專利名稱：假單孢菌素酰胺和酯類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及假單孢菌素(pseudomycin)化合物，特別是酸修飾的半合成假單孢菌素化合物。
背景技術(shù)：
假單孢菌素是從丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae，與植物有關(guān)的細(xì)菌)的液體培養(yǎng)物中分離出的天然產(chǎn)物，并且已表明有抗真菌活性(參見Harrison，L.等人，“假單孢菌素，一族得自丁香假單胞菌的具有廣譜抗真菌活性的新肽”J.Gen.Microbiology，137(12)，2857-65(1991)以及美國專利5,576,298和5,837,685)。與以前描述過的得自丁香假單胞菌的抗霉菌劑(例如丁香霉素、丁香毒素和丁香抑制素)不同，假單孢菌素A-C含有羥基天冬氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、脫氫氨基丁酸、賴氨酸和二氨基丁酸。
假單胞菌素A、A’、B、B’、C、C’的肽部分相應(yīng)于具有末端羧基的L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)，該羧基在N-末端Ser的OH上將大環(huán)閉合。這些類似物的區(qū)別在于N-?；鶄?cè)鏈，即假單孢菌素A被3，4-二羥基十四烷?；鵑-?；?，假單孢菌素A’被3，4-二羥基十五烷?；鵑-?；?，假單孢菌素B被3-羥基十四烷?；鵑-?；?，假單孢菌素B’被3-羥基十二烷?；鵑-?；?，假單孢菌素C被3，4-二羥基十六烷?；鵑-酰化，假單孢菌素C’被3-羥基十六烷酰基N-?；?參見Ballio，A.，等人，“得自丁香假單胞菌的生物活性脂縮肽假單孢菌素，”FEBS Letters，355(1)，96-100，(1994)和Coiro，V.M.，等人，“使用得自NMR數(shù)據(jù)的幾何位距和分子動(dòng)力學(xué)通過計(jì)算機(jī)模擬確定的丁香假單胞菌MSU16H植物毒性脂縮肽假單孢菌素A的溶液構(gòu)象，”Eur.J.Biochem.，257(2)，449-456(1998))。
已知假單孢菌素具有一些不利的生物作用。例如，當(dāng)靜脈內(nèi)施用假單孢菌素時(shí)，已觀察到了其破壞靜脈的內(nèi)皮、破壞組織、炎癥、和對(duì)宿主組織的局部毒性。因?yàn)榧賳捂呔鼐哂械靡宰C實(shí)的抗真菌活性和相當(dāng)多未研究的化學(xué)特性，所以需要研究這類化合物以找到可用作具有較少不利副作用的抗真菌劑的其它潛在化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了可用作抗真菌劑或者可用于設(shè)計(jì)抗真菌劑的下述結(jié)構(gòu)所代表的假單孢菌素化合物、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 其中Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵，或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基，或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫，或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C6-C18烷基、C5-C11烷氧基、或聯(lián)苯基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中
Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1獨(dú)立地為-NH2或-NHp-Pg，其中p是0或1；R2和R3獨(dú)立地為-OR2a、或-N(R2b)(R2c)，其中R2a和R2b獨(dú)立地為氫、C1-C10烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等)、C3-C6環(huán)烷基(例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊基甲基、甲基環(huán)戊基、環(huán)己基等)、鹵代烷基(例如CF3CH2-)、羥基(C1-C10)烷基、烷氧基(C1-C10)烷基(例如甲氧基乙基)、烯丙基、C2-C10烯基、氨基(C1-C10)烷基、一-或二烷基氨基(C1-C10)烷基、芳基(C1-C10)烷基(例如芐基)、雜芳基(C1-C10)烷基(例如3-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基)、或環(huán)雜烷基(C1-C10)烷基(例如N-四氫-1，4-惡嗪基乙基和N-哌嗪基乙基)，或者R2b是氨基酸烷基酯的羧酸烷基酯殘基(例如-CH2CO2CH3、-CH(CO2CH3)CH(CH3)2、-CH(CO2CH3)CH(苯基)、-CH(CO2CH3)CH2OH、-CH(CO2CH3)CH2(對(duì)羥基苯基)、-CH(CO2CH3)CH2SH、-CH(CO2CH3)CH2(CH2)3NH2、-CH(CO2CH3)CH2(4-或5-咪唑)、-CH(CO2CH3)CH2CO2CH3、-CH(CO2CH3)CH2CO2NH2等)，且R2c是氫或C1-C6烷基，條件是R2和R3都不是-OH。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了具有上述結(jié)構(gòu)I的假單孢菌素化合物的前藥，其中R2和R3是-OR2a，其中R2a是C1-C3烷基。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了假單孢菌素化合物的3-酰氨基衍生物，其中該化合物是通過下述步驟制得的(i)提供其中R1是-NH2、且R2和R3都是-OH的具有上述結(jié)構(gòu)I的化合物；(ii)用氨基保護(hù)基將在2、4和5位的氨基R1保護(hù)；(iii)使用鄰苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽作為偶聯(lián)劑在3位形成酰胺鍵；和(iv)除去所述的氨基保護(hù)基。除了使用苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽作為偶聯(lián)劑外，采用上述步驟還可以提供8-酰氨基衍生物。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了藥物制劑，其中包含上述結(jié)構(gòu)I所代表的假單孢菌素化合物和可藥用載體。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了在動(dòng)物中治療抗真菌感染的方法，包括給所述動(dòng)物施用上述假單孢菌素化合物I。
定義除非另有說明，本文所用術(shù)語“烷基”是指含有1-30個(gè)碳原子的通式CnH2n+1烴基。烷基可以是直鏈烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基等)、支鏈烷基(例如異丙基、異丁基、叔丁基、新戊基等)、環(huán)狀烷基(例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、甲基環(huán)戊基、環(huán)己基等)、或多環(huán)烷基(例如二環(huán)[2.2.1]庚烷、螺[2.2]戊烷等)。所述烷基可以被取代或未取代。類似地，烷氧基、烷?；蛲樗狨サ耐榛糠志哂信c上述相同的定義。
術(shù)語“烯基”是指含有至少一個(gè)碳碳雙鍵的無環(huán)烴。烯基可以呈直鏈、支鏈、環(huán)狀、或多環(huán)。烯基可以被取代或未取代。烯氧基、烯?；蛳┧狨サ南┗糠志哂信c上述相同的定義。
術(shù)語“炔基”是指含有至少一個(gè)碳碳三鍵的無環(huán)烴。炔基可以呈直鏈或支鏈。炔基可以被取代或未取代。炔氧基、炔?；蛉菜狨サ娜不糠志哂信c上述相同的定義。
術(shù)語“芳基”是指具有單環(huán)(例如苯基)或稠合環(huán)系(例如萘、蒽、菲等)的芳族基團(tuán)。所述芳基可被取代或未取代。
