專利名稱：具有促進(jìn)3t3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的新的人蛋白及其編碼序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及新的編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。
人基因組學(xué)研究目前是國(guó)際上的熱點(diǎn)，除人染色體DNA大規(guī)模測(cè)序，表達(dá)序列測(cè)序(EST)的方法外，還缺少?gòu)墓δ荛_(kāi)始的篩選具有功能基因的高通量的方法。
癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預(yù)防腫瘤，目前人們已越來(lái)越關(guān)注腫瘤的基因治療。因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)研究與癌細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)的人蛋白及其激動(dòng)劑/抑制劑。
本發(fā)明的目的是提供一類新的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白多肽以及其片段、類似物和衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。
本發(fā)明的另一目的是提供生產(chǎn)這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供新穎的分離出的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼上述的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23。更佳地，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24的編碼區(qū)序列或全長(zhǎng)序列。
在本發(fā)明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞或者被上述多核苷酸直接轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
在本發(fā)明的第四方面，提供了制備具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白活性的多肽的制備方法，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的條件下，培養(yǎng)上述被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白活性的多肽。
在本發(fā)明的第五方面，提供了與上述的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。還提供了可用于檢測(cè)的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中連續(xù)10個(gè)核苷酸至全長(zhǎng)核苷酸，較佳地它含有連續(xù)的約10-800個(gè)核苷酸。
在本發(fā)明的第六方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。這些藥物組合物可用于促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的針對(duì)本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽的拮抗劑(如抗體)以及藥學(xué)上可接受的載體。該藥物組合物可治療癌癥以及細(xì)胞異常增殖等病癥。
本發(fā)明的其它方面由于本文的技術(shù)的公開(kāi)，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。
3T3細(xì)胞是一種小鼠成纖維細(xì)胞(J.Cell.Biol.，17299，1963)。在癌癥研究領(lǐng)域中，常將外源基因(尤其是人基因)引入3T3細(xì)胞，觀察其對(duì)3T3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響情況。通常認(rèn)為，對(duì)3T3細(xì)胞生長(zhǎng)(或惡性轉(zhuǎn)化)有影響的基因是癌癥相關(guān)基因，其中對(duì)3T3細(xì)胞生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)化有抑制作用的基因大多是抑癌基因，而對(duì)3T3細(xì)胞生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用的基因大多是(原)癌基因。
本發(fā)明采用大規(guī)模cDNA克隆轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3，在獲得具有促進(jìn)生長(zhǎng)作用的基礎(chǔ)上，經(jīng)測(cè)序證明為新的基因，進(jìn)一步得到全長(zhǎng)cDNA克隆。DNA轉(zhuǎn)染試驗(yàn)證明，本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋自對(duì)3T3細(xì)胞具有促進(jìn)克隆形成的作用，其促進(jìn)率≥50％。
如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(lái)(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒(méi)有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開(kāi)，則為分離純化的。
如本文所用，“分離的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白或多肽”是指具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白?；旧霞兊亩嚯脑诜沁€原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細(xì)菌、酵母、高等植物、昆蟲(chóng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中產(chǎn)生。根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本發(fā)明的天然具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白相同的生物學(xué)功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(i)有一個(gè)或多個(gè)保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(ii)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中具有取代基團(tuán)的多肽，或(iii)成熟多肽與另一個(gè)化合物(比如延長(zhǎng)多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來(lái)純化此多肽的序列或蛋白原序列)。根據(jù)本文的教導(dǎo)，這些片段、衍生物和類似物屬于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的范圍。
本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。以PP12719蛋白(在本申請(qǐng)中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO3所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡(jiǎn)并的變異體。如本文所用，“簡(jiǎn)并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO2的蛋白質(zhì)，但與SEQ ID NO3所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。再以PP13181蛋白(在本申請(qǐng)中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO6所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡(jiǎn)并的變異體。對(duì)于其他具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白，依此類推。
編碼成熟多肽的多核苷酸包括只編碼成熟多肽的編碼序列；成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列；成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。
術(shù)語(yǔ)“編碼多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個(gè)多核苷酸的替換形式，它可能是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的取代、缺失或插入，但不會(huì)從實(shí)質(zhì)上改變其編碼的多肽的功能。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個(gè)序列之間具有至少50％，較佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴(yán)格條件下與本發(fā)明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中，“嚴(yán)格條件”是指(1)在較低離子強(qiáng)度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)雜交時(shí)加有變性劑，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95％以上，更好是97％以上時(shí)才發(fā)生雜交。并且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與SEQ IDNO2所示的成熟多肽(以PP12719蛋白為例)有相同的生物學(xué)功能和活性。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的長(zhǎng)度至少含15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴(kuò)增技術(shù)(如PCR)以確定和/或分離編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的多聚核苷酸。
本發(fā)明中的多肽和多核苷酸優(yōu)選以分離的形式提供，更佳地被純化至均質(zhì)。
本發(fā)明的DNA序列能用幾種方法獲得。例如，用本領(lǐng)域熟知的雜交技術(shù)分離DNA。這些技術(shù)包括但不局限于1)用探針與基因組或cDNA文庫(kù)雜交以檢出同源性核苷酸序列，和2)表達(dá)文庫(kù)的抗體篩選以檢出具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆的DNA片段。
編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的特異DNA片段序列產(chǎn)生也能用下列方法獲得1)從基因組DNA分離雙鏈DNA序列；2)化學(xué)合成DNA序列以獲得所需多肽的雙鏈DNA。
當(dāng)需要的多肽產(chǎn)物的整個(gè)氨基酸序列已知時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是經(jīng)常選用的方法。如果所需的氨基酸的整個(gè)序列不清楚時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是不可能的，選用的方法是cDNA序列的分離。分離感興趣的cDNA的標(biāo)準(zhǔn)方法是從高表達(dá)該基因的供體細(xì)胞分離mRNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，形成質(zhì)粒或噬菌體cDNA文庫(kù)。提取mRNA的方法已有多種成熟的技術(shù)，試劑盒也可從商業(yè)途徑獲得(Qiagene)。而構(gòu)建cDNA文庫(kù)也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory.New York，1989)。還可得到商業(yè)供應(yīng)的cDNA文庫(kù)，如Clontech公司的不同cDNA文庫(kù)。當(dāng)結(jié)合使用聚合酶反應(yīng)技術(shù)時(shí)，即使極少的表達(dá)產(chǎn)物也能克隆。
可用常規(guī)方法從這些cDNA文庫(kù)中篩選本發(fā)明的基因。這些方法包括(但不限于)；(1)DNA-DNA或DNA-RNA雜交；(2)標(biāo)志基因的功能出現(xiàn)或喪失；(3)測(cè)定具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄本的水平；(4)通過(guò)免疫學(xué)技術(shù)或測(cè)定生物學(xué)活性，來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。上述方法可單用，也可多種方法聯(lián)合應(yīng)用。
在第(1)種方法中，雜交所用的探針是與本發(fā)明的多核苷酸的任何一部分同源，其長(zhǎng)度至少15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸。此外，探針的長(zhǎng)度通常在2kb之內(nèi)，較佳地為1kb之內(nèi)。此處所用的探針通常是在本發(fā)明的基因DNA序列信息的基礎(chǔ)上化學(xué)合成的DNA序列。本發(fā)明的基因本身或者片段當(dāng)然可以用作探針。DNA探針的標(biāo)記可用放射性同位素，熒光素或酶(如堿性磷酸酶)等。
在第(4)種方法中，檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物可用免疫學(xué)技術(shù)如Western印跡法，放射免疫沉淀法，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。
應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 19852301350-1354)被優(yōu)選用于獲得本發(fā)明的基因。特別是很難從文庫(kù)中得到全長(zhǎng)的cDNA時(shí)，可優(yōu)選使用RACE法(RACE-cDNA末端快速擴(kuò)增法)，用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開(kāi)的本發(fā)明的序列信息適當(dāng)?shù)剡x擇，并可用常規(guī)方法合成?？捎贸Ｒ?guī)方法如通過(guò)凝膠電泳分離和純化擴(kuò)增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本發(fā)明的基因，或者各種DNA片段等的核苷酸序列的測(cè)定可用常規(guī)方法如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)。這類核苷酸序列測(cè)定也可用商業(yè)測(cè)序試劑盒等。為了獲得全長(zhǎng)的cDNA序列，測(cè)序需反復(fù)進(jìn)行。有時(shí)需要測(cè)定多個(gè)克隆的cDNA序列，才能拼接成全長(zhǎng)的cDNA序列。
本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明多核苷酸的載體，以及用本發(fā)明的載體或具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白編碼序列經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細(xì)胞，以及經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明所述多肽的方法。
通過(guò)常規(guī)的重組DNA技術(shù)(Science，1984；2241431)，可利用本發(fā)明的多聚核苷酸序列可用來(lái)表達(dá)或生產(chǎn)重組的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽。一般來(lái)說(shuō)有以下步驟(1).用本發(fā)明的編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多核苷酸(或變異體)，或用含有該多核苷酸的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細(xì)胞；(2).在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細(xì)胞；(3).從培養(yǎng)基或細(xì)胞中分離、純化蛋白質(zhì)。
