處在二噁烷中的4N HCl溶液和大大過量的正辛醇的處理除去保護基并酯基交換/酯化t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(NHOCH3))-pico中的羧基。該化合物的處理和純化的進行與
FAB-MS (M+H+) 599實施例40N-(c-己氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物制備起始于N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-甲氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺(見實施例10c)。通過處在二噁烷中的4N HCl溶液和大大過量的環(huán)己醇的處理除去保護基并酯基交換/酯化t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(NHOCH3))-pico中的羧基。該化合物的處理和純化的進行與實施例11類似。
FAB-MS (M+H+) 569實施例41N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-烯丙氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺a)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-氨基硫代羰基-3-吡啶甲基)酰胺根據WO 96/25426，實施例93，步驟c)，將t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CN)-pico(WO 96/25426，實施例93，步驟b)與處在吡啶/三乙胺中的硫化氫反應得到對應的硫代酰胺t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CSNH2)-pico。
b)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-S-甲基亞氨基硫代羰基-3-吡啶甲基)-酰胺氫碘酸鹽與WO 96/25426，實施例93，步驟d)類似，將由a)得到的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-CSNH2)-pico與碘甲烷反應得到t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI。
c)N-(叔丁氧基羰基亞甲基)-(Boc)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-烯丙氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺將O-烯丙基羥胺鹽酸鹽(0.93g，7.0mmol)溶于20ml的甲醇并采用離子交換劑(Fluka在聚合物載體上的乙酸鹽，3.0mmol的乙酸鹽每g)將其轉化成對應的乙酸鹽。往該甲醇溶液中加入t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI(4.5g，5.8mmol；見b)并在室溫下將該反應混合物攪拌過夜。真空濃縮后，將殘留物置于乙酸乙酯中，用每次30ml的水洗滌三次，用每次20ml的20％濃度的硫酸氫鈉溶液洗滌兩次，并用30ml飽和氯化鈉溶液洗滌一次，然后采用在硅膠上的柱色譜法進行純化，分離出2.1g的期望產物。
d)N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-(6-烯丙氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺將在c)中得到的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(NHO-烯丙基)-pico(2.1g，3.1mmol)溶于5ml的無水二噁烷中，冷卻至0℃，并用5ml的二噁烷中的4N HCl溶液處理。室溫下在隔絕濕氣的情況下攪拌該混合物6小時并濃縮，然后將殘留物溶于水中，通過乙酸鹽交換劑對該溶液進行鹽交換并將含水相冷凍干燥。得到0.69g的標題化合物，為白色粉末。
FAB-MS (M+H+) 513實施例42N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-芐氧基脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物制備與實施例41類似，將在41c)中所得的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI與O-芐羥胺于35℃下反應30分鐘(根據實施例40接受從鹽酸鹽到乙酸鹽的鹽交換)。其處理與實施例41類似。由于通過MPLC(硅膠)采用洗脫劑乙酸乙酯/環(huán)己烷＝1∶1的柱色譜法純化失敗，通過MPLC(洗脫劑乙酸乙酯/環(huán)己烷＝3∶7)進行第二種純化。得到1.5g的標題化合物，為白色粉末。采用處在二乙醚中的HCl溶液除去BOC保護基并水解叔丁酯。
FAB-MS (M+H+) 563實施例43N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-(間甲氧基-芐氧基)脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物制備與實施例41類似，將在41c)中所得的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI與O-(間甲氧基芐基)-羥胺于35℃下反應30分鐘(根據實施例40接受從鹽酸鹽到乙酸鹽的鹽交換)。其處理與實施例41類似。由于通過MPLC(硅膠)采用洗脫劑乙酸乙酯/環(huán)己烷＝1∶1的柱色譜法純化失敗，通過MPLC(洗脫劑乙酸乙酯/環(huán)己烷＝3∶7)進行第二種純化。得到1.5g的標題化合物，為白色粉末。采用處在二乙醚中的HCl溶液除去BOC保護基并水解叔丁酯。
FAB-MS (M+H+) 563
實施例44N-(羥基羰基亞甲基)-(D)環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-(4-氯苯基)己氧基)脒基-3-吡啶甲基]-酰胺該化合物制備與實施例41類似，將在41c)中所得的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI與O-[6-(4-氯苯基)己基]-羥胺于20℃下反應10小時。采用處在二乙醚中的4N HCl溶液除去BOC保護基并水解叔丁酯。