術(shù)語“雜芳基”是指在芳環(huán)系內(nèi)含有至少一個(gè)雜原子的芳族基團(tuán)(例如吡咯、吡啶、吲哚、噻吩、呋喃、苯并呋喃、咪唑、噁嗪、嘧啶、嘌呤、苯并咪唑、喹啉等)。該芳族基團(tuán)可由單環(huán)或稠合環(huán)系構(gòu)成。雜芳基可以被取代或未取代。
“NHp-Pg”和“氨基保護(hù)基”是指當(dāng)化合物上的其它官能團(tuán)反應(yīng)時(shí)通常用來阻斷或保護(hù)氨基官能團(tuán)的氨基取代基(Pg)。當(dāng)p是0時(shí)，氨基保護(hù)基可以與其所連接的氮形成環(huán)亞酰胺例如鄰苯二甲酰亞胺和四氯鄰苯二甲酰亞氨基。當(dāng)p是1時(shí)，保護(hù)基可以與其所連接的氮形成氨基甲酸酯，例如甲基、乙基和9-芴基甲基氨基甲酸酯；或酰胺，例如N-甲酰基和N-乙?；０?。
在有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)，特別是在有機(jī)生物化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)，眾所周知有效取代的化合物是可耐受或甚至有用的。在本發(fā)明中，例如，術(shù)語烷基包括作為標(biāo)準(zhǔn)烷基的取代基例如甲基、乙基、丙基、己基、異辛基、十二烷基、十八烷基等。術(shù)語“基團(tuán)”特定涉及并包括烷基上的本領(lǐng)域常用取代基，例如羥基、鹵素、烷氧基、羰基、酮基、酯、氨基甲酸酯等，并包括未取代的烷基。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常知道，應(yīng)當(dāng)選擇取代基以不給化合物的藥理特征帶來不利影響或者不有害地干擾藥物的應(yīng)用。對(duì)于任意上文定義的基團(tuán)，合適的取代基包括烷基、烯基、炔基、芳基、鹵素、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、一-和二烷基氨基、季銨鹽、氨基烷氧基、羥基烷基氨基、氨基烷硫基、氨基甲?；?、羰基、羧基、羥乙酰基、甘氨酰基、肼基、脒基、和它們的組合。
術(shù)語“溶劑化物”是指包含一個(gè)或多個(gè)溶質(zhì)分子例如結(jié)構(gòu)I化合物分子和一個(gè)或多個(gè)可藥用溶劑分子例如水、乙醇等分子的聚集體。
術(shù)語“可藥用鹽”是指在施用劑量下對(duì)接受者基本上無毒的結(jié)構(gòu)I化合物的有機(jī)或無機(jī)鹽。
術(shù)語“前藥”是指在體內(nèi)由于被代謝過程(例如生物轉(zhuǎn)化)轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生藥理作用的一類藥物。在本發(fā)明中，假單孢菌素前藥化合物包含可被血漿中的酯酶裂解而生成活性藥物的酯官能團(tuán)。
術(shù)語“動(dòng)物”是指人、寵物(例如狗、貓和馬)、食物供應(yīng)動(dòng)物(例如牛、豬、綿羊和家禽)、動(dòng)物園動(dòng)物、海洋動(dòng)物、鳥類以及其它類似種屬動(dòng)物。
發(fā)明詳述本申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過修飾連接在假單孢菌素天然產(chǎn)物或半合成衍生物的羥基天冬氨酸和/或天冬氨酸單元上的酸官能團(tuán)，體外實(shí)驗(yàn)表明新化合物可有效地抗白色念珠菌(C.albican)、新型隱球酵母(C.neoformans)和/或煙曲霉(A.fumigatus)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些二酯能起前藥的作用；因此，這些特定化合物具有降低的體外活性，但是表現(xiàn)出體內(nèi)效力。
下述合成方案I表示的是從任一種天然假單孢菌素或N-?；揎椀难苌锖铣苫衔颕的一般方法。通常使用三個(gè)合成步驟來制備化合物I(1)選擇性地氨基保護(hù)；(2)與適當(dāng)醇或胺縮合以分別生成酯或酰胺；和(3)將氨基脫保護(hù)。 合成方案I可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的保護(hù)氨基的標(biāo)準(zhǔn)方法將在殘基2、4和5上的側(cè)鏈氨基保護(hù)。所用的氨基保護(hù)基的特定種類不是至關(guān)重要的，只要是在隨后于中間體分子的其它位點(diǎn)上進(jìn)行反應(yīng)的條件下其保持穩(wěn)定，并且可在適當(dāng)位點(diǎn)選擇性地除去、同時(shí)又不斷裂包括其它氨基保護(hù)基在內(nèi)的分子的其余部分即可。優(yōu)選的氨基保護(hù)基是叔丁氧基羰基(t-Boc)、烯丙氧基羰基、鄰苯二甲酰亞氨基、和芐氧基羰基(CBZ)。最優(yōu)選的是烯丙氧基羰基(Alloc)和芐氧基羰基(CBZ)。合適的保護(hù)基的其它實(shí)例描述在T.W.Greene，“有機(jī)合成中的保護(hù)基(Protective Groups in Organic Synthesis)”John Wiley andSons，New York，N.Y.，(2nd ed.，1991)，第7章。
可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)酯化方法形成酯基。在酸性條件下酯化一般包括在質(zhì)子酸(例如HCl、TFA、對(duì)甲苯磺酸等)存在下將假單孢菌素化合物溶于或懸浮在適當(dāng)醇中。在堿性條件下，一般是在弱堿(例如無水條件下的碳酸氫鈉)存在下將假單孢菌素化合物與適當(dāng)?shù)耐榛u反應(yīng)。
酰氨基的形成可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)酰胺化方法來實(shí)現(xiàn)。然而，要選擇偶聯(lián)劑來選擇性地修飾酸基團(tuán)。例如，使用苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)作為偶聯(lián)劑使得能夠同時(shí)分離出純的在殘基8的單酰胺和(在有些情況下)純的二酰胺。然而，偶聯(lián)劑例如鄰苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3，-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)有利于形成在殘基3的單酰胺。
本申請(qǐng)人還發(fā)現(xiàn)，加入龐大的胺能提高在殘基3的單酰胺的比例。通過加入龐大的胺，在殘基3上酰胺化與在殘基8上酰胺化的比例從約1∶1提高至約6∶1，并且降低了二酰胺的量。術(shù)語“龐大的胺”是指在氮原子上具有多個(gè)和/或大取代基的胺?？墒褂门c反應(yīng)條件相容的任何叔胺。優(yōu)選的龐大的胺包括N，N-二異丙基乙基胺(DIEA)和N-乙基二環(huán)己基胺。龐大的胺的加入量一般為約1-10當(dāng)量、優(yōu)選3-8當(dāng)量、更優(yōu)選5-6當(dāng)量。該反應(yīng)一般在約室溫(25℃)-約-20℃進(jìn)行。然而，本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，低溫(約0℃-約-20℃)能進(jìn)一步提高在殘基3上形成單酰胺。通過加入龐大的胺并降低反應(yīng)溫度，在殘基3上酰胺化與在殘基8上酰胺化的比例提高至20∶1。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知道，低溫限度將取決于反應(yīng)組分的溶解度。
一旦酸基團(tuán)被修飾，即可以使用適于所用的特定保護(hù)基的標(biāo)準(zhǔn)方法除去所述的氨基保護(hù)基(在2、4和5位)。例如，CBZ基團(tuán)可通過在氫化催化劑(例如10％Pd/C)存在下氫化來除去。當(dāng)氨基保護(hù)基是烯丙氧基羰基時(shí)，該保護(hù)基可通過使用氫化三丁基錫和二氯化三苯基膦鈀來除去。該特定保護(hù)/脫保護(hù)方案的優(yōu)點(diǎn)在于降低了假單孢菌素結(jié)構(gòu)的Z-Dhb單元的乙烯基被氫化的可能性。