本發(fā)明中，具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重組表達(dá)載體中。術(shù)語(yǔ)“重組表達(dá)載體”指本領(lǐng)域熟知的細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、植物細(xì)胞病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞病毒如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體。在本發(fā)明中適用的載體包括但不限于在細(xì)菌中表達(dá)的基于T7的表達(dá)載體(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)；在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的pMSXND表達(dá)載體(Lee and Nathans，J Bio Chem.2633521，1988)和在昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)的來(lái)源于桿狀病毒的載體?？傊?，只要能在宿主體內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以用。表達(dá)載體的一個(gè)重要特征是通常含有復(fù)制起點(diǎn)、啟動(dòng)子、標(biāo)記基因和翻譯控制元件。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白編碼DNA序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號(hào)的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等(Sambroook，et al)。所述的DNA序列可有效連接到表達(dá)載體中的適當(dāng)啟動(dòng)子上，以指導(dǎo)mRNA合成。這些啟動(dòng)子的代表性例子有大腸桿菌的lac或trp啟動(dòng)子；λ噬菌體PL啟動(dòng)子；真核啟動(dòng)子包括CMV立即早期啟動(dòng)子、早期和晚期SV40啟動(dòng)子和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細(xì)胞或其病毒中表達(dá)的啟動(dòng)子。表達(dá)載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。
此外，表達(dá)載體優(yōu)選地包含一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP)，或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。
包含上述的適當(dāng)DNA序列以及適當(dāng)啟動(dòng)子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，以使其能夠表達(dá)蛋白質(zhì)。
宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高等真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞。代表性例子有大腸桿菌，鏈霉菌屬；鼠傷寒沙門氏菌的細(xì)菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞如酵母；植物細(xì)胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲(chóng)細(xì)胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞等。
本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，如果在載體中插入增強(qiáng)子序列時(shí)將會(huì)使轉(zhuǎn)錄得到增強(qiáng)。增強(qiáng)子是DNA的順式作用因子，通常大約有10到300個(gè)堿基對(duì)，作用于啟動(dòng)子以增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄?？膳e的例子包括在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的100到270個(gè)堿基對(duì)的SV40增強(qiáng)子、在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的多瘤增強(qiáng)子以及腺病毒增強(qiáng)子等。
本領(lǐng)域一般技術(shù)人員都清楚如何選擇適當(dāng)?shù)妮d體、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和宿主細(xì)胞。
用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。當(dāng)宿主為原核生物如大腸桿菌時(shí)，能吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞可在指數(shù)生長(zhǎng)期后收獲，用CaCl2法處理，所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知?？晒┻x擇的是用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的方法進(jìn)行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機(jī)械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。
獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，表達(dá)本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細(xì)胞，培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)宿主細(xì)胞生長(zhǎng)到適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度后，用合適的方法(如溫度轉(zhuǎn)換或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇的啟動(dòng)子，將細(xì)胞再培養(yǎng)一段時(shí)間。
在上面的方法中的重組多肽可包被于細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外或在細(xì)胞膜上表達(dá)或分泌到細(xì)胞外。如果需要，可利用其物理的、化學(xué)的和其它特性通過(guò)各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于常規(guī)的復(fù)性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過(guò)濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)合。
重組的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白功能低下或喪失所致的疾病，和用于篩選促進(jìn)或?qū)咕哂写龠M(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白功能的抗體、多肽或其它配體。例如，該抗體可用于治療癌癥或細(xì)胞異常增殖。用重組表達(dá)的本發(fā)明蛋白篩選多肽庫(kù)可用于尋找有治療價(jià)值的能抑制或刺激具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白功能的多肽分子。
本發(fā)明也提供了篩選藥物以鑒定提高(激動(dòng)劑)或阻遏(拮抗劑)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的藥劑的方法。激動(dòng)劑提高具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白刺激細(xì)胞增殖等生物功能，而拮抗劑阻止和治療與細(xì)胞過(guò)度增殖有關(guān)的紊亂如各種癌癥。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的拮抗劑包括篩選出的抗體、化合物、受體缺失物和類似物等。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的拮抗劑可以與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白結(jié)合并消除其功能，或是抑制具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的產(chǎn)生，或是與多肽的活性位點(diǎn)結(jié)合使多肽不能發(fā)揮生物學(xué)功能。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的拮抗劑可用于治療用途。
在篩選作為拮抗劑的化合物時(shí)，可以將具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白加入生物分析測(cè)定中，通過(guò)測(cè)定化合物影響具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白和其受體之間的相互作用來(lái)確定化合物是否是拮抗劑。用上述篩選化合物的同樣方法，可以篩選出起拮抗劑作用的受體缺失物和類似物。
本發(fā)明蛋白的拮抗劑可直接用于疾病治療，例如，各種惡性腫瘤、和細(xì)胞異常增殖等。
本發(fā)明的多肽，及其片段、衍生物、類似物或它們的細(xì)胞可以用來(lái)作為抗原以生產(chǎn)抗體。這些抗體可以是多克隆或單克隆抗體。多克隆抗體可以通過(guò)將此多肽直接注射動(dòng)物的方法得到。制備單克隆抗體的技術(shù)包括雜交瘤技術(shù)，三瘤技術(shù)，人B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，EBV-雜交瘤技術(shù)等。
可以將本發(fā)明的多肽和拮抗劑與合適的藥物載體組合后使用。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩沖液、甘油以及它們的組合。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑以及不影響藥物效果的載體和賦形劑。這些組合物可以作為藥物用于疾病治療。
本發(fā)明還提供含有一種或多種容器的藥盒或試劑盒，容器中裝有一種或多種本發(fā)明的藥用組合物成分。與這些容器一起，可以有由制造、使用或銷售藥品或生物制品的政府管理機(jī)構(gòu)所給出的指示性提示，該提示反映出生產(chǎn)、使用或銷售的政府管理機(jī)構(gòu)許可其在人體上施用。此外，本發(fā)明的多肽可以與其它的治療化合物結(jié)合使用。
藥物組合物可以以方便的方式給藥，如通過(guò)局部、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或皮內(nèi)的給藥途徑。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白或其特異性抗體，可按有效地治療和/或預(yù)防具體的適應(yīng)癥的量來(lái)給藥。施用于患者的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的量和劑量范圍將取決于許多因素，如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫(yī)生的判斷。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多種治療目的?；蛑委熂夹g(shù)可用于治療由于具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的無(wú)表達(dá)或異常/無(wú)活性的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的表達(dá)所致的細(xì)胞發(fā)育或代謝異常。重組的基因治療載體(如病毒載體)可設(shè)計(jì)成表達(dá)變異的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白，以抑制內(nèi)源性的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白活性。例如，一種變異的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白可以是縮短的、缺失了信號(hào)傳導(dǎo)功能域的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白，雖可與下游的底物結(jié)合，但缺乏信號(hào)傳導(dǎo)活性。因此重組的基因治療載體可用于治療具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白表達(dá)或活性異常所致的疾病。來(lái)源于病毒的表達(dá)載體如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺病毒相關(guān)病毒、單純皰疹病毒、細(xì)小病毒等可用于將具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。構(gòu)建攜帶具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因的重組病毒載體的方法可見(jiàn)于已有文獻(xiàn)(Sambrook，et al.)。另外重組具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白基因可包裝到脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。
抑制具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酶也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。核酶是一種能特異性分解特定RNA的酶樣RNA分子，其作用機(jī)制是核酶分子與互補(bǔ)的靶RNA特異性雜交后進(jìn)行核酸內(nèi)切作用。反義的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技術(shù)獲得，如固相磷酸酰胺化學(xué)合成法合成寡核苷酸的技術(shù)已廣泛應(yīng)用。反義RNA分子可通過(guò)編碼該RNA的DNA序列在體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)錄獲得。這種DNA序列已整合到載體的RNA聚合酶啟動(dòng)子的下游。為了增加核酸分子的穩(wěn)定性，可用多種方法對(duì)其進(jìn)行修飾，如增加兩側(cè)的序列長(zhǎng)度，核糖核苷之間的連接應(yīng)用磷酸硫酯鍵或肽鍵而非磷酸二酯鍵。
多聚核苷酸導(dǎo)入組織或細(xì)胞內(nèi)的方法包括將多聚核苷酸直接注入到體內(nèi)組織中；或在體外通過(guò)載體(如病毒、噬菌體或質(zhì)粒等)先將多聚核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞中，再將細(xì)胞移植到體內(nèi)等。由于本發(fā)明蛋白具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化的功能，因此本發(fā)明蛋白編碼序列的反義序列，可被引入細(xì)胞以抑制細(xì)胞的異常增殖(如癌變)。
本發(fā)明還提供了針對(duì)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白抗原決定簇的抗體。這些抗體包括(但不限于)多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達(dá)文庫(kù)產(chǎn)生的片段。
抗具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測(cè)活檢標(biāo)本中的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白。
與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白結(jié)合的單克隆抗體也可用放射性同位素標(biāo)記，注入體內(nèi)可跟蹤其位置和分布。這種放射性標(biāo)記的抗體可作為一種非創(chuàng)傷性診斷方法用于腫瘤細(xì)胞的定位和判斷是否有轉(zhuǎn)移。
本發(fā)明中的抗體可用于治療或預(yù)防與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白相關(guān)的疾病。給予適當(dāng)劑量的抗體可以阻斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的產(chǎn)生或活性，從而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或細(xì)胞的異常增殖。
抗體也可用于設(shè)計(jì)針對(duì)體內(nèi)某一特殊部位的免疫毒素。如具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白高親和性的單克隆抗體可與細(xì)菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，紅豆堿等)共價(jià)結(jié)合。一種通常的方法是用巰基交聯(lián)劑如SPDP，攻擊抗體的氨基，通過(guò)二硫鍵的交換，將毒素結(jié)合于抗體上，這種雜交抗體可用于殺滅有關(guān)的陽(yáng)性細(xì)胞(如癌細(xì)胞)。