FAB-MS (M+H+)667實施例45N-(乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-(4-氯苯基)己氧基)脒基-3-吡啶甲基)酰胺該化合物可以與實施例11類似，通過在處于二噁烷的4N HCl溶液中用乙醇酯化N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-(4-氯苯基)己氧基)-脒基-3-吡啶甲基)酰胺(實施例44)而制備。
FAB-MS (M+H+)695實施例46N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-(對甲基-芐氧基)脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物制備與實施例43類似，將在41c)中所得的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI與O-(對甲基芐基)-羥胺反應。采用處在二噁烷中的4N HCl溶液除去BOC保護基并水解叔丁酯。
FAB-MS (M+H+)577實施例47N-(乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?(6-(對甲基芐氧基)脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物可以與實施例11類似，通過在處于二噁烷的4N HCl溶液中用乙醇酯化N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-[6-(對甲基-芐氧基)脒基-3-吡啶甲基]酰胺(實施例46)而制備。
FAB-MS (M+H+)605實施例48N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-苯氧基脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物制備與實施例43類似，在兩個當量的二異丙基乙胺的存在下，將在41c)中所得的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI與O-苯基羥胺鹽酸鹽反應。采用處在二噁烷中的4N HCl溶液除去BOC保護基并水解叔丁酯。
FAB-MS (M+H+)549實施例49N-(乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-[6-苯氧基脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物可以與實施例11類似，通過在處于二噁烷的4N HCl溶液中用乙醇酯化N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-苯氧基脒基-3-吡啶甲基]酰胺(實施例48)而制備。
FAB-MS (M+H+)577實施例50N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-[6-異戊氧基脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物制備與實施例43類似，在六個當量的二異丙基乙胺的存在下，將在41c)中所得的產物t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-NH-3-(6-C＝NH(SCH3))-pico x HI與O-異戊基羥胺鹽酸鹽反應。采用處在二乙醚中的HCl溶液除去BOC保護基并水解叔丁酯。
FAB-MS (M+H+)543實施例51N-(乙氧基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨酰基-[6-異戊氧基脒基-3-吡啶甲基]酰胺該化合物可以與實施例11類似，通過在處于二噁烷中的4N HCl溶液中用乙醇酯化N-(羥基羰基亞甲基)-(D)-環(huán)己基丙氨酰-3，4-脫氫脯氨?；?[6-異戊氧基脒基-3-吡啶甲基]酰胺(實施例50)而制備。
FAB-MS (M+H+)57權利要求
1.式I的化合物 其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R1OOC-C(CH3)2-、HO-CH2-CH2-、R2R3N(O)C-CH2-、R2R3N-O-CO-CH2-、R2N(OH)-CO-CH2-，其中R2和R3相互獨立地為H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，或芐基，或者R2和R3共同形成C4-C6-亞烷基鏈，其中R1為H-、C1-C16-烷基-、H3C-[O-CH2-CH2]q(q＝1-4)、C10-三環(huán)烷基-、C10-三環(huán)烷基-CH2-、C3-C8-環(huán)烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，其中，苯環(huán)可以稠合到環(huán)烷基環(huán)，吡喃基-、哌啶基-、芳基-或苯基-C1-C3-烷基-，其中，除了H，所述的所有基團可任選攜帶至多4個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、NO2、HO或C1-C4-烷氧基的基團；或者R1為2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基-甲基-，它可以在5-位被C1-C16-烷基或芳基取代；或者R1為R4-C(O)OC(R5)2-，R4-C(O)NR2-C(R5)2-，其中R4可以是C1-C4-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-、C1-C4-烷氧基-、C3-C8環(huán)烷基-C1-C3-烷氧基-、C3-C8-環(huán)烷氧基-、芳基-或苯基-C1-C6-烷基-、兩個R5基團相互獨立地是H、CH3或C2H5，而R2具有以上所示的含義，R6OOC-C1-C6-烷基-，R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6R7N-C2-C6-烷基-，其中R6和R7相互獨立地為H或C1-C6-烷基-，或者如果R1為R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6和R7共同形成C4-C6-亞烷基鏈，或者A為C1-C4-烷基-SO2-(CH2)2-6-、HO3S-(CH2)4-6-、5-四唑基-(CH2)1-6-、C1-C4-烷基-O-(CH2)2-6-、R2R3N-(CH2)2-6-、R2S-(CH2)2-6-、R2R3NSO2-(CH2)2-6-、HO-(CH2)2-6-，B為 