專利名稱：一種制備總纈草素的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種制備總纈草素(Valepotriates)的新方法。
背景技術(shù)：
總纈草素具有鎮(zhèn)靜、催眠及抗驚厥作用，效果顯著，并且毒性低。傳統(tǒng)的總纈草素的提取方法包括以下一些步驟(詳見專利US3869476)1、提取 用酸性有機(jī)溶劑(如含1％乙酸的二氯甲烷液)對(duì)纈草屬植物(其中包括蜘蛛香)的根及根莖干燥藥材粉末進(jìn)行浸泡、滲漉，得到提取液；2、除酸 將提取液用堿性或中性水溶液(如Nacl和NaOH水溶液)萃取直至提取液pH值呈中性；3、除水 加干燥劑(如無水Na2SO4)到提取液中，以除去提取液中的水分。
4、回收溶劑 將提取液在30℃減壓回收溶劑，得到浸膏；5、溶解 將浸膏溶于90％乙酸中，并過濾；6、萃取 在上述90％乙酸溶液中加入苯進(jìn)行萃取，棄去苯層；7、稀釋 將大量冰水加入90％乙酸溶液中；8、萃取 加苯至上述稀乙酸溶液中進(jìn)行萃取，棄去稀乙酸層，得到苯提取液；9、除酸 將苯液用堿性或中性水溶液(如Nacl和NaOH水溶液)萃取直至苯液pH值呈中性或微酸性；10、除水 加干燥劑(如無水Na2SO4)到苯液中，以除去苯液中的水分；11、除色素 加活性炭至苯液中，以除去苯液中的色素；12、回收溶劑 將苯液在30℃減壓回收溶劑，得到總纈草素。總纈草素的得率為原藥材的2～3％。
傳統(tǒng)制備總纈草素的工藝復(fù)雜，步驟繁多，耗時(shí)長(zhǎng)，并且大量使用毒性大的有機(jī)溶劑(如苯和乙酸)，對(duì)操作人員的身體有害，對(duì)環(huán)境污染大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種工藝簡(jiǎn)單、使用溶劑品種少、毒性小的總纈草素的制備新方法?？偫i草素的制備方法包括超聲提取和減壓回收溶劑兩個(gè)步驟一、總纈草素的提取將蜘蛛香(V.jatamansi.Jones)干燥根莖藥材粉末用石油醚浸泡，然后在30℃超聲提取過濾得到提取液。
二、總纈草素的純化將提取液30℃減壓回收石油醚至干即得總纈草素浸膏。
經(jīng)13C和1H核磁共振檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果說明得到的總纈草素主要包括纈草素、二氫纈草素和乙酰纈草素三種成分，它們占該提取物的80％以上。二氫纈草素化學(xué)結(jié)構(gòu)式 二氫纈草素核磁共振結(jié)果13C-NMRδ88.3(1-C)，142.2(3-C)，110.8(4-C)，32.5(5-C)，35.1(6-C)，76.7(7-C)，64.1(8-C)，39.4(9-C)，48.7(10-C)，169.8(11-C).21.0(12-C)，63.3(13-C)，173.0(15-C).43.3(16-C).25.7(17-C)，22.3(18，19，24，25-C)，171.1(21-C)，43.2(22-C)，25.5(23-C)1H-NMRδ5.83(d，J＝5.36Hz，1H，1-H)，6.5(1H，s，3-H)，2.97(1H，m，5-H)，2.24(2H，m，6-H)，4.95(1H，t，J＝5.72Hz，7-H)，2.72(1H，dd，J1＝5.33Hz，J2＝5.35Hz，9-H)，3.07(1H，d，J＝4.91Hz，10-H)，2.83(1H，d，J＝4.91Hz，10-H’)，2.00(3H，s，12-H)，4.69(1H，d，J＝12.29，13-H)，4.46(1H，d，J＝12.29，13-H’)，2.24(4H，d，J＝6.56Hz，16，22-2H)，0.98，0.95(各6H，s，18，19，24，25-3H)，2.19，2.21(各1H，m，17，23-H)乙酰纈草素化學(xué)結(jié)構(gòu)式 乙酰纈草素核磁共振結(jié)果13C-NMRδ92.5(1-C)，148.6(3-C)，108.2(4-C)，141.1(5-C)，118.3(6-C)，83.3(7-C)，64.0(8-C)，42.9(9-C)，60.7(10-C)，47.8(11-C)，170.8(13-C)，20.9(14-C)，170.3(16-C)，42.9(17-C)，25.5(18-C)，22.3(19，20-C)，170.3(22-C)，44.0(23-C)，79.2(24-C)，26.6(25-C)，26.7(26-C)，169.5(28-C)，22.2(29-C)1H-NMRδ5.98(1H，d，J＝10.1Hz，1-H)，6.71(1H，s，3-H)，5.38(1H，d，J＝2.63Hz，6-H)，5.86(1H，t，J1＝J2＝2.70Hz，7-H)，3.41(1H，dd，J1＝10，J2＝2.5Hz，9-H)，4.66，4.75(各1H，AB，d，J＝12.3Hz，10-H)，2.88，3.03(各1H，AB，d，J＝4.8，11-H)，2.06(3H，s，14-H)，2.18(3H，m，17，18-H)，0.99(6H，d，J＝6.5Hz，19，20-H)，2.89(2H-s，23-H)，1.51(6H，s，25，26-H)，1.98(3H，s，29-H)，。