多克隆抗體的生產(chǎn)可用具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白或多肽免疫動(dòng)物，如家兔，小鼠，大鼠等。多種佐劑可用于增強(qiáng)免疫反應(yīng)，包括但不限于弗氏佐劑等。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白單克隆抗體可用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)(Kohler andMilstein.Nature，1975，256495-497)。將人恒定區(qū)和非人源的可變區(qū)結(jié)合的嵌合抗體可用已有的技術(shù)生產(chǎn)(Morrison et al，PNAS，1985，816851)。而已有的生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)(U.S.Pat No.4946778)也可用于生產(chǎn)抗具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的單鏈抗體。
能與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白結(jié)合的多肽分子可通過(guò)篩選由各種可能組合的氨基酸結(jié)合于固相物組成的隨機(jī)多肽庫(kù)而獲得。篩選時(shí)，必須對(duì)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白分子進(jìn)行標(biāo)記。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白水平的診斷試驗(yàn)方法。這些試驗(yàn)為本領(lǐng)域所熟知，且包括FISH測(cè)定和放射免疫測(cè)定。試驗(yàn)中所檢測(cè)的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白水平，可以用作解釋具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白在各種疾病中的重要性和用于診斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白起作用的疾病。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。在診斷方面，具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的表達(dá)與否或在疾病狀態(tài)下具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的異常表達(dá)。如具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白DNA序列可用于對(duì)活檢標(biāo)本的雜交以判斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的表達(dá)異常。雜交技術(shù)包括Southern印跡法，Northern印跡法、原位雜交等。這些技術(shù)方法都是公開(kāi)的成熟技術(shù)，相關(guān)的試劑盒都可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片(即基因芯片)上，用于分析組織中基因的差異表達(dá)分析和基因診斷。用具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白特異的引物進(jìn)行RNA-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)體外擴(kuò)增也可檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因的突變也可用于診斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白相關(guān)的疾病。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白突變的形式包括與正常野生型具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白DNA序列相比的點(diǎn)突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等?？捎靡延械募夹g(shù)如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測(cè)突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達(dá)，因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無(wú)突變。
本發(fā)明的序列對(duì)染色體鑒定也是有價(jià)值的。這些序列會(huì)特異性地針對(duì)某條人染色體具體位置且并可以與其雜交。目前，需要鑒定染色體上的各基因的具體位點(diǎn)。然而現(xiàn)在只有很少的基于實(shí)際序列數(shù)據(jù)(重復(fù)多態(tài)性)的染色體標(biāo)記物可用于標(biāo)記染色體位置。為了將這些序列與疾病相關(guān)基因相關(guān)聯(lián)。第一步就是將本發(fā)明DNA序列定位于染色體上。
簡(jiǎn)而言之，根據(jù)cDNA制備PCR引物(優(yōu)選15-35bp)，可以將序列定位于染色體上。然后，將這些引物用于PCR篩選含各條人染色體的體細(xì)胞雜合細(xì)胞。只有那些含有相應(yīng)于引物的人基因的雜合細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增的片段。
體細(xì)胞雜合細(xì)胞的PCR定位法，是將DNA定位到具體染色體的快捷方法。使用本發(fā)明的的寡核苷酸引物，通過(guò)類似方法，可利用一組來(lái)自特定染色體的片段或大量基因組克隆而實(shí)現(xiàn)亞定位?？捎糜谌旧w定位的其它類似策略包括原位雜交、用標(biāo)記的流式分選的染色體預(yù)篩選和雜交預(yù)選，從而構(gòu)建染色體特異的cDNA庫(kù)。
將cDNA克隆與中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)，可以在一個(gè)步驟中精確地進(jìn)行染色體定位。此技術(shù)的綜述，參見(jiàn)Verma等，Human Chromosomesa Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。
一旦序列被定位到準(zhǔn)確的染色體位置，此序列在染色體上的物理位置就可以與基因圖數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。這些數(shù)據(jù)可見(jiàn)于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通過(guò)與Johns Hopkins University Welch Medical Library聯(lián)機(jī)獲得)。然后可通過(guò)連鎖分析，確定基因與業(yè)已定位到染色體區(qū)域上的疾病之間的關(guān)系。
接著，需要測(cè)定患病和未患病個(gè)體間的cDNA或基因組序列差異。如果在一些或所有的患病個(gè)體中觀察到某突變，而該突變?cè)谌魏握€(gè)體中未觀察到，則該突變可能是疾病的病因。比較患病和未患病個(gè)體，通常涉及首先尋找染色體中結(jié)構(gòu)的變化，如從染色體水平可見(jiàn)的或用基于cDNA序列的PCR可檢測(cè)的缺失或易位。
本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白核苷酸全長(zhǎng)序列或其片段通常可以用PCR擴(kuò)增法、重組法或人工合成的方法獲得。對(duì)于PCR擴(kuò)增法，可根據(jù)本發(fā)明所公開(kāi)的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開(kāi)放閱讀框序列來(lái)設(shè)計(jì)引物，并用市售的cDNA庫(kù)或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫(kù)作為模板，擴(kuò)增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長(zhǎng)時(shí)，常常需要進(jìn)行兩次或多次PCR擴(kuò)增，然后再將各次擴(kuò)增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來(lái)大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過(guò)常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到有關(guān)序列。
此外，還可用人工合成的方法來(lái)合成有關(guān)序列，尤其是片段長(zhǎng)度較短時(shí)。通常，通過(guò)先合成多個(gè)小片段，然后再進(jìn)行連接可獲得序列很長(zhǎng)的片段。
目前，已經(jīng)可以完全通過(guò)化學(xué)合成來(lái)編碼本發(fā)明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領(lǐng)域中的各種DNA分子(如載體)和細(xì)胞中。此外，還可通過(guò)化學(xué)合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。
此外，由于本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，與來(lái)源于其他物種的同族蛋白相比，預(yù)計(jì)在施用于人時(shí)將具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人體內(nèi)的免疫原性更低或沒(méi)有)。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New YorkCold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。注意，在核苷酸和氨基酸組合序列中，(1)給出的是起始和終止編碼子第一個(gè)核苷酸的位置，(2)分子量單位是道爾頓。
實(shí)施例1cDNA基因的獲得及對(duì)3T3細(xì)胞克隆形成的促進(jìn)作用PP12719、PP13181、PP13191、PP13479、PP13439、PP13842、PP14673和PP14776是通過(guò)用常規(guī)方法構(gòu)建人胎盤cDNA文庫(kù)獲得的。取3、6、10月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說(shuō)明書提取總RNA，用mRNA提純?cè)噭┖?Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒(Stratagene公司)構(gòu)建上述mRNA的cDNA文庫(kù)。其中反轉(zhuǎn)錄酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCOBRL)，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在42℃進(jìn)行。轉(zhuǎn)化XL 10-Gold感受細(xì)胞，獲得了1×106cfu/μg滴度的cDNA文庫(kù)。第一輪隨機(jī)挑取cDNA克隆，其后以高豐度cDNA克隆和已證明有抑癌細(xì)胞生長(zhǎng)功能的cDNA克隆為探針，雜交篩選cDNA文庫(kù)，挑取弱陽(yáng)性及陰性克隆。用Qiagen 96孔板質(zhì)粒抽提試劑盒，按廠家說(shuō)明書進(jìn)行質(zhì)粒DNA的提取。質(zhì)粒DNA和空載體同時(shí)轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞系。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待轉(zhuǎn)染。每份DNA樣品中加0.74μl脂質(zhì)體及9.3μl無(wú)血清培液，混勻后，室溫放置10分鐘。每管中加150μl無(wú)血清培液，均分加入3孔生長(zhǎng)于96孔板的3T3細(xì)胞中，37℃放置2小時(shí)，每孔再加50μl無(wú)血清培液，37℃24小時(shí)。每孔換100μl全培液，37℃24小時(shí)，換含G418的全培液100μl，37℃24-48小時(shí)，邊觀察，邊換G418濃度不等的培液。約2-3次后，直到鏡檢細(xì)胞有克隆形成，計(jì)數(shù)。發(fā)現(xiàn)以上克隆有促進(jìn)細(xì)胞克隆形成作用，結(jié)果如下表所示。
cDNA克隆轉(zhuǎn)染細(xì)胞(3T3)的克隆形成情況
對(duì)cDNA克隆采用雙脫氧終止法，在ABI377 DNA自動(dòng)測(cè)序儀上測(cè)定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，確定為新基因克隆，進(jìn)行另一端測(cè)序。對(duì)于仍未獲得全長(zhǎng)cDNA序列的，設(shè)計(jì)引物，再次進(jìn)行測(cè)序，直到獲得全長(zhǎng)序列(SEQ ID NO1、4、7、10、13、16、19、22)。
實(shí)施例2從胎盤cDNA中PCR獲得全長(zhǎng)基因取3、6、10月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說(shuō)明書提取總RNA，用mRNA提純?cè)噭┖?Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL)，反轉(zhuǎn)錄酶在42℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得胎盤cDNA。利用各個(gè)基因的轉(zhuǎn)異引物(如下表所示)，按97℃3分鐘、1個(gè)循環(huán)；94℃30秒→60℃30秒→72℃1分鐘，共35個(gè)循環(huán)；72℃10分鐘，1個(gè)循環(huán)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得含有完整開(kāi)放閱讀框序列的各蛋白基因的擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證，與實(shí)施例1測(cè)得的序列相符，隨后用常規(guī)技術(shù)將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，獲得重組蛋白(SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23)。
基因特異引物
實(shí)施例3cDNA克隆序列分析1. PP12719A核苷酸序列(SEQ ID NO1)長(zhǎng)度11791 GTGGGATTAC AGGCGTGAGC CACCACCACA CCCAGCCCTG GGAATGGAGT CTTGATTCTT61 CTCTGCCCCT CACTGATTCT TCCAAACTGG AAACCCTGAA GCTGAGAGCC CAGCATGGTT121 CCTGGCAAAC AGCAGGCACT CAAATATTGA TTGGTTTACT GTATGACTAG TAGAGACCCC181 AACGAGCAAA ACTGTGGCCT AATAAAATTC TGGCTCCTCT CCCAGACTTC CCCTCCCTTT241 GAGAAATGCC AGAAGCTTCT TAGGGAGGCT CTTGCCAACC TAGACATCAC AGGCACTCAT301 GGGGCAGCTC CAGCCTCTTC CTCCTGTCAT CACCATAATG CATCCATATC TACAATATGG361 CAAATTTCAT ATCCTTCCAA CCTCTTTCCT GCATTATTGA TGGGCTGTGT GCACTTTTTA421 AAAAATCAAT TAGATCAGGG CGTGGAGCTG GAGTTCAAAG AAGCCTTTAA AAGTCTGCTC481 TTCTGTTTTG CTGTTTTGAA TAGGCACAGA TAAAGCTTTC CCTCTGGTTT GAATAAGCCA541 AGCTCAGTGC TAGGTTGGCT CTGATTGGCC AGGACTAGGA AAATGCGGTT AAGATGCAAA601 CACAAGCAAA TATAACCCAG TATCTCTGTG GCCATTACTA AGCTAAGGCA GCAGGACCTG661 GAGCCTCCTG CTTTGGAGTG GTTCTTCAAT ACTGCTGCTG CTTACGCGCC GGGAAACTGG721 GAAGGCTGGT GAGCGAGAAG GCAAGGTAAG GTCTCTGATT TACGGGGGCA TGCCAGTTAA781 TCCTCCTGAA TGAGGAAGAA ATGAAAGGAA GAGGAGCTTG AGAGTCCCTT GGCTTTGTCT841 TCTGAGATGA GGCTTTTAAA ATGAACCAGG AGTCTGGCTG GCCAGTTTTG CAAACTTCTT901 GTTCAGAAGA ACCCCTTAGA GGCAGCTGAA CATATAGGGC ACATTTTCAA AAGCTGGGAA961 AGACAGACCC CTTTCACCTA TCCCTAGAGA AAGATGGTAT GGAGCAAGGC AGGAGGAGTT1021 AAAACCAGCT TCCTGGCCCA GAGAGGTGGC TTACACCTGT AATCCCAACA CTTTGGGAAG1081 CCAGGGCATG AGGATTGTTT GAGCCCAGGA GTTTGTAACT TGTGACCATC CTGGGCAACA1141 TAGTGAGACC CTGTCTCTAC AAAAAAAAAA AAAAAAAAAB核苷酸序列 (SEQ ID NO2) 長(zhǎng)度1161 MTSRDPNEQN CGLIKFWLLS QTSPPFEKCQ KLLREALANL DITGTHGAAP ASSSCHHHNA61 SISTIWQISY PSNLFPALLM GCVHFLKNQL DQGVELEFKE AFKSLLFCFA VLNRHRC.