如上所述，假單孢菌素是從丁香假單胞菌分離出的天然產(chǎn)物，并且其特征在于，它是含有被內(nèi)酯鍵閉合的環(huán)肽部分，并包含特殊氨基酸例如4-氯蘇氨酸(ClThr)、3-羥基天冬氨酸(HOAsp)、2，3-去氫-2-氨基丁酸(Dhb)、和2，4-二氨基丁酸(Dab)的脂縮肽。下文描述了生長不同丁香假單胞菌的菌株以制備不同假單孢菌素類似物(A、A’、B、B’、C、和C’)的方法，并且在Hilton等人于2000年4月14日提交的名稱為“由丁香假單胞菌制備假單孢菌素”的第PCT/US00/08728號(hào)PCT專利申請(qǐng)、Kulanthaivel等人于2000年4月14日提交的名稱為“假單孢菌素天然產(chǎn)物”的第PCT/US00/08727號(hào)PCT專利申請(qǐng)、以及美國專利5,576,298和5,837,685中對(duì)此作了更詳細(xì)的描述，這4篇專利文獻(xiàn)都引入本發(fā)明以作參考。
產(chǎn)生一種或多種假單孢菌素的分離出的丁香假單胞菌菌株是本領(lǐng)域內(nèi)已知的。下述文獻(xiàn)中描述了野生型菌株MSU 174和通過轉(zhuǎn)座子誘變生成的該菌株的突變型MSU 16H美國專利5,576,298和5,837,685；Harrison，等人，“假單孢菌素，一族得自丁香假單胞菌的具有廣譜抗真菌活性的新肽”J.Gen.Microbiology，137(12)，2857-2865(1991)；和Lamb等人，“轉(zhuǎn)座子誘變和熒光假單胞菌標(biāo)記抗真菌生成是控制Dutch elm疾病所必需的，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，6447-6451(1987)。
適于制備一種或多種假單孢菌素的丁香假單胞菌菌株可從環(huán)境來源包括植物(例如大麥作物、柑橘作物、和丁香植物)以及來源例如土壤、水、空氣和灰塵中分離得到。優(yōu)選的菌株是從植物分離的。從環(huán)境來源中分離的丁香假單胞菌菌株可稱為野生型。本文所用的“野生型”是指天然存在于標(biāo)準(zhǔn)丁香假單胞菌群體中的顯性遺傳型(例如天然發(fā)現(xiàn)并且不是由實(shí)驗(yàn)室操作制得的的丁香假單胞菌菌株或分離物)。象大多數(shù)生物體一樣，所用的假單孢菌素制備培養(yǎng)物(丁香假單胞菌菌株例如MSU 174、MSU 16H、MSU 206、25-B1、7H9-1)的特征可發(fā)生變異。因此，可通過本領(lǐng)域已知方法獲得這些菌株的后代(例如重組物、突變體和變種)。
丁香假單胞菌MSU 16H可以以保藏號(hào)ATCC 67028從AmericanType Culture Collection，Parklawn Drive，Rockville，MD，USA公眾獲得。丁香假單胞菌菌株25-B1、7H9-1、和67 H1是在2000年3月23日由American Type Culture Collection保藏的，并且指定了下述保藏號(hào)25-B1保藏號(hào)PTA-16227H9-1保藏號(hào)PTA-162367H1 保藏號(hào)PTA-1621丁香假單胞菌的突變體菌株也適于制備一種或多種假單孢菌素。本文所用的“突變體”是指在菌株表型中的突然可遺傳的變化，這種變化可以是自發(fā)的，或者是通過已知的誘變劑例如放射(例如紫外放射或X-射線)、化學(xué)誘變劑(例如甲磺酸乙酯(EMS)、二環(huán)氧辛烷、N-甲基-N-硝基-N’-亞硝基鳥嘌呤(NTG)、和亞硝酸)、位點(diǎn)特異性誘變和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的誘變引起的。制備假單孢菌素的丁香假單胞菌突變體可通過用一定量能有效地產(chǎn)生下述突變體的誘變劑處理細(xì)菌而制得即能過度地產(chǎn)生一種或多種假單孢菌素、相對(duì)于其它假單孢菌素過量產(chǎn)生一種假單孢菌素(例如假單孢菌素B)、或在有利的生長條件下產(chǎn)生一種或多種假單孢菌素。雖然所用的誘變劑的類型和量可以改變，但是優(yōu)選的方法是將NTG系列稀釋至1-100μg/ml的水平。優(yōu)選的突變體是能過度產(chǎn)生假單孢菌素B、并在基本培養(yǎng)基中生長的突變體。
可選擇環(huán)境分離物、突變體菌株、和其它所需的丁香假單胞菌菌株以獲得所需的生長習(xí)性、生長培養(yǎng)基營養(yǎng)來源、碳來源、生長條件、氨基酸需求等的特征。優(yōu)選地，選擇制備假單孢菌素的丁香假單胞菌菌株以使其能在基本培養(yǎng)基例如N21培養(yǎng)基中生長和/或能產(chǎn)生水平大于約10μg/ml的一種或多種假單孢菌素。優(yōu)選的菌株表現(xiàn)出這樣的特征當(dāng)在包含3種或3種以下的氨基酸和任選的脂質(zhì)、馬鈴薯產(chǎn)品或其組合的培養(yǎng)基中生長時(shí)，能產(chǎn)生一種或多種假單孢菌素。
重組菌株可通過使用本領(lǐng)域已知的方法轉(zhuǎn)化丁香假單胞菌菌株而制得。通過使用重組DNA技術(shù)，可將丁香假單胞菌菌株轉(zhuǎn)化以表達(dá)出除了這些菌株產(chǎn)生的抗生素以外的多種不同基因產(chǎn)物。例如，可修飾菌株以引入多個(gè)內(nèi)源性假單孢菌素生物合成基因的拷貝，來獲得更高的假單孢菌素產(chǎn)率。
為了從野生型或丁香假單胞菌的突變體菌株中產(chǎn)生一種或多種假單孢菌素，在攪拌下將生物體在包含有效量的3種或3種以下氨基酸，優(yōu)選谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、或其組合的含水營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)?；蛘?，將甘氨酸與一種或多種馬鈴薯產(chǎn)品和脂質(zhì)混合。在能有效地使丁香假單胞菌生長并且生成所需假單孢菌素的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。有效條件包括約22℃-約27℃的溫度、和約36小時(shí)-約96小時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間。在丁香假單胞菌的培養(yǎng)期間控制培養(yǎng)基中氧的濃度對(duì)于生成假單孢菌素是有利的。優(yōu)選地，將氧水平保持在約5-50％飽和、更優(yōu)選約30％飽和。用空氣、純氧、或包含氧的氣體混合物吹掃可控制培養(yǎng)基中氧的濃度。
在丁香假單胞菌的培養(yǎng)期間控制培養(yǎng)基的pH也是有利的。假單孢菌素在堿性pH下不穩(wěn)定，并且如果培養(yǎng)基的pH在大于約6的水平保持約12小時(shí)，則可發(fā)生顯著的降解。優(yōu)選將培養(yǎng)基的pH維持在6-4。當(dāng)在分批培養(yǎng)物中生長時(shí)，丁香假單胞菌可產(chǎn)生一種或多種假單孢菌素。然而，分批補(bǔ)入或半連續(xù)補(bǔ)入葡萄糖和任選補(bǔ)入酸或堿(例如氫氧化銨)以控制pH能提高產(chǎn)量。通過使用其中自動(dòng)補(bǔ)入葡萄糖和氫氧化銨的連續(xù)培養(yǎng)方法可進(jìn)一步提高假單孢菌素產(chǎn)量。
選擇丁香假單胞菌可影響所生成的假單孢菌素的量和分布。例如，菌株MSU 16H和67 H1分別主要生成假單孢菌素A，但是也生成假單孢菌素B和C，三者的比例通常為4∶2∶1。通常情況下，菌株67H1生成的假單孢菌素的水平比菌株MSU 16H生成的水平高約3-5倍。與菌株MSU 16H和67 H1相比，菌株25-B1生成更多的假單孢菌素B和更少的假單孢菌素C。菌株7H9-1的與眾不同之處在于，其主要生成假單孢菌素B，并且假單孢菌素B的產(chǎn)量大于其它菌株。例如，該菌株生成的假單孢菌素B的量可比假單孢菌素A或C大至少10倍。
可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何不同方法檢測、測定、分離和/或純化各種假單孢菌素、假單孢菌素中間體和混合物。例如，肉湯或分離物或純化的組合物中假單孢菌素活性水平可通過抗真菌例如假絲酵母屬的抗真菌作用來確定，并且可通過高效液相色譜法分離和純化。
或者，可由N-?；牒铣苫衔镄纬甚０被蝓パ苌?。半合成假單孢菌素化合物可通過交換L-絲氨酸單元上的N-酰基來合成。各種N-?；苌锏膶?shí)例描述在Belvo，等人于同一日期提交的名稱為“假單孢菌素N-?；鶄?cè)鏈類似物”的第___號(hào)PCT專利申請(qǐng)中，該專利申請(qǐng)引入本發(fā)明以作參考。通常使用4個(gè)合成步驟來從天然假單孢菌素化合物制備半合成化合物(1)選擇性地保護(hù)氨基；(2)用化學(xué)或酶法將N-?；鶄?cè)鏈脫酰；(3)用不同側(cè)鏈再酰化；和(4)將所述的氨基脫保護(hù)。在將氨基脫保護(hù)之前，可將天冬氨酸和/或羥基天冬氨酸單元修飾。
