專利名稱：分離類似的有機(jī)化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分離類似的化合物的方法，更尤其是通過(guò)使用經(jīng)銀離子預(yù)處理過(guò)的含磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂將具有烷基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物與具有鏈烯基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物分離的方法。
作為含磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的適合實(shí)例，可述及的是合成的基質(zhì)(base)或硅膠基質(zhì)，諸如凝膠型樹(shù)脂和可與極性溶劑一起使用但不可和非極性溶劑一起使用的多孔樹(shù)脂；以及極性和非極性溶劑均可與之一起使用的高度多孔樹(shù)脂。這些樹(shù)脂可根據(jù)使用的洗脫劑的極性選擇。
含有磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以是在末端具有苯磺酸基團(tuán)的含苯磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。例如，樹(shù)脂可以是苯乙烯單體和二乙烯基苯(DVB)的共聚物基質(zhì)或硅膠基質(zhì)。
作為含有苯磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，即，苯乙烯單體和DVB的磺化共聚物的例子，可述及的是Diaion(SK系列，RCP系列，HPK系列，PK系列如PK206)(商標(biāo)，由日本的Mitsubishi化學(xué)公司生產(chǎn))、Amberlite(IR120B，IR200)和Duolite(C20，C26)(商標(biāo)，由Rohm&Haas公司生產(chǎn))、Dowex(50W-X8，MSC-1)(商標(biāo)，由陶氏化學(xué)公司生產(chǎn))、Ionac(C-240)(商標(biāo)，由Sybron化學(xué)公司生產(chǎn))和Lewatit(S-100，SP系列)(商標(biāo)，由拜耳公司生產(chǎn))。
作為具有硅膠作為基質(zhì)的含苯磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的例子可述及的是以含苯磺酸基團(tuán)的硅氧烷聚合物涂覆的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，諸如Capcell Pak(SCX系列)(商標(biāo)，由日本的Shiseido有限公司生產(chǎn))，其基質(zhì)被硅氧烷聚合物的薄膜所涂覆，然后在其末端引入磺酸基團(tuán)。
在這些含有苯磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中，特別優(yōu)選Diaion(RCP系列和PK系列)和Capcell Pak(SCX系列)。
可用于預(yù)處理含有磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的銀離子可優(yōu)選由可在水中產(chǎn)生銀離子的各種銀鹽提供，諸如硝酸銀、高氯酸銀等。
含有磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可用銀離子預(yù)處理，方法是，如果樹(shù)脂是H型的，就使銀鹽的水溶液通過(guò)之，或者如果是Na型的，就將其轉(zhuǎn)化為H型，用水洗滌，調(diào)節(jié)到pH值3-4，并使銀鹽的水溶液通過(guò)之。這種使用銀離子的預(yù)處理優(yōu)選通過(guò)將銀鹽裝料成1mol/L-R或更高來(lái)進(jìn)行。
本發(fā)明的提純方法可通過(guò)下列步驟進(jìn)行。
(i)混合物，即，待分離的含有“具有烷基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物”和“具有鏈烯基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物”的原料，可將其溶解于適合的溶劑中，諸如丙酮等，并且加料到填充了用銀離子預(yù)處理過(guò)的含有磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的柱色譜中。
(ii)并且，可用適當(dāng)?shù)南疵搫┤绫?、乙酸乙酯與甲醇的混合物等進(jìn)行洗脫。