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO3)克隆號(hào) PP12719起始編碼子163 ATG 終止編碼子511 TAA 蛋白質(zhì)分子量13057.341 GTG GGA TTA CAG GCG TGA GCC ACC ACC ACA CCC AGC CCT GGG AAT GGA 4849 GTC TTG ATT CTT CTC TGC CCC TCA CTG ATT CTT CCA AAC TGG AAA CCC 9697 TGA AGC TGA GAG CCC AGC ATG GTT CCT GGC AAA CAG CAG GCA CTC AAA144145 TAT TGA TTG GTT TAC TGT ATG ACT AGT AGA GAC CCC AAC GAG CAA AAC1921 Met Thr Ser Arg Asp Pro Asn Glu Gln Asn 10193 TGT GGC CTA ATA AAA TTC TGG CTC CTC TCC CAG ACT TCC CCT CCC TTT24011 Cys Gly Leu Ile Lys Phe Trp Leu Leu Ser Gln Thr Ser Pro Pro Phe 26241 GAG AAA TGC CAG AAG CTT CTT AGG GAG GCT CTT GCC AAC CTA GAC ATC28827 Glu Lys Cys Gln Lys Leu Leu Arg Glu Ala Leu Ala Asn Leu Asp Ile 42289 ACA GGC ACT CAT GGG GCA GCT CCA GCC TCT TCC TCC TGT CAT CAC CAT33643 Thr Gly Thr His Gly Ala Ala Pro Ala Ser Ser Ser Cys His His His 58337 AAT GCA TCC ATA TCT ACA ATA TGG CAA ATT TCA TAT CCT TCC AAC CTC38459 Asn Ala Ser Ile Ser Thr Ile Trp Gln Ile Ser Tyr Pro Ser Asn Leu 74385 TTT CCT GCA TTA TTG ATG GGC TGT GTG CAC TTT TTA AAA AAT CAA TTA43275 Phe Pro Ala Leu Leu Met Gly Cys Val His Phe Leu Lys Asn Gln Leu 90433 GAT CAG GGC GTG GAG CTG GAG TTC AAA GAA GCC TTT AAA AGT CTG CTC48091 Asp Gln Gly Val Glu Leu Glu Phe Lys Glu Ala Phe Lys Ser Leu Leu106481 TTC TGT TTT GCT GTT TTG AAT AGG CAC AGA TAA AGC TTT CCC TCT GGT528107 Phe Cys Phe Ala Val Leu Asn Arg His Arg ***117529 TTG AAT AAG CCA AGC TCA GTG CTA GGT TGG CTC TGA TTG GCC AGG ACT576577 AGG AAA ATG CGG TTA AGA TGC AAA CAC AAG CAA ATA TAA CCC AGT ATC624625 TCT GTG GCC ATT ACT AAG CTA AGG CAG CAG GAC CTG GAG CCT CCT GCT672673 TTG GAG TGG TTC TTC AAT ACT GCT GCT GCT TAC GCG CCG GGA AAC TGG720721 GAA GGC TGG TGA GCG AGA AGG CAA GGT AAG GTC TCT GAT TTA CGG GGG768769 CAT GCC AGT TAA TCC TCC TGA ATG AGG AAG AAA TGA AAG GAA GAG GAG816817 CTT GAG AGT CCC TTG GCT TTG TCT TCT GAG ATG AGG CTT TTA AAA TGA864865 ACC AGG AGT CTG GCT GGC CAG TTT TGC AAA CTT CTT GTT CAG AAG AAC912913 CCC TTA GAG GCA GCT GAA CAT ATA GGG CAC ATT TTC AAA AGC TGG GAA960961 AGA CAG ACC CCT TTC ACC TAT CCC TAG AGA AAG ATG GTA TGG AGC AAG 10081009 GCA GGA GGA GTT AAA ACC AGC TTC CTG GCC CAG AGA GGT GGC TTA CAC 10561057 CTG TAA TCC CAA CAC TTT GGG AAG CCA GGG CAT GAG GAT TGT TTG AGC 11041105 CCA GGA GTT TGT AAC TTG TGA CCA TCC TGG GCA ACA TAG TGA GAC CCT 11521153 GTC TCT ACA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 11792. PP13181A核苷酸序列(SEQ ID NO4)長(zhǎng)度16521 GCGGCCCCCC TCTGAGGGCG AGTTCATCGA CTGCTTCCAG AAAATCAAGC TGGCGATTAA61 CTTGCTGGTG GGTCCGGTGG CCCCAGCCCT GCCCCACTGT CTGTGCTGAG GGGAGGGTGG121 AGGCCCCGCC CCGCCCCGGC ACCTGCTCAC TTGTTCCCAC CCCCAGGCAA AGCTGCAGAA181 GCACATCCAG AACCCCAGCG CCGCGGAGCT CGTGCACTTC CTCTTCGGGC CTCTGGACCT241 GGTGCCTGGG GCCGGGCGGC AGGGGCGCGC AGGGTGGGGG CCCAGAGGCC TCTGCAGCAT301 CTCCCCGGGG TCGGGGTTGG GGCAGCAGGT GCCCGCCTTG GGCAGCCCGG TTCACGCTGT361 GTGGCCACTC TCCTGGGGTC CAAAGTCCCT TCCCGAGGGC CAGCCTGTGG AGCTACGGGG421 GTGCTGGGCC AGGGTCTGTG GGCCTCAGTC CCCTCTGAAC CTCACTGTGC CCCAGATCGT481 CAACACCTGC AGTGGCCCAG ACATCGCACG CTCCGTCTCC TGCCCACTGC TCTCCCGAGA541 TGCCGTGGAC TTCCTGCGCG GCCACCTGGT CCCTAAGGAG ATGTCGCTGT GGGAGTCACT601 GGGAGAGAGC TGGATGCGGC CCCGTTCCGA GTGGCCGCGG GAGCCACAGG TGCCCCTCTA661 CGTGCCCAAG TTCCACAGCG GCTGGGAGCC TCCTGTGGAT GTGCTGCAGG AGGCCCCCTG721 GGAGGTGGAG GGGCTGGCGT CTGCCCCCAT CGAGGAGGTG AGTCCAGTGA GCCGACAGTC781 CATAAGAAAC TCCCAGAAGC ACAGCCCCAC TTCAGAGCCC ACCCCCCCGG GGGATGCCCT841 ACCACCAGTC AGCTCCCCAC ATACTCACAG GGGCTACCAG CCAACACCAG CCATGGCCAA901 GTACGTCAAG ATCCTGTATG ACTTCACAGC CCGAAATGCC AACGAGCTAT CGGTGCTCAA961 GGATGAGGTC CTAGAGGTGC TGGAGGACGG CCGGCAGTGG TGGAAGCTGC GCAGCCGCAG1021 CGGCCAGGCG GGGTACGTGC CCTGCAACAT CCTAGGCGAG GCGCGACCGG AGGACGCCGG1081 CGCCCCGTTC GAGCAGGCCG GTCAGAAAAG TACTGGGGCC CCGCCAGCCC GACCCACAAG1141 CTACCCCCAA GCTTCCCGGG GAACAAAGAC GAGCTCATGC AGCACATGGA CGAGGTCAAC1201 GACGAGCTCA TCCGGAAAAT CAGCAACATC AGGGCGCAGC CACAGAGGCA CTTCCGCGTG1261 GAGCGCAGCC AGCCCGTGAG CCAGCCGCTC ACCTACGAGT CGGGTCCGGA CGAGGTCCGC1321 GCCTGGCTGG AAGCCAAGGC CTTCAGCCCG CGGATCGTGG AGAACCTGGG CATCCTGACC1381 GGGCCGCAGC TCTTCTCCCT CAACAAGGAG GAGCTGAAGA AAGTGTGCGG CGAGGAGGGC1441 GTCCGCGTGT ACAGCCAGCT CACCATGCAG AAGGCCTTCC TGGAGAAGCA GCAAAGTGGG1501 TCGGAGCTGG AAGAACTCAT GAACAAGTTT CATTCCATGA ATCAGAGGAG GGGGGAGGAC1561 AGCTAGGCCC AGCTGCCTTG GGCTGGGGCC TGCGGAGGGG AAGCCCACCC ACAATGCATG1621 GAGTATTATT TTTAAAAAAA AAAAAAAAAA AAB核苷酸序列 (SEQ ID NO5) 長(zhǎng)度2321 MSLWESLGES WMRPRSEWPR EPQVPLYVPK FHSGWEPPVD VLQEAPWEVE GLASAPIEEV61 SPVSRQSIRN SQKHSPTSEP TPPGDALPPV SSPHTHRGYQ PTPAMAKYVK ILYDFTARNA121 NELSVLKDEV LEVLEDGRQW WKLRSRSGQA GYVPCNILGE ARPEDAGAPF EQAGQKSTGA181 PPARPTSYPQ ASRGTKTSSC STWTRSTTSS SGKSATSGRS HRGTSAWSAA SPC.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO6)克隆號(hào) PP13181起始編碼子581 ATG 終止編碼子1277 TGA 蛋白質(zhì)分子量25362.691 G CGG CCC CCC TCT GAG GGC GAG TTC ATC GAC TGC TTC CAG AAA ATC 4647 AAG CTG GCG ATT AAC TTG CTG GTG GGT CCG GTG GCC CCA GCC CTG CCC 9495 CAC TGT CTG TGC TGA GGG GAG GGT GGA GGC CCC GCC CCG CCC CGG CAC142143 CTG CTC ACT TGT TCC CAC CCC CAG GCA AAG CTG CAG AAG CAC ATC CAG190191 AAC CCC AGC GCC GCG GAG CTC GTG CAC TTC CTC TTC GGG CCT CTG GAC238239 CTG GTG CCT GGG GCC GGG CGG CAG GGG CGC GCA GGG TGG GGG CCC AGA286287 GGC CTC TGC AGC ATC TCC CCG GGG TCG GGG TTG GGG CAG CAG GTG CCC334335 GCC TTG GGC AGC CCG GTT CAC GCT GTG TGG CCA CTC TCC TGG GGT CCA382383 AAG TCC CTT CCC GAG GGC CAG CCT GTG GAG CTA CGG GGG TGC TGG GCC430431 AGG GTC TGT GGG CCT CAG TCC CCT CTG AAC CTC ACT GTG CCC CAG ATC478479 GTC AAC ACC TGC AGT GGC CCA GAC ATC GCA CGC TCC GTC TCC TGC CCA526527 CTG CTC TCC CGA GAT GCC GTG GAC TTC CTG CGC GGC CAC CTG GTC CCT574575 AAG GAG ATG TCG CTG TGG GAG TCA CTG GGA GAG AGC TGG ATG CGG CCC6221 Met Ser Leu Trp Glu Ser Leu Gly Glu Ser Trp Met Arg Pro 14623 CGT TCC GAG TGG CCG CGG GAG CCA CAG GTG CCC CTC TAC GTG CCC AAG67015 Arg Ser Glu Trp Pro Arg Glu Pro Gln Val Pro Leu Tyr Val Pro Lys 30671 TTC CAC AGC GGC TGG GAG CCT CCT GTG GAT GTG CTG CAG GAG GCC CCC71831 Phe His Ser Gly Trp Glu Pro Pro Val Asp Val Leu Gln Glu Ala Pro 46719 TGG GAG GTG GAG GGG CTG GCG TCT GCC CCC ATC GAG GAG GTG AGT CCA76647 Trp Glu Val Glu Gly Leu Ala Ser Ala Pro Ile Glu Glu Val Ser Pro 62767 GTG AGC CGA CAG TCC ATA AGA AAC TCC CAG AAG CAC AGC CCC ACT TCA81463 Val Ser Arg Gln Ser Ile Arg Asn Ser Gln Lys His Ser Pro Thr Ser 78815 GAG CCC ACC CCC CGG GGG GAT GCC CTA CCA CCA GTC AGC TCC CCA CAT86279 Glu Pro Thr Pro Pro Gly Asp Ala Leu Pro Pro Val Ser Ser Pro His 94863 ACT CAC AGG GGC TAC CAG CCA ACA CCA GCC ATG GCC AAG TAC GTC AAG91095 Thr His Arg Gly Tyr Gln Pro Thr Pro Ala Met Ala Lys Tyr Val Lys110911 ATC CTG TAT GAC TTC ACA GCC CGA AAT GCC AAC GAG CTA TCG GTG CTC958111 Ile Leu Tyr Asp Phe Thr Ala Arg Asn Ala Asn Glu Leu Ser Val Leu126959 AAG GAT GAG GTC CTA GAG GTG CTG GAG GAC GGC CGG CAG TGG TGG AAG 1006127 Lys Asp Glu Val Leu Glu Val Leu Glu Asp Gly Arg Gln Trp Trp Lys1421007 CTG CGC AGC CGC AGC GGC CAG GCG GGG TAC GTG CCC TGC AAC ATC CTA 1054143 Leu Arg Ser Arg Ser Gly Gln Ala Gly Tyr Val Pro Cys Asn Ile Leu1581055 GGC GAG GCG CGA CCG GAG GAC GCC GGC GCC CCG TTC GAG CAG GCC GGT 1102159 Gly Glu Ala Arg Pro Glu Asp Ala Gly Ala Pro Phe Glu Gln Ala Gly 1741103 CAG AAA AGT ACT GGG GCC CCG CCA GCC GGA CCC ACA AGC TAC CCC CAA1150175 Gln Lys Ser Thr Gly Ala Pro Pro Ala Arg Pro Thr Ser Tyr Pro Gln 1901151 GCT TCC CGG GGA ACA AAG ACG AGC TCA TGC AGC ACA TGG AGG AGG TCA1198191 Ala Ser Arg Gly Thr Lys Thr Ser Ser Cys Ser Thr Trp Thr Arg Ser 2061199 AGG AGG AGC TCA TCC GGA AAA TCA GCA ACA TCA GGG CGC AGC CAC AGA1246207 Thr Thr Ser Ser Ser Gly Lys Ser Ala Thr Ser Gly Arg Ser His Arg 2221247 GGC ACT TCC GCG TGG AGC GCA GCC AGC CCG TGA GCC AGC CGC TCA CCT1294223 Gly Thr Ser Ala Trp Ser Ala Ala Ser Pro *** 2331295 AGG AGT CGG GTC CGG ACG AGG TCC GCG CCT GGC TGG AAG CCA AGG CCT13421343 TCA GCC CGC GGA TCG TGG AGA ACC TGG GCA TCC TGA CCG GGC CGC AGC13901391 TCT TCT CCC TCA ACA AGG AGG AGC TGA AGA AAG TGT GCG GCG AGG AGG14381439 GCG TCC GCG TGT ACA GCC AGC TCA CCA TGC AGA AGG CCT TCC TGG AGA14861487 AGC AGC AAA GTG GGT CGG AGC TGG AAG AAC TCA TGA ACA AGT TTC ATT15341535 CCA TGA ATC AGA GGA GGG GGG AGG ACA