具有γ或δ羥基化側(cè)鏈的N-酰基(例如3，4-二羥基十四烷酸酯)的脫酰可通過在含水溶劑中用酸處理氨基保護(hù)的假單孢菌素化合物來實(shí)現(xiàn)。合適的酸包括乙酸和三氟乙酸。優(yōu)選的酸是三氟乙酸。如果使用三氟乙酸，該反應(yīng)可在室溫或接近室溫的溫度下完成。然而，當(dāng)使用乙酸時(shí)，該反應(yīng)通常在約40℃進(jìn)行。合適的含水溶劑系統(tǒng)包括乙腈、水、及其混合物。有機(jī)溶劑能促進(jìn)該反應(yīng)；然而，加入有機(jī)溶劑可導(dǎo)致生成其它副產(chǎn)物。在側(cè)鏈上沒有δ或γ羥基的假單孢菌素化合物(例如假單孢菌素B和C’)可用酶方法脫酰。合適的脫酰酶包括多粘菌素酰基轉(zhuǎn)移酶(164-16081 Fatty Acylase(粗產(chǎn)物)或161-16091 Fatty Acylase(純)，得自Wako Pure Chemical Industries，Ltd.)、或ECB脫酰酶。酶法脫?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)脫酰方法來完成。例如，使用多粘菌素酰基轉(zhuǎn)移酶的一般方法可參見Yasuda，N.，等人，Agric.Biol.Chem.，53，3245(1989)和Kimura，Y.，等人，Agric.Biol.Chem.，53，497(1989)。
在羰基活化劑存在下，使用所需酰基的相應(yīng)酸將脫酰產(chǎn)物(也稱為假單孢菌素核)再?；！棒驶罨鶊F(tuán)”是指能促進(jìn)在該羰基上進(jìn)行的親核加成反應(yīng)的取代基。合適的活化取代基是對(duì)羰基有凈吸電子作用的基團(tuán)。這樣的基團(tuán)包括但不限于烷氧基、芳氧基、含氮芳香雜環(huán)、或氨基(例如羥苯并三唑、咪唑基、硝基苯氧基、五氯苯氧基、N-氧基琥珀酰亞胺、N，N’-二環(huán)己基異脲-O-基、和N-羥基-N-甲氧基氨基)；乙酸酯；甲酸酯；磺酸酯(例如甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、和對(duì)甲苯磺酸酯)；鹵化物(例如氯化物、溴化物、和碘化物)。
在酰化方法中可使用多種不同的酸。合適的酸包括含有一個(gè)或多個(gè)側(cè)鏈的芳基、烷基、氨基(包括伯胺、仲胺和叔胺)、羥基、烷氧基、和酰氨基的脂族酸；在脂族鏈內(nèi)含有氮或氧的脂族酸；被烷基、羥基、烷氧基和/或烷基氨基取代的芳族酸；和被烷基、羥基、烷氧基和/或烷基氨基取代的雜芳族酸。
或者，可使用固相合成，其中是使用羥基苯并三唑-樹脂(HOBt-樹脂)作為?；磻?yīng)的偶聯(lián)劑。
然后如下所述進(jìn)行保護(hù)的N-?；牒铣苫衔锏乃嵝揎棇⒅辽僖粋€(gè)連接在N-?；揎椀陌牒铣杉賳捂呔鼗衔锏奶於彼峄蛄u基天冬氨酸肽單元上的側(cè)鏈羧基反應(yīng)以形成所需的酰氨基或酯鍵。然后如上所述除去保護(hù)基。
可分離出假單孢菌素化合物，并以其自身的形式或其可藥用鹽或溶劑化物的形式使用。術(shù)語“可藥用鹽”是指用無機(jī)酸和有機(jī)酸形成的無毒酸加成鹽。合適的鹽衍生物包括鹵化物、硫氰酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、芳基磺酸鹽、烷基磺酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、鏈烷酸鹽、環(huán)烷基鏈烷酸鹽、芳基鏈烷酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、富馬酸鹽、葡萄庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、三氟乙酸鹽等。
術(shù)語“溶劑化物”是指包含一個(gè)或多個(gè)溶質(zhì)分子(即假單孢菌素化合物)和一個(gè)或多個(gè)可藥用溶劑分子例如水、乙醇等分子的聚集體。當(dāng)溶劑是水時(shí)，該聚集體稱為水合物。溶劑化物一般是通過在加熱條件下將化合物溶于適當(dāng)溶劑中，并緩慢地冷卻以生成無定形或結(jié)晶溶劑化物形式。
一般是將活性組分(即假單孢菌素化合物)配制成藥物劑型以提供易于控制的藥物劑量和給患者、醫(yī)師或獸醫(yī)提供雅致且易于使用的產(chǎn)品。制劑可含有0.1％-99.9％重量的活性組分、更通常約10％-約30％重量的活性組分。
本文所用的術(shù)語“單位劑量”或“劑量單位”是指含有經(jīng)計(jì)算能產(chǎn)生所需療效的預(yù)定量活性組分的物理不連續(xù)單位。當(dāng)劑量單位經(jīng)口服或非胃腸道途徑施用時(shí)，其一般以片劑、膠囊、丸劑、粉末小包、局部施用的組合物、栓劑、糯米紙囊劑、在安瓿或多劑量容器中的測定量單位等形式提供?；蛘?，劑量單位可以以干燥或液體氣霧劑的形式施用，這樣的氣霧劑可吸入或噴霧給藥。
給藥劑量可根據(jù)動(dòng)物的身體狀況、動(dòng)物癥狀的嚴(yán)重程度、施用藥物的方式以及動(dòng)物種類而變。對(duì)于給定動(dòng)物，具體劑量通常由負(fù)責(zé)醫(yī)生或獸醫(yī)決定。
合適的載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，并且包括材料例如碳水化合物、蠟、水溶性和/或可水膨脹的聚合物、親水或疏水性物質(zhì)、明膠、油、溶劑、水等。所用的特定載體、稀釋劑或賦形劑將取決于施用活性組分的手段和目的。制劑還可以包含潤濕劑、潤滑劑、表面活性劑、緩沖劑、增強(qiáng)劑、增量劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、甜料、香料、矯味劑和它們的組合。
可使用不同方法施用藥物組合物。合適的方法包括局部施用(例如膏劑或噴霧劑)、口服、注射和吸入。特定治療方法將取決于所治療的感染類型。
在非胃腸道靜脈內(nèi)施用中，通常是將制劑稀釋或重新配制(如果是冷凍干燥的話)并且如果需要的話在給藥前進(jìn)一步稀釋。對(duì)于冷凍干燥產(chǎn)品的重新配制規(guī)程的實(shí)例是將10ml注射用水(WFI)加到小瓶中，并輕微攪拌以溶解。重新配制時(shí)間一般少于1分鐘。然后在給藥前將所得溶液在輸注溶液例如5％葡萄糖水溶液(D5W)中進(jìn)一步稀釋。
已表明假單孢菌素化合物表現(xiàn)出抗真菌活性，例如抑制各種傳染性真菌的生長，所述真菌包括假絲酵母屬各種(即白色念珠菌(C.albicans)、近平滑假絲酵母(C.parapsilosis)、克魯絲氏假絲酵母(C.krusei)、光滑假絲酵母(C.glabrata)、熱帶假絲酵母(C.tropicalis)或葡萄牙假絲酵母(C.lusitania))；球擬酵母屬各種(即光滑球擬酵母(T.glabrata))；曲霉屬各種(即煙曲霉(A.fumigatus))；組織胞漿菌屬各種(即莢膜組織胞漿菌(H.capsulatum))；隱球酵母屬各種(即新型隱球酵母(C.neoformans))；芽生菌屬各種(即皮炎芽生菌(B.dermatitidis))；鐮孢屬各種；發(fā)癬菌屬各種、Pseudallescheria boydii、粗球孢子菌、申克氏孢子絲菌等。
因此，本發(fā)明化合物和制劑可用于制備用于抗全身真菌感染或真菌皮膚感染的藥物。所以本發(fā)明提供了用于抑制真菌活性的方法，包括將本發(fā)明假單孢菌素化合物與真菌接觸。優(yōu)選的方法包括抑制白色念珠菌或煙曲霉的活性。術(shù)語“接觸”包括本發(fā)明化合物與真菌的結(jié)合或接合或明顯的接觸或相互接觸。該術(shù)語不意味著對(duì)本發(fā)明方法進(jìn)一步限制，例如通過抑制機(jī)理限制。所述方法定義為包括通過本發(fā)明化合物的作用或其固有的抗真菌特性抑制真菌活性。