使用經(jīng)銀離子預(yù)處理過(guò)的含磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的分離方法可通過(guò)固定床體系或連續(xù)床體系進(jìn)行。從操作方法而言，固定床體系包括單床體系、多床體系、雙床體系、混合床體系、離子交換過(guò)濾體系、循環(huán)體系等。從再生方法而言，固定床體系包括下流式再生體系、上流式再生體系、逆流上流式(countercurrent ascendingflow)再生體系、逆流再生體系、無(wú)塔(ex-column)再生體系等。另外，連續(xù)床體系包括流化床體系(逆流接觸體系、多級(jí)間歇式體系)、移動(dòng)床體系(上行型(單塔型、多塔型)、下行型(單塔型、多塔型)、模擬移動(dòng)床體系、環(huán)形帶體系(液-液萃取體系))等，其中模擬移動(dòng)床體系有效并適合大量生產(chǎn)。
于本發(fā)明的分離方法適用的含內(nèi)酯的高分子量化合物是指在分子內(nèi)具有至少一個(gè)內(nèi)酯環(huán)并且分子量約400或更高的化合物。它們可以是單環(huán)的、雙環(huán)的、三環(huán)的等。更優(yōu)選它們由12或更多原子構(gòu)成。這類單環(huán)化合物包括紅霉素、柱晶白霉素、酒霉素等。這類三環(huán)化合物包括具有內(nèi)酯環(huán)的化合物，諸如EP0184162中所述的三環(huán)化合物；EP0427680、EP0532088或WO93/04680中所述的含有雜原子的三環(huán)化合物。最優(yōu)選的是1，14-二羥基-12-[2-(4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧雜-4-氮雜三環(huán)[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。被作為側(cè)鏈的烷基或鏈烯基取代的最優(yōu)選的位置是其17位，并且當(dāng)17位被烯丙基取代時(shí)為他克莫司，而在被乙基取代時(shí)為子囊霉素。此外，適合的例子還有rapamysin等。
作為含內(nèi)酯的高分子量化合物的烷基側(cè)鏈，可述及的是碳原子數(shù)為1-6的直鏈或支鏈烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基等，其中優(yōu)選碳原子數(shù)為1-4的烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基和異丁基。
作為與上述化合物具有共同基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)的含內(nèi)酯的高分子量化合物的鏈烯基側(cè)鏈，可述及的是碳原子數(shù)為2-6的直鏈或支鏈鏈烯基，諸如乙烯基、丙烯基(烯丙基或1-丙烯基)、丁烯基、異丁烯基、戊烯基、己烯基等，其中優(yōu)選乙烯基和丙烯基。待分離的物質(zhì)的制備將含有1％玉米淀粉、1％甘油、0.5％葡萄糖、1％的棉籽粉、0.5％干酵母、0.5％玉米漿和0.2％碳酸鈣的培養(yǎng)基(100mL)調(diào)節(jié)到pH值6.5，傾入八個(gè)500mL錐形瓶中，并在120℃滅菌30分鐘。將一鉑環(huán)量的Streptomyces tsukubaensis No.9993(根據(jù)布達(dá)佩斯條約，在the National Institute of Bioscience and HumanTechnology，Agency of Industrial Science and Technology，Japan的保藏編號(hào)為No.FERM BP-927)的斜面培養(yǎng)物接種到每個(gè)瓶中的培養(yǎng)基上，并且在旋轉(zhuǎn)式搖床上在30℃培養(yǎng)72小時(shí)。該培養(yǎng)物作為種母轉(zhuǎn)移到160L相同的培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基裝在預(yù)先經(jīng)120℃滅菌30分鐘的200L小型發(fā)酵罐中，并且已經(jīng)向其添加了0.05％Adekanol(消泡劑，商標(biāo)，由日本的Asahi Denka公司制造)和0.05％硅氧烷(由日本Shinetsu化學(xué)公司制造)。將其以200rpm攪拌在160升/分鐘的通風(fēng)下在30℃預(yù)培養(yǎng)48小時(shí)。將30L這種預(yù)培養(yǎng)物接種到在4噸罐中的、在120℃預(yù)先滅菌30分鐘、pH值6.8的3000L生產(chǎn)培養(yǎng)基中，其含有3％可溶性淀粉、0.8％小麥胚、0.4％干酵母、0.6％玉米漿、0.1％碳酸鈣、0.05％ Adekanol和0.05％硅氧烷，并且以140rpm攪拌在1500升/分鐘的通風(fēng)下在25℃發(fā)酵168小時(shí)。
將這樣得到的培養(yǎng)液用50kg硅藻土過(guò)濾。菌絲餅用1000L丙酮萃取得到1000L萃取液。從菌絲餅得到的丙酮萃取液和濾液(2700L)合并，并通過(guò)非離子型吸附樹(shù)脂“Diaion HP-20”(商標(biāo)，由日本的Mitsubishi化學(xué)公司制造)柱(200L)。用600L 50％含水丙酮洗滌后，用75％含水丙酮進(jìn)行洗脫。在洗脫液中的溶劑通過(guò)減壓蒸發(fā)除去，得到40L含水殘留物。殘留物用40L乙酸乙酯萃取兩次。減壓濃縮乙酸乙酯萃取液，得到油狀殘留物。將油狀殘留物溶解在正己烷和乙酸乙酯(1∶1，v/v，3L)的混合物中，并進(jìn)行柱色譜處理，色譜使用以相同的溶劑填充的70L硅膠(Merck & Co.，Ltd.制造，70-230目)。