GCT AGG CCC AGC TGC CTT GGG15821583 CTG GGG CCT GCG GAG GGG AAG CCC ACC CAC AAT GCA TGG AGT ATT ATT16301631 TTT AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 16523.PP13191A核苷酸序列(SEQ ID NO7)長(zhǎng)度14891 GCCTGTCCAC ACCTCTGCCC CAGAGCTGCC TCCTGCCTGG CACTGCCGCC ACACTCCCCT61 CCTGGGATGG GGCTTCTGCT CCCGGGCTCA CTCAAGGAGA CTGCGGCATG TTGACCACAC121 CAGACTGGGT TTCAGGGAAT GGGCATGCCA GGTGCCAAGG AGCCAAACAG ATGGCTTTCC181 AGGCAGCAAG GTCCTTGGGG CCTTCTTGGA GGAGCTTGGG TGACAGCCAG GTGAGCACCC241 AGACCCCAGA CCCTCATGTG CTGTGTGCCT GGCCCCTTCT GTACTGGCCA TTTGTGGCCA301 GGGCCAAGCC TGTGACTCAA CTCCAGGGGC AAGATGGGGA GTGAGCTGAT GGCTCCGAGA361 CTGGTCAGGA GCCCAGGCCA GTGAGATGGG GCCTGGAGCC TTGTCTGTGT CACATTAGGT421 ACCATGGGAG CTGCTGAGAC CTGACATTTT GTCCCCTGCC TACATGGCTT GGCCCATGGA481 GAAGGAGCAG TGAATGGGAT CGTCGGGGAA GCCCCTCTTC CTGCTCTGCT CCCCTGGAAA541 CTGTTGCAAA ACTCCCACCG CCTCATGGCA AATGCCCAAA GCATGTTCCG CACCCAGGCG601 GGGGCCCCTG CTAATGAGAA CCTTGGTGCA GCTGCAGCCA GGAGGGGAGC GGGCCCAGGA661 GCCAGGCTCA GGTCCAGCTG GTTCCTCTCT GGCGCCTTCT GAACCCGTCT CAGCAGGTCC721 ACAGCACCTG GGCAGAGGTC AGAGACCAGG GGAGGCCGGG CCTTGCCCTC CCTTCTGCCC781 AGGGCCCAGT GTTCTTGATA GAAGACCCTT CTGGGGAGCC AGGGAGCTCA GGGGACAGAT841 AAGGGAAGGA CGCCCCCTGA CTCCAGGCCC CTGAGCCTGG CGGGAAGTGG CTGCGGCCCA901 GGCAGCCAGT CCTGGTGGTG TTCTCCCTGC ATGCCCTCCG TGGCTGGGCT GCCACCCCAC961 CCGGCCGGAA TCTGTCTTGA CCTGCAGGAA TACACGGGCG GCGCCAGGCA TTACCTCACA1021 GCGGGACTAC ACAGTTGCTG GCTTTGCTCC TGGGCAAGGA GGAGCAGGCC AGAGCCTCTT1081 TTGCTTCCTT TTCTTGCCCA TGCGGCTTCT AGAAGCCAGG CACAGGTTGC CAAGAGGTGA1141 CACGAAACAG GAGGAAACTC AGTGACCTCT GCCTCTCCCA CATTCCTCCC CGCGGGGGAG1201 GACCTCGCCG CTCTGAAGAG CACCGTGCAC ATGTGGGTGC ACAAACGTGG GTGTTGGTGT1261 GGAGGGGGCG CAGATCTCGG TGGATGAACT GCGTCTGGAC TCTTAGATTC ATAAAATATT1321 CGAGGGTTTG GGAGTCACAG ACCCTCCCCT CTCCTCAGTG CACTTTAGCA TTTGCACGGT1381 GTCTTCCCCG GACAGCACAG CAATAAATGG TGTGATTGCG TGGAAAAAAA AAAAAAAAAA1441 AAAAAAAAAA TAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAB核苷酸序列 (SEQ ID NO8) 長(zhǎng)度1261 MGSSGKPLFL LCSPGNCCKT PTASWQMPKA CSAPRRGPLL MRTLVQLQPG GERAQEPGSG61 PAGSSLAPSE PVSAGPQHLG RGQRPGEAGP CPPFCPGPSV LDRRPFWGAR ELRGQIREGR121 PLTPGPC.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO9)克隆號(hào) PP13191起始編碼子494 ATG 終止編碼子872 TGA 蛋白質(zhì)分子量13131.411G CCT GTC CAC ACC TCT GCC CCA GAG CTG CCT CCT GCC TGG CAC TGC 4647 CGC CAC ACT CCC CTC CTG GGA TGG GGC TTC TGC TCC CGG GCT CAC TCA 9495 AGG AGA CTG CGG CAT GTT GAC CAC ACC AGA CTG GGT TTC AGG GAA TGG 142143 GCA TGC CAG GTG CCA AGG AGC CAA ACA GAT GGC TTT CCA GGC AGC AAG 190191 GTC CTT GGG GCC TTC TTG GAG GAG CTT GGG TGA CAG CCA GGT GAG CAC 238239 CCA GAC CCC AGA CCC TCA TGT GCT GTG TGC CTG GCC CCT TCT GTA CTG 286287 GCC ATT TGT GGC CAG GGC CAA GCC TGT GAC TCA ACT CCA GGG GCA AGA 334335 TGG GGA GTG AGC TGA TGG CTC CGA GAC TGG TCA GGA GCC CAG GCC AGT 382383 GAG ATG GGG CCT GGA GCC TTG TCT GTG TCA CAT TAG GTA CCA TGG GAG 430431 CTG CTG AGA CCT GAC ATT TTG TCC CCT GCC TAC ATG GCT TGG CCC ATG 478479 GAG AAG GAG CAG TGA ATG GGA TCG TCG GGG AAG CCC CTC TTC CTG CTC 5261 Met Gly Ser Ser Gly Lys Pro Leu Phe Leu Leu 11527 TGC TCC CCT GGA AAC TGT TGC AAA ACT CCC ACC GCC TCA TGG CAA ATG 57412 Cys Ser Pro Gly Asn Cys Cys Lys Thr Pro Thr Ala Ser Trp Gln Met 27575 CCC AAA GCA TGT TCC GCA CCC AGG CGG GGG CCC CTG CTA ATG AGA ACC 62228 Pro Lys Ala Cys Ser Ala Pro Arg Arg Gly Pro Leu Leu Met Arg Thr 43623 TTG GTG CAG CTG CAG CCA GGA GGG GAG CGG GCC CAG GAG CCA GGC TCA 67044 Leu Val Gln Leu Gln Pro Gly Gly Glu Arg Ala Gln Glu Pro Gly Ser 59671 GGT CCA GCT GGT TCC TCT CTG GCG CCT TCT GAA CCC GTC TCA GCA GGT 71860 Gly Pro Ala Gly Ser Ser Leu Ala Pro Ser Glu Pro Val Ser Ala Gly 75719 CCA CAG CAC CTG GGC AGA GGT CAG AGA CCA GGG GAG GCC GGG CCT TGC 76676 Pro Gln His Leu Gly Arg Gly Gln Arg Pro Gly Glu Ala Gly Pro Cys 91767 CCT CCC TTC TGC CCA GGG CCC AGT GTT CTT GAT AGA AGA CCC TTC TGG 81492 Pro Pro Phe Cys Pro Gly Pro Ser Val Leu Asp Arg Arg Pro Phe Trp 107815 GGA GCC AGG GAG CTC AGG GGA CAG ATA AGG GAA GGA CGC CCC CTG ACT 862108 Gly Ala Arg Glu Leu Arg Gly Gln Ile Arg Glu Gly Arg Pro Leu Thr 123863 CCA GGC CCC TGA GCC TGG CGG GAA GTG GCT GCG GCC CAG GCA GCC AGT 910124 Pro Gly Pro *** 127911 CCT GGT GGT GTT CTC CCT GCA TGC CCT CCG TGG CTG GGC TGC CAC CCC 958959 ACC GGG CCC GAA TCT GTC TTG ACC TGC AGG AAT ACA CGG GCG GCG CCA10061007 GGC ATT ACC TCA CAG CGG GAC TAC ACA GTT GCT GGC TTT GCT CCT GGG10541055 CAA GGA GGA GCA GGC CAG AGC CTC TTT TGC TTC CTT TTC TTG CCC ATG11021103 CCG CTT CTA GAA GCC ACG CAC AGG TTG CCA AGA GGT GAC ACG AAA CAG11501151 GAG GAA ACT CAG TGA CCT CTG CCT CTC CCA CAT TCC TCC CCG CGG GGG11981199 AGG ACC TCG CCG CTC TGA AGA GCA CCG TGC ACA TGT GGG TGC ACA AAC12461247 GTG GGT GTT GGT GTG GAC GGG GGC CAG ATC TCC GTG GAT GAA CTG GGT12941295 CTG GAC TCT TAG ATT CAT AAA ATA TTC GAG GGT TTG GGA GTC ACA GAC13421343 CCT CCC CTC TCC TCA GTG CAC TTT AGC ATT TGC ACG GTG TCT TCC CCG13901391 GAC AGC ACA GCA ATA AAT GGT GTG ATT GCG TGG AAA AAA AAA AAA AAA14381439 AAA AAA AAA AAA TAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA14861487 AAA14894.PP13439A核苷酸序列(SEQ ID NO10)長(zhǎng)度29351 GCCAGCCCGC AGAGCACGGT CCTGGGGGTG TGATCACAGC TGCTGACCGC GGCTCCCGCC61 GTGTGATGTG ACCACTCGGA GGTGGGGCGA GGGGGCCGGG GGCCAGCAGC AGGGAGTGTG121 TAAAAGGTCT TCTTCCTCAC AATACGATTG AAGGTGTTTG GGAGGTAGGG CTCAGATCCA181 GGAGTGCCGT CCTCCAAGCC TTCCATAGGA TTTTGTGACG CCCTTGAGAA CCGCCCTTGT241 AGACTCAGTC CTGAACTACC GCCACGCCTG TATTTGCTCC TCCTCATCTC 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CATGGTTGAC TGCAGGTAAC TGAAATTTTA GTTACATGAA ACCACAGATA1201 AGGGGGGACT GCACTACACA TAAAATAGGC ATAAGTAACC TCAAGACAAT AGACATTATT1261 AAAATATAGA AAAGTAATAA AGAAGTGATA AATGGAGAAC TTTTGCTTTA ATATAATTTA1321 TTGTAAGTTT ATATAATTTA ATTTTTAGTA ACTTCAATTT TTAATATTTT AATTTTTAAT1381 GATTTATGTG TTTAACAACT GACTCACAAA ATTGCTGAAA ATTTCCCAAT CTTGATGAAA1441 ATTTCCCAGT CTGCTCTCAG GAGCCTATAT GAGCCAGCCC AGAATACCAC TGGAGTTATA1501 ATTTTAGAAG ATTACCTTGG TAGCAATCTG TAGAAATGTT TTGTAGGGGA GCTACAGTAG1561 GGATCAAAAG TGGAGACAGA TTACGAAATG TCTTCAGACC CTGCCAGCAT GAGGGTTCAA1621 ATGATGTCTA GTCAGTGGAG ATCACGCAAA TTTCACTGGT TTGTGTTCCC ACGTGGATCC1681 GTAGGACCTT CAATGCAAGT CTCCTTCAGG TATTCCTGGT GGTATCTTGG CATTGTCTCA1741 CATGTGTTTT GAGAGCCCCA CTTCCTTGGG GAGTCTTCCG CTTTGGCTTC CTTGTTGATG1801 ACCGTGGGCC AAAGGGCTTT GTGTGTGAGG CTCCACCTCA GCCATAGCTG GTGTCCTCCT1861 GAAGAGGATT TATGCCAAAA GGAGTCACAT GCCAGGACTT GTTTTTTTCA AGTTTGCAAA1921 TCTGGGGGGA GGGTGGGGCT CTAGAAAGAT GCTGGAACCT GGTATGTGCC CTGCAGAAAT1981 GTCCTTGACT CCTTTTGTCA 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ACT GTA TTT TAC11021103 TTA ATA ATG GCT ACA AAG TGC AAA AGT AGC GAT ATA ATA TTT TTG GAC11501151 CAT GGT TGA CTG CAG GTA ACT GAA ATT TTA GTT ACA TGA AAC CAC AGA11981199 TAA GGG GGG ACT GCA CTA CAC ATA AAA TAG GCA TAA GTA ACC TCA AGA12461247 CAA TAG ACA TTA TTA AAA TAT AGA AAA GTA ATA AAG AAG TGA TAA ATG12941295 GAG AAC TTT TGC TTT AAT ATA ATT TAT TGT AAG TTT ATA TAA TTT AAT13421343 TTT TAG TAA CTT CAA TTT TTA ATA TTT TAA TTT TTA ATG ATT TAT GTG13901391 TTT AAC AAC TGA CTC ACA AAA TTG CTG AAA ATT TCC CAA TCT TGA TGA14381439 AAA TTT CCC AGT CTG CTC TCA GGA GCC TAT ATG AGC CAG CCC AGA ATA14861487 CCA CTG GAG TTA TAA TTT TAG AAG ATT ACC TTG GTA GCA ATC TGT AGA15341535 AAT GTT TTG TAG GGG AGC TAC AGT AGG GAT CAA AAG TGG AGA CAG ATT15821583 ACG AAA TGT CTT CAG ACC CTG CCA GCA TGA GGG TTC AAA TGA TGT CTA16301631 GTC AGT GGA GAT CAC GCA AAT TTC ACT GGT TTG TGT TCC CAC GTG GAT16781679 CCG TAG GAC CTT CAA TGC AAG TCT CCT TCA GGT ATT CCT GGT GGT ATC17261727 TTG GCA TTG TCT CAC ATG TGT TTT GAG AGC 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ACA GTC TAC AGG TAG ACT AGG TCG AGT TCA GAA GCC TGA AGA ACA26862687 CCA GTG TTT AAG GGA TGG TGT TGG GAA AGG GAG CCA GGC CAG CCA GAG27342735 AGG AAT GTT CCG GAA CTC TGA AAG GAA GGA AAT GGC AGG AAC AAA GGA27822783 GCT GGG GCA CAA CAG TGG TGA CTC ACA CTG GGA ACA CTT CGG CCC ATT28302831 GTG TTT ATG CTT ATA GTT TCC CAA GTT TAT CTT TTC AGG GTT ATG ATT28782879 ACG TTA ACC TCA CCT CCC TCC CTC CCT CTA AAA CAA AAC AAA AAA AAA29262927 AAA AAA AAA29355. PP13479A核苷酸序列(SEQ ID NO13)長(zhǎng)度23231 GGCCGGATTC CCAGTGGTGG CGAGGAGGTG GTATTTTTTT AAGTGTCAGT GTGGCATTGT61 GGTTGCCTCA ATAAAACAGA GTCTTTTTTT GTCTTTTTTT TTTGAGACAG GGTCTCGCTC121 TCACCCAGGC TGGAGTGCAG TGACACAGTT GCAGCTCACT GCAGCCTCGA CCTCCTGGGC181 TCAAGCAATC CTCCCGCCTC AGCCTCCCGA GTAGCTGAGT CTACAGATCT CCACAATGGA241 AGTTCGAAGC AAGCAAAAGC CACGCAAACC ACAGGCCGAT CTGTCTGAGC CCTAGGATTT301 GGCCCGGTTC TGCTTCAGCC ACCAGCACCG TCTGCTCCTC CTCAGAATCC TTCCTCCCCC361 GTGGCCCGCC CGCCGTGTCC CTCCTCCTCC ACGGGCCGCC CACCGTGTCC TTCCCTCCCC421 CGTGGCCCAC CCACCATGTC CTTCCCTCCC CTGTGGCCCA CCCGCCATGT CCCTGCCTCC481 CACCCGACAT GCCCCTTGAA GCTGCCTGGG CCCTGCTGTT GTCCCCACTG CCTGTGTGAC541 TCTGCGCCCC CTTCCCTACC CTGCCCCACC CTGGTTCAGG GAGCGTCCAG GCCCATTCTC601 ATCCTCAGGG CCTTCCCTGG CCCTTGCCAC TCTGTGCCGT GTCATGACCT GAAGCTGCAG661 GTGGGCGCCT CCCCCTTCCG TCATGGCTGT CCCCCTTCTG TGAGGTGTCC CAGCCGCCTG721 ATTGCCGGAG TCCCAGGGTG CTCGGTGCTG TCGTGGAGCC TGGGACATTC ACTGTCTGGG781 ATTGATTCCA GGGTTGGAGC CACACCTGGT CTGGGGCATT CGCTGTCCTG 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LSHLVSSSRC CGPC.