本發(fā)明還提供了治療真菌感染的方法，包括給需要這種治療的宿主動(dòng)物施用有效量的本發(fā)明藥物制劑。優(yōu)選的方法包括治療白色念珠菌或煙曲霉感染。術(shù)語“有效量”是指能抑制真菌活性的活性化合物的量。給藥劑量將隨諸如感染的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、宿主的年齡和一般健康狀況、宿主對(duì)抗真菌劑的耐受性和宿主種類這樣的因素而變。特定給藥方案同樣可根據(jù)這些因素而變。藥物可以以單次日劑量或者在一天期間多次劑量的方式施用。給藥治療可持續(xù)約2-3天到約2-3周或更長。日劑量(以單劑量或均分劑量施用)一般含有約0.01mg/kg-100mg/kg體重活性化合物的劑量水平。優(yōu)選的日劑量一般為約0.1mg/kg-60mg/kg、更優(yōu)選為約2.5mg/kg-40mg/kg。宿主可以是任何動(dòng)物，包括人、寵物(例如狗、貓和馬)、食物供應(yīng)動(dòng)物(例如牛、豬、羊和家禽)、動(dòng)物園動(dòng)物、海洋動(dòng)物、鳥類以及其它類似種屬動(dòng)物。
實(shí)施例除非另有說明，所有化學(xué)藥品均得自Aldrich Chemical(Milwaukee，WI)。在整個(gè)實(shí)施例中使用下述縮寫以代表各物質(zhì)ACN-乙腈TFA-三氟乙酸DMF-二甲基甲酰胺EDCI-1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽BOC＝叔丁氧基羰基，(CH3)3C-O-C(O)-CBZ＝芐氧基羰基，C6H5CH2-O-C(O)-PyBOP＝苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽TBTU＝鄰苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽DIEA＝N，N-二異丙基乙基胺
HPLC條件除非另有說明，分析反相HPLC操作是用裝配著WatersμBondapak(C18，3.9×300mm)柱的Waters 600E系統(tǒng)進(jìn)行的。所用的洗脫劑是65∶35乙腈/0.1％TFA水溶劑體系-100％乙腈(用20分鐘)，流速是1.5ml/分鐘，并在230nm使用UV檢測。
制備HPLC處理是用采用Dynamax 60埃C18柱的Waters Prep2000系統(tǒng)進(jìn)行的，其中使用與分析HPLC系統(tǒng)相同的溶劑體系，但是流速為40ml/分鐘。
生物分析抗真菌活性的檢測和定量測定通過使用標(biāo)準(zhǔn)瓊脂稀釋測試或圓盤展開測試獲得化合物的最小抑制濃度(MIC)來在體外測定抗真菌活性。在抗真菌活性測試中使用的典型真菌是白色念珠菌。當(dāng)測試樣本(50μl)對(duì)接種到瓊脂板上的白色念珠菌的抑制引起10-12mm直徑區(qū)域時(shí)認(rèn)為有顯著抗真菌活性。尾靜脈毒性在第0、24、48和72小時(shí)，用0.1ml測試化合物(20mg/kg)經(jīng)由側(cè)尾靜脈靜脈內(nèi)(IV)給藥來治療小鼠。每組包括2只小鼠。將化合物配制在0.5％葡萄糖和無菌注射用水中。首次治療后監(jiān)測小鼠7天，并仔細(xì)觀察包括紅斑、腫脹、變色、壞死、尾損失在內(nèi)的刺激征狀以及表明毒性的其它副作用征狀。
在該實(shí)驗(yàn)中使用的小鼠是遠(yuǎn)系繁殖的，雄性ICR小鼠的平均體重為18-20g(得自Harlan Sprangue Dawley，Indianapolis，IN)。
一般方法CBZ保護(hù)的假單孢菌素用CBZ保護(hù)假單孢菌素A、A’、B、B’、C或C’的2、4和5位側(cè)鏈氨基的一般方法將假單孢菌素化合物(R1＝H)溶解/懸浮在DMF(20mg/ml，AldrichSure Seal)中。在室溫?cái)嚢柘录尤隢-(芐氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺(6當(dāng)量)。在室溫下攪拌32小時(shí)。通過HPLC(4.6×50mm，3.5μm，300-SB，C8，Zorbax柱)監(jiān)測反應(yīng)。用高度真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將反應(yīng)濃縮至10ml。將材料置于冰箱中直至用于通過色譜法制備。通過反相制備HPLC純化，冷凍干燥后獲得了無定形白色固體(在下述結(jié)構(gòu)II中R1＝CBZ)。Alloc保護(hù)的假單孢菌素用Alloc保護(hù)假單孢菌素A、A’、B、B’、C或C’的2、4和5位側(cè)鏈氨基的一般方法將焦碳酸二烯丙酯(diallyl pyrocarbonate)(558mg，3.0mmol)加到假單孢菌素A(1.22g，1.0mmol)在600ml DMF內(nèi)的溶液中。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去溶劑，獲得了油狀殘余物，用乙醚將其洗滌3次。將油狀殘余物再溶于水與ACN(約1∶1)的混合物中，冷凍干燥，以90％的產(chǎn)率獲得了Alloc保護(hù)的假單孢菌素A。
使用相同方法，以90％的產(chǎn)率制得了Alloc保護(hù)的假單孢菌素B(在下述結(jié)構(gòu)II中R1＝alloc)。通過氫化除去2、4和5位的CBZ保護(hù)基的一般方法將CBZ保護(hù)的?；苌锶苡诶涞?％-10％乙酸/甲醇溶液(5mg/ml)中，并加入等量10％Pd/C。通過脫氣反應(yīng)并用H2替換體積4-7次來給反應(yīng)裝載氫氣。讓反應(yīng)在室溫進(jìn)行。每隔1小時(shí)用HPLC檢測反應(yīng)直至原料消耗完畢。當(dāng)反應(yīng)完全時(shí)，除去氫氣囊，并經(jīng)由0.45μm濾器板(Acrodisk GHP，GF by Gelman)過濾該反應(yīng)。濃縮至約1/10體積，并通過HPLC純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分冷凍干燥。用氫化三丁基錫和二氯化三苯基膦鈀除去2、4和5位的Alloc保護(hù)基的一般方法將乙酸(1ml)加到Alloc保護(hù)的假單孢菌素B(0.05mmol)在5ml二氯甲烷內(nèi)的懸浮液中。真空脫氣后，將溶液用6.0mg PdCl2(PPH3)2(0.008mmol)和0.40ml氫化三正丁基錫(1.5mmol)于室溫處理2小時(shí)。將溶劑在真空下蒸發(fā)，把殘余物溶于水/ACN(約1∶1)中并過濾。通過制備HPLC純化所得溶液，以93％的產(chǎn)率獲得了所需假單孢菌素B化合物?；蛘?，可使用5ml四氫呋喃和0.1ml乙酸作為溶劑來替代5ml二氯甲烷和1.0ml乙酸。
使用下述結(jié)構(gòu)II來描述在實(shí)施例1-27中觀察的產(chǎn)物。雖然在下述實(shí)施例中使用的是特定假單孢菌素天然產(chǎn)物(假單孢菌素B)，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以使用其它假單孢菌素天然產(chǎn)物或半合成衍生物作為原料。 實(shí)施例1-3舉例說明了在殘基3和8的二酯的形成。
實(shí)施例1合成二乙酯1-1R1＝HR2＝-OCH2CH3R3＝-OCH2CH31-1向50ml園底燒瓶中加入10ml絕對(duì)乙醇和CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(251.7mg，0.156mmol)。向該混合物中加入約1ml酸化的乙醇(預(yù)先用HCl氣體酸化)，并將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^夜。然后在真空下除去溶劑，殘余物不用進(jìn)一步純化即用于下一步反應(yīng)，將殘余物溶于10ml MeOH/1.5ml冰醋酸的溶液中。使用249.7mg 10％Pd/C進(jìn)行30分鐘的標(biāo)準(zhǔn)氫化，經(jīng)過濾除去催化劑，并通過制備HPLC純化，冷凍干燥后獲得了化合物1-1(120.9mg)。MS(離子噴霧)C55H96ClN12O19(M+H)+的計(jì)算值1264.89，實(shí)測值1264.3。
在反應(yīng)之后通過HPLC小心地進(jìn)行分離可得到單酯。在適當(dāng)時(shí)間，即當(dāng)原料單酯∶二酯的比例最大時(shí)停止該反應(yīng)。操作保持相同。分離所得單酯混合物，其中一些酯是在天冬氨酸殘基上形成的，一些是在是在羥基天冬氨酸殘基上形成的。使用標(biāo)準(zhǔn)方法將該CBZ保護(hù)的單酯的混合物氫化，獲得了假單孢菌素B單乙酯的混合物。
使用與上述相同的方法合成化合物1-2和1-3。