用正己烷和乙酸乙酯(1∶1，v/v，420L和1∶2，v/v，420L)的混合物、210L乙酸乙酯和隨后用210L丙酮相繼進(jìn)行洗脫。收集洗脫體積為從350L至420L(第一洗脫液)、從490L至840L(第二洗脫液)和從980L至1190L(第三洗脫液)的各個(gè)部分。第二洗脫液在減壓下濃縮，并加入丙酮以置換溶劑(50mg/mL)。這樣得到有待用柱色譜分離的原料。


圖1表示通過(guò)使用經(jīng)銀離子預(yù)處理過(guò)的DiaionRCP160M的柱色譜進(jìn)行分離而得到的圖；和圖2表示通過(guò)使用經(jīng)銀離子預(yù)處理過(guò)的Capcell PakSCX的柱色譜進(jìn)行分離而得到的圖。
發(fā)明的最佳實(shí)施方式下面的實(shí)施例僅用于更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。
分離并鑒定出他克莫司、子囊霉素和17-丙基-1，14-二羥基-12-[2-(4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧雜-4-氮雜三環(huán)-[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮(下文稱為化合物A)。
本發(fā)明的分離方法因其重復(fù)性、大規(guī)模適用性和/或其經(jīng)濟(jì)效益而非常有用。因此，本發(fā)明可用于化學(xué)工業(yè)，特別是制藥工業(yè)，其中目標(biāo)化合物的大量生產(chǎn)和純度很關(guān)鍵。
權(quán)利要求
1.通過(guò)使用經(jīng)銀離子預(yù)處理過(guò)的含有磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂將具有烷基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物與具有鏈烯基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物分離的方法，含內(nèi)酯的高分子量化合物具有共同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中含內(nèi)酯的高分子量化合物的共同基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)是三環(huán)化合物。
3.權(quán)利要求2的方法，其中三環(huán)化合物是1，14-二羥基-12-[2-(4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧雜-4-氮雜三環(huán)-[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
4.權(quán)利要求3的方法，其中作為側(cè)鏈的烷基和鏈烯基各自在每個(gè)三環(huán)化合物的17位取代。
5.權(quán)利要求1的方法，其中烷基是乙基或丙基，而鏈烯基是丙烯基。
6.權(quán)利要求1的方法，其中銀離子由諸如硝酸銀或高氯酸銀的銀鹽提供。
7.權(quán)利要求1的方法，其中分離通過(guò)使用模擬移動(dòng)床體系進(jìn)行。
8.權(quán)利要求1的方法，其中含磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂是含苯磺酸基團(tuán)的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
9.權(quán)利要求8的方法，其中樹(shù)脂由苯乙烯單體和二乙烯基苯的共聚物基質(zhì)或由被硅氧烷聚合物薄膜涂覆的硅膠基質(zhì)構(gòu)成。
10.離子交換樹(shù)脂，其中樹(shù)脂由苯乙烯單體和二乙烯基苯的共聚物基質(zhì)構(gòu)成，并且樹(shù)脂含有用銀離子處理過(guò)的苯磺酸基團(tuán)。
全文摘要
使用經(jīng)銀離子預(yù)處理過(guò)的含有磺酸基團(tuán)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂將具有烷基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物與具有鏈烯基作為側(cè)鏈的含內(nèi)酯的高分子量化合物分離的方法,含內(nèi)酯的高分子量化合物具有共同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)。
文檔編號(hào)C07D498/18GK1378548SQ00807975
公開(kāi)日2002年11月6日 申請(qǐng)日期2000年5月19日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月25日
發(fā)明者西原豐, 本田啟二, 向井浩二, 橋本法弘, 畑中洋, 山下道雄 申請(qǐng)人:藤澤藥品工業(yè)株式會(huì)社