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO15)克隆號(hào)PP13479起始編碼子436 ATG 終止編碼子1045 TGA 蛋白質(zhì)分子量17771.811 GGC CGG ATT CCC AGT GGT GGC GAG GAG GTG GTA TTT TTT TAA GTG TCA 4849 GTG TGG CAT TGT GGT TGC CTC AAT AAA ACA GAG TCT TTT TTT GTC TTT 9697 TTT TTT TGA GAC AGG GTC TCG CTC TCA CCC AGG CTG GAG TGC AGT GAC 144145 ACA GTT GCA GCT CAC TGC AGC CTC GAC CTC CTG GGC TCA AGC AAT CCT 192193 CCC GCC TCA GCC TCC CGA GTA GCT GAG TCT ACA GAT CTC CAC AAT GGA 240241 AGT TCG AAG CAA GCA AAA GCC ACG CAA ACC ACA GGC CGA TCT GTC TGA 288289 GCC CTA GGA TTT GGC CCG GTT CTG CTT CAG CCA CCA GCA CCG TCT GCT 336337 CCT CCT CAG AAT CCT TCC TCC CCC GTG GCC CGC CCG CCG TGT CCC TCC 384385 TCC TCC ACG GGC CGC CCA CCG TGT CCT TCC CTC CCC CGT GGC CCA CCC 432433 ACC ATG TCC TTC CCT CCC CTG TGG CCC ACC CGC CAT GTC CCT GCC TCC 4801 Met Ser Phe Pro Pro Leu Trp Pro Thr Arg His Val Pro Ala Ser 15481 CAC CCG ACA TGC CCC TTG AAG CTG CCT GGG CCC TGC TGT TGT CCC CAC 52816 His Pro Thr Cys Pro Leu Lys Leu Pro Gly Pro Cys Cys Cys 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TCT GGG GTT GGA GCC ACA CCT GGT CTG GGG CAT TTG CTG TCC GGG GTC 912144 Ser Gly Val Gly Ala Thr Pro Gly Leu Gly His Leu Leu Ser Gly Val 159913 GGA GCC TCA CCT GGT GAA GAT ACA GAA CAT GCT GCT GCC CTA ACC CCG 960160 Gly Ala Ser Pro Gly Glu Asp Thr Glu His Ala Ala Ala Leu Thr Pro 175961 TGT GGT GTG CCC CCT GTC CCC GGG TGT CGT TCC CAT AGC CAG CCC TTG1008176 Cys Gly Val Pro Pro Val Pro Gly Cys Arg Ser His Ser Gln Pro Leu 1911009 TCT CAT CTC GTC TCA TCC TCT AGA TGC TGT GGG CCC TGA GGG AAA GGA1056192 Ser His Leu Val Ser Ser Ser Arg Cys Cys Gly Pro *** 2041057 TCA CAG AGG CGC TGA GCC GGG ATG GCT ACG TGT ACA AGT ACG ACC TCT11041105 CCC TCC CTG TGG AGC GGC TCT ACG ACA TCG TGA CTG ACC TGC GCG CCC11521153 GCC TCG GCC CGC ACG CCA AGC ACG TGG TGG GCT ATG GCC ACC TTG GAG12001201 ATG GTA ACC TGC ACC TCA ATG TGA CGG CGG AGG CCT TCA GCC CCT CGC12481249 TCC TGG CTG CCC TGG AGC CCC ACG TGT ACG AGT GGA CGG CCG GGC AGC12961297 AGG GCA GCG TCA GCG CGG AGC ACG GAG TGG GCT TCA GGA AGA GGG ACG13441345 TCC TGG GCT ACA GCA AGC CAC CGG GGG CCC TGC AGC TCA TGC AGC AGC13921393 TCA AGG CCC TGC TGG ACC CCA AGG GCA TCC TCA ACC CCT ACA AGA CGC14401441 TGC CCA GCC AGG CCT GAC GGC CAC TCC TGC TGC TGC CAA GGC CCA CTG14881489 GGG GTC GGC GGG TGG CTC TCG GGC GGG GGT GTT GCG GTG GCT CTG AGG15361537 GAT GAG CCG GCA GTG GGC AGG GGA CCA GGC ACC TGG TTG AAG GGA CTG15841585 GGA GCC CGC ACT GGG GAA CTG CCG GAC GCA GGC CCT CGG GCA GGA GCA16321633 TCT GGC AGA GTG GGG GGC GTG GCA GGC ACC CTC CTT TGC AGG GCG AGG16801681 TGG GGC CTC TGC AGC CAT CCT GGA CAG GCC GGG GTG GCG GCA GCT TTG17281729 CCC ACG TGG AAG CGG GGT GGG TCT CAC TTG CGT GGT GGC CCC TGG CCC17761777 CAT CTT GCC TGC TGC GGC CTG GGG AGC AGG CGC TGG GTG GTG GTT CTG18241825 CCT GCT TGC TGC TCG TTC CCC GGG CAT GCG TGG GCA GCG GGG GGC ATG18721873 CGT GGG CAG CAG GGG GCG TGG GCA GCG GGG GCA TGG GCA GGA CCA CGT19201921 GGG CCG TGA TCG TGG GTT GCC GAG AGG ACC TGA GCG CTG CGG CTC TGC19681969 TGA ATG GAG CCG GGT CCC TCA GGC CGT GGA CGC CCT CGG GAG GGG GGT20162017 GAC TGT GGC TTG TGT CTG GAC AGG AAT GTG TCA TTT CCC ACA TCT TCT20642065 AGA GGG CTG CCA GCT GGG AAG ACA GTT ATC AGG GCA AGC TGT GCT CTG21122113 AGT TTC GGG TTC TGC TCC TAC AAA GAA CGT GCG GTG CTG CGG GCG AGG21602161 GCC CCG GCA CGG ACA AGG GCC ACT GCA GAG TGT GTT TCT GCT CGT CAG22082209 CTG CCC TGG GCA GCG GAT GGG CTG GGC GAT GCA GCT GGA TGC ACA TCT22562257 CAT TCT GTC ATG AAT GTC CAG TAA AAA TCT GAA TTG GTT GCA AAA AAA23042305 AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 23236. PP13842A核苷酸序列(SEQ ID NO16)長(zhǎng)度12591 GCTGCAGCCC CTGCCCCCGC CCCTCCTCGC TGGGTGCTCA GAAGGCTGAC AGCTGCGCCA61 GGCTGAGGCG GCAGTCGATG CTGGAGTTGT CCGGGCCCGT GTAGGCCAGG CCCAGGGGCT121 CTAGGAAGGC CCGGCAGGCC CCAGCGCTGC CTTTGCGGAT TCTGTTTTTG AGCCGTGGAC181 TTGGGTTGTA AATTTATTTG TGGGGAGTGC GCTCCAGGAA GAGCCACCAT CCCTGCCCCC241 GTTTTCCCAC CGGGGAGTCT GTACAGAGAT TTTTCTACGT TTTTATTTTT TGCCTCAGAG301 GGATGGGATT GGGGAGGAGG GGATGGGCAG CGGAGGGTTG GGGGCATGGT CTGCAGGCTC361 ATCTGTGTCC GCTTTCACTC CACTAATGCT GTCTCAGTGT TTTCTCTCTC TCTCTTTCGA421 GCTTGCACTC CGGTACCCGA CCCGGCGCCC TGGCCCATCC CATGCCGGGG GGCCAGTGGA481 AAGAAGACAG GCCGTCCAGC CCGTGCCCGC CTGCGGCGGG GGCACCCAGC AAGCCCGCCC541 ACCGCCCGCT GCCTCACCTG CTTCGCCACA GACTCTTGTT CCCAGCCCCT TGGGGCCTCC601 GTGTTTGGGG TGGGGGAGCT GCTTAGAGAC TGTGCCCGTC CTCGGCCCCC CACCCTGAAG661 TGCCAGCACC ACCAGCACCA GATCCTCCGC CGCCACACCG CACTGAGGAC ACGCCGGCCG721 GGCCGCCTCG TCTCAAGTTG TATAAAGTTG TCTCCGTGTC CCCTCCTCCC TCTGCCCCCA781 GTGTTTCTTC TGATTTTTTT TTCCCCTTTC CCTCCCTCCC CCTCCGCATT CTTCCCTTGG841 TTCAGCACAG GTAAAACGGT TCCCCTCCCT CCCTGCCTTC ATGGATCACC AGCTCACGTC901 ATGTTGCCTT CTCTTTTCTT TGTGTGTGTG TTTATTTAAG TTATTTTTCT TCCTCCTCTC961 CCTTTTCTTT TTGGCCCTCC CTCCCTCCCT CTTCTGCCAT GTAACTGGAG GATGTGCTAT1021 GAGTTTGCAA ACAGCTGGAC TGTCAGGCTG CTTTTTTTCC AGATGTTCCT CCTCTGCCTC1081 CCCTTCCCCT CCTCTCCCCT CCTTTTCCTT CCTTCCTTCC TTTCCTTGGA GCACTGAGCA1141 CCATTTGGAA GCTTGAGAGA AACCAAAATT AAAGAGAGAA AGAGAGAAAA AAAAAAAAAA1201 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AACCTCGGGB核苷酸序列 (SEQ ID NO17) 長(zhǎng)度1971 MVCRLICVRF HSTNAVSVFS LSLFRACTPV PDPAPWPIPC RGASGKKTGR PARARLRRGH61 PASPPTARCL TCFATDSCSQ PLGASVFGVG ELLRDCARPR PPTLKCQHHQ HQILRRHTAL121 RTRRPGRLVS SCIKLSPCPL LPLPPVFLLI FFSPFPPSPS AFFPWFSTGK TVPLPPCLHG181 SPAHVMLPSL FFVCVFI
C.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO18)克隆號(hào)PP13842起始編碼子346ATG 終止編碼子937 TAA 蛋白質(zhì)分子量21622.561 GCT GCA GCC CCT GCC CCC GCC CCT CCT CGC TGG GTG CTC AGA AGG CTG 4849 ACA GCT GCG CCA GGC TGA GGC GGC AGT CGA TGC TGG AGT TGT CCG GGC 9697 CCG TGT AGG CCA GGC CCA GGG GCT CTA GGA AGG CCC GGC AGG CCC CAG144145 CGC TGC CTT TGC GGA TTC TGT TTT TGA GCC GTG GAC TTG GGT TGT AAA192193 TTT ATT TGT GGG GAG TGC GCT CCA GGA AGA GCC ACC ATC CCT GCC CCC240241 GTT TTC CCA CCG GGG AGT CTG TAC AGA GAT TTT TCT ACG TTT TTA TTT288289 TTT GCC TCA GAG GGA TGG GAT TGG GGA GGA GGG GAT GGG CAG CGG AGG336337 GTT GGG GGC ATG GTC TGC AGG CTC ATC TGT GTC CGC TTT CAC TCC ACT3841 Met Val Cys Arg Leu Ile Cys Val Arg Phe His Ser Thr 13385 AAT GCT GTC TCA GTG TTT TCT CTC TCT CTC TTT CGA GCT TGC ACT CCG43214 Asn Ala Val Ser Val Phe Ser Leu Ser Leu Phe Arg Ala Cys Thr Pro 29433 GTA CCC GAC CCG GCG CCC TGG CCC ATC CCA TGC CGG GGG GCC AGT GGA48030 Val Pro Asp Pro Ala Pro Trp Pro Ile Pro Cys Arg Gly Ala Ser Gly 45481 AAG AAG ACA GGC CGT CCA GCC CGT GCC CGC CTG CGG CGG GGG CAC CCA52846 Lys Lys Thr Gly Arg Pro Ala Arg Ala Arg Leu Arg Arg Gly His Pro 61529 GCA AGC CCG CCC ACC GCC CGC TGC CTC ACC TGC TTC GCC ACA GAC TCT57662 Ala Ser Pro Pro Thr Ala Arg Cys Leu Thr Cys Phe Ala Thr Asp Ser 77577 TGT TCC CAG CCC CTT GGG GCC TCC GTG TTT GGG GTG GGG GAG CTG CTT62478 Cys Ser Gln Pro Leu Gly Ala Ser Val Phe Gly Val Gly Glu Leu Leu 93625 AGA GAC TGT GCC CGT CCT CGG CCC CCC ACC CTG AAG TGC CAG CAC CAC67294 Arg Asp Cys Ala Arg Pro Arg Pro Pro Thr Leu Lys Cys Gln His His109673 CAG CAC CAG ATC CTC CGC CGC CAC ACC GCA CTG AGG ACA CGC CGG CCG720110 Gln His Gln Ile Leu Arg Arg His Thr Ala Leu Arg Thr Arg Arg Pro125721 GGC CGC CTC GTC TCA AGT TGT ATA AAG TTG TCT CCG TGT CCC CTC CTC768126 Gly Arg Leu Val Ser Ser Cys Ile Lys Leu Ser Pro Cys Pro Leu Leu141769 CCT CTG CCC CCA GTG TTT CTT CTG ATT TTT TTT TCC CCT TTC CCT CCC816142 Pro Leu Pro Pro Val Phe Leu Leu Ile Phe Phe Ser Pro Phe Pro Pro157817 TCC CCC TCC GCA TTC TTC CCT TGG TTC AGC ACA GGT AAA ACG GTT CCC864158 Ser Pro Ser Ala Phe Phe Pro Trp Phe Ser Thr Gly Lys Thr Val Pro173865 CTC CCT CCC TGC CTT CAT GGA TCA CCA GCT CAC GTC ATG TTG CCT TCT912174 Leu Pro Pro Cys Leu His Gly Ser Pro Ala His Val Met Leu Pro Ser189913 CTT TTC TTT GTG TGT GTG TTT ATT TAA GTT ATT TTT CTT CCT CCT CTC960190 Leu Phe Phe Val Cys Val Phe Ile ***198961 CCT TTT CTT TTT GGC CCT CCC TCC CTC CCT CTT CTG CCA TGT AAC TGG 10081009 AGG ATG TGC TAT GAG TTT GCA AAC AGC TGG ACT GTC AGG CTG CTT TTT 10561057 TTC CAG ATG TTC CTC CTC TGC CTC CCC TTC CCC TCC TCT CCC CTC CTT 11041105 TTC CTT CCT TCC TTC CTT TCC TTG GAG CAC TGA GCA CCA TTT GGA AGC 11521153 TTG AGA GAA ACC AAA ATT AAA GAG AGA AAG AGA GAA AAA AAA AAA AAA 12001201 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 12481249 AAA ACC TCG GG1259