R＝-H R＝-HR2＝-OCH3R2＝-OCH(CH3)2R3＝-OCH3R3＝-OCH(CH3)21-2 1-3實(shí)施例2舉例說明了使用堿性條件合成二酯。
實(shí)施例2合成二丙酯2-1R＝-HR2＝-OCH2CH2CH3R3＝-OCH2CH2CH32-1將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(247.3mg，0.154mmol)溶于5mlDMF中。然后加入大大過量的丙基碘和過量NaHCO3。將該反應(yīng)在室溫下攪拌10小時(shí)。通過制備HPLC進(jìn)行純化，然后冷凍干燥，獲得了147.6mg保護(hù)的二酯。使用149.3mg 10％Pd/C在標(biāo)準(zhǔn)條件下將該化合物氫解，給HPLC純化和冷凍干燥后，獲得了78.9mg化合物2-1。
實(shí)施例3R＝-H R＝-HR2＝-O(CH2)4CH3R2＝-OHR3＝-OH R3＝-O(CH2)4CH33-1 3-2將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(282.3mg，0.175mmol)溶于5mlDMF中。然后加入大大過量的正戊基碘和過量NaHCO3。將該反應(yīng)在室溫下攪拌10小時(shí)。通過制備HPLC進(jìn)行純化，然后冷凍干燥，獲得了49.1mg保護(hù)的單戊酯的混合物。使用47.3mg 10％Pd/C在標(biāo)準(zhǔn)條件下將該混合物氫解，經(jīng)HPLC純化和冷凍干燥后，獲得了30.6mg化合物3-1和3-2。
R＝-H R＝-H R＝-HR2＝-O(CH2)3CH3R2＝-O(CH2)3CH3R2＝-OHR3＝-O(CH2)3CH3R3＝-OH R3＝-O(CH2)3CH33-3 3-4 3-5用正丁基碘代替丙基碘，獲得了二丁基酯(3-3)，單酯混合物(3-4+3-5)和單酯+下述環(huán)亞酰胺化合物3-6的混合物 實(shí)施例4合成環(huán)戊基甲基酯4-1R＝-HR2＝-OCH2(環(huán)戊基)R3＝-OH4-1將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B、大大過量的對(duì)甲苯磺酸和環(huán)戊烷甲醇混合，并攪拌過夜。在第二天加入另外10當(dāng)量的醇。通過制備HPLC分離該CBZ保護(hù)的酯，然后使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行氫化以制得化合物4-1。
在實(shí)施例1-4中合成的各化合物表現(xiàn)出可測得的抗白色念珠菌、新型隱球酵母、煙曲霉、Candida Parapsilosis、或莢膜組織胞漿菌的活性。然而，基于所合成的化合物觀察到了下述在活性方面的基本趨勢。簡單的酯(二甲酯、二乙酯和單乙酯)有活性并且有效力；而較大的酯表現(xiàn)出較小效力(例如丙酯和更大的酯)。ADME已表明化合物1-1和2-1迅速裂解成假單孢菌素B母化合物。
實(shí)施例5-11舉例說明了在殘基3的酰胺衍生物。
實(shí)施例5合成化合物5-1R＝-HR2＝-NH2R3＝-OH5-1將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(1.12g)和224mg TBTU、0.56mlDIEA和1.0g脫保護(hù)的rink酰胺樹脂(4-(2’，4’-二甲氧基苯基氨基甲基)苯氧基樹脂，得自Advance ChemTech，Inc.，Louisville，KY)混合3天。將該混合物過濾，并將樹脂用DMF洗滌3次，用二氯甲烷洗滌3次。將樹脂用5％水在1∶1 TFA/CH2Cl2中的混合物處理3小時(shí)。將該混合物過濾，并用TFA將樹脂洗滌3次。收集濾液并在真空下濃縮。通過HPLC純化，分離得到了60mg(5.3％)CBZ保護(hù)的酰氨基產(chǎn)物。
將該保護(hù)的酰氨基化合物(60mg)溶于6ml 1％AcOH的甲醇溶液，并加入60mg 10％Pd/C。將該混合物在氫氣氛下于室溫?cái)嚢?0分鐘。過濾后，將該溶液在真空下濃縮。把殘余物溶于50％ACN/水中，并冷凍干燥，獲得了45mg(90％)化合物5-1。
實(shí)施例6合成化合物6-1R＝-HR2＝-NH(環(huán)丙基)R3＝-OH6-1將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(400mg，0.25mmol)溶于4ml無水DMF中。依次加入TBTU(79mg，0.25mmol)、DIEA(200μl，6當(dāng)量)和環(huán)丙基胺(14.2mg，0.25mmol)。將該反應(yīng)在室溫下于氮?dú)夥障聰嚢瑁瑫r(shí)通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，將該反應(yīng)在真空下濃縮。通過制備HPLC純化粗產(chǎn)物。冷凍干燥，獲得了209.2mg(51.1％)無色粉末。
將該3-酰氨基化合物(279.1mg，0.169mmol)在10％Pd/C的催化下于1％HOAc/MeOH中在氫氣下氫化45分鐘。將該反應(yīng)過濾，并在真空下濃縮。將殘余物置于1∶1的水∶ACN混合物中，然后冷凍干燥，獲得了208.3mg(98.6％)無色粉末。H1-NMR證實(shí)了該結(jié)構(gòu)。
也可以使用下述方法由Alloc保護(hù)的假單孢菌素B制備化合物6-1。
將1-羥基苯并三唑水合物(136mg，1.0mmol)和EDCI(211mg，1.1mmol)加到Alloc保護(hù)的假單孢菌素B(730mg，0.50mmol)在7ml DMF內(nèi)的溶液中。攪拌過夜后，加入環(huán)丙基胺(85.6mg，1.5mmol)。通過HPLC監(jiān)測該反應(yīng)的進(jìn)程。反應(yīng)完全后，通過制備HPLC和冷凍干燥分離到了Alloc保護(hù)的假單孢菌素衍生物(334mg，產(chǎn)率為50％)。
將該Alloc保護(hù)的中間體(117mg，0.078mmol)溶于15ml二氯甲烷和1ml乙酸中。用干燥氮?dú)鈱⒃摲磻?yīng)混合物脫氣后，向該混合物中加入30mg(PPH3)2PdCl2和1ml氫化三丁基錫。通過HPLC監(jiān)測該反應(yīng)的進(jìn)程。反應(yīng)完全后，通過反相制備HPLC純化該反應(yīng)混合物，獲得了88mg(產(chǎn)率為91％)化合物6-1。
下表I列出了使用與上述相同的一般方法用適當(dāng)?shù)南鄳?yīng)胺原料合成的其它3-酰氨基衍生物。
表I 實(shí)施例7合成3-酰氨基化合物7-1 在烘箱干燥過的500mL園底燒瓶中，將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(0.5g，0.311mmol)溶于25mL DMF中。向該溶液中加入TBTU(0.2g，0.622mmol)、3-(氨基甲基)吡啶(0.067g，0.622mmol)、和N-乙基二環(huán)己基胺(0.391g，1.87mmol)。將該溶液攪拌3小時(shí)，然后濃縮。通過反相制備HPLC分離產(chǎn)物，并冷凍干燥，獲得了(96mg，產(chǎn)率為18％)CBZ保護(hù)的酰胺。通過將等量的10％Pd/C緩慢地加到CBZ保護(hù)的酰胺在1％乙酸/甲醇內(nèi)的冷溶液中來將CBZ基團(tuán)脫保護(hù)。將該溶液溫至室溫，并在1atm H2下迅速攪拌3.5小時(shí)。經(jīng)由過濾除去催化劑后，通過反相HPLC純化，并冷凍干燥，獲得了40mg(產(chǎn)率為55％)化合物7-1。MS數(shù)據(jù)C57H93ClN14O18分子量計(jì)算值＝1296.6實(shí)測值ES+1297.15，ES-1294.95實(shí)施例8合成3-酰氨基化合物8-1 可使用與實(shí)施例7中所述相同的一般方法。當(dāng)不加入任何堿時(shí)，觀察到了8和3酰氨基取代的化合物的混合物。
實(shí)施例9合成3-酰氨基化合物9-1
R＝-H R＝-HR2＝-NH(芐基)R2＝-NH(芐基)R3＝-OH R3＝-NH(芐基)9-1 9-2可使用與實(shí)施例7中所述相同的一般方法。當(dāng)不加入任何堿時(shí)，觀察到了化合物9-1和9-2的混合物。
實(shí)施例10合成3-酰氨基化合物10-1 使用與實(shí)施例7中所述相同的一般方法，用適當(dāng)?shù)南鄳?yīng)胺原料合成化合物10-1。
實(shí)施例11合成3-酰氨基化合物11-1 使用與實(shí)施例7中所述相同的一般方法，用4-(氨基甲基)吡啶作為胺原料合成化合物11-1。
實(shí)施例12合成3-酰氨基化合物12-1
R＝-HR2＝-N(CH3)2R3＝-OH12-1將CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(260mg，0.16mmol)、51.8mg TBTU和152μl DIEA溶于3ml DMF和320ml二甲基胺(0.16mmol)的THF溶液(2M溶液)中。將該反應(yīng)在室溫下攪拌20分鐘，然后經(jīng)由HPLC純化。將產(chǎn)物冷凍干燥，獲得了172mg(產(chǎn)率為66％)所需的CBZ保護(hù)的酰胺。
使用上述一般方法將該CBZ保護(hù)的酰胺氫化，獲得了化合物12-1。
實(shí)施例13舉例說明了其中將羧酸基團(tuán)與各種氨基酸烷基酯反應(yīng)的假單孢菌素化合物的合成。
實(shí)施例13合成3-酰氨基化合物13-1R＝-HR2＝-NHCH(CO2CH3)CH2CH2CH2CH2NH2R3＝-OH13-1將CBZ保護(hù)的賴氨酸甲酯(164mg，0.49mmol)加到CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(800mg，0.49mmol)、TBTU(158mg，0.49mmol)和400ml DIEA(2.51mmol)在8ml DMF內(nèi)的溶液中。將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后經(jīng)由HPLC純化，獲得了260mg(產(chǎn)率為32％)CBZ保護(hù)的酰胺。
使用上述一般方法將該CBZ保護(hù)的酰胺氫化，獲得了化合物13-1。
在表II列出的化合物13-2-13-4是使用與上述相同的一般方法用適當(dāng)?shù)南鄳?yīng)氨基酸酯合成的。
表II 實(shí)施例14-16舉例說明了在殘基8上的酰胺衍生物的合成。
實(shí)施例14合成8-酰氨基化合物14-1R＝-HR2＝-OHR3＝-NH214-1化合物14-1是用與上述使用rink酰胺樹脂制備化合物6-1的方法相同的方法合成的，只是使用PyBOP作為偶聯(lián)劑以代替TBTU。
實(shí)施例15合成8-酰氨基化合物15-1R＝-HR2＝-OHR3＝-NH(CH2)3CH315-1將正丁基胺(45.4mg，0.62mmol)加到CBZ保護(hù)的假單孢菌素B(1000mg，0.62mmol)和PyBop(323mg，0.62mmol)溶解在10ml DMF內(nèi)的溶液中。將該反應(yīng)在室溫下攪拌1小時(shí)，然后經(jīng)由HPLC純化。將產(chǎn)物冷凍干燥，獲得了280mg(產(chǎn)率為27％)CBZ保護(hù)的酰胺。
將該CBZ保護(hù)的酰胺(280mg，0.17mmol)在10％Pd/C的催化下于1％乙酸/甲醇中在氫氣下氫化45分鐘。將該反應(yīng)混合物過濾，并在真空下濃縮。將殘余物溶于50％ACN在水中的混合物，并冷凍干燥，獲得了189mg(產(chǎn)率為89％)化合物15-1。
在表III中列出的8-酰氨基化合物是使用與上述相同的一般方法用適當(dāng)?shù)南鄳?yīng)胺原料合成的。
表III
實(shí)施例16合成8-酰氨基化合物16-1
在100ml園底燒瓶中，將Alloc保護(hù)的假單孢菌素B(0.25g，0.171mmol)溶于25ml DMF中。向該溶液中加入Pybop(0.089g，0.171mmol)和4-(2-氨基乙基)嗎啉(0.022g，0.171mmol)。將該溶液在1atm N2下迅速攪拌過夜。將該溶液濃縮，通過反相HPLC分離出產(chǎn)物，并冷凍干燥，獲得了(140mg，0.089mmol，52％)Alloc保護(hù)的假單孢菌素B嗎啉衍生物。通過向Alloc保護(hù)的假單孢菌素B嗎啉衍生物在1％乙酸/二氯甲烷內(nèi)的溶液(10mg/mL)中加入Bu3SnH(0.648g，2.23mmol)、和(PH3P)2PdCl2(0.009g，0.013mmol)來將Alloc基團(tuán)脫保護(hù)。反應(yīng)時(shí)間為30分鐘。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)。將該溶液濃縮，通過反相制備HPLC分離出產(chǎn)物，并冷凍干燥，獲得了38mg(32％)化合物16-1。MS數(shù)據(jù)C57H99ClN14O19分子量計(jì)算值為1318.7，實(shí)測值ES+1320.0，ES-1318.0。
在表IV中列出的8-酰氨基化合物是使用與上述相同的一般方法用適當(dāng)相應(yīng)的胺原料合成的。
表IV 在實(shí)施例5-16中合成的各化合物表現(xiàn)出可測得的抗白色念珠菌、新型隱球酵母、煙曲霉、Candida Parapsilosis、或莢膜組織胞漿菌的活性。然而，基于所合成的化合物觀察到了下述在活性方面的基本趨勢。
當(dāng)測定8-酰氨基衍生物抗白色念珠菌的作用時(shí)，從數(shù)據(jù)中顯然看見幾個(gè)趨勢。體外效力沿著下述R3取代基順序下降-NH2＞-NHCH3＞-NHCH2CH3＞-NH(CH2)2CH3＞-NH(CH2)3CH3；-NHCH2CH2N(CH3)2＞-NH(CH2)3N(CH3)2；和-NH(GlyOMe)＞-NH(PheOMe)。通常用具有較小烷基的酰氨基能實(shí)現(xiàn)更好的活性。發(fā)現(xiàn)具有游離酰胺基團(tuán)的化合物是該系列中活性最高的。此外，經(jīng)證實(shí)，環(huán)烷基酰胺的活性比相應(yīng)的直鏈烷基強(qiáng)。在烷基鏈末端具有極性取代的烷基表現(xiàn)出的活性比相應(yīng)的天然產(chǎn)物低。與母體天然產(chǎn)物不同，沒有任何8-酰氨基衍生物表現(xiàn)出尾靜脈刺激。
與母體天然產(chǎn)物比較，經(jīng)證實(shí)3-酰氨基衍生物具有與8-酰氨基衍生物類似的趨勢(例如在R2具有較短烷基鏈的酰胺取代基比具有較長烷基鏈的酰胺取代基的活性強(qiáng))。與8-酰氨基衍生物不同，3-酰氨基衍生物在抗白色念珠菌的活性方面沒有表現(xiàn)出任何顯著下降直至達(dá)到7個(gè)碳原子或更長(其中R2＝-NH(CH2)6CH3的3-酰氨基PSB化合物具有MIC＝20μg/ml)，而對(duì)于8-酰氨基衍生物是直至4個(gè)碳原子或更長(其中R3＝-NH(CH2)3CH3的8-酰氨基PSB化合物具有MIC＝20μg/ml)。大多數(shù)測試的3-酰氨基衍生物在尾靜脈刺激方面表現(xiàn)出改善。例外的是R2＝-NH(異戊基)、-NH(正己基)、-NH(CH2)2N(CH2CH3)2、和-NH(CH2)3N(CH3)2。
雖然經(jīng)證實(shí)與相應(yīng)的天然產(chǎn)物(假單孢菌素B)相比，在殘基3和8都形成酰胺鍵使毒性得到改善，但是體內(nèi)效力通常會(huì)下降。
權(quán)利要求
1.具有下述結(jié)構(gòu)I的假單孢菌素化合物、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵、或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基，或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫，或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C8-C18烷基或C5-C11烷氧基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、或-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1獨(dú)立地為-NH2或-NHp-Pg，其中p是0或1；R2和R3獨(dú)立地為-OR2a、或-N(R2b)(R2c)，其中R2a和R2b獨(dú)立地為氫、C1-C10烷基、C3-C6環(huán)烷基、羥基(C1-C10)烷基、烷氧基(C1-C10)烷基、C2-C10烯基、氨基(C1-C10)烷基、一-或二烷基氨基(C1-C10)烷基、芳基(C1-C10)烷基、雜芳基(C1-C10)烷基、或環(huán)雜烷基(C1-C10)烷基，或者R2b是氨基酸烷基酯的羧酸烷基酯殘基，且R2c是氫或C1-C6烷基，條件是R2和R3都不是-OH。