p為0、1、2R8為H-、R10OOC-，其中R10＝C1-16-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、苯基-C1-C4-烷基-、R11C(O)-O-CH2-、R11C(O)-O-CH(CH3)-、其中，R11可以是C1-C4-烷基-、苯基-、芐基-、C3-C8-環(huán)烷基-或環(huán)己基-CH2-，R9為C3-8-環(huán)烷基-，它可以攜帶至多四個相同或不同的C1-4-烷基，D為 G為-H、-OH、-OR12，其中，R12為-C1-8-烷基、-C3-C8-環(huán)烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它們任選攜帶至多三個C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、或C1-C4-烷氧基；K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，它們的構型異構體、互變構型體和它們與生理學上可耐受的酸的鹽，其中適用以下規(guī)則(i)如果G＝-H、-OH、-OR12，其中R12為-C1-C8-烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它任選攜帶至多3個C1-C4-烷基、CF3、F、Cl或C1-C4-烷氧基的基團，K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，然后A和B具有以下含義AR1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R1OOC-C(CH3)2-、HO-CH2-CH2-、R2aR3aN(O)C-CH2-、R2R3N-O-CO-CH2-、R2N(OH)-CO-CH2-，其中R2和R3相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基，或R2和R3共同形成C4-C6-亞烷基鏈，R2a等于H而R3a為C5-C8-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基；其中，R1為C5-C16-烷基-、H3C-[O-CH2-CH2]q(q＝1-4)、C10-三環(huán)烷基-、C10-三環(huán)烷基-CH2-、C3-C8-環(huán)烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，其中苯環(huán)可以稠合到環(huán)烷基環(huán)，吡喃基-、哌啶基-或芳基-，其中，除了H，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、NO2、HO或C1-C4-烷氧基的基團；或者R1為2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基-甲基-，它可以在5-位被C1-C16-烷基或芳基取代；或者R1為R4-C(O)O-C(R5)2-，R4-C(O)NR2-C(R5)2-，其中R4可以是C1-C4-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-、C1-C4-烷氧基-、C3-C8環(huán)烷基-C1-C3-烷氧基-、C3-C8-環(huán)烷氧基-、芳基-或苯基-C1-C6-烷基-、兩個R5基團相互獨立地是H、CH3或C2H5，而R2具有以上所示的含義，R6OOC-C1-C6-烷基-，R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6R7N-C2-C6-烷基-，其中R6和R7相互獨立地是H或C1-C6-烷基，或者如果R1為R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6和R7共同形成C4-C6-亞烷基鏈；或者A為C1-C4-烷基-SO2-(CH2)2-6-、HO3S-(CH2)4-6-、5-四唑基-(CH2)1-6-、C1-C4-烷基-O-(CH2)2-6-、R2R3N-(CH2)2-6-、R2S-(CH2)2-6-、R2R3NSO2-(CH2)2-6-、HO-(CH2)2-6-，B為 p為0、1、2R8為H-、R10OOC-，其中R10＝C1-16-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、苯基-C1-C4-烷基-、R11C(O)-O-CH2-、R11C(O)-O-CH(CH3)-、其中，R11可以是C1-C4-烷基-、苯基-、芐基-、C3-C8-環(huán)烷基-或環(huán)己基-CH2-，R9為C3-8-環(huán)烷基-，它可以攜帶至多四個相同或不同的C1-4-烷基；或(ii)如果G＝-OR12，其中R12為-C5-C8-烷基、-C3-C8-環(huán)烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它任選攜帶至多3個C1-C4-烷基、CF3、F、Cl或C1-C4-烷氧基，K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團，然后A和B具有以下含義AR1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R1OOC-C(CH3)2-、R2aR3aN(O)C-CH2-，其中R2a和R3a相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基，或R2a和R3a共同形成C4-C6-亞烷基鏈，其中，R1為H-、C1-C4-烷基-或苯基-C1-C4-烷基-，其中除了H以外，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自C1-C4-烷基、CF3、F、Cl、NO2、HO或C1-C4-烷氧基的基團，B、p和R8、R9、R10與R11具有在i)中所表示的含義。