7.PP14673A核苷酸序列(SEQ ID NO19)長(zhǎng)度23331 GCGGCCGTAG CGGCCGGGGC TGCGGTAGCC ACTTTAGATT TGGGCAAGGA CTTTAGATTC61 GGGCTCTGTT CTGTTTCCGC CGTCCTGCTT CCTGCCGAGG CTGGCCCAGG CAGCCGCGCT121 TCGAAGGACG CCGCCGGGAG CTGCGGAGCA TGCGTGGAGT GGCAGTGCTA ACGGCTGGTG181 TCTCGCACTG TTGGCCTGTG AAGGTACGTG AAGCTGAAAG CCTGGAATGG CTGGAAAGGG241 GTCATCAGGC AGGCGGCCCC TGCTGCTGGG GCTGCTGGTG GCCGTAGCCA CTGTCCACCT301 GGTCATCTGT CCCTACACCA AAGTGGAGGA GAGCTTCAAC CTGCAGGCCA CACATGACCT361 GCTCTACCAC TGGCAAGACC TGGAGCAGTA CGACCATCTT GAGTTCCCCG GAGTCGTCCC421 CAGGACGTTC CTCGGGCCAG TGGTGATCGC AGTGTTCTCC AGCCCCGCGG TTTACGTGCT481 TTCGCTGTTA GAAATGTCCA AGTTTTACTC TCAGCTAATA GTTAGAGGAG TGCTTGGACT541 CGGCGTGATT TTTGGACTCT GGACGTTACA AAAGGAAGTG AGACGGCACT TCGGGGCCAT601 GGTGGCCACC ATGTTCTGCT GGGTGACGGC CATGCAGTTC CACCTGATGT TCTACTGCAC661 GCGGACACTG CCCAATGTGC TGGCCCTGCC TGTAGTCCTG CTGGCCCTCG CGGCCTGGCT721 GCGGCACGAG TGGGCCCGCT TCATCTGGCT GTCAGCCTTC GCCATCATCG TGTTCAGGGT781 GGAGCTGTGC CTGTTCCTGG GCCTCCTGCT GCTGCTGGCC TTGGGCAACC GAAAGGTTTC841 TGTAGTCAGA GCCCTTCGCC ACGCCGTCCC GGCAGGGATC CTCTGTTTAG GACTGACGGT901 TGCTGTGGAC TCTTATTTTT GGCGGCAGCT CACTTGGCCG GAAGGAAAGG TGCTTTGGTA961 CAACACTGTC CTGAACAAAA GCTCCAACTG GGGGACCTCC CCGCTGCTGT GGTACTTCTA1021 CTCAGCCCTG CCCCGCGGCC TGGGCTGCAG CCTGCTCTTC ATCCCCCTGG GCTTGGTAGA1081 CAGAAGGACG CACGCGCCGA CGGTGCTGGC ACTGGGCTTC ATGGCACTCT ACTCCCTCCT1141 GCCACACAAG GAGCTACGCT TCATCATCTA TGCCTTCCCC ATGCTCAACA TCACGGCTGC1201 CAGAGGCTGC TCCTACCTGC TGAATAACTA TAAAAAGTCT TGGCTGTACA AAGCGGGGTC1261 TCTGCTTGTG ATCGGACACC TCGTGGTGAA TGCCGCCTAC TCAGCCACGG CCCTGTATGT1321 GTCCCATTTC AACTACCCAG GTGGCGTCGC AATGCAGAGG CTGCACCAGC TGGTGCCCCC1381 CCAGACAGAC GTCCTTCTGC ACATTGACGT GGCAGCCGCC CAGACAGGTG TGTCTCGGTT1441 TCTCCAAGTC AACAGCGCCT GGAGGTACGA CAAGAGGGAG GATGTGCAGC CGGGGACAGG1501 CATGCTGGCA TACACACACA TCCTCATGGA GGCGGCCCCT GGGCTCCTGG CCCTCTACAG1561 GGACACACAC CGGGTCCTGG CCAGCGTCGT GGGGACCACA GGTGTGAGTC TGAACCTGAC1621 CCAACTGCCC CCCTTCAACG TCCACCTGCA GACAAAGCTG GTGCTTCTGG AGAGGCTCCC1681 CCGGCCGTCC TGAGGGGGAC CAGGCAGCCC TCAGCAGCCA CAGGCCTTCC AGGAGCTGTT1741 ATCACTACCA GTTTCTGGCA CAATTCCAGC ACAATTATGA CAATTCAGAG AAGCAAGTCA1801 AAGGACTGGG CACCTGCCTC TGACAGACAC CAGACCAGGT CCAGGGCCTC CTCCACAGCC1861 TCAGCTGGGG CTCTCAGCAC CAAAGAACGA GGGGCCCAGG TCTTGTTGGC ACCCCGGGAG1921 CCACTGCCCA GGGTGATTGG TGGCCAGCTC AGGGCTTCCT GCGGGTGACT GTCGCCCAGA1981 CCAGGTGCCA TTCATGACTA ATCAGGAGCA GCGGGCTCAC CCAGGCACCT GTCTGCCAGG2041 AGGCCACCGT GTGTCCTGCC CACCCAGGGG GAGCTGTATT TTGGCAGCAC CCCACGCTTG2101 CTGCCCGAGG GCCTCTTGGG GCACCTAAGA CAGCACCCCC TCTCAGGGGA GACCATGGTG2161 GCCCCGGCCG CACCCCCCCA CCCTGGTGCC ACCACTGCAA CTTTTGTATT CACAGGCATC2221 CCATCTCCAT CACAGATAAA ATCTTAGGAG ATAAACACAT TCAAAAAGGA ATGAGATAAA2281 AAGAATAAGG CAATAAATGT TGATTGGAAC CTCTCAAAAA AAAAAAAAAA AAAB核苷酸序列 (SEQ ID NO20) 長(zhǎng)度4881 MAGKGSSGRR PLLLGLLVAV ATVHLVICPY TKVEESFNLQ ATHDLLYHWQ DLEQYDHLEF61 PGVVPRTFLG PVVIAVFSSP AVYVLSLLEM SKFYSQLIVR GVLGLGVIFG LWTLQKEVRR121 HFGAMVATMF CWVTAMQFHL MFYCTRTLPN VLALPVVLLA LAAWLRHEWA RFIWLSAFAI181 IVFRVELCLF LGLLLLLALG NRKVSVVRAL RHAVPAGILC LGLTVAVDSY FWRQLTWPEG241 KVLWYNTVLN KSSNWGTSPL LWYFYSALPR GLGCSLLFIP LGLVDRRTHA PTVLALGFMA301 LYSLLPHKEL RFIIYAFPML NITAARGCSY LLNNYKKSWL YKAGSLLVIG HLVVNAAYSA361 TALYVSHFNY PGGVAMQRLH QLVPPQTDVL LHIDVAAAQT GVSRFLQVNS AWRYDKREDV421 QPGTGMLAYT HILMEAAPGL LALYRDTHRV LASVVGTTGV SLNLTQLPPF NVHLQTKLVL481 LERLPRPSC.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO21)克隆號(hào)PP14673起始編碼子227 ATG 終止編碼子1691 TGA 蛋白質(zhì)分子量54651.701G CGG CCG TAG CGG CCG GGG CTG CGG TAG CCA CTT TAG ATT TGG GCA4647 AGG ACT TTA GAT TCG GGC TCT GTT CTG TTT CCG CCG TCC TGC TTC CTG9495 CCG AGG CTG GCC CAG GCA GCC GCG CTT CGA AGG ACG CCG CCG GGA GCT 142143 GCG GAG CAT GCG TGG AGT GGC AGT GCT AAC GGC TGG TGT CTC GCA CTG 190191 TTG GCC TGT GAA GGT ACG TGA AGC TGA AAG CCT GGA ATG GCT GGA AAG 2381 Met Ala Gly Lys 4239 GGG TCA TCA GGC AGG CGG CCC CTG CTG CTG GGG CTG CTG GTG GCC GTA 2865 Gly Ser Ser Gly Arg Arg Pro Leu Leu Leu Gly Leu Leu Val Ala Val 20287 GCC ACT GTC CAC CTG GTC ATC TGT CCC TAC ACC AAA GTG GAG GAG AGC 33421 Ala Thr Val His Leu Val Ile Cys Pro Tyr Thr Lys Val Glu Glu Ser 36335 TTC AAC CTG CAG GCC ACA CAT GAC CTG CTC TAC CAC TGG CAA GAC CTG 38237 Phe Asn Leu Gln Ala Thr His Asp Leu Leu Tyr His Trp Gln Asp Leu 52383 GAG CAG TAC GAC CAT CTT GAG TTC CCC GGA GTC GTC CCC AGG ACG TTC 43053 Glu Gln Tyr Asp His Leu Glu Phe Pro Gly Val Val Pro Arg Thr Phe 68431 CTC GGG CCA GTG GTG ATC GCA GTG TTC TCC AGC CCC GCG GTT TAC GTG 47869 Leu Gly Pro Val Val Ile Ala Val Phe Ser Ser Pro Ala Val Tyr Val 84479 CTT TCG CTG TTA GAA ATG TCC AAG TTT TAC TCT CAG CTA ATA GTT AGA 52685 Leu Ser Leu Leu Glu Met Ser Lys Phe Tyr Ser Gln Leu Ile Val Arg 100527 GGA GTG CTT GGA CTC GGC GTG ATT TTT GGA CTC TGG ACG TTA CAA AAG 574101 Gly Val Leu Gly Leu Gly Val Ile Phe Gly Leu Trp Thr Leu Gln Lys 116575 GAA GTG AGA CGG CAC TTC GGG GCC ATG GTG GCC ACC ATG TTC TGC TGG 622117 Glu Val Arg Arg His Phe Gly Ala Met Val Ala Thr Met Phe Cys Trp 132623 GTG ACG GCC ATG CAG TTC CAC CTG ATG TTC TAC TGC ACG CGG ACA CTG 670133 Val Thr Ala Met Gln Phe His Leu Met Phe Tyr Cys Thr Arg Thr Leu 148671 CCC AAT GTG CTG GCC CTG CCT GTA GTC CTG CTG GCC CTC GCG GCC TGG 718149 Pro Asn Val Leu Ala Leu Pro Val Val Leu Leu Ala Leu Ala Ala Trp 164719 CTG CGG CAC GAG TGG GCC CGC TTC ATC TGG CTG TCA GCC TTC GCC ATC 766165 Leu Arg His Glu Trp Ala Arg Phe Ile Trp Leu Ser Ala Phe Ala Ile 180767 ATC GTG TTC AGG GTG GAG CTG TGC CTG TTC CTG GGC CTC CTG CTG CTG 814181 Ile Val Phe Arg Val Glu Leu Cys Leu Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu 196815 CTG GCC TTG GGC AAC CGA AAG GTT TCT GTA GTC AGA GCC CTT CGC CAC 862197 Leu Ala Leu Gly Asn Arg Lys Val Ser Val Val Arg Ala Leu Arg His 212863 GCC GTC CCG GCA GGG ATC CTC TGT TTA GGA CTG ACG GTT GCT GTG GAC 910213 Ala Val Pro Ala Gly Ile Leu Cys Leu Gly Leu Thr Val Ala Val Asp 228911 TCT TAT TTT TGG CGG CAG CTC ACT TGG CCG GAA GGA AAG GTG CTT TGG 958229 Ser Tyr Phe Trp Arg Gln Leu Thr Trp Pro Glu Gly Lys Val Leu Trp 244959 TAC AAC ACT GTC CTG AAC AAA AGC TCC AAC TGG GGG ACC TCC CCG CTG1006245 Tyr Asn Thr Val Leu Asn Lys Ser Ser Asn Trp Gly Thr Ser Pro Leu 2601007 CTG TGG TAC TTC TAC TCA GCC CTG CCC CGC GGC CTG GGC TGC AGC CTG1054261 Leu Trp Tyr Phe Tyr Ser Ala Leu Pro Arg Gly Leu Gly Cys Ser Leu 2761055 CTC TTC ATC CCC CTG GGC TTG GTA GAC AGA AGG ACG CAC GCG CCG ACG1102277 Leu Phe Ile Pro Leu Gly Leu Val Asp Arg Arg Thr His Ala Pro Thr2921103 GTG CTG GCA CTG GGC TTC ATG GCA CTC TAC TCC CTC CTG CCA CAC AAG1150293 Val Leu Ala Leu Gly Phe Met Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Pro His Lys 3081151 GAG CTA CGC TTC ATC ATC TAT GCC TTC CCC ATG CTC AAC ATC ACG GCT1198309 Glu Leu Arg Phe Ile Ile Tyr Ala Phe Pro Met Leu Asn Ile Thr Ala 3241199 GCC AGA GGC TGC TCC TAC CTG CTG AAT AAC TAT AAA AAG TCT TGG CTG1246325 Ala Arg Gly Cys Ser Tyr Leu Leu Asn Asn Tyr Lys Lys Ser Trp Leu 3401247 TAC AAA GCG GGG TCT CTG CTT GTG ATC GGA CAC CTC GTG GTG AAT GCC1294341 Tyr Lys Ala Gly Ser Leu Leu Val Ile Gly His Leu Val Val Asn Ala 3561295 GCC TAC TCA GCC ACG GCC CTG TAT GTG TCC CAT TTC AAC TAC CCA GGT1342357 Ala Tyr Ser Ala Thr Ala Leu Tyr Val Ser His Phe Asn Tyr Pro Gly 3721343 GGC GTC GCA ATG CAG AGG CTG CAC CAG CTG GTG CCC CCC CAG ACA GAC1390373 Gly Val Ala Met Gln Arg Leu His Gln Leu Val Pro Pro Gln Thr Asp 3881391 GTC CTT CTG CAC ATT GAC GTG GCA GCC GCC CAG ACA GGT GTG TCT CGG1438389 Val Leu Leu His Ile Asp Val Ala Ala Ala Gln Thr Gly Val Ser Arg 4041439 TTT CTC CAA GTC AAC AGC GCC TGG AGG TAC GAC AAG AGG GAG GAT GTG1486405 Phe Leu Gln Val Asn Ser Ala Trp Arg Tyr Asp Lys Arg Glu Asp Val 4201487 CAG CCG GGG ACA GGC