2.具有下述結(jié)構(gòu)的假單孢菌素前藥、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 其中Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵、或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基，或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫，或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C8-C18烷基、C5-C11烷氧基、或聯(lián)苯基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1獨(dú)立地為-NH2或-NHp-Pg，其中p是0或1；R2和R3是-OR2a，其中R2a是C1-C3烷基。
3.通過下述步驟制得的假單孢菌素化合物的3-酰氨基衍生物(i)提供具有下述結(jié)構(gòu)的假單孢菌素化合物、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 其中Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵、或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基、或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫、或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C6-C18烷基、C5-C11烷氧基、或聯(lián)苯基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、或-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1是-NH2；R2和R3是-OH；(ii)用氨基保護(hù)基將在2、4和5位的氨基R1保護(hù)；(iii)使用鄰苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽作為偶聯(lián)劑在3位形成酰胺鍵；(iv)除去所述的氨基保護(hù)基。
4.權(quán)利要求3的3-酰氨基衍生物，其中形成酰胺鍵的步驟(iii)是在龐大的胺存在下進(jìn)行的。
5.權(quán)利要求3的3-酰氨基衍生物，其中形成酰胺鍵的步驟(iii)是在龐大的胺存在下于約0℃--20℃溫度下進(jìn)行的。
6.通過下述步驟制得的假單孢菌素化合物的8-酰氨基衍生物(i)提供具有下述結(jié)構(gòu)的假單孢菌素化合物、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 其中Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵、或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基，或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫，或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C6-C18烷基、C5-C11烷氧基、或聯(lián)苯基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1是-NH2；R2和R3是-OH；(ii)用氨基保護(hù)基將在2、4和5位的氨基R1保護(hù)；(iii)使用苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽作為偶聯(lián)劑在8位形成酰胺鍵；(iv)除去所述的氨基保護(hù)基。
7.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物在制備用于抗全身性真菌感染或真菌皮膚感染的藥物中的應(yīng)用。
8.制備假單孢菌素化合物的3-酰氨基衍生物的方法，包括下述步驟(i)提供具有下述結(jié)構(gòu)的假單孢菌素化合物、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 其中Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵，或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基，或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫，或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C6-C18烷基、C5-C11烷氧基、或聯(lián)苯基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1是-NH2；R2和R3是-OH；(ii)用氨基保護(hù)基將在2、4和5位的氨基R1保護(hù)；(iii)使用鄰苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽作為偶聯(lián)劑在3位形成酰胺鍵；(iv)除去所述的氨基保護(hù)基。
9.制備假單孢菌素化合物的8-酰氨基衍生物的方法，包括下述步驟(i)提供具有下述結(jié)構(gòu)的假單孢菌素化合物、及其可藥用鹽和溶劑化物， 其中R是 其中Ra和Ra′獨(dú)立地為氫或甲基，或者Ra或Ra′為烷基氨基、與Rb或Rb′一起形成6-元環(huán)烷基環(huán)、6-元芳環(huán)或雙鍵，或者與Rc一起形成6-元芳環(huán)；Rb和Rb′獨(dú)立地為氫、鹵素、或甲基，或者Rb或Rb′是氨基、烷基氨基、α-乙酰乙酸酯、甲氧基、或羥基；Rc是氫、羥基、C1-C4烷氧基、羥基(C1-C4)烷氧基，或者與Re一起形成6-元芳環(huán)或C5-C6環(huán)烷基環(huán)；Re是氫，或者與Rf一起形成6-元芳環(huán)、C5-C14烷氧基取代的6-元芳環(huán)、或C5-C14烷基取代的6-元芳環(huán)，且Rf是C6-C18烷基、C5-C11烷氧基、或聯(lián)苯基；R是 其中Rg是氫、或C1-C13烷基，且Rh是C1-C15烷基、C4-C15烷氧基、(C1-C10烷基)苯基、-(CH2)n-芳基、或-(CH2)n-(C5-C6環(huán)烷基)，其中n＝1或2；或者R是 其中Ri是氫、鹵素、或C5-C8烷氧基，且m是1、2或3；R是 其中Rj是C5-C14烷氧基或C5-C14烷基，且p＝0、1或2；R是 其中Rk是C5-C14烷氧基；或者R是-(CH2)-NRm-(C13-C18烷基)，其中Rm是H、-CH3或-C(O)CH3；R1是-NH2；R2和R3是-OH；(ii)用氨基保護(hù)基將在2、4和5位的氨基保護(hù)；(iii)使用苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽作為偶聯(lián)劑在8位形成酰胺鍵；(iv)除去所述的氨基保護(hù)基。
10.一種藥物制劑，它包含權(quán)利要求1的化合物和可藥用載體。
11.一種藥物制劑，它包含權(quán)利要求2的前藥和可藥用載體。
12.治療動(dòng)物中抗真菌感染的方法，包括給所述動(dòng)物施用權(quán)利要求1的假單孢菌素化合物。
13.治療動(dòng)物中抗真菌感染的方法，包括給所述動(dòng)物施用權(quán)利要求2的前藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然或半合成假單孢菌素化合物的天冬氨酸和/或羥基天冬氨酸單元的酸修飾,以及抗真菌活性治療的方法。
文檔編號(hào)C07K7/06GK1362966SQ00810330
公開日2002年8月7日 申請(qǐng)日期2000年6月8日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月15日
發(fā)明者陳曙輝, C·S·加爾卡, S·L·赫爾曼, J·L·克爾斯特南斯基, M·J·羅德里格茨, 孫喜成, A·Y·烏斯亞廷斯基, V·瓦蘇德范, M·J·茨維菲爾 申請(qǐng)人:伊萊利利公司