2.權利要求1的式I的化合物，其中在i)中，其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-其中，R1為C5-C16-烷基-、H3C-[O-CH2-CH2]q(q＝1-4)、C10-三環(huán)烷基-、C10-三環(huán)烷基-CH2-、C3-C8-環(huán)烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-C1-C3-烷基-，其中苯環(huán)可以稠合到環(huán)烷基環(huán)，吡喃基-或哌啶基-，其中，除了H，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自CH3、CF3、F、Cl、HO或甲氧基的基團；或者R1為2-氧代-1，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基-甲基-，它可以在5-位被C1-C3-烷基或芳基取代；或者R1為R4-C(O)OC(R5)2-，其中R4可以是C1-C4-烷基-、C3-C8-環(huán)烷基-、C1-C4-烷氧基-、C3-C8環(huán)烷基-C1-C3-烷氧基-、C3-C8-環(huán)烷氧基-或芳基-，兩個R5基團相互獨立地是H、CH3或C2H5，R6OOC-C1-C6-烷基-，R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6R7N-C2-C6-烷基-，其中R6和R7相互獨立地是H或C1-C6-烷基-，或者如果R1為R6R7N(O)C-C1-C6-烷基-，R6和R7共同形成C4-C6-亞烷基鏈，B為 p為0、1，R8為H-、R10OOC-，而R10＝C1-8-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、苯基-C1-C4-烷基-，R9為C3-C8-環(huán)烷基-，它可攜帶至多4個相同或不同的C1-4烷基-，D＝(II)而G＝-H、-OH、-O-C1-8-烷基-，K為H或者G和K共同形成-C(O)O-基團。
3.權利要求1的式I的化合物，其中在ii)中，其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-、R2aR3aN(O)C-CH2-，其中R2a和R3a相互獨立地是H、C1-C6-烷基、C3-C8-環(huán)烷基或芐基，或者R2a和R3a共同形成C4-C6-亞烷基鏈，其中，R1為H-、C1-C4-烷基-或苯基-C1-C4-烷基-，其中除了H以外，所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自CH3、CF3、F、Cl、HO或甲氧基的基團，P為0，1，B為 p為0、1R8為H-、R10OOC-，而R10＝C1-16-烷基-、苯基-、C3-C8-環(huán)烷基-、芐基-，而R9具有在ii)中所示的含義。D＝(II)G＝-OR12，其中，R12為-C5-C8-烷基、-C3-C8-環(huán)烷基、-C1-C3-烷基-C3-C8-環(huán)烷基、-芳基或-C1-C6-烷基苯基，它任選攜帶至多3個CH3-、CF3-、F-、Cl-、或甲氧基，K為H，或者G和K共同形成-C(O)O-基團。
4.權利要求1的式I的化合物，其中A、B、D、G和K具有以下含義A為R1OOC-CH2-、R1OOC-CH2-CH2-、R1OOC-CH(CH3)-，其中，R1為C5-C10-烷基-、C4-C7-環(huán)烷基-、C4-C7-環(huán)烷基-CH2-，其中所述的所有基團任選攜帶至多4個相同或不同的選自CH3-和甲氧基-的基團。B為 p為0、1，R8為H-，R9為C4-7-環(huán)烷基-，它可攜帶至多4個相同或不同的甲基或乙基，D為 G為-OH，K為H。
5.化合物、其構型異構體、互變異構體及其與生理學上耐受的酸的鹽，選自HOOC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoBnO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoHOOC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH))]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OH)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoEtO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconPrO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-piconBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoiBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picotBuO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(H)]-picoHOOC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(O-Allyl)]-picoH3CO-OC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-3-[6-am-(OCH3)]-picoiPrO-OC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-3-[6-am-(OCH3)]-pico
6.一種藥物，包括常規(guī)賦形劑和助劑以及權利要求1-5之任一所要求的通式I的化合物。
7.權利要求1-5之任一所要求的通式I的化合物用于制備治療和預防凝血酶依賴性血栓栓塞的藥物的用途。
8.權利要求1-5之任一所要求的通式I的化合物用于制備治療和預防以下病癥的藥物的用途-病理機制直接或間接基于凝血酶的蛋白水解作用的疾??；-病理機制基于凝血酶依賴性受體的活化和信息傳導的疾?。?伴隨體細胞中基因表達的刺激或抑制的疾?。?基于凝血酶的致有絲分裂作用的疾??；-基于上皮細胞的凝血酶依賴性收縮性和滲透性的變化的疾病；-凝血酶依賴性血栓栓塞；-彌漫性血管內凝血(DIC)；-用血栓溶解劑進行聯合藥物治療時為了降低再灌注的時間，以及再閉塞；-PTCA后早期再閉塞和晚期再狹窄的出現；-平滑肌細胞的凝血酶依賴性增殖；-在CNS中活性凝血酶的蓄積；-腫瘤生長及防止腫瘤細胞的粘著和轉移。
9.權利要求1-5之任一所要求的通式I的化合物作為前藥用于制備口服或腸胃外給藥的藥物的應用。
10.權利要求1-5之任一所要求的通式I的化合物用于制備這樣的藥物的應用與在每種情況下采用藥理活性化合物制備的相比，改善了胃腸道吸收或在劑量間期內的血漿濃度時間曲線的振幅變平或延長了活性化合物作用的持續(xù)時間。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I的前藥,其含義如說明書所示。描述了這樣的藥理學活性雜環(huán)脒的前藥,在體內由它產生作為胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶,尤其是凝血酶的競爭性抑制劑的化合物,其制備方法及其作為藥物的用途。
文檔編號C07K5/065GK1349526SQ00807009
公開日2002年5月15日 申請日期2000年4月5日 優(yōu)先權日1999年4月9日
發(fā)明者D·鮑克, H·馬克, W·希茨, W·霍恩伯格, G·貝克菲施, J·戴爾澤 申請人:巴斯福股份公司