纈草素化學(xué)結(jié)構(gòu)式 纈草素核磁共振結(jié)果3C-NMRδ92.5(1-C)，148.4(3-C)，108.3(4-C)，140.9(5-C)，118.6(6-C)，83.0(7-C)，64.1(8-C)，43.0(9-C)，60.8(10-C)，47.8(11-C)，170.8(13-C)，20.9(14-C)，172.4(16-C)，43.3(17-C)，25.8(18-C)，22.3(19，20-C)，170.2(22-C)，43.0(23-C)，25.5(24-C)，22.2(25-C)，22.2(26-C)1H-NMRδ5.98(1H，d，J＝10.1Hz，1-H)，6.70(1H， s，3-H)，5.37(1H，d，J＝2.9Hz，6-H)，5.82(1H，t，J1＝J2＝2.8Hz，7-H)，3.44(1H，dd，J1＝10.1Hz，J2＝2.6Hz，9-H)，4.66，4.74(各1H，AB，d，J＝12.2Hz，10-H)，2.86，3.02(各1H，AB，d，J＝4.9，11-H)，2.06(3H，s，14-H)，2.10~2.25(6H，m，17，18，23，24-H)，0.90，0.94，0.97，1.00(各3H，s，19，20，25，26-H)。
總纈草素鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥作用的驗(yàn)證觀察藥物對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響、對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響、對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量的影響和對(duì)戊四氮誘發(fā)驚厥的影響是驗(yàn)證藥物具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥作用常用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，故用其驗(yàn)證總纈草素對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物的鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥作用。
1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，雌雄兼用，18～22g，每10只/籠群養(yǎng)，自由覓食和飲水，室溫23±2℃，自然光照。2、實(shí)驗(yàn)方法(1)對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響 選取體重18～22g健康小鼠，雌雄不拘，隨機(jī)分3組，每組10只，空白組小鼠腹注1％CMC-Na液，其余兩組小鼠腹注或灌胃給不同劑量的總纈草素混懸液(含1％CMC-Na，下同)，以2分鐘內(nèi)小鼠活動(dòng)時(shí)間和前肢上舉次數(shù)為指標(biāo)，觀察給藥后30，60分鐘的活動(dòng)變化。
(2)對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響 選取體重18～22g健康小鼠，雌雄不拘，隨機(jī)分5組，每組10只，空白組小鼠灌胃1％CMC-Na液，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腹注0.5mg/kg安定注射液，其余三組小鼠灌胃不同劑量的總纈草素混懸液。各組小鼠于灌胃60分鐘后，腹注戊巴比妥鈉50mg/kg，以翻正反射消失至恢復(fù)時(shí)間作為睡眠時(shí)間。
(3)對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量的影響 選取體重18～22g健康小鼠，雌雄不拘，隨機(jī)分5組，每組10只，空白組小鼠灌胃1％CMC-Na液，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腹注0.5mg/kg安定注射液，其余三組小鼠灌胃不同劑量的總纈草素混懸液。各組小鼠于灌胃60分鐘后，腹注戊巴比妥鈉25mg/kg，以翻正反射消失達(dá)1分鐘以上的鼠數(shù)作為入睡動(dòng)物數(shù)。
(4)對(duì)戊四氮誘發(fā)驚厥的影響 選取體重18～22g小鼠，雌雄不拘，隨機(jī)分3組，每組10只，對(duì)照組腹注戊四氮生理鹽水液85mg/kg；給藥組腹注總纈草素混懸液30分鐘后，腹注戊四氮生理鹽水液85mg/kg。以小鼠跌倒并呈陣發(fā)性驚厥為指標(biāo)，觀察各組發(fā)生驚厥的小鼠數(shù)目。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響見表1表1總纈草素對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響組別 劑量g/kg 給藥途 給藥前給藥后30 給藥后60徑分鐘 分鐘活動(dòng)時(shí)間 對(duì)照組 30.8±8.3 31.6±5.629.3±7.6(秒) 總纈草素 0.008腹注 29.7±7.5 3.3±3.5**4.5±1.2**0.2 灌胃 28.4±11.4 6.7±3.2**5.5±4.2**前肢上舉對(duì)照組 10.6±1.1 9.5±2.49.0±1.6次數(shù) 總纈草素 0.008 腹注13.9±2.3 1.2±1.2**1.5±1.0**0.2灌胃14.3±11.0 4.8±2.5*3.5±3.1*注①x±SD②與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(下同)結(jié)果，與對(duì)照組比較，總纈草素能明顯抑制小白鼠的自主活動(dòng)，2)對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響見表2表2對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響(n＝10)組別 劑量(g/kg)睡眠時(shí)間(min)空白組112.8±34.7陽(yáng)性對(duì)照組組0.0005 251.2±47.6**總纈草素低劑量組 0.05 118.8±55.8總纈草素中劑量組 0.10 147.9±36.8*總纈草素高劑量組 0.20 202.0±62.8**由表2中結(jié)果可以看出，高、中劑量組總纈草素均能明顯延長(zhǎng)戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間。3)對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量的影響見表3表3 對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量的影響(n＝10)組別 劑量(g/kg) 動(dòng)物數(shù) 入睡動(dòng)物數(shù)空白組 10 1陽(yáng)性對(duì)照組0.0005 10 10**總纈草素低劑量組 0.0510 4總纈草素中劑量組 0.1 10 8**總纈草素高劑量組 0.2 10 9**從表3中可以看出，高、中劑量組總纈草素可明顯提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡數(shù)。4)對(duì)戊四氮誘發(fā)驚厥的影響見表4表4總纈草素對(duì)戊四氮誘發(fā)的小鼠驚厥的影響組別 劑量g/kg動(dòng)物數(shù) 驚厥動(dòng)物數(shù)戊四氮 0.08510 10戊四氮+總纈草0.085+0.064 10 2**素結(jié)果，與對(duì)照組比較，總纈草素能對(duì)抗戊四氮誘發(fā)的小鼠驚厥。
本發(fā)明總纈草素制備工藝簡(jiǎn)單，縮短了工藝流程，降低了成本，減少了環(huán)境污染。
實(shí)施例2取4.8kg干燥的蜘蛛香根莖粉末用42升石油醚浸泡2小時(shí)，然后30℃超聲提取2小時(shí)，然后過濾，得到提取液，再以同法超聲提取2次，合并提取液，將提取液30℃減壓回收石油醚，得到105g總纈草素褐色浸膏。
實(shí)施例3取48kg干燥的蜘蛛香根莖粉末用420升石油醚浸泡1天，然后30℃超聲提取20小時(shí)，然后過濾，得到提取液，再以同法超聲提取2次，合并提取液，將提取液30℃減壓回收石油醚，得到1kg總纈草素褐色浸膏。
權(quán)利要求
1.一種制備總纈草素的方法，包括以纈草屬植物為原料對(duì)總纈草素的提取和純化，其特征在于所用的原料為蜘蛛香的根莖，所用的提取溶劑為石油醚，30℃下超聲提取，再減壓回收石油醚，得總纈草素浸膏。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種制備總纈草素的新方法。本發(fā)明采用纈草屬植物蜘蛛香干燥根莖粉末作為原料，用石油醚浸泡后，30℃下超聲提取，再減壓回收石油醚，即得總纈草素浸膏。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，使用有機(jī)溶劑少，避免了對(duì)環(huán)境的污染。
文檔編號(hào)C07D493/10GK1396166SQ01113388
公開日2003年2月12日 申請(qǐng)日期2001年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月12日
發(fā)明者秦路平, 陳磊, 鄭漢臣 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)