ATG CTG GCA TAC ACA CAC ATC CTC ATG GAG GCG1534421 Gln Pro Gly Thr Gly Met Leu Ala Tyr Thr His Ile Leu Met Glu Ala 4361535 GCC CCT GGG CTC CTG GCC CTC TAC AGG GAC ACA CAC CGG GTC CTG GCC1582437 Ala Pro Gly Leu Leu Ala Leu Tyr Arg Asp Thr His Arg Val Leu Ala 4521583 AGC GTC GTG GGG ACC ACA GGT GTG AGT CTG AAC CTG ACC CAA CTG CCC1630453 Ser Val Val Gly Thr Thr Gly Val Ser Leu Asn Leu Thr Gln Leu Pro 4681631 CCC TTC AAC GTC CAC CTG CAG ACA AAG CTG GTG CTT CTG GAG AGG CTC1678469 Pro Phe Asn Val His Leu Gln Thr Lys Leu Val Leu Leu Glu Arg Leu 4841679 CCC CGG CCG TCC TGA GGG GGA CCA GGC AGC CCT CAG CAG CCA CAG GCC1726485 Pro Arg Pro Ser *** 4891727 TTC CAG GAG CTG TTA TCA CTA CCA GTT TCT GGC ACA ATT CCA GCA CAA17741775 TTA TGA CAA TTC AGA GAA GCA AGT CAA AGG ACT GGG CAC CTG CCT CTG18221823 ACA GAC ACC AGA CCA GGT CCA GGG CCT CCT CCA CAG CCT CAG CTG GGG18701871 CTC TCA GCA CCA AAG AAC GAG GGG CCC AGG TCT TGT TGG CAC CCC GGG19181919 AGC CAC TGC CCA GGG TGA TTG GTG GCC AGC TCA GGG CTT CCT GCG GGT19661967 GAC TGT CGC CCA GAC CAG GTG CCA TTC ATG ACT AAT CAG GAG CAG CGG20142015 GCT CAC CCA GGC ACC TGT CTG CCA GGA GGC CAC CGT GTG TCC TGC CCA20622063 CCC AGG GGG AGC TGT ATT TTG GCA GCA CCC CAC GCT TGC TGC CCG AGG21102111 GCC TCT TGG GGC ACC TAA GAC AGC ACC CCC TCT CAG GGG AGA CCA TGG21582159 TGG CCC CGG CCG CAC CCC CCC ACC CTG GTG CCA CCA CTG CAA CTT TTG22062207 TAT TCA CAG GCA TCC CAT CTC CAT CAC AGA TAA AAT CTT AGG AGA TAA22542255 ACA CAT TCA AAA AGG AAT GAG ATA AAA AGA ATA AGG CAA TAA ATG TTG23022303 ATT GGA ACC TCT CAA AAA AAA AAA AAA AAA A 23338.PP14776A核苷酸序列(SEQ ID NO22)長(zhǎng)度14051 GTTTGGGTAG ATTTATAGGT GTTTAATAGC CATAGTCAAA GCACATTTAT TAATGATAAA61 TGGAAATGGA GACCCCTAAG GTATGCAGTA AAGACAGGTC CTCGGTTTGG GATTCGCCAC121 CGTTTCCTCC CACGCATTTT AATGAAAGAT TTAAATGAAA ACACAGATTT GCTTTCCACA181 TTTTAAAAAT TATTCAAAAC TAGAGTCAAA GGGGAGAATC TGATACACTG GATAACAGAA241 TTGAAATTCA ATAAGGCATT CAGAAGCAAA AGCAGTTATG CTGTAACAAG TCAGCTGCAC301 TGCCATCCCA CTGAAACTAT GATCGATACC TGGCATTTAT GAGAACTTAT GATACACCAG361 GAACTTCGAT GTGCATCATC CCAGATGATC CTCACAGAAA TCCTAGGAGG TTCTACGATG421 AAATCAGGAC CCCGCTCCTC TCTGACATCC GCATCGATTA TCCCCCCAGC TCAGTGGTGC481 AGGCCACCAA GACCCTGTTC CCCAACTACT TCAACGGCTC GGAGATCATC ATTGCGGGGA541 AGCTGGTGGA CAGGAAGCTG GATCACCTGC ACGTGGAGGT CACCGCCAGC AACAGTAAGA601 AATTCATCAT CCTGAAGACA GATGTGCCTG TGCGGCCTCA GAAGGCAGGG AAAGATGTCA661 CAGGAAGCCC CAGGCCTGGA GGCGATGGAG AGGGGGACCC CAACCACATC GAGCGTCTCT721 GGAGCTACCT CACCACAAAG GAGCTGCTGA GCTCCTGGCT GCAAAGTGAC GATGAACCGG781 AGAAGGAGCG GCTGCGGCAG CGGGCCCAGG CCCTGGCTGT GAGCTACCGC TTCCTCACTC841 CCTTCACCTC CATGAAGCTG AGGGGGCCGG TCCCACGCAT GGACGGCCTG GAGGAGGCCC901 ACGGCATGTC GGCTGCCATG GGACCCGAAC CGGTGGTGCA GAGCGTGCGA GGAGCTGGCA961 CGCAGCCAGG ACCTTTGCTC AAGAAGCCAT ACCAGCCAAG AATTAAAATC TCTAAAACAT1021 CAGGTAAAGC AAAGGATGCG GTTGTGTGTG GATTGAGAGT AAGAGATGTT TAAAAAGTGT1081 AAAACCAGGC CAGGTGTACT GGCTCACGCC TGTAATCCCA GCACTTTGGG AGGCCGAGGT1141 GGGTGTATTG CTTGAGGTCA GGAGTTCAAG ACCAGCCTGG CCAACATGGT GCAACCTCGT1201 CTCTACTAAG AATACAAAAA TTAGCCAGGC ATGGTGGCAG GGGCCTGTAG TTCCAGCTAC1261 TGGGGAGGCT GAGGCAGGAG AATCACTTGA ACCTGGGAAG TTGAGGTTAC AGTGAGCCGA1321 GATTGTGCCA CCACACTCTA GCCTGGACTA CAAGAGTGAA ACTCTGTCTC AAAAAAAAAA1381 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAB核苷酸序列 (SEQ ID NO23) 長(zhǎng)度2441 MRTYDTPGTS MCIIPDDPHR NPRRFYDEIR TPLLSDIRID YPPSSVVQAT KTLFPNYFNG61 SEIIIAGKLV DRKLDHLHVE VTASNSKKFI ILKTDVPVRP QKAGKDVTGS PRPGGDGEGD121 PNHIERLWSY LTTKELLSSW LQSDDEPEKE RLRQRAQALA VSYRFLTPFT SMKLRGPVPR181 MDGLEEAHGM SAAMGPEPVV QSVRGAGTQP GPLLKKPYQP RIKISKTSGK AKDAVVCGLR241 VRDVC.核苷酸及氨基酸組合序列 (SEQ ID NO24)克隆號(hào)PP14776起始編碼子339 ATG 終止編碼子1071 TAA 蛋白質(zhì)分子量27185.721 GT TTG GGT AGA TTT ATA GGT GTT TAA TAG CCA TAG TCA AAG CAC ATT 4748 TAT TAA TGA TAA ATG GAA ATG GAG ACC CCT AAG GTA TGC AGT AAA GAC 9596 AGG TCC TCG GTT TGG GAT TCG CCA CCG TTT CCT CCC ACG CAT TTT AAT143144 GAA AGA TTT AAA TGA AAA CAC AGA TTT GCT TTC CAC ATT TTA AAA ATT191192 ATT CAA AAC TAG AGT CAA AGG GGA GAA TCT GAT ACA CTG GAT AAC AGA239240 ATT GAA ATT CAA TAA GGC ATT CAG AAG CAA AAG CAG TTA TGC TGT AAC287288 AAG TCA GCT GCA CTG CCA TCC CAC TGA AAC TAT GAT CGA TAC CTG GCA335336 TTT ATG AGA ACT TAT GAT ACA CCA GGA ACT TCG ATG TGC ATC ATC CCA3831 Met Arg Thr Tyr Asp Thr Pro Gly Thr Ser Met Cys Ile Ile Pro 15384 GAT GAT CCT CAC AGA AAT CCT AGG AGG TTC TAC GAT GAA ATC AGG ACC43116 Asp Asp Pro His Arg Asn Pro Arg Arg Phe Tyr Asp Glu Ile Arg Thr 31432 CCG CTC CTC TCT GAC ATC CGC ATC GAT TAT CCC CCC AGC TCA GTG GTG47932 Pro Leu Leu Ser Asp Ile Arg Ile Asp Tyr Pro Pro Ser Ser Val Val 47480 CAG GCC ACC AAG ACC CTG TTC CCC AAC TAC TTC AAC GGC TCG GAG ATC52748 Gln Ala Thr Lys Thr Leu Phe Pro Asn Tyr Phe Asn Gly Ser Glu Ile 63528 ATC ATT GCG GGG AAG CTG GTG GAC AGG AAG CTG GAT CAC CTG CAC GTG57564 Ile Ile Ala Gly Lys Leu Val Asp Arg Lys Leu Asp His Leu His Val 79576 GAG GTC ACC GCC AGC AAC AGT AAG AAA TTC ATC ATC CTG AAG ACA GAT62380 Glu Val Thr Ala Ser Asn Ser Lys Lys Phe Ile Ile Leu Lys Thr Asp 95624 GTG CCT GTG CGG CCT CAG AAG GCA GGG AAA GAT GTC ACA GGA AGC CCC67196 Val Pro Val Arg Pro Gln Lys Ala Gly Lys Asp Val Thr Gly Ser Pro111672 AGG CCT GGA GGC GAT GGA GAG GGG GAC CCC AAC CAC ATC GAG CGT CTC 719112 Arg Pro Gly Gly Asp Gly Glu Gly Asp Pro Asn His Ile Glu Arg Leu 127720 TGG AGC TAC CTC ACC ACA AAG GAG CTG CTG AGC TCC TGG CTG CAA AGT 767128 Trp Ser Tyr Leu Thr Thr Lys Glu Leu Leu Ser Ser Trp Leu Gln Ser 143768 GAC GAT GAA CCG GAG AAG GAG CGG CTG CGG CAG CGG GCC CAG GCC CTG 815144 Asp Asp Glu Pro Glu Lys Glu Arg Leu Arg Gln Arg Ala Gln Ala Leu 159816 GCT GTG AGC TAC CGC TTC CTC ACT CCC TTC ACC TCC ATG AAG CTG AGG 863160 Ala Val Ser Tyr Arg Phe Leu Thr Pro Phe Thr Ser Met Lys Leu Arg 175864 GGG CCG GTC CCA CGC ATG GAC GGC CTG GAG GAG GCC CAC GGC ATG TCG 911176 Gly Pro Val Pro Arg Met Asp Gly Leu Glu Glu Ala His Gly Met Ser 191912 GCT GCC ATG GGA CCC GAA CCG GTG GTG CAG AGC GTG CGA GGA GCT GGC 959192 Ala Ala Met Gly Pro Glu Pro Val Val Gln Ser Val Arg Gly Ala Gly 207960 ACG CAG CCA GGA CCT TTG CTC AAG AAG CCA TAC CAG CCA AGA ATT AAA 1007208 Thr Gln Pro Gly Pro Leu Leu Lys Lys Pro Tyr Gln Pro Arg Ile Lys 2231008 ATC TCT AAA ACA TCA GGT AAA GCA AAG GAT GCG GTT GTG TGT GGA TTG 1055224 Ile Ser Lys Thr Ser Gly Lys Ala Lys Asp Ala Val Val Cys Gly Leu 2391056 AGA GTA AGA GAT GTT TAA AAA GTG TAA AAC CAG GCC AGG TGT ACT GGC 1103240 Arg Val Arg Asp Val *** 2451104 TCA CGC CTG TAA TCC CAG CAC TTT GGG AGG CCG AGG TGG GTG TAT TGC 11511152 TTG AGG TCA GGA GTT CAA GAC CAG CCT GGC CAA CAT GGT GCA ACC TCG 11991200 TCT CTA CTA AGA ATA CAA AAA TTA GCC AGG CAT GGT GGC AGG GGC CTG 12471248 TAG TTC CAG CTA CTG GGG AGG CTG AGG CAG GAG AAT CAC TTG AAC CTG 12951296 GGA AGT TGA GGT TAC AGT GAG CCG AGA TTG TGC CAC CAC ACT CTA GCC 13431344 TGG ACT ACA AGA GTG AAA CTC TGT CTC AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 13911392 AAA AAA AAA AAA AA 140權(quán)利要求
1.一種分離的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23。
3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼如權(quán)利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。
4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23。
5.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24的編碼區(qū)序列或全長(zhǎng)序列。
6.一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
7.一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它是選自下組的一種宿主細(xì)胞(a)用權(quán)利要求6所述的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)用權(quán)利要求3所述的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
8.一種具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白活性的多肽的制備方法，其特征在于，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白活性的多肽。
9.一種能與權(quán)利要求1所述的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白特異性結(jié)合的抗體。
10.一種核酸分子，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸中連續(xù)的10-800個(gè)核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一類新的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白,編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生該多肽的方法。本發(fā)明還公開(kāi)了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明還公開(kāi)了編碼這類新的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文檔編號(hào)C07K14/47GK1369506SQ0110532
公開(kāi)日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2001年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月13日
發(fā)明者顧健人 申請(qǐng)人:上海